荆防败毒散对阿霉素肾病大鼠足细胞Nephrin、CD2相关蛋白及ILK通路的影响

目的观察荆防败毒散对阿霉素诱导肾病大鼠肾组织足细胞Nephrin、CD2相关蛋白(CD2AP)、整合素连接激酶(ILK)蛋白及基因表达的影响。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、苯那普利组、荆防败毒散组。除正常组外,其余各组采用大鼠尾静脉一次性注射阿霉素制备肾病模型,并进行相应干预。检测各组大鼠24 h尿蛋白水平及肾功能情况,检测肾组织中Nephrin、CD2AP及ILK蛋白及基因表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白水平显著上升,肾功能指标增高,肾组织中Nephrin、CD2AP蛋白及基因表达明显降低,ILK蛋白及基因表达显著上调。与模型组比较,荆防败毒散组大鼠24 h尿蛋白水平显著降低,肾功能指标下调,肾组织中Nephrin、CD2AP蛋白及基因表达明显上调,ILK蛋白及基因表达显著下调。结论荆防败毒散可减少阿霉素肾病大鼠蛋白尿水平,其可能机制是下调ILK表达,从而上调足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin、CD2AP表达。     

藏药灰兜巴对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的改善作用

目的探讨藏药灰兜巴对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的改善作用。方法采取高脂高糖饮食喂养和腹腔注射65 mg/kg链脲佐菌素法诱导糖尿病肾病大鼠模型。大鼠随机分为对照组、模型组、二甲双胍组、灰兜巴组,每组8只,灌胃给药6周。分别于药物干预前后进行口服葡萄糖耐量实验(oral glucose tolerance test,OGTT),收集24小时尿液并检测mAlb与Ucr比值;PASM观察肾组织病理学改变情况;Western blot法和免疫荧光法检测足细胞标志蛋白Nephrin表达;透射电子显微镜观察足细胞和肾小球基底膜损伤。结果与对照组比较,模型组大鼠时间-血糖曲线下面积及mAlb/Ucr升高(P0.01),足细胞标志蛋白Nephrin表达减少(P0.01),透射电镜下可见肾小球基底膜明显增厚及广泛足突融合。与模型组比较,灰兜巴可改善糖尿病肾病大鼠空腹葡萄糖耐量受损,降低mAlb/Ucr(P0.01),上调足细胞标志蛋白Nephrin表达(P0.01),减少足细胞丢失,改善足细胞和肾小球基底膜超微结构改变情况。结论益气养阴藏药灰兜巴可减轻糖尿病肾病大鼠足细胞损伤,降低蛋白尿,从而发挥肾脏保护作用。     

复方黄芪首乌合剂对代谢综合征大鼠肾组织Nephrin和Podocin的调节作用

目的:观察复方黄芪首乌合剂对代谢综合征大鼠早期足细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用高糖高脂饲料喂养法建立实验性代谢综合征大鼠模型,以复方黄芪首乌合剂(高、中、低剂量组)灌胃治疗,8周末收集尿标本检测24 h尿蛋白(24 hPro)、尿微量白蛋白(MA)和尿白蛋白肌酐比值(albumin to creatinine ratio,ACR);免疫组织化学法检测肾皮质Nephrin和Podocin的蛋白表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾皮质Nephrin和Podocin mRNA的表达;电镜下观察肾脏基底膜和足细胞的变化。结果:造模大鼠24 hPro、MA和ACR较正常对照组明显增加(P<0.01);肾小球基底膜显著增厚,足细胞与对照组大鼠比较明显减少,足突排列紊乱,足突融合;肾皮质Podocin、Nephrin蛋白和mRNA表达明显低于正常对照组(P<0.05)。经复方黄芪首乌合剂治疗8周后,24 hPro、MA、ACR均明显减少(P<0.05);肾小球基底膜病变减轻,细胞外基质增多减轻,足细胞数目增多,足细胞融合减轻;肾皮质Podocin、Nephrin蛋白和mRNA表达分别较模型组显著增加(P<0.05)。结论:复方黄芪首乌合剂对代谢综合征大鼠肾脏足细胞损伤有保护作用,其作用机制可能与其参与调节代谢综合征大鼠肾组织Nephrin和Podocin的蛋白和mRNA表达有关。     

苁归益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏Nephrin蛋白和Podocin蛋白表达的影响

目的探讨苁归益肾胶囊(由肉苁蓉、当归、山茱萸、桂枝、泽泻和丹皮组成)对高糖高脂饲料喂养加链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病肾脏足细胞裂孔隔膜蛋白相关分子(肾病蛋白Nephrin和肾小球足细胞裂隙膜蛋白Podocin)表达的影响,探讨其降低尿蛋白、保护肾脏的机制。方法随机抽取大鼠10只作为正常组,并将90只成模大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、苁归治疗组(苁归益肾胶囊高、中、低剂量组)。治疗10周后,收集大鼠尿液测定24 h尿蛋白定量,肾脏HE染色观察病理损伤,检测各组大鼠肾功能,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测肾组织Nephrin和Podocin蛋白的表达。结果苁归益肾胶囊可改善糖尿病肾病大鼠肾组织病理损伤,降低糖尿病肾病大鼠24 h尿蛋白定量血肌酐和血尿素,并能增加肾组织中Nephrin和Podocin蛋白的表达。各治疗组肾组织病理改变较模型组均有不同程度的改善。结论苁归益肾胶囊对糖尿病肾病模型大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与上调Podocin和Nephrin表达有关。     

冬虫夏草及雷公藤多甙对糖尿病肾病大鼠足细胞影响的实验研究

目的探讨冬虫夏草及雷公藤多甙对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞的保护作用。方法制备DN大鼠模型,将动物随机分为正常对照组(A组)、DN模型组(B组)、冬虫夏草治疗组(C组)及雷公藤多甙治疗组(D组)、两药联合治疗组(E组)。12周后观察24h尿蛋白排泄量(24hurinary protein count,24hpro)、血糖(Glu)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、外周血白细胞(WBC)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)以及肾重(KW)/体重(BW)等值的变化;HE染色检测肾组织病理变化;透射电镜测量足细胞超微结构变化;免疫荧光方法检测肾皮质nephrin和podocin蛋白表达。结果与A组比较,B组SCr、BUN增高(P<0.05);Glu、KW/BW和24hpro明显增高(P<0.01),肾小球、小管间质及足细胞病变,肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达减少。与B组比较,C、D、E组KW/BW和24hpro降低(P<0.01),肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻;肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达增高。与C组比较,D、E组KW/BW和24hpro降低,肾小球、小管间质及足细胞病变减轻,肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达增高,差异均有统计学意义以E组最为明显(P<0.01)。结论冬虫夏草及雷公藤多甙具有减轻DN蛋白尿,保护及修复DN大鼠足细胞病变的作用。其机制可能与其上调nephrin和podocin蛋白的表达有关。冬虫夏草与雷公藤多甙联合治疗可增加疗效并减轻雷公藤多甙的不良反应。     

嘌呤霉素肾病模型肾组织微小RNA的差异性表达及雷至胶囊的干预作用

目的:观察嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型鼠肾组织微小RNA(microRNAs,miR-NAs)差异性表达的特征及其与足细胞裂隙膜(slid diaphragm,SD)关键结构分子nephrin,podocin和骨架蛋白synaptopodin表达的关系;阐明雷至胶囊(Leizhi capsule,LZC)在体内通过调控模型鼠肾组织miRNAs差异性表达而改善足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,减少蛋白尿的机制.方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、雷至胶囊组(C,5 mL·kg-1·d-1)、雷公藤多苷组(D,10mL·kg-1 ·d-1)和缬沙坦(E,7.5 mL· kg-1·d-1)组.除A组外,其余各组大鼠一次性经颈静脉注射PAN(100 mg·kg-1)而建立PAN肾病模型.造模后第2天灌胃给药,A,B组大鼠用生理盐水干预,共10 d.造模前及造模后第3,9天称量各组大鼠体重,并检测24h尿蛋白排泄量(urinary protein ration,Upro).造模后第11天,处死全部大鼠,采集血液和肾组织,观察血清生化指标血清白蛋白(albumin,Alb),血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肾小球超微结构(足细胞足突形态)以及肾组织dicer酶,nephrin,podocin,synaptopodin表达;同时,借助生物芯片(biochip)技术,分析肾皮质miRNAs差异性表达的特征,并且,借助荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)验证mo-miR-23a,rno-miR-300-3p,rno-miR-24,rno-miR-30c等的差异性表达量.结果:在PAN诱导下,模型鼠出现蛋白尿、肾功能减退、低白蛋白血症、足细胞足突融合;在模型鼠肾组织中,dicer酶影响足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达;上调rno-miR-23a,mo-miR-300-3p表达,下调mo-miR-24,rno-miR-30c表达;差异性表达的miRNAs包括rno-miR-24,rno-miR-30c,rno-miR-23a,rno-miR-300-3p等.雷至胶囊能改善PAN肾病模型鼠的一般情况、蛋白尿、血清BUN、足细胞足突融合;还能减少模型鼠肾组织dicer酶表达,增加足细胞nephrin,podocin和synaptopodin表达;减弱在模型鼠肾组织中上调的rno-miR-23a,rno-miR-300-3p,增强在模型鼠肾组织中下调的rno-miR-24,rno-miR-30c等.结论:PAN在体内通过dicer酶/miRNAs差异性表达途径而影响模型鼠肾组织miRNAs表达,干预足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,破坏足细胞结构和功能,产生蛋白尿;雷至胶囊可以减少PAN肾病模型鼠蛋白尿,其机制可能是干预dicer酶/miRNAs差异性表达途径,调控足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,改善足细胞的结构与功能.     

扶正祛风方对膜性肾病大鼠蛋白尿及肾脏病理改变的影响

目的:观察扶正祛风方对膜性肾病大鼠24 h尿蛋白、血清白蛋白、血肌酐、血尿素氮及肾脏病理的作用,探讨该方治疗膜性肾病的疗效。方法:大鼠随机分为正常组和造模组,参考Border法制备阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA),制备膜性肾病大鼠模型。模型制备成功后将造模组分为模型组,扶正祛风方(20.5 g·kg-1)组,扶正祛风方组大鼠给予相应药物灌胃,正常组、模型组同法灌胃相应体积的去离子水,连续灌胃给药治疗4周。分别于0,2,4周检测各组大鼠24 h尿蛋白(24 hUpro);于给药4周后,测定各组大鼠血清白蛋白(ALB),血尿素氮(BUN)及血肌酐(CRE)含量;取肾组织行苏木素-伊红(HE)染色,马松(Masson)染色,六胺银(PASM)染色,经光镜观察肾小球及肾小管改变情况;以间接免疫荧光法检测肾小球免疫球蛋白(Ig)G和补体C3沉积情况;经透射电镜观察肾小球基底膜、足突改变情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h-Upro显著升高(P0.01),血ALB水平显著降低(P0.01),病理学检测发现大鼠肾组织病理明显改变;与模型组比较,扶正祛风方组大鼠24 h-Upro有所降低(P0.05),血ALB水平有所回升(P0.05),病理学形态改善突出,表现为肾小球基底膜免疫复合物沉积、基底膜增厚和足突融合显著减轻。结论:扶正祛风方能有效改善膜性肾病大鼠蛋白尿,升高血ALB水平,显著减轻肾脏病理损伤,延缓膜性肾病的进展。     

灯盏益肾颗粒对糖尿病肾病大鼠肾脏组织病理影响的研究

目的:观察灯盏益肾颗粒对糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏组织病理的影响,探讨灯盏益肾颗粒对DN可能的作用靶点和机制,为实验用药治疗DN提供依据。方法:雄性SD大鼠90只随机分成正常组(A组)、模型组(B组)、盐酸贝那普利组(C组)、灯盏益肾低、中、高剂量组(D、E、F组)。链脲佐菌素(STZ) 55 mg/kg一次性腹腔注射建立DN模型,给予不同实验因素干预后,观察实验大鼠的一般情况;测定尿微量白蛋白/尿肌酐(Urine Microalbumin to Urine Creatinine,ACR)、胱抑素C (CystatinC,CysC)、肌酐(Serum Creatinine,SCr)、尿素氮(Blood Uria Nitrogen,BUN)等指标;取肾脏组织,HE、PAS、Masson染色后,用光镜观察各组大鼠的肾脏组织病理改变。结果:与本组造模前比较,B、C、D、E、F组大鼠造模后的血糖和24-hrUP升高(P 0.05)。与A组比较,B、C、D、E、F组大鼠血糖和24 h尿蛋白(24-hour Urinary Protein,24-hrUP)升高(P 0.05);B组ACR明显升高(P 0.01),肾小球系膜基质增生、肾小球基底膜(GBM)增厚、肾小管管腔扩张、肾小管上皮细胞空泡样变性明显;肾皮质坏死、肾小管坏死、肾组织炎性细胞浸润明显(P 0.01)。与B组比较,C、D、E、F组ACR、BUN、CysC降低,肾小球系膜基质增生、GBM增厚、肾小管管腔扩张、肾小管上皮细胞空泡样变性改善(P 0.05,P 0.01);D、E、F组肾皮质坏死、肾小管坏死、肾组织炎性细胞浸润改善(P 0.05);与C组比较,D、E、F组肾皮质坏死、肾小管坏死、肾组织炎性细胞浸润改善(P 0.05);与C、D组比较,E、F组ACR、CysC降低(P 0.05);E、F组肾小球系膜基质增生、GBM增厚、肾小管管腔扩张、肾小管上皮细胞空泡样变性改善(P 0.05)。结论:灯盏益肾颗粒可减少糖尿病肾病大鼠ACR排泄量、减轻肾功能损伤、减轻肾脏组织病理病变。上述效应在一定范围内呈剂量依赖性。     

肾炎消白颗粒对阿霉素肾病大鼠足细胞CD_2AP、Nephrin的影响

目的：探讨肾炎消白颗粒减少尿蛋白的作用机理。方法：用尾静脉一次性注射阿霉素制备肾炎蛋白尿模型,分为5组,分别为正常对照组、模型对照组、洛汀新组、肾炎消白颗粒低剂量组、肾炎消白颗粒高剂量组,给药7周,RT-PCR检测大鼠肾组织NephrinmRNA、CD2APmRNA的表达。结果：模型组大鼠肾足细胞CD2AP、Nephrin表达明显升高,肾炎消白颗粒两组肾足细胞CD2AP、Nephrin表达水平明显降低（P〈0.01）。结论：肾炎消白颗粒能够在一定程度上减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白的排泄量,降低肾组织CD2AP和Nephrin表达是其作用机制之一。     

基于Pyk2通路探讨加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠的作用

目的基于Pyk2通路探讨加味四君子汤对阿霉素肾病大鼠的作用。方法将实验用SD大鼠30只采用随机数字表法分为正常组、模型组及中药组,诱导阿霉素肾病大鼠模型。中药组在阿霉素注射后第7天予中药灌胃,正常组和模型组予等量生理盐水灌胃。实验的第7、21、35天分别检测各组24 h尿蛋白定量及电镜下观察大鼠肾组织;检测各组肾组织中Nephrin、Nephrin m RNA、Pyk2 m RNA、Pyk2、Pyk2磷酸化蛋白水平(p Pyk2)及p Pyk2/Pyk2比值。结果 (1)24 h尿蛋白定量:模型组较正常组明显升高(P0.01),中药组较模型组降低(P0.05)。(2)Nephrin及Nephrin m RNA水平:第21、35天,模型组较正常组均明显减少(P0.01),中药组较模型组增高(P0.05)。(3)Pyk2 m RNA水平:第21、35天,模型组和中药组比正常组均升高(P0.05),但第35天,中药组比模型组明显减少(P0.01)。(4)p Pyk2、p Pyk2/Pyk2比值:第21、35天,模型组较正常组均有上升(P0.05和0.01),而中药组比模型组均有降低(P0.01)。结论阿霉素可通过损伤足细胞,抑制Nephrin蛋白,激活Pyk2蛋白磷酸化引起肾病综合症的发生;加味四君子汤可抑制阿霉素肾病大鼠肾组织中Pyk2激活,上调Nephrin蛋白水平,改善肾组织足突病变,减少尿蛋白,进而保护肾小球的滤过屏障作用。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞Desmin及CD2AP蛋白的影响

目的探讨祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞结蛋白（Desmin）和CD2相关蛋白（CD2-asso—ciatedprotein,CD2AP）的作用。方法一次性尾静脉注射阿霉素制备肾病模型。3周后造模成功,随机分为空白对照组（A组,12只）,模型对照组（B组,8只）,祛风通络方小、中、大剂量组（C组、D、E每组8只）和阳性对照组（F组,8中）。从第4周起,A组和B组给生理盐水,C—E组分别给祛风通络方1．O、2．1、4．2g／mL,F组给泼尼松25mg／kg。各组均灌胃给药,10mL／kg,1次／天,连续28天。期间进行24h尿蛋白定量、血清生化指标检测。实验结束时电镜观察超微结构、Real-timePCR法及Westernblot法检测足细胞骨架蛋白DesminmRNA、裂孔隔膜蛋白CD2APmRNA及其蛋白表达。结果（1）与B组比较,C、D、E、F组24h尿蛋白定量明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）与B组比较,C、D、E组ALB均有所升高,差畀有统计学意义（P〈O．05）;TC含量明显降低,差异均有统计学意义（P〈0．05）;F组TG反而有明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）电镜观察发现,D、E、F组与B组比较,足细胞形态均有不同程度改善,特别是足突结构、足突数目改善明显,其D、E组改善更明显。（4）阿霉素肾病大鼠中DesminmRNA、CD2APmRNA及蛋白表达均升高,差异有统计学意义（尸〈0．05）。干预后,与B组比较,C、D、E、F组DesminmRNA和CD2APmRNA表达明显降低,差异有统计学意义（P〈O．05）。（5）与A组比较,B组Desmin、CD2AP蛋白表达显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。与B组比较,C、D、E、F组CD2AP蛋白表达明显降低,D、E、F组Desmin蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P〈0．05）;各剂量组间比较,C、D、E组Desmin及CD2AP蛋白表达逐渐降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;与F组比较,C、D组CD2AP蛋白表达明显高,E组CD2AP蛋白表达明显低,差异有统计学意义（P〈0．05）;C、D、E组Desmin蛋白表达较高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论祛风通络方对阿霉素肾病大鼠的治疗作用伴随着改变足细胞骨架蛋白Desmin及裂孔隔膜蛋白CD2AP基因表达的改变而实现。     

程氏分清饮对大鼠肾病综合征作用机制的研究

目的:探讨程氏分清饮对大鼠肾病综合征的作用机制。方法:采用大鼠尾静脉一次性注射盐酸多柔比星(5.5mg/kg)的方法造成大鼠肾病综合征模型,将实验动物随机分为正常对照组(A)、模型对照组(B)、程氏分清饮治疗组(C组)、激素治疗组(D组)、程氏分清饮加激素治疗组(E组)。观察程氏分清饮对肾病大鼠尿蛋白、血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)、甘油三酯(TG)、肾组织病理形态学的影响。结果:各治疗组24h尿蛋白明显低于B组(P<0.05,P<0.01);各治疗组血清生化指标较B组明显改善(P<0.05);肾组织病理改变明显,各治疗组MMP-9的表达明显高于B组(P<0.05)。结论:程氏分清饮通过上调MMP-9的表达,促进肾小球细胞外基质降解,防止肾小球硬化,同时可以降低肾病大鼠的尿蛋白,提高Alb、降低TG,阻止BUN、Cr的增高,修复足突融合,减轻肾组织损伤,保护肾功能。     

辛通畅络法对系膜增生性肾炎模型大鼠IL-1、IL-6和细胞外基质的影响

目的:观察辛通畅络中药复方肾苏Ⅱ对系膜增生性肾炎(MsPGN)模型大鼠肾组织白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)及肾小球细胞外基质(ECM)的影响,探讨中医药防治MsPGN的有效途径。方法:采用抗Thy-1系膜增生性肾炎大鼠模型,以中药复方肾苏Ⅱ为治疗药物,贝那普利为对照药物,于治疗6周末,分别观察各组大鼠肾组织IL-1、IL-6和肾小球纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的变化情况。结果:治疗6周末,中药组在抑制MsPGN大鼠肾组织IL-1、IL-6表达,减少肾小球FN、LN、ColⅣ表达量等方面显示疗效优势,且均明显优于西药组。结论:以辛通畅络立法的中药复方肾苏Ⅱ,具有减轻MsPGN模型大鼠肾小球ECM积聚,改善肾小球硬化的作用。     

叶景华糖肾方对糖尿病肾病大鼠足细胞Desmin蛋白表达的影响

目的观察糖肾方对糖尿病肾病大鼠模型足细胞蛋白Desmin的影响,通过以方测证的方法探讨足细胞损伤的中医病机。方法清洁级SD大鼠30只,予腹腔注射STZ,制备糖尿病肾病(DN)大鼠模型,随机分为正常组、模型组、糖肾方组,正常组与模型组予蒸馏水灌胃,糖肾方组以糖肾方灌胃,6周后处死,收集血、尿液,检测血糖、尿微量白蛋白,光镜观察肾组织病理形态,RT-PCR检测Desmin的mRNA表达。结果 3组尿微量蛋白水平比较,糖肾方组大鼠尿微量蛋白(9.98±1.78)mg/24 h少于模型组(14.64±2.73)mg/24 h(P0.01)。光镜下观测肾小球病理改变发现,糖肾方组肾小球基底膜增厚,系膜基质增生等病理损伤程度均低于模型组。RT-PCR显示糖肾方组Desmin表达(1.805±0.269)则明显低于模型组(3.548±0.621)(P0.01)。结论糖肾方能够有效减少糖尿病肾病大鼠的蛋白尿,改善肾小球病理损伤,下调足细胞Desmin蛋白的表达,保护足细胞,并根据以方测证的原理推论虚和瘀可能是糖尿病肾病足细胞损伤的中医病机。     

益肾通络方抑制EGFR及下游信号途径对膜性肾病大鼠肾脏保护作用的研究

目的探究益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及足细胞和肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法 SD大鼠尾ⅳ阳离子牛血清白蛋白(cationic bovine serum albumin,C-BSA)建立膜性肾病大鼠模型,给予益肾通络方和盐酸贝那普利进行干预,检测各组大鼠24 h尿蛋白(urinetotal protein,UTP)、血清中白蛋白(albumin,ALB)和总胆固醇(total cholesterol,TC)水平;观察各组大鼠肾组织病理变化;采用TUNEL法检测各组大鼠肾组织足细胞和肾小管上皮细胞凋亡情况;采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织磷酸化EGFR (p-EGFR)和剪切型半胱氨酸蛋白酶-3 (cleaved Caspase-3)的表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠肾组织p-EGFR、Ras相关的C3 肉毒素底物 1 (Ras-related C3 botulinum toxin substrate l,Racl)、c-jun、c-fos、FasL 和 cleaved Caspase-3 蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠24 h UTP以及血清中TC水平明显升高(P0.01),ALB水平显著降低(P0.01);肾小球基底膜、足细胞结构发生改变;肾组织足细胞和肾小管上皮细胞凋亡明显增多(P0.01);肾组织p-EGFR、Racl、c-jun、c-fos、FasL和cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,益肾通络方中、高剂量组大鼠24 h UTP以及血清中TC水平明显降低(P0.01),ALB水平明显升高(P0.01);肾组织病理损伤得到改善;肾组织足细胞和肾小管上皮细胞凋亡明显减少(P0.05、0.01),肾组织p-EGFR、Racl、c-jun、c-fos、FasL和cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P0.05、0.01)。结论益肾通络方可以减轻膜性肾病大鼠肾脏病理损伤,抑制肾组织足细胞和肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与抑制EGFR及下游Racl/c-jun、c-fos/FasL信号途径有关。     

肾炎消白颗粒对肾炎模型大鼠Nephrin蛋白表达的影响

目的:观察肾炎消白(SYXB)颗粒对肾炎模型大鼠肾脏组织中Nephrin蛋白表达的影响,探讨其作用机理。方法:100只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、洛汀新组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组20只。采用一次性尾静脉注射阿霉素制造肾炎蛋白尿大鼠模型。空白组、模型组灌胃蒸馏水2 mL/d,洛汀新组灌胃洛汀新0.90 mg/kg,中药高、低剂量组分别灌胃SYXB颗粒3.60、1.80 g/kg,每天1次,1周连续给药6次,共给药7周。收集大鼠随机尿液,检测尿蛋白排泄量。3周末、5周末分别取3只大鼠,取右肾,7周末所有剩余大鼠取右肾,免疫组化检测大鼠肾组织Nephrin蛋白表达情况,HE染色观察肾脏病理组织学变化。结果:与空白组比较,模型组大鼠各时间点尿白蛋白/尿肌酐比值显著升高,肾组织Nephrin蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与模型组比较,洛汀新组大鼠各时间点尿白蛋白/尿肌酐比值显著降低,肾组织Nephrin蛋白表达显著升高;中药高剂量组大鼠在第3、4、5、6、7周尿白蛋白/尿肌酐比值显著降低,各时间点肾组织Nephrin蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与洛汀新组比较,中药高剂量组大鼠在第5、6、7周尿白蛋白/尿肌酐比值较低,差异均有统计学意义(P0.05)。与第3周末比较,洛汀新组、中药高、低剂量组大鼠各时间点肾组织Nephrin蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:SYXB颗粒可能通过上调阿霉素肾病大鼠肾组织中Nephrin蛋白表达,从多部位修复损伤的足细胞。在阿霉素肾病大鼠蛋白尿的治疗中,SYXB颗粒显著优于洛汀新,SYXB颗粒高剂量组优于低剂量组。     

升阳益胃汤合补阳还五汤对特发性膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及对Nephrin、CD2AP表达的影响

目的 观察升阳益胃汤合补阳还五汤对特发性膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及对肾组织中肾病蛋白(Nephrin)、CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响。方法 取40只雄性SD大鼠,随机选择10只大鼠作为正常组,余30只大鼠尾静脉一次性注射羊抗大鼠F×1A血清0.4 mL/100 g制备特发性膜性肾病模型。将造模成功后大鼠随机分为模型组、升阳合补阳组、贝那普利组,每组10只。升阳合补阳组给予升阳益胃汤合补阳还五汤全方颗粒剂溶液9.2 g/(kg·d)灌胃,贝那普利组给予盐酸贝那普利溶液0.000 88 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,均1次/d,连续灌胃6周。于灌胃6周末收集各组大鼠24 h尿液,用以检测24 h尿蛋白水平;腹主动脉取血,检测血白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;取肾组织,HE染色和Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化法和Western blot法检测肾脏组织中Nephrin、CD2AP表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白及血清TC水平均明显升高(P均<0.05),血清ALB水平明显降低(...     

消渴汤对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞Nephrin和Podocin表达的影响

目的:探究消渴汤对糖尿病肾病大鼠的肾小球足细胞Nephrin和Podocin表达的影响。方法:选取4周龄健康雄性Wistar大鼠45只,采用随机数字表法分为:正常组、对照组和实验组,每组各15只;对照组和实验组大鼠采用一次性腹腔注射链脲霉素(STZ)55mg/kg方法制作糖尿病肾病(DN)模型;各组大鼠分别于完成造模后第0、2、4周采用自动生化分析仪检测大鼠血肌酐、尿素氮、血糖和24 h尿蛋白含量水平;采用Western blotting检测各组大鼠肾皮质中Nephrin和Podocin蛋白表达情况;使用HE染色观察大鼠肾小球结构。结果:实验前,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验2周后,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验组及对照组相比各项指标均无差异(Ρ0.05);实验4周后,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验组与对照组相比各项指标均有下降(P0.05);相比正常组实验组及对照组大鼠肾组织nephrin和podocin蛋白表达显著降低(P0.05);实验组Nephrin和Podocin蛋白水平高于对照组(P0.05)。HE染色结果显示,使用消渴汤治疗后大鼠肾小球体积相对对照组减小,肾小管间质病变减轻,纤维化和炎细胞浸润显著改善。结论:消渴汤可以通过抑制炎症、调节糖代谢并增加大鼠足细胞数目来实现治疗糖尿病肾病。     

雷公藤甲素对局灶节段性肾小球硬化足细胞损伤的调控机制

目的:通过观察雷公藤甲素(TP)对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠及PAN致小鼠足细胞损伤模型中uPAR和TRPC6的表达影响,探讨TP对足细胞的保护作用。方法:将48只大鼠随机分为6组,Control组、Model组、TP-LD组、TP-MD组、TP-HD组和CSA组。除Control组外,其余各组均通过单侧肾切除联合尾静脉重复注射阿霉素方法建立FSGS大鼠模型,药物组给予不同浓度TP或CSA进行治疗,干预8周后处死。检测大鼠24h尿蛋白、血肌酐、尿素氮。HE染色观察肾组织病理变化,电镜观察肾小球足细胞病变。Western Blot检测肾组织中uPAR和TRPC6蛋白表达。培养小鼠肾足细胞MPC5,分为正常组(Control组)、PAN组(Model组)、PAN+TP组(TP组)、PAN+CSA组(CSA组)。CCK-8法检测TP对于PAN诱导的足细胞活力的影响,Western Blot检测足细胞uPAR、TRPC6蛋白水平的表达。结果:Model组大鼠尿蛋白、血肌酐及尿素氮水平较Control组显著升高(P<0.01),肾脏病理检查可见小球局灶节段性硬化,小管扩张及足突融合。Western Blot发现,与Control组比较,Model组Podocin表达下降,TRPC6及uPAR表达显著升高(P<0.01)。经TP干预后,大鼠尿蛋白、血肌酐、尿素氮及肾脏病理显著改善,肾组织Podocin表达升高,TRPC6、uPAR表达下降。随着TP浓度升高,足细胞保护作用逐步增强,高浓度TP的作用效果与CSA基本相似。细胞实验进一步证实MPC5经PAN作用48h后,Podocin表达显著下降,TRPC6及uPAR表达明显上升,TP治疗可有效逆转上述改变。结论:TP可通过下调TRPC6及uPAR起到保护足细胞,改善FSGS的作用。     

柴芩肾安方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞podocin表达的影响

目的观察柴芩肾安方对IgA肾病（IgAN）大鼠肾小球足细胞podoc in表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、切肾组、IgAN组、柴芩肾安方组和氯沙坦组,通过切除单侧肾并反复静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）建立大鼠IgAN模型,分别进行药物干预。第12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白量（Upr）,观察肾小球病理变化,并采用免疫组化和实时定量PCR检测足细胞podo-c in蛋白及mRNA的表达。结果与正常组比较,IgAN组大鼠Upr、肾小球系膜细胞、系膜基质相对含量均显著升高（P〈0.01）,大部分足突融合,足细胞podoc in蛋白及mRNA表达均明显下调（P〈0.01）。柴芩肾安方组上述指标均明显改善,与IgAN组比较差异显著（P〈0.01）,且其podoc in蛋白表达高于氯沙坦组（P〈0.01）。结论柴芩肾安方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变,这可能与其恢复足细胞podoc in表达有关。