掌叶大黄细胞悬浮系统和根培养系统对鬼臼毒素的生物转化研究

目的 对鬼臼毒素的生物转化进行研究.方法 利用掌叶大黄细胞悬浮系统和根培养系统进行生物转化.采用色谱技术和波谱手段对转化产物进行分离鉴定.结果 加入鬼臼毒素对掌叶大黄细胞悬浮系统和根培养系统的pH值无明显影响;两种组培系统均能转化鬼臼毒素.在本实验条件下,细胞悬浮系统使73.8%的鬼臼毒素发生了转化,根培养系统中使56.3%的鬼臼毒素发生了转化.两种系统对鬼臼毒素的转化产物不同,前者只转化生成鬼臼苦素,后者转化生成表鬼臼毒素等多种化合物.结论 掌叶大黄细胞悬浮系统和根培养系统均能有效转化鬼臼毒素.     

桔梗细胞悬浮培养体系对斑蝥素的生物转化研究

目的 研究桔梗细胞悬浮培养体系对抗癌天然活性成分斑蝥素的生物转化，以获得具有新颖结构的斑蝥素衍生物。方法 往桔梗悬浮培养体系中加入斑蝥素并培养6d，培养液经萃取后采用色谱方法进行分离纯化，产物的结构根据光谱数据予以鉴定。结果分离得到了以2：1比例混合存在的两个转化产物。经光谱分析，两个产物鉴定为羰基还原为羟基的一对差向异构体1β-羟基斑蝥素(Ⅱa)及1a-羟基斑蝥素(Ⅱb)。结论 Ⅱa和Ⅱb均为未见报道的新化合物。桔梗细胞培养体系对斑蝥素具有较强的选择性还原作用，此转化反应可用于斑蝥素衍生物的制备。     

三种鬼臼毒素类化合物的鉴定

目的:三种鬼臼毒素类化合物鬼臼毒素、苦鬼臼毒素和异鬼臼苦酮在液相色谱上很容易混淆,甚至误认,为此进行了一系列的实验,使这三种化合物在不同的色谱条件下可以彼此分离,用于鬼臼类植物桃儿七化学成分判定。方法:高效液相色谱法。结论:鬼臼毒素、苦鬼臼毒素和异鬼臼苦酮在液相色谱上可以互相分离,实验用鬼臼类植物桃儿七中含有该三种化学成分。     

长春花及银杏植物细胞悬浮培养对青蒿素的生物转化研究

目的：对抗疟药物青蒿素（Ⅰ）进行了生物转化研究。方法：利用长春花及银杏植物细胞悬浮培养细胞进行生物转化。用硅胶柱色谱进行产物的分离，波谱方法鉴定产物的结构。结果：此两种植物悬浮细胞体系均能将青蒿素转化成3α-羟基去氧青蒿素（Ⅱ）。结论：此两种植物悬浮细胞体系均有有效转化青蒿素。     

长春花悬浮细胞培养体系用于生物转化的研究概况

 目的介绍长春花悬浮细胞培养体系的生物转化作用以及生物转化对于中药新药开发的意义。方法对过去25年中利用长春花悬浮细胞培养体系进行生物转化的文献报道进行了综述。结果利用该体系共完成了以下6种类型的反应:羟基化、氧化、还原、碳碳双键的氢化作用、糖基结合作用,以及水解作用。结论用生物转化的方法处理中药中的化学成分,修饰它们的结构或活性位点,对充分发挥我国中药的资源优势,开发具有自主知识产权的新药具有十分重要的意义。     

黄花蒿悬浮培养细胞对二氢青蒿酸的生物转化研究

目的采用黄花蒿悬浮培养细胞研究二氢青蒿酸(Ⅰ)的生物转化。方法向预培养14 d的黄花蒿细胞悬浮培养体系中加入底物二氢青蒿酸,培养2 d后终止转化。通过TLC和HPLC检测转化产物,利用硅胶、Seph-adex LH-20以及ODS柱色谱分离纯化转化产物,并根据理化数据和波谱技术鉴定转化产物的化学结构,最后利用HPLC考察共培养时间对转化率的影响。结果二氢青蒿酸在黄花蒿培养体系中成功地进行了转化并分离得到两个转化产物:3-α-羟基二氢青蒿酸(Ⅱa)和3-β-羟基二氢青蒿酸(Ⅱb)。两个转化产物的最佳共培养时间均为1d,总的摩尔转化率分别为2.6%(Ⅱa)和15.7%(Ⅱb)。结论本研究首次利用黄花蒿培养细胞生物转化二氢青蒿酸,且得到一对区域特异性的羟基化转化产物。     

充足光照条件下生长的盾叶鬼臼叶的采摘频率和时间对植物生长与鬼臼毒素量的影响

〔英〕/Cushman K E…∥Planta Med.-2006,72(9).-824~829盾叶鬼臼Podophyllum peltatum的叶和根茎中含大量鬼臼毒素,因而可代替西藏鬼臼P.emodi。在不影响植物长期生长、木脂素水平或鬼臼毒素产量的前提下,为选择合适的采摘频率和时间,研究了该植物叶的采摘频率和时间对植物生     

烟草悬浮培养细胞对呋喃橐吾酮的生物转化研究

目的 研究烟草悬浮培养细胞对呋喃橐吾酮(I)的生物转化.方法 将外源底物呋喃橐吾酮乙醇溶液投入预培养10 d的烟草悬浮培养细胞中,共培养4 d后终止转化,通过HPLC检测方法,并利用各种色谱技术分离纯化转化产物,最后根据其理化性质和光谱数据进行结构鉴定.此外,实验还考察了共培养时间对转化率的影响.结果 呋喃橐吾酮(Ⅰ)在烟草细胞中发生了转化,分离鉴定出两个转化产物:3-oxo-eremophila-1,7(11)-dien-12,8-olide(Ⅱ)和3-oxo-8-hydroxyeremophila-1,7(11)-dien-12,8-olide(Ⅲ).转化的最佳共培养时间为5 d,此时总的摩尔转化率最高(53.1%).结论 首次利用烟草悬浮培养细胞转化倍半萜类化合物呋喃橐吾酮并获得成功.     

稀土元素镧对掌叶大黄毛状根和非转化根生长及蒽醌产量的影响

目的 研究不同浓度的稀土元素镧(La2 )对3种大黄根生物量和蒽醌次生代谢产物产量的影响。方法采用统计学分析方法,研究稀土元素La3 对两种掌叶大黄单克隆毛状根DH5c、DH7a和液体培养非转化根NOR生物量和蒽醌化合物合成的影响。结果 La3 浓度对大黄根生物量积累有显著影响,培养基中La3 为10 mg/L时,对大黄根生长表现出明显的抑制作用;La3 浓度对3种大黄根的蒽醌产量有极显著影响,当培养基中La3 1.0mg/L时,蒽醌产量最高;经稀土离子处理的3种大黄根中芦荟大黄素和大黄酸显著高于大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。结论 培养基中添加适宜浓度的稀土离子La3 对掌叶大黄单克隆毛状根的生物量积累和蒽醌类化合物的合成具有明显的促进作用。     

转基因何首乌毛状根生物转化瑞香素的研究

目的:利用转基因何首乌毛状根对瑞香素(Ⅰ)进行生物转化研究,对其生物转化产物进行分离、鉴定,并建立其产物的时效曲线图.方法:将瑞香素投入何首乌毛状根悬浮培养体系中,共培养36h后,利用TLC和HPLC进行产物检测,硅胶柱层析法分离纯化,核磁共振技术进行结构鉴定,利用HPLC考察共培养时间对转化产物(Ⅱ)、降解产物含量的影响及分析转化产物降解的原因.结果:瑞香素在何首乌毛状根悬浮培养体系中发生了生物转化反应.分离鉴定出一个产物:瑞香素-8-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ).何首乌毛状根悬浮培养体系转化生成Ⅱ的最佳共培养时间为36h,总摩尔转化率为32.11%.蔗糖-水培养基(仅含有蔗糖和水)可以使何首乌毛状根悬浮培养体系转化产率大幅增加,总摩尔转化率达72.44%.初步推断产物(Ⅱ)的降解与MS培养基中金属离子有关.结论:使用何首乌毛状根悬浮培养体系可大量生物合成天然药材中含量极低的活性化合物--瑞香素-8-O-β-D-葡萄糖苷.     

大黄多糖的研究

从掌叶大黄根及根茎中得到2种酸性杂多糖DHP-1和DHP-2。重均分子量分别为11万和2.5万。TLC和GC分析表明2种多糖的糖组成完全相同,主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、来苏糖、木糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸组成。     

不同产地掌叶大黄HPLC指纹图谱的比较

目的 应用RP—HPLC(DAD)对不同产地掌叶大黄药材进行指纹图谱比较。方法 用Inertsil ODS—3分析柱，1％HAc—H20与1％HAc—CH3CN梯度洗脱，流速1mL／min，柱温30℃，检测波长280nm，参比波长380nm。结果 建立了HPLC指纹图谱共有模式，并对其他产地药材进行了相似度比较。结论 对大黄药材中各成分均得到很好分离，可作为大黄药材的具有专属性的指纹图谱。     

掌叶大黄鞣质类化学成分研究

目的研究掌叶大黄Rheum palmatum根中鞣质类化学成分。方法采用硅胶柱色谱、中压柱色谱及半制备高效液相色谱等多种色谱分离方法对鞣质类成分进行分离,根据波谱数据分析鉴定化合物结构。结果从掌叶大黄的70%乙醇提取物中分离得到4个鞣质类化合物,分别鉴定为3-O-桂皮酰基-1-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷(1)、2-O-桂皮酰基-1-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷(2)、2-O-桂皮酰基-1,6-O-二没食子酰基-β-D-葡萄糖苷(3)、6-O-桂皮酰基-1-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷(4)。结论化合物1为新化合物,命名为掌叶大黄苷。     

高效液相色谱法测定大黄及其炮制品中总大黄素的含量

应用高效液相色谱法测定了大黄及其炮制品中总大黄素的含量。以甲醇-水(80:20)并用磷酸调节pH为3时,能使待测组分达到较理想的分离度。实验表明,该法的重现性、回收率均较好,具有快速、准确、灵敏的特点。     

掌叶大黄种苗质量分级标准

目的:研究掌叶大黄种苗质量分级标准。方法:通过对甘肃省道地产区不同产地的80份掌叶大黄种苗单株鲜重、根长、根粗、侧根数、种苗病斑程度等质量指标检测,并以各项数据的K均值聚类分析结果为划分种苗质量等级的参考依据。结果:以单株鲜重、根长、根粗为主要分级指标将掌叶大黄种苗分为4个等级,即特大种苗单株重 30. 0 g,根粗2. 3 cm,根长 30. 0 cm,侧根多,芽完整,无病斑、伤口;一级种苗单株重≥25. 0 g,根粗≥2. 1 cm,根长≥25. 0 cm,无基部直径 3 mm的侧根,芽完整,无病斑、伤口;二级种苗单株重≥20. 0 g,根粗≥1. 8 cm,根长≥20. 0 cm,无基部直径 4 mm的侧根,芽完整,无病斑、伤口;三级种苗单株重≥15. 0 g,根粗≥1. 5 cm,根长≥15. 0 cm,有少数侧根,芽基本完整,无病斑、伤口。结论:收集的80份掌叶大黄种苗样品中,一、二级种苗占68. 8%,不同等级掌叶大黄种苗经大田移栽成药后鲜产量一级特大苗二级三级种苗,植株抽薹率特大苗一级二级三级种苗。因此在规范化生产中不建议采用特大种苗,应以一、二级种苗为宜。     

掌叶大黄不同组织器官中主要资源性化学成分的分析评价

目的对蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum的不同组织器官(主根、根头、支根、根皮、叶柄和叶片)的主要资源性成分进行分析评价。方法采用高效液相色谱(HPLC)法、紫外可见分光光度(UV)法、粗纤维检测(Weende)法、电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)法对掌叶大黄不同组织器官中的蒽醌类、可溶性多糖类、总纤维素和无机元素进行测定。结果掌叶大黄主根、根头、支根、根皮中分别含芦荟大黄素3.22~4.33、1.33~2.32、3.21~3.68、3.22~3.76 mg/g,大黄酸0.77~1.36、2.46~2.52、1.16~1.46、1.02~1.21 mg/g,大黄素0.27~0.39、0.28~0.34、0.30~0.42、0.31~0.67 mg/g,大黄酚2.85~3.70、2.78~3.01、4.02~4.81、4.05~4.72 mg/g,大黄素甲醚1.88~2.44、1.82~2.01、2.48~3.02、3.61~4.46mg/g。而叶中含芦荟大黄素0.56~1.07 mg/g,大黄酸0.45~0.69 mg/g,大黄素1.41~1.91 mg/g。主根、叶柄、叶片中可溶性多糖质量分数分别为9.76%~10.42%、5.76%~7.63%和3.50%~5.72%。叶柄和叶片中纤维素质量分数分别为15.54%和10.20%。掌叶大黄叶片中Ca量最高,达88.53 mg/g,K、Mg、Al、Fe依次为32.42、12.93、1.22、1.17 mg/g;叶柄中Ca、K量分别为80.60、28.73 mg/g,高于主根21.08、14.09 mg/g;叶柄中Na量为2.66 mg/g,高于主根0.26 mg/g和叶片0.57 mg/g。结论蒽醌类成分在根中的种类和量总体高于叶柄和叶片,符合传统入药部位的认识。叶片中大黄素量大致为根中的5倍,叶柄、叶片中还含有一定量的纤维素和可溶性多糖类成分,元素种类丰富,可进一步深入开发利用。     

丛枝菌根真菌对掌叶大黄产量及次生代谢产物的影响

目的:观察丛枝菌根(AM)真菌在人工栽培条件下对掌叶大黄根和根茎的产量及化学成分含量的影响。方法:通过室内盆栽对照试验,设不接种AM组为CK组,设接种摩西斗管囊霉(Funneliformis mosseae)为AM组,每处理组重复15盆,每盆播种掌叶大黄种子10粒,出苗后间苗3株。采用文献方法计算菌根侵染率和浸染强度,采用称重法测定掌叶大黄根和根茎产量,采用高效液相色谱法测定掌叶大黄根和根茎中蒽醌类成分的含量,比较施加AM真菌后,掌叶大黄生物量、蒽醌类组分的变化。结果:AM组与CK组的侵染率分别为(96.96±1.57)%和0,侵染强度分别为(62.07±3.40)%和0;与CK组比较,AM组根和根茎产量提高了(42.96±2.12)%,总蒽醌类平均值提高了127.43%,差异均有统计学意义(P0.05)。HPLC分析结果表明,AM组与CK组掌叶大黄蒽醌类在含量和成分间的比例上发生了一定的变化,但接种AM真菌处理并未导致掌叶大黄有效成分的根本改变。结论:接种AM真菌后,能明显促掌叶大黄根和根茎的生长发育,增加药用部位中有效成分的含量,但在试验期间未造成掌叶大黄质量的变异。