人脐血树突状细胞体外扩增的研究

目的 探讨人脐血来源的树突状细胞(dendritic cells，DC)的体外培养、增殖情况。方法 采用密度梯度离心法获得界面细胞，贴壁培养2小时，获得单个核细胞，体外以重组hGM-CSF(50ng/m1) hIL-4(10n g/ml) hTNF-α(50ng／m1)诱导培养2周。在DC发育过程中，在光镜下观察其生长情况，流武细胞仪检测DC表型。结果 体外培养的DC在第四天由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞，随着培养时间的延长。此类细胞数量增多。第八天为形态不规则的毛刺状，为典型树突状细胞形态。流式细胞仪显示体外培养成熟的De高表达共刺激分子CD80、黏附分子CD54、MHC Ⅱ类分子HLA-DR。结论 人脐血经hGM-CSF hIL-4 hTNF-α体外培养，能诱导出DC,本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础。     

多细胞因子及高敏C反应蛋白在手足口病患儿中的表达

目的探讨手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)患儿血清多细胞因子[白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)、粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]以及高敏C反应蛋白(hs-CRP)的表达水平及其临床意义。方法选择2011年10～12月60例HFMD患儿(病例组),分为轻症组(n=32)和重症组(n=28);选择同期28例健康体检儿童作为对照组。采集静脉血进行多细胞因子及hs-CRP的检测。结果 HFMD重症组血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN、TNF及GM-CSF的水平均显著高于对照组及轻症组(P0.01),而轻症组多种细胞因子水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。重症组hs-CRP水平明显高于轻症组,差异有统计学意义(P0.01)。结论除IL-8外的其他多种细胞因子及hs-CRP可作为判断HFMD病情、监测疾病进展、指导早期治疗的重要指标。     

小鼠骨髓树突状细胞体外扩增方法的建立

目的建立小鼠骨髓树突状细胞(DC)体外大量扩增方法。方法应用粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-4诱导培养小鼠骨髓细胞，应用相差显微镜观察形态学变化，’H-TdR掺入法检测细胞增殖能力，FACS检测细胞表面分了，ELISA检测细胞因子。结果体外诱导培养8天后可获得大量形态学典型的DC，具有强烈的激活同种异体或自体T细胞增殖反应能力。FACS检测表明，扩增的DC表达IaK^b、CDllc、CD80、CD86、ICAM-1分子。DC接受LPS刺激后，可以促使DC成熟，分泌IL-12(p70)、IL-6、TNF-a和IL-1β水平增强。结论小鼠骨髓细胞体外诱导培养，可生成大量功能成熟的DC，为进一步开展DC基础和临床研究打下基础。     

小儿中枢神经系统感染脑脊液时IL-8和G-CSF的检测价值

目的:探讨小儿中枢神经系统感染时白介素 8(IL-8)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的变化。方法: 用ELISA法检测91例中枢神经系统感染患儿中的59例病毒性脑炎或脑膜脑炎(Vm & Ve)患儿、 22例化脓性脑膜炎患儿(Pm)和10例结核性脑膜炎患儿(Tm),并以21例非神经系统疾病患儿的脑脊液、血清G-CSF和IL-8活性作为对照。结果:患儿组脑脊液IL-8明显高于对照组(P<0.05),但患儿组间差异无显著性。G-CSF各组间差异无显著性。结论:IL-8在中枢神经系统感染发病中起作用,但IL-8、G-CSF的检测无鉴别诊断价值。     

哮喘患者血清G-CSF和IL-10的变化

目的探讨哮喘患者血清粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和白细胞介素10(IL-10)的变化.方法采用Elisa双抗体夹心法检测患者血清G-CSF和IL-10水平.结果哮喘患者血清G-CSF明显高于对照组(P＜0.01):合并肺炎组血清G-CSF最高;治疗后血清G-CSF明显下降(P＜0.01);血清IL-10明显低于对照组(P＜0.01);而治疗后血清IL-10明显上升(P＜0.01);血清C-CSF与IL-10呈负相关(r=-0.732,P＜0.01).结论哮喘患者血清G-CSF升高,IL-10降低,二者参与哮喘病理炎症发展:检测G-CSF和IL-10对临床治疗有一定指导意义.     

不同浓度粒巨噬细胞集落刺激因子在未成熟树突状细胞培养中的效果研究

目的:探讨不同浓度细胞因子在培养小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞(Dendritic cells,DC)中的作用,寻找培养所需最佳细胞因子浓度.方法:分别用低、中、高剂量粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulatingfactor,GM-CSF)联合或不联合白细胞介素4(Interlenkin-4,IL-4)培养小鼠骨髓源性未成熟DC,对其进行形态学观察和细胞表型检测.结果:培养第7 d,低剂量组DC数量最少、突起细小,CD80、CD86及主要组织相容(Major histocompatibility complex,MHC Ⅱ)类分子表达低,如联合IL-4培养口1提高DC数量;中等剂量组与高剂量组DC较低剂量组为多,CD80、CD86及MHCⅡ类分子表达亦较前者提高,但二组无明显差异,有无联合IL-H4培养的差异亦不显著.结论:GM-CSF低剂量时,可诱导出纯度较高的末成熟DC,而GM-CSF中等剂量和高剂量时,无论是否联合诱导IL-4培养,诱导未成熟DC的产量及纯度无明显差异.     

不同方法对未成熟树突状细胞体外诱生的研究

目的筛选最佳体外诱生大鼠未成熟树突状细胞(imDC)的方法。方法用低剂量(0.2ng/mL)粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombination rat GM-CSF,rrGM-CSF)体外诱导imDC;用常规剂量(5ng/mL)的GM-CSF加大鼠白细胞介素-4(recombinationratIL-4,rrIL-4)(5ng/L)体外诱导imDC;rrGM-CSF rrIL-4再加大鼠白细胞介素-10(recombination rat IL-10,rrIL-10)(10ng/mL)体外诱导imDC;第13天收获细胞,观察形态;流式细胞仪检测表面抗原;混合淋巴细胞培养(MLR)检测DC刺激同种异体T淋巴细胞的能力,培养上清白细胞介素-12(IL-12)的浓度和细胞增殖情况等方面进行考察,对比筛选。结果低剂量GM-CSF组和IL-10组DC与GM-CSF IL-4组DC相比,符合imDC的特点;GM-CSF IL-4组DC表现成熟DC的特点,但细胞增殖情况低剂量GM-CSF组明显低于GM-CSF IL-4 IL-10组,两组相比差别具有显著性。结论GM-CSF IL-4 IL-10组是最佳诱导imDC的方法。     

危重症患者血清促炎性细胞因子变化的研究

目的　研究危重症患者血清肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白细胞介素 6 (IL 6 )及IL 8等促炎性细胞因子的变化。方法　 5 1例危重症患者进入重症监护病房 (ICU)后第 1、2、3、4、5、6及 7d清晨空腹抽取静脉血 3mL ,用放射免疫法检测血清中TNF α、IL 6及IL 8浓度。用急性生理和慢性健康评分Ⅲ (APACHEⅢ )每日进行危重症评分。每一观察日的各项指标录入数据库。结果　存活组与死亡组比较 ,TNF α从第 1个观察日起有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;IL 8从第 4个观察日起有非常显著性差异 (P <0 0 1) ;IL 6从第 2个观察日起有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;两组各观察日TNF α、IL 6及IL 8与各自正常值比较有非常显著性差异 (P <0 0 1) ;APACHEⅢ评分从第 1个观察日起即有非常显著性差异 (P <0 0 1)。TNF α、IL 6及IL 8与APACHEⅢ评分比较 ,敏感性、特异性、准确率、阴性预测值以及阳性预测值等基本相似。结论　TNF α、IL 6和IL 8浓度与APACHEⅢ评分一样可作为评估危重症病情及其预后的辅助指标     

狼疮性肾炎外周血粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体表达的研究

目的:探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体(GM-CSFR)在狼疮性肾炎(LN)发病中的意义.方法:运用流式细胞术对32例LN病人、15例正常人的外周血GM-CSFR水平进行测定分析.结果:LN外周血单核细胞GM-CSFR表达水平显著高于正常对照组(P＜0.01);外周血中性粒细胞GM-CSFR表达水平两组差异不显著(P＞0.05).外周血单核细胞GM-CSFR表达水平与蛋白尿程度呈正相关.结论:GM-CSFR与系统性红斑狼疮的发病及LN的肾脏损害密切相关.     

外周血单个核细胞的GM-CSF与白介素-10mRNA表达量比值的变化与哮喘气道炎症

目的探讨炎症因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与抑炎因子IL-10基因表达的动态变化与治疗前后症状改善的关系,寻找简便易行能较好反映气道炎症客观指标。方法对42例症状期支气管哮喘（简称哮喘）患者,采用RT-PCR方法,进行吸入糖皮质激素治疗前后（普米克TM气雾剂200～1000 μg/d）外周血单个核细胞GM－CSF/β actin mRNA,IL-10/β-actin mRNA表达动态监测,并与健康人对比。结果 GM-CSF /β-actin与IL-10/β-actin相对比值在症状期哮喘组显著高于正常对照组;分别为 2.751 7±0.695和5.097 2±0.853(P＝0.038)。抗炎治疗后随症状缓解,PBMCs GM-CSF /β-actin与IL-10/β-actin相对比值下降至2.426±0.755（P=0.000）。结论动态观察炎症因子/抑炎因子的相对值-GM-CSF/IL-10在外周血单个核细胞的表达变化,对于客观判断临床疗效及指导进一步的抗炎治疗可能更具实用价值。     

鼻息肉患者血清白细胞介素-5、白细胞介素-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和嗜酸性粒细胞水平变化及相关性

目的探讨鼻息肉患者血清白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-8(IL-8)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和嗜酸性粒细胞水平变化及相关性。方法选择2013年1月至2014年12月在仙桃市第一人民医院住院治疗的鼻息肉患者32例作为鼻息肉组,另选择同期体检健康者24例作为对照组,采用酶联免疫吸附试验测定血清IL-5、IL-8和GM-CSF水平,应用全自动血细胞计数仪进行嗜酸性粒细胞计数。结果鼻息肉组患者血清IL-5、IL-8和GM-CSF水平显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),鼻息肉组患者外周血嗜酸性粒细胞计数亦显著高于对照组(P<0.01)。鼻息肉患者血清GM-CSF水平与IL-5水平呈正相关(r=0.658,P<0.01),嗜酸性粒细胞计数与IL-8水平呈正相关(r=0.409,P<0.05)。结论 IL-5、IL-8和GM-CSF可能参与了鼻息肉的发生和发展。     

病毒性脑炎患儿脑脊液IL-6、TNF-α的变化及临床意义

目的：探讨病毒性脑炎患儿脑脊液中IL-6、TNF-α的变化。方法：采用ELISA法检测46例病毒性脑炎患儿急性期和恢复期脑脊液中的IL-6、TNF-α的水平,并与20例正常儿童进行比较,用直线相关分析法对IL-6,TNF-α与脑脊液中白细胞计数、糖、蛋白质定量分别进行相关性分析。结果：病毒性脑炎患儿急性期脑脊液中IL-6、TNF-α水平均明显高于对照组;重症组高于轻症组（P〈0.01）,IL-6、TNF-α含量与病情严重程度呈正相关;急性期比复期有明显增高（P〈0.01）。结论：病毒性脑炎患儿脑脊液中IL-6、TNF-α均明显增高,其水平与疾病的发生、发展和病情严重程度有关,病情越重,其值越高,恢复越慢。     

首发精神分裂症患者血清细胞因子水平变化的研究

目的:探讨精神分裂症患者的免疫状态、细胞因子与精神症状的关系.方法:采用酶联免疫吸附测定法(ELISA) 检测45 例精神分裂症患者和30例健康志愿者血清IL-1β、IL-2 、TNF-α水平.结果:精神分裂症患者治疗前、后血清IL-1β、IL-2 、TNF-α含量显著高于对照组(P<0.05); 治疗后精神分裂症组血清IL-1β、IL-2水平比治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05),而TNF-α水平有下降趋势,但无统计学意义 (P>0.05).IL-lβ治疗前后的差值与PANSS量表减分率呈正相关(r=0.82,P＜0.05);治疗前IL-2与PANSS量表阳性症状评分呈正相关(r=0.55,P＜0.05);治疗前TNF-α与PANSS量表阴性症状评分呈正相关(r=0.69,P＜0.05).结论:精神分裂症患者处于免疫激活状态;IL-1β水平的变化也许可以作为抗精神病药物疗效的一个参考指标;细胞因子与精神病理之间存在着一定关系.     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的研究

目的 进行重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）的临床前研究和Ⅰ期临床试验。方法在动物模型上进行ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的药理、毒理、药代和药效研究，并在人体上进行安全性评价和初步疗效观察。结果体外实验证明ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对骨髓造血祖细胞有促增殖作用；在６０Ｃｏｒ射线照射造成的白细胞低下动物（狗和猴），显示了明显的升白细胞作用；急性毒性试验显示，ＬＤ５０大于５０００μｇ／ｋｇ；小鼠的药代动力学研究表明，注入的ＧＭ－ＣＳＦ主要从尿中排出，并不在体内蓄积；狗的慢性毒性试验表明在高于临床用量３倍时，无明显毒性反应。Ⅰ期临床试验证明，每天在２．５－７．５μｇ／ｋｇ的剂量下使用是安全的，并能升高白细胞。结论ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可用于治疗放疗与化疗引起的白细胞减少症。     

小儿中枢神经系统感染时脑脊液IL—8和G—CSF的检测价值

目的探讨小儿中枢神经系统感染时白介素8(IL-8)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的变化。方法用ELISA法检测91例中枢神经系统感染患儿中的59例病毒性脑炎或脑膜脑炎(Vm&Ve)患儿、22例化脓性脑膜炎患儿(Pm)和10例结核性脑膜炎患儿(Tm)，并以21例非神经系统疾病患儿的脑脊液、血清G-CSF和IL-8活性作为对照。结果患儿组脑脊液IL-8明显高于对照组(P<0.05)，但患儿组间差异无显著性。G-CSF各组间差异无显著性。结论IL-8在中枢神经系统感染发病中起作用，但IL-8、G-CSF的检测无鉴别诊断价值。     

脑膜炎患者脑脊液中粒细胞集落刺激因子的测定

为探讨粒细胞集落刺激因子（ＧＣＳＦ）在脑膜炎诊断中的价值，对１９例化脓性脑膜炎（化脑）和２７例病毒性脑膜炎（病脑）患儿进行了脑脊液ＧＣＳＦ的测定，并对部分患儿进行动态观察。结果：ＧＣＳＦ在化脑患儿脑脊液中的阳性率为７８９％，明显高于病脑患儿的阳性率３７％（Ｐ＜０００１），并且随着化脑患儿进行抗生素治疗的好转或恢复，脑脊液中ＧＣＳＦ的阳性率明显降低（Ｐ＜０００１）。提示：脑脊液中ＧＣＳＦ的测定有助于化脑和病脑的鉴别及化脑患儿治疗效果的观察。     

脐血及外周血树突状细胞的体外诱导及比较研究

目的 :体外诱导扩增具典型形态、表型及功能的树突状细胞 (DC) ,以进行相关基础研究及临床应用。方法 :取正常人外周血及脐血 ,以 Ficoll分离取白细胞 ,去除悬浮细胞后 ,分别在以加入 GM- CSF,TNF-α(脐血 )及GM- CSF,IL- 4 (外周血 )的完全培养基中培养 ,在第 3,7,9天表型 (CD1a,CD80 ,CD83,HL A- DR)分析及形态观察 ,1周左右分别做同种异体混合淋巴细胞培养 ,比较激发细胞增殖的能力。结果 :脐血诱导的 DC细胞数大于外周血来源的 DC细胞数 ,两者有显著差异。两种来源的 DC在形态及细胞表型 (第 9天 CD1a脐血 6 7.2± 3.6 % ,外周血 6 9.3± 6 .8% ;CD83脐血 73.7± 5 .5 % ,外周血 75 .6± 4 .9% )无显著差异 ,两者的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力无显著差异。结论 :脐血可成功诱导功能性 DC,脐血诱导比外周血诱导效率高 ,且与外周血所诱导的 DC在形态及功能方面差异无显著性     

不同刺激因子对树突状细胞未成熟状态影响的实验研究

目的探讨重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠体内对树突状细胞(DC)数量及成熟度的影响,为诱导移植免疫耐受提供新途径。方法将Wistar雄性大鼠随机分成3组,对照组,GM-CSF预处理组,G-CSF预处理组。分别在给药的3,5,7,9,11d取脾脏并分离DC。采用流式细胞技术检测DC的数量及未成熟树突状细胞(imDC)及imDC/DC的比值。结果DC数量增长与两组药物刺激时间呈线性关系;两组imDC/DC与刺激时间呈正相关性,其中预处理后的第7d达最大值;两种刺激因子对大鼠体内DC增值的数量不具有统计学差异;两种预处理因素对大鼠体内DC成熟度的表达具有统计学差异。结论GM-CSF或G-CSF在大鼠体内作用时,可增加DC的数量及imDC/DC的比率。提示体内使用G-CSF在促进DC的未成熟状态以及诱导免疫耐受方面可能比GM-CSF更明显。