小白菊内酯对人肺癌A-549细胞周期变化和凋亡通路的影响

目的:研究小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用及其机制,为研发新型抗肿瘤中药奠定坚实的基础。方法:应用MTT法测定小白菊内酯对肺癌细胞的毒性作用和抑制增殖作用;应用倒置显微镜、Annexin V-FITC/碘化丙锭(PI)染色荧光显微镜观察药物作用前后人肺癌A-549细胞的形态学变化;应用活性氧(ROS)检测药物作用后细胞内活性氧的水平,以及活性氧含量与细胞凋亡之间的关系;应用免疫细胞化学技术检测药物作用前后蛋白阳性表达变化的情况并进一步探讨小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株抑制增殖和诱导凋亡的作用机制。结果:(1)MTT法检测结果显示:小白菊内酯在不同浓度(5mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、55 mg/L、60 mg/L、65 mg/L)对人肺癌A-549细胞有不同程度的生长抑制作用,并呈现出浓度和时间梯度依赖性,当药物终浓度为55 mg/L作用时间为48h时,对A-549细胞的抑制率为51.02%。(2)Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜观察发现实验组细胞可见大量绿色荧光细胞和红色凋亡细胞。(3)活性氧检测发现:实验组细胞内活性氧的水平出现明显升高。(4)免疫细胞化学检测法结果显示对照组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax分别为10.07%、11.42%、14.09%、9.75%和11.87%,加入小白菊内酯后(实验组)细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax蛋白的表达为89.24%、85.75%、84.46%、85.14%和84.09%,与对照组相比明显增加,有显著差异。结论:小白菊内酯作用于人肺癌A-549细胞株后,诱导其出现细胞凋亡的改变,它通过死亡受体通路和线粒体通路来完成诱导凋亡的机制,小白菊内酯作用后活性氧水平的增加可能参与诱导细胞凋亡的机制。     

半枝莲提取物对肺癌A549细胞生存素蛋白表达的影响

目的:研究半枝莲提取物对肺癌A549细胞生存素(survivin)蛋白表达的影响及其作用机制。方法:体外培养(10%胎牛血清、1640培养基)肺癌A549细胞,MTT法观察半枝莲提取物对A549细胞的抑制作用,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学(SP)法检测半枝莲提取物对A549细胞survivin蛋白表达的影响。结果:MTT法结果显示,半枝莲提取物质量浓度5～40 mg·L-1对A549细胞的抑制率呈浓度依赖性(P<0.01)。半枝莲提取物18.86 mg·L-1剂量组凋亡指数为(38.40±7.41)%,对照组为(6.22±0.45)%,两者有显著性差异(P<0.01)。半枝莲提取物组survivin蛋白阳性细胞数明显低于对照组(P<0.01)。结论:半枝莲提取物能明显抑制肺癌A549细胞生长,其机制可能与下调survivin表达有关。     

透骨草提取物对人肺癌A549细胞凋亡及其PUMA/Bcl-2/Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察透骨草提取物对人肺癌A549细胞PUMA(P53上调凋亡调空因子)、Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2)、Caspase-3(天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3)蛋白表达的影响,从凋亡诱导的角度探讨透骨草提取物抑制A549细胞增殖的作用机制。方法:将A549细胞分为实验组和对照组;吖啶橙染色观察透骨草提取物对A549细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对A549细胞PUMA、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果:吖啶橙染色结果显示,39.7 mg/L透骨草提取物处理的A549细胞皱缩,胞核固缩、呈边集,出现凋亡小体。免疫组化检测结果显示,39.7 mg/L透骨草提取物处理的A549细胞PUMA蛋白显著高于对照组(P0.05),而Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达显著低于对照组(P0.05)。结论:透骨草提取物对A549细胞具有凋亡诱导作用,机制与促进A549细胞PUMA蛋白表达、抑制Bcl-2和Caspase-3蛋白表达有关。     

半枝莲提取物诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡及对凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨半枝莲提取物(Scutellaria barbataextract,SBE)对人肺癌SPC-A-1细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法:体外培养肺癌SPC-A-1细胞,以2.5、5、10 mg/L SBE处理SPC-A-1细胞48h,并以2.5 mg/L顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,TUNEL法检测凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达。结果:与正常对照组相比,SBE各组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3 mRNA表达显著上升(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:SBE具有诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调caspase-3及下调survivin基因表达有关。     

半枝莲提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨半枝莲提取物(Scutellaria barbata D.Don extract,SBE)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Survivin和Caspase-3表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,以2.5,5和10 mg.L-1SBE处理48 h,并以2.5 mg.L-1顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Bcl-2,Survivin和Caspase-3蛋白表达。结果与正常对照组相比,SBE各浓度组细胞抑制率显著升高(P(0.001),细胞凋亡率明显上升(P(0.01),Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.01或P<0.05),Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论SBE具有诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调Caspase-3蛋白表达以及下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关。     

白藜芦醇致敏TRAIL诱导人肝癌细胞凋亡及其相关机制的研究

目的研究白藜芦醇对TRAIL诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其机制。方法培养人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照组、TRAIL干预组、Res+TRAIL干预组,进行DNA末端原位标记(TUNEL)染色法作凋亡分析;Western Blot检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞Survivn表达的影响。结果对照组SMMC-7721细胞的凋亡指数为(1.78±0.49)%,TRAIL干预组凋亡指数为(9.86±0.53)%,Res+TRAIL干预组中25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L浓度Ros凋亡指数分别为(11.30±0.80)%,(20.89±0.69)%和(27.78±1.88)%。除Res+TRAIL干预组(25μmol/L)与TRAIL干预组比较无显著性差异(P0.05),其余各组之间比较差异均有统计学意义(P均0.05)。Western Blot测定结果显示:25μmol/L Ros处理组Survivin/β-actin的值与对照组相比无统计学差异(P0.05);50μmol/L和100μmol/L Res处理组Survivin/β-actin的值较对照组显著降低(P0.01);100μmol/L Res处理组Survivin/β-actin的值较50μmol/L显著降低(P0.01)。结论 TRAIL对SMMC-7721细胞有凋亡诱导作用;Res对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡有致敏作用,并且这种作用呈剂量依赖关系;其分子机制可能与下调凋亡抑制因子Survivin的表达有关。     

远志皂苷元诱导肺癌A549细胞凋亡作用研究

目的:观察远志皂苷元诱导肺癌A549细胞凋亡作用,初步探讨其可能作用机制。方法:以肺癌A549细胞为实验对象,通过不同浓度的远志皂苷元(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理A549细胞,MTT观察细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞的凋亡率;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的活性;Real Time PCR检测凋亡相关基因TNF-α、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的表达。结果:远志皂苷元可显著抑制A549细胞增殖(P0.05)、诱导A549细胞凋亡(P0.05)。同时增强Caspase-3和Caspase-9的活性,显著改变TNF-α、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的基因表达(P0.05)。结论:远志皂苷元可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其调节Caspase家族因子活性有关。     

直立白薇苷C诱导肺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的研究白薇诱导肺癌A549细胞凋亡的活性成分及其作用机制。方法以肺癌A549细胞为实验对象,通过硅胶柱层析等方法确定其活性成分,并利用比色法研究活性成分对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9的活性以及凋亡相关基因肿瘤坏死因子(TNF-α)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(BCL2)、Caspase-3和生存素(Survivin)的影响。结果分离获得1种能诱导肺癌A549细胞凋亡的活性成分,经鉴定为直立白薇苷C。它可显著抑制A549细胞增殖、诱导A549细胞凋亡。同时增强Caspase-3和Caspase-9的活性,上调TNF-α基因表达,下调BCL2、Caspase-3和Survivin等基因表达。结论直立白薇苷C可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其调节Caspase家族因子活性有关。     

槲皮素对甲型H1N1流感病毒诱导的A549细胞凋亡效应酶Caspase-3的影响

目的观察银杏叶主要活性成分槲皮素对甲型H1N1流感病毒感染的人肺上皮瘤细胞A549凋亡效应酶Caspase-3的影响。方法采用MTT法测定H1N1毒力、槲皮素细胞毒性作用、槲皮素对H1N1致A549细胞病变的抑制作用。然后用100 TCID50甲型H1N1感染A549 2 h后换用含10 mg/L槲皮素维持液继续培养,于感染后4、12、24、48 h收集细胞,提取细胞总蛋白,采用Western blot方法,应用Image-Pro Plus测定Caspase-3与β-actin灰度值,两者灰度比值为Caspase-3的相对表达量。结果甲型H1N1 A549的TCID50为10-4.75,槲皮素A549的最大无毒浓度为40 mg/L,槲皮素抑制甲型H1N1致A549细胞病变的最小有效浓度为10 mg/L。在甲型H1N1感染A549细胞后4～48 h内,槲皮素可显著抑制Caspase-3蛋白表达,具有明显的抗凋亡作用。结论槲皮素可通过抑制Caspase-3含量或活性而发挥抗病毒感染作用。     

鸦胆子油乳脂质纳米粒对A549细胞抑制作用的研究

目的探讨鸦胆子油乳脂质纳米粒对人非小细胞肺癌A549细胞株的抑制、凋亡作用及其机制。方法用MTT法检测设不同浓度实验组(30、60、90、120 mg/L)及不同作用时间(24、48、72 h)药物对细胞的抑制率;用流式细胞仪检测药物浓度60 mg/L作用24、48、72 h后实验组细胞的凋亡率;RTPCR检测Caspase-3 mRNA的表达。结果不同浓度、时间鸦胆子油乳脂质纳米粒对A549细胞增殖的影响:细胞增殖抑制率在一定剂量范围内随浓度的增加而增加,具有剂量依赖性,用相同浓度鸦胆子油乳脂质纳米粒(60 mg/L)干预A549人肺腺癌细胞24、48、72 h,抑制率在一定时间范围内随时间的延长而增加,具有时间依赖性。用相同浓度鸦胆子油乳脂质纳米粒(60 mg/L)干预A549人肺腺癌细胞24、48、72 h凋亡率分别是:48.67%±1.42,64.82%±1.46,68.25%±1.32。RT-PCR结果提示鸦胆子油乳脂质纳米粒上调了Caspase-3 mRNA的表达。结论鸦胆子油乳脂质纳米粒可以抑制人肺腺癌A549细胞增殖和诱导凋亡,并呈时间-剂量关系,其机制可能与上调Caspase-3的表达有关。     

穴位贴敷治疗实证痛经的疗效观察及对前列腺素的影响

目的:观察穴位贴敷治疗实证痛经的临床疗效及对前列腺素的影响.方法:将原发性痛经的实证患者随机分为贴敷组和药物组,贴敷组31例使用中药(制南星、三棱、莪术等)在中极、关元、气海穴处进行贴敷治疗;药物组30例口服田七痛经胶囊治疗.在治疗前后分别观察痛经的疼痛程度及持续时间的积分,测定外周血前列腺素F_(2α)(PGF_(2α))与前列腺素E_2(PGE_2)含量.结果:贴敷组总有效率为93.5%,明显优于药物组的73.3%(P<0.05);两组患者治疗后症状积分均较治疗前明显降低(均P<0.01),且贴敷组症状改善程度较药物组显著(P<0.01);贴敷组可明显升高原发性痛经患者外周血中PGE_2含量(P<0.01),明显降低外周血中PGF_(2α)含量及PGF_(2α)/PGE_2比值(均P<0.01).结论:穴位贴敷治疗实证原发性痛经有较好的疗效,临床值得推广.穴位贴敷对原发性痛经患者前列腺素的合成有良性调节作用.     

参桂胶囊治疗慢性心力衰竭的疗效及对BNP的影响研究

目的探讨参桂胶囊治疗慢性心力衰竭的疗效及对BNP的影响。方法将180例慢性心力衰竭患者随机分为观察组和对照组各90例,2组均给予常规西医抗心力衰竭治疗,观察组在此基础上加用参桂胶囊。观察2组治疗前及治疗4周后6 min步行距离、中医证候积分、超声心动图相关指标以及血清TNF-α、hs-CRP、BNP水平变化情况,统计2组治疗4周后的临床疗效。结果 2组6 min步行距离、中医证候积分、SV、LVEF均较治疗前明显改善(P均0.05),且观察组改善情况明显优于对照组(P均0.05);2组治疗后LVEDd无明显变化(P均0.05);对照组治疗后TNF-α、hs-CRP以及BNP水平无明显变化(P均0.05),而观察组治疗后TNF-α、hs-CRP以及BNP水平均较治疗前及对照组明显改善(P均0.05);观察组总有效率明显高于对照组(P0.05)。结论参桂胶囊可明显改善慢性心力衰竭患者心脏功能,提高生活质量,值得临床推广应用。     

走罐治疗寻常型银屑病的疗效及对PASI评分影响的Meta分析※

目的:系统分析走罐疗法治疗寻常型银屑病的疗效。方法:使用计算机检索中国知网、万方数据、维普期刊、中国生物医学文献数据库、Pubmed、cochrane library等数据库,通过检索词查找走罐治疗寻常型银屑病的临床随机对照试验,文献时限为建库以来至2019年10月,分别由两名评估员进行检索并筛选文献,并使用cochrane 5.1评价手册评价纳入文献的质量及偏倚风险,运用RevMan5.3软件对纳入文献的数据进行分析。结果:最后纳入7篇文献,共计640例寻常型银屑病患者。Meta分析结果显示:走罐组治疗寻常型银屑病的有效率高于对照组[OR=4.60,95%CI(2.73,7.78),Z=5.71,P0.00001],具有显著差异;走罐组治疗寻常型银屑病后PAIS评分低于对照组[MD=-2.77,95%CI(-3.92,-1.61),Z=4.69,P0.00001],具有显著差异。结论:通过走罐疗法治疗寻常型银屑病,其有效率及对PASI评分的影响均优于其它治疗方法。     

脂必泰治疗高血脂症的疗效及对脂肪肝、颈动脉斑块的影响

目的评价脂必泰胶囊治疗高血脂症的疗效及对脂肪肝程度、动脉内膜厚度及颈动脉斑块的影响。方法 80例高血脂症患者给予脂必泰胶囊240 mg/次口服,2次/d,分别于治疗前及治疗后3个月、6个月、12个月检测血脂、肝肾功能、肌酸激酶,并于治疗前及治疗后6个月、12个月行肝脏超声检查,治疗前及治疗后12个月行颈动脉超声检查。结果治疗3个月、6个月及12个月后,患者总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇均显著下降,高密度脂蛋白胆固醇显著升高。治疗前后肝肾功能、肌酸激酶无明显变化。治疗6个月、12个月后脂肪肝程度较治疗前显著改善。治疗12个月后,颈动脉内膜厚度减小,血流速度增快,颈动脉斑块最大横截面积减小。结论脂必泰除能有效调节血脂外,还能有效改善脂肪肝程度、颈动脉内膜厚度和颈动脉斑块大小,且临床应用安全。     

Cytoprotective effect on oxidative stress and inhibitory effect on cellular aging of Uncaria sinensis Havil

The ethanol extract from the hooks and stems of Uncaria sinensis Havil (Rubiaceae) exhibited significant inhibitory activity on oxidative stress and the age-dependent shortening of the telomeric DNA length. In the peroxidation model using t-BuOOH, the Uncaria sinensis extract showed a notable cytoprotective effect on the HEK-N/F cells with 65.0 +/- 3.0% of cell viability when compared with control cells at a concentration of 50 microg/ml. In addition, the Uncaria sinensis extract exhibited a significant cytoprotective effect against UVB-induced oxidative damage. The life-span of the HEK-N/F cells was elongated by 201% as a result of the continuous administration of 3 microg/ml of the Uncaria sinensis extract compared to that of the control. These observations were attributed to the inhibitory effect of the Uncaria sinensis extract on the age-dependent shortening of the telomere length as shown by the Southern blots of the terminal restriction fragments (TRFs) of DNA extracted from subculture passages.     

乌拉地尔治疗慢性心力衰竭的疗效及对血浆脑钠肽水平的影响

目的观察盐酸乌拉地尔治疗慢性心力衰竭(CHF)患者的临床疗效及对血浆脑钠肽(BNP)的影响。方法将80例心功能(NYHA)Ⅲ～Ⅳ级CHF患者随机分为治疗组和对照组各40例。2组均给予常规治疗,包括利尿剂、口服血管紧张素转换酶抑制剂、地高辛等,治疗组在此基础上静脉泵入乌拉地尔50～200μg/m in,对照组给予硝酸异山梨酯(异舒吉)10～40μg/m in,疗程均为7～10 d。治疗前后观察2组患者血浆BNP变化,采用超声心动图、6 m in步行实验等方法观察疗效。结果 2组治疗后BNP、心功能、6 m in步行实验距离均明显改善,治疗组改善情况优于对照组。2组均未见明显不良反应。结论盐酸乌拉地尔能有效降低CHF患者血浆BNP,改善心功能,且安全可靠。     

化痰散结法治疗亚急性甲状腺炎疗效及对患者炎症因子的影响

目的:探讨化痰散结法治疗亚急性甲状腺炎的近期疗效及对患者血清炎症因子的影响。方法:选取亚急性甲状腺炎患者80例。随机分为对照组和观察组各40例。对照组给予醋酸泼尼松治疗,观察组在对照组用药基础上给予化痰散结法治疗。比较两组治疗前后甲状腺功能指标(FT₃、FT₄、TSH)、血清炎症因子(TNF-α、IL-2、IL-3)变化、临床疗效及生活质量情况。结果:治疗后2、4、8周,两组患者中医症状积分均明显下降,且观察组比对照组下降更明显(P<0.05)。治疗前,两组血清FT₃、FT₄、TSH、TNF-α、IL-2、IL-3比较差异无统计学意义(P>0.05); 两组治疗后FT₃、FT₄、TNF-α均降低,TSH、IL-2、IL-3均升高(P<0.05); 观察组治疗后FT₃、FT₄、TNF-α均低于对照组,TSH、IL-2、IL-3均高于对照组(P<0.05); 两组治疗期间均未出现明显不良反应,观察组总有效率95.00%高于对照组77.50%(P<0.05)。观察组治疗后生活质量明显优于对照组(P<0.05)。结论:化痰散结法可显著改善亚急性甲状腺炎患者甲状腺功能,降低血清TNF-α水平,提高IL-2、IL-3水平,临床疗效满意。     

马鞭草镇痛作用的实验研究

目的:探讨马鞭草的镇痛作用.方法:镇痛实验采用热板法和醋酸扭体法.结果:马鞭草提取物能显著抑制醋酸致小鼠扭体反应,可明显延长热板引起小鼠疼痛反应的痈阈值.结论:马鞭草有明显的镇痛作用.     

龙胆苦苷抗炎药理作用研究

目的 研究秦艽所含龙胆苦苷的抗炎作用。方法 分别用二甲苯致小鼠耳肿胀，冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加及小鼠扭体反应，酵母多糖A、角叉菜胶、制霉菌素致大鼠或小鼠足跖肿胀模型，ig给药，观察龙胆苦苷的抗炎作用。结果 龙胆苦苷能减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀、冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶、酵母多糖A所致大鼠足跖肿胀，但对制霉菌素所致的炎症模型无明显作用。结论 秦艽所含龙胆苦苷具有一定的抗炎作用，其机制涉及对多种炎症介质的抑制。抗炎作用能部分代表秦艽生药的传统功效。     

Cytoprotective effect on oxidative stress and inhibitory effect on cellular aging of Terminalia chebula fruit

The ethanol extract from the fruit of Terminalia chebula (Combretaceae) exhibited significant inhibitory activity on oxidative stress and the age-dependent shortening of the telomeric DNA length. In the peroxidation model using t-BuOOH, the T. chebula extract showed a notable cytoprotective effect on the HEK-N/F cells with 60.5 +/- 3.8% at a concentration of 50 microg/ml. In addition, the T. chebula extract exhibited a significant cytoprotective effect against UVB-induced oxidative damage. The life-span of the HEK-N/F cells was elongated by 40% as a result of the continuous administration of 3 microg/ml of the T. chebula extract compared to that of the control. These observations were attributed to the inhibitory effect of the T. chebula extract on the age-dependent shortening of the telomere, length as shown by the Southern blots of the terminal restriction fragments (TRFs) of DNA extracted from subculture passages.