中国人CCR5732基因突变的检测及其对HIV遗传易感性的初步评估

为了解ＣＣＲ５Δ３２ 基因突变在中国本土人群基因组中的分布,初步评估我国人群对ＨＩＶ－１ 感染的遗传易感性,用ＰＣＲ扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交和ＤＮＡ 测序等分子生物学方法对９１５ 名中国人来源的基因组ＤＮＡ中ＣＣＲ５Δ３２ 基因突变进行了检测。结果发现,所有被检测的个体绝大多数均表现为ＣＣＲ５ ｗ ｔ／ｗ ｔ纯合子等位基因型,仅检测到两例个体为突变的杂合子ＣＣＲ５ｗ ｔ／Δ３２ 基因型,而未见到有突变的ＣＣＲ５Δ３２／Δ３２ 纯合子的个体。上述初步结果提示：在我国人群中,ＣＣＲ５Δ３２ 基因突变率很低（约为０．２％ ）,所以我国绝大多数人群对ＮＳＩ嗜巨噬细胞的ＨＩＶ－１ 株感染的遗传易感性较高     

PCR技术诊断结核病41例体会

ＰＣＲ技术诊断结核病４１例体会武警山东总队医院检验科张耀进,韩宝莱（济南２５０１０１）关键词ＰＣＲ,ＤＮＡ,结核菌,凝胶电泳聚合酶链式反应（ＰＣＲ）是近年来开展的一项新技术,应用ＰＣＲ检测结核菌ＤＮＡ具有快速、敏感、特异等优点,克服了传统的涂片法阳性...     

戊型肝炎病人及实验感染猴粪便中戊型肝炎病毒基因的检出

采用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）结合ＤＮＡ杂交技术，直接检测急性戊型肝炎病人和实验感染猴粪便标中的戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）基因，将从粪便标本中提取的ＲＮＡ反转录合成ｃＤＮＡ后，用ＨＥＶ特异引物进行套式ＰＣＲ扩增，并用长臂光敏生物素村记的ＨＥＶＥＴ１．１核酸探针进行杂交，结果显示，直接从６份病人１０％粪悬液标本中提取的ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ，在琼脂糖凝胶电泳上未见任何信号带，点杂交也未见阳性，但     

应用原位聚合酶链反应对肝细胞癌组织中HBVDNA进行再评价

为探讨ＨＢＶ感染与肝细胞癌（ＨＣＣ）发生之间关系，作者应用原位聚合酶链反应（ＰＣＲＩＳ）对２６例肝癌、２３例癌旁肝组织的石蜡切片进行了ＨＢＶＤＮＡ的检测，检出率分别为８４．６％和９１．３％，明显高于原位核酸杂交（ＩＳＨ）的５３．８％（１４／２６）和５６．５％（１３／２３）；亦高于从患者血清和ＨＣＣ组织提取ＤＮＡ后行聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增的５７．７％（１５／２６）和５５．６％（５／９）。用ＰＣＲＩＳ方法，ＨＣＣ组织细胞中ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒强度、ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞数和组织切片的清晰度均高于ＩＳＨ。ＰＣＲＩＳ既显示了ＰＣＲ技术的高敏性和特异性，又能在细胞内定位。本结果显示我国ＨＣＣ的发生与ＨＢＶ感染密切相关。     

PCR技术在鉴定阳性重组子中的应用

介绍了采用ＰＣＲ技术在人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）、人促红细胞生成素及中国人γ－干扰素（ｈＩＦＮ－γ）ｃＤＮＡ重组质粒的构建过程中快速鉴定阳性重组子的方法。经ＰＣＲ扩增鉴定为阳性的重组子，提取质粒ＤＮＡ经重组位点相应的ＤＮＡ内切酶双酶切鉴定表明，全部含有插入片段。     

巢式聚合酶链反应检测幽门螺杆菌方法的建立及临床初步应用

在ＨＰ高度保守的尿素酶Ａ基因内合成两对引物，建立了巢式聚合酶链反应（Ｎ－ＰＣＲ）检测ＨＰＤＮＡ的方法，实验证明有很高的特异性和敏感性，与其它４株肠道菌无交叉反应，最小检出量为１ｆｇＨＰＤＮＡ。对Ｎ－ＰＣＲ反应体系中有关实验条件如Ｍｇ￣２＋浓度、引物浓度、复性温度等进行优化选择，并对酚／氯仿提取法和裂解粗提法两种标本处理方法进行了比较。用建立的Ｎ－ＰＣＲ检测３０例有上消化道症状患者的唾液及８例胃组织标本中ＨＰＤＮＡ，结果阳性率分别为５６．６７％和６２．５０％，５例胃组织标本阳性患者中４例唾液标本亦阳性。实验表明Ｎ－ＰＣＲ是一种敏感特异的检测方法，可用于唾液等标本中ＨＰ的检测。     

登革2型病毒NS3基因的扩增及序列测定

采用热酚法从登革２ 型病毒４３ 株（Ｄ２ ４３） 感染的Ｃ６／３６ 细胞中提取了病毒ＲＮＡ,以病毒ＲＮＡ 为模板,进行Ｄ２ ４３ 株ＮＳ３ 基因ｃＤＮＡ 片段的反转录 ＰＣＲ 扩增,片段长度为１１７６ ｂｐ。将扩增的ｃＤＮＡ 片段克隆到Ｔ 载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ｋｓⅡ（ ＋ ） 中。通过双脱氧法测定了ｃＤＮＡ片段序列,与国际标准株ＮＧＣ株序列一致。     

用多重及套式PCR同时检测血清中的HBV和HCV方法的建立

首次应用多重及套式ＰＣＲ技术同时检测人血清中的ＨＢＶ和ＨＣＶ。将抽提的ＨＢＶＤＮＡ和（或）ＨＣＶＲＮＡ在含ＡＭＶ逆转录酶、ＴａｑＤＮＡ多聚酶以及ＨＢＶ和ＨＣＶ外套引物的ＰＣＲ缓冲引物的ＰＣＲ缓冲液中进行逆转录后连续进行ＰＣＲ扩增，以第一轮扩增产物为模板，在含ＨＢＶ和ＨＣＶ内套引物的ＰＣＲ反应体系中进行第二轮扩增，产物经电泳后，以ＤＮＡ分子量标志物或已知片段做参考，出现５２３ｂｐ和（或）２６０ｂｐ产     

中国人TTV部分基因的克隆及序列测定

目的：了解我国人群中是否存在ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染，分析国内ＴＴ病毒株基因结构特点。方法：用ＰＣＲ方法检测血清标本中ＴＴＶ ＤＮＡ，对ＴＴＶ ＤＮＡ阳性的标本进行序列测定。结果：１０例临床诊断为非甲至非戊型肝炎病人血清标本中，用ＰＣＲ方法检测出５例为ＴＴＶ ＤＮＡ阳性。将其中的一株命名为ＴＴＶＣＨ１（ＴＴＶ中国株１）并进行序列测定，该序列与日本ＴＴＶ部分基因（ＣＬＯＮ２２）相对位置的核苷酸同源性为     

联合应用D21S11,IFNAR位点定量PCR快速诊断先天愚型

为了探讨定量ＰＣＲ方法在分子水平对先天愚型基因诊断意义，本实验以ＳＴＲ（Ｄ２１Ｓ１１ＩＦＮＡＲ）做为遗传标记，合成特异引物对１１例正常人（６例外周血，５例羊水）及２８例先天愚型患者外周血进行同位素标记ＰＣＲ扩增后定量分析，结果显示在Ｄ２１Ｓ１１位点１１例正常人中１０人呈ＤＮＡ含量为１∶１关系的两条带，１人为１条带。２８例患者中２４人呈ＤＮＡ含量为２∶１的两条带，３人为ＤＮＡ含量为１∶１∶１关系的三条带，１人为１条带。在ＩＦＮＡＲ位点５例为纯合子，其余均为杂合子。实验表明Ｄ２１Ｓ１１和ＩＦ ＮＡＲ位点多态是对先天愚型基因诊断很有应用价值的遗传标记，应用定量ＰＣＲ的方法可在２４ｈ内对先天愚型做出快速、准确的产前及临床基因诊断。     

多药抗药基因mdrl探针的基因克隆

多药抗药基因（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｅ，ｍｄｒｌ）的表达水平与细胞的耐药性直接相关，检测ＭＤＲ１的表达水平可预测化疗的效果以及预后。用分子原位杂交的方法可检测单个细胞中ＭＤＲ１的表达水平。采用ＰＣＫ扩增方法获得了一段特异的ＤＮＡ片段，并将其克隆到ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列分析证明与文献一致。此探针可用于临床标本的分子杂交检测。     

PCR扩增nuc基因快速检测金黄色葡萄球菌

为快速检测标本中金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增金葡菌ｎｕｃ基因，并与培养法进行比较分析。结果只有金葡菌扩增出一条特异的ＤＮＡ条带，平行对照的其它菌株均为阴性。说明用ＰＣＲ检测金葡菌的方法简便、快速、特异、敏感。     

中国人CCR5Δ32基因突变的检测及其对HIV遗传易感性的初步评估

为了解ＣＣＲ５Δ３２基因突变在中国本土人群基因组中的分布,初步评估我国人群对ＨＩＶ－１感染的遗传易感性,用ＰＣＲ扩增,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＤＮＡ测序等分子生物学方法对９１５名中国人来源的基因组ＤＮＡ中ＣＣＲ５Δ３２基因突变进行了检测。结果发现,所有被检测的个体绝大多数均表现为ＣＣＲ５ｗｔ／ｗｔ纯合子等位基因型,仅检测到两例个体为突变的杂合子ＣＣＲ５ｗｔ／Δ３２基因型,而未见到有突变的ＣＣＲ５Δ３     

DNA标记超顺磁性氧化铁粒子的磁共振增强试验

目的：评价ＤＮＡ标记超顺磁氧化铁粒子（ＤＮＡ－ＳＰＩＯ）对大鼠肝炎性假瘤的强化作用,方法：从猪脾中提取ＤＮＡ。在合适ＰＨ下与ＳＰＩＯ结合,制备出ＤＮＡ－ＳＰＩＯ,用弗氏完全佐剂建立大鼠肝炎假瘤模型（ｎ＝８）观察ＤＮＡ－ＳＰＩＯ对肝炎性假瘤的增强作用。结果;注射ＤＮＡ－ＳＰＩＯ（２ｍｇＦｅ／只）正常肝组织ＭＲ信号明显下降,与瘤灶的较高信号对比更加清晰,结论：ＤＮＡ－ＳＰＩＯ对提高肝脏瘤灶的早期检出水     

用聚合酶链反应技术检测膀胱癌病毒基因

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对６８例膀胱癌及１５例正常膀胱粘膜中第１６、１８型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ１６、１８）ＤＮＡ进行了检测。结果表明，新鲜及石蜡包埋的癌组织ＨＰＶ１６ＤＮＡ的阳性率分别为５３．８％及６６．７％，ＨＰＶ１８ＤＮＡ的阳性率为４．４％。ＨＰＶ１６ＤＮＡ在癌组织中出现与恶性度及浸润深度有一定关系。正常粘膜有少量ＨＰＶ１６ＤＮＡ存在。从正常粘膜到癌组织，ＨＰＶ１６ＤＮＡ检出率逐渐增高，反     

舟山海岛地区乙肝患者HBV-DNA与HBVM的相关性调查

为探讨海岛乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染人群的特殊性，我们对舟山地区ＨＢＶ感染人群采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ与乙肝病毒标志物（ＨＢＶＭ），检测结果作相关性分析，并与大陆地区资料比较，报道如下。一、对象与方法１．检测对象：为本院经...     

PCR技术检测结核性脑膜炎病人脑脊液中的人型结核分支杆菌的研究

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，检测人型结核分支杆菌。扩增片段为１６５ｂＰ，非结核分支杆菌和其它细菌结果阴性，证实其具有较高的特异性。通过与常规ＤＮＡ制备方法的比较，证明对脑脊液标本煮沸后进行直接扩增，方便、快捷、不影响实验结果。对３３例结核性脑膜炎及２６例非结核性脑膜炎病人的脑脊液进行结核分支杆菌ＤＮＡ检测，并与其它诊断方法进行比较，结果显示：ＰＣＲ的阳性率为：８４．８％（２８／３３），抗酸染色３％（１／３３），抗原检测６０．６％（２０／３３），抗体检测为５４．５％（１８／３３），对照组无１例阳性，表明ＰＣＲ技术在特异性和敏感性方面均优于上述方法，可望成为结脑可靠的诊断手段。     

聚合酶链反应检测尿道炎179例观察

我们用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１７９例慢性尿道炎门诊患者进行了淋球菌（ＮＧ）、沙眼衣原体（ＣＴ）、解脲支原体（ＵＵ）的ＤＮＡ检测及观察,报告如下。１临床资料１１一般资料１７９例门诊患者,均为男性,＜２０岁２例,２０～２９岁１１３例,３０～３９岁５３...     

用聚合酶链反应技术检测膀胱癌病毒基因

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对６８例膀胱癌及１５例正常膀胱粘膜中第１６、１８型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ＿１６、１８）ＤＮＡ进行了检测。结果表明，新鲜及石蜡包埋的癌组织ＨＰＶ＿１６ＤＮＡ的阳性率分别为５３．８％及６６．７％，ＨＰＶ＿１８ＤＮＡ的阳性率为４．４％。ＨＰＶ＿１６ＤＮＡ在癌组织中出现与恶性度及浸润深度有一定关系。正常粘膜有少量ＨＰＶ＿１６ＤＮＡ存在。从正常粘膜到癌组织，ＨＰＶ＿１６ＤＮＡ检出率逐渐增高，反映出其存在较为广泛及在癌变中的作用。     

胃癌DNA错配修复基因hMSH2突变研究

采用ＰＣＲ、聚丙烯酰胺电泳、单链构象多态性分析及银染技术,检测３０例胃癌组织ＤＮＡ微卫星不稳定（ＭＳＩ）及ｈＭＳＨ２基因突变情况。探讨错配修复（ＭＭＲ）基因与胃癌的关系及发生的分子机制。结果显示３０例胃癌中有８例表现ＭＳＩ;有５例６次检测到ｈＭＳＨ２基因突变,其中生殖细胞突变２次,体细胞突变４次。本研究结果认为,胃癌组织ＤＮＡ中存在ＭＳＩ和ＭＲＲ基因突变。部分胃癌的发生机制可能为ＭＭＲ基因缺陷导致