miR-182在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的:检测miR-182在胆囊癌中的表达,探讨其影响胆囊癌细胞增殖、侵袭的可能机制。方法:实时荧光定量PCR检测miR-182、p38在10例胆囊癌组织、癌旁组织中的表达情况;应用miR-182mimics转染胆囊癌细胞GBC-SD,应用p38 MAPK信号通路特异性阻滞剂SB203580处理转染miR-182mimics的GBC-SD细胞,通过MTT实验、细胞周期检测、Transwell小室检测miR-182对GBC-SD细胞增殖、侵袭能力的影响。结果:胆囊癌组织中miR-182、p38的表达高于癌旁组织;miR-182mimics转染GBC-SD细胞后,p38的表达水平随之升高(P<0.05),细胞增殖能力增强,细胞迁移数增多(75±8),S期细胞比例增多[(68.81±7.57)%];应用SB203580处理转染miR-182的GBC-SD细胞,细胞增殖能力降低,细胞迁移数减少(23±5),S期细胞比例减少[(34.49±7.05)%]。结论:miR-182在胆囊癌组织中高表达,通过上调p38 MAPK信号通路增强胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力,参与了胆囊癌的发生发展过程。     

miR-370-3P通过调节JAK2/STAT5B信号通路抑制人关节软骨细胞增殖

目的 研究非编码单链RNA(micro RNA,miRNA) miR-370-3P是否通过调控JAK2/STAT5B信号通路调节人关节软骨细胞(human chondrocytes-articular,HC-a)的增殖,并探讨其潜在作用机制.方法 ①通过脂质体转染HC-a细胞构建miR-370-3P过表达/低表达人关节...     

胆囊癌及癌前病变的病理研究

对165例连续胆囊切除标本进行病理及组化研究,结果表明胆囊粘膜的单纯增生发生率为72.5％,不典型增为22.15％,胆囊癌为5.45％、AgNOR及DNA结合染色结果发现;胆囊粘膜从单纯增生到轻、中、重度不典型增生及胆囊癌的AgNOR颗粒及面积与DNA倍体含量逐步增高,各组之间有显著差异(P<0.01),且AgNOR面积与DNA倍体之间明显相关。说明Feulgen DNA及AgNOR结合染色是可行的,反映了胆囊粘膜细胞由增生到癌的细胞动力学变化过程,提示胆囊粘膜的不典型增生是胆囊癌重要的癌前病变。     

MicroRNAs与信号转导及转录激活因子

MicroRNAs(miRNAs)作为重要的基因表达调节子,参与肿瘤和自身免疫性疾病等多种病理机制。信号转导及转录激活因子(STAT)是众多细胞因子和生长因子的主要信号蛋白,在调控细胞功能、细胞分化以及维持免疫细胞稳态中起着重要作用。本文综述了近年来miRNAs与STATs相互作用的研究进展,聚焦于两者在免疫细胞与肿瘤的促进与抑制过程中的相互作用。MiRNA与STAT之间的相互作用仍是一个新兴的领域,需要更深入的研究去阐明两者间的机制。     

氯氧喹通过下调Rho/Rho激酶信号通路抑制乳腺癌细胞转移

目的: 通过观察氯氧喹对乳腺癌细胞系细胞骨架的聚合状态及其对Rho/Rho激酶信号通路相关靶点蛋白磷酸化的作用,明确氯氧喹治疗乳腺癌的作用机制。方法: 以不同浓度氯氧喹处理乳腺癌Bcap37和MDA-MB-453细胞系,划痕试验检测细胞迁移,Transwell试验检测细胞侵袭,罗丹明标记鬼笔环肽染色法观察F肌动蛋白的聚解状态,免疫荧光法观察α微管蛋白的表达,蛋白质印迹法检测Rho/Rho激酶信号通路关键蛋白磷酸化水平。结果: 氯氧喹可剂量依赖性地抑制细胞迁移和侵袭;Bcap37和MDA-MB-453细胞经氯氧喹处理后其细胞形态发生改变,细胞体积减少;F肌动蛋白和α微管蛋白染色形态不规则,荧光染色聚集成团,且呈现剂量依赖性;氯氧喹可下调Rho/Rho激酶信号通路中肌动蛋白解聚因子Cofilin、磷酸化蛋白激酶（Limk）、Rho关联卷曲蛋白激酶2（Rock2）磷酸化表达（均P < 0.01）。结论: 氯氧喹可抑制乳腺癌细胞骨架聚合从而抑制细胞迁移,该作用可能与抑制Rho/Rho激酶信号通路相关。     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制晶状体上皮细胞增殖的实验研究

[目的] 探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞（LECs）增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊（PCO）的临床治疗提供新的靶点。[方法] 人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组：Wnt3a组,姜黄素组和对照组。Wnt3a组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞中,构建PCO的细胞模型。姜黄素组在转染Wnt3a cDNA表达载体48 h后加入20 μmol/L姜黄素,对照组转染pcDNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达,CKK-8实验检测姜黄素对SRA 01/04细胞增殖能力的影响,采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的变化;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子cyclin D1和c-Myc蛋白表达的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化。[结果] Western blot检测证实,转染pcDNA3-HA表达载体后,SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CKK-8检测表明,姜黄素组SRA 01/04细胞的增殖率明显低于Wnt3a组（t=2.782,P=0.049）。姜黄组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为23.6%±4.0%,明显低于Wnt3a组的43.4%±5.4%,差异有统计学意义（t=2.951,P=0.018）。转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a组细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞之中,姜黄素组β-catenin蛋白主要分布于细胞核中,少量分布于细胞质中。Western blot检测姜黄素组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc蛋白表达明显低于Wnt3a组。[结论] 在SRA 01/04细胞中,姜黄素抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达下调,抑制人LECs的增生。     

萝卜硫素下调Traf6/NF-κB信号通路抑制肾癌细胞增殖的作用研究

目的 探讨萝卜硫素对肾癌细胞(RC-2)增殖的影响及其机制.方法 体外培养RC-2和Traf6过表达的RC-2细胞,不同浓度萝卜硫素处理对数生长期的细胞株,采用CCK8试剂盒检测萝卜硫素对RC-2细胞和过表达Traf6基因RC-2细胞增殖的抑制作用;免疫印迹(Western blot)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测RC-2细胞中Traf6和NF-κB蛋白及mRNA的表达水平.结果 萝卜硫素的浓度大于10μmol/L时可抑制RC-2细胞的增殖,并随着浓度增加抑制率随之增强;Traf6的过表达可以促进RC-2细胞的增殖;RT-PCR和Western blot实验结果表明20μmol/L的萝卜硫素可以抑制Traf6的表达而引起NF-κB表达下调.结论 萝卜硫素可以抑制RC-2细胞的增殖,其机制可能与下调Traf6/NF-κB信号通路蛋白表达有关.     

MiR-203抑制食管鳞癌Eca109细胞的增殖及侵袭

目的探讨microRNA分子miR-203对食管鳞癌Eca109细胞增殖及侵袭能力的影响。方法根据人源miR-203序列,设计并合成其双链模拟物。通过脂质体转染将miR-203模拟物分子导入食管鳞癌Eca109细胞中,转染无关microRNA模拟物作为对照。测定2组细胞的细胞倍增时间、细胞凋亡率以及侵袭细胞率,观察miR-203对Eca109细胞增殖及侵袭能力的影响。结果Eca109细胞转染miR-203后其细胞倍增时间为(26.1±0.5) h,较对照组(24.2±0.6) h明显延长(P<0.01);其凋亡细胞比例较对照组增加\[(4.5±0.4)% vs (3.7±0.4)%,P<0.05\];Transwell小室侵袭实验显示转染miR-203模拟物后,该组的侵袭细胞率明显低于对照组\[(39.2±5.8)% vs (49.5±6.8)%,P<0.05\]。结论miR-203能抑制Eca109细胞的增殖和侵袭能力,提示miR-203可能是食管鳞癌生物治疗的潜在靶点。     

卵巢癌细胞对T细胞信号转导途径JAK-STAT的影响

目的　通过研究卵巢癌细胞对T细胞信号转导途径JAK STAT的影响 ,探讨其在卵巢癌免疫抑制中的作用。方法　分别采用MTT、流式细胞术、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法观察 3株卵巢癌细胞 (OVCAR3、CAOV3和SKOV3)培养上清液对CD8+ T细胞增殖和细胞周期及分泌细胞因子的影响 ;运用Western印迹方法检测在卵巢癌细胞培养上清液作用后CD8+ T细胞中JAK1、JAK3蛋白的表达和STAT3、STAT5的活化状态。结果　 (1 ) 3株卵巢癌细胞培养上清液皆能抑制CD8+ T细胞增殖 ,并使其阻滞在G1 /G0 期 ,分泌的细胞因子IFN γ显著降低 ,而白细胞介素 (IL) 1 0显著增高 ;(2 )与对照组比较 ,OVCAR3、CAOV3和SKOV3细胞培养上清液均能抑制CD8+ T细胞中JAK3的表达 ,JAK3蛋白平均吸光度 (A)值分别为 0 396± 0 0 1 2 ;0 40 0± 0 0 1 0 ;0 41 6± 0 0 1 5 ;0 656± 0 0 1 5 ;STAT5的活化也明显受抑 ,STAT5蛋白平均A值分别为 0 2 2 0± 0 0 1 0 ;0 2 1 6±0 0 0 5 ;0 2 2 3± 0 0 0 6 ;0 390± 0 0 0 1 ;对JAK1的表达无影响 ,只有OVCAR3细胞培养上清液使STAT3的活化受抑 (0 2 1 0± 0 0 1 0 ;0 393± 0 0 0 7)。结论　卵巢癌能抑制CD8+ T细胞信号转导途径JAK STAT的活化 ,从而抑制其增殖与活化 ,这可能是卵巢癌     

奥沙利铂通过p53信号通路抑制肝癌细胞增殖的机制研究

目的:研究奥沙利铂（L-OHP）对突变型肝癌细胞HuH-7、野生型肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响,探讨p53信号通路相关蛋白在其中的作用。方法:MTT法检测L-OHP对HuH-7、HepG2细胞增殖的抑制效应;倒置显微镜观察L-OHP作用后2种细胞株形态的变化;流式细胞术检测L-OHP作用后细胞周期分布;Western blot法检测p53信号通路相关蛋白表达变化。结果:L-OHP能抑制HuH-7、HepG2细胞增殖,具有时间浓度依赖性（P<0.01）;L-OHP作用后,可观察到细胞形态发生改变,细胞变圆、脱壁;L-OHP能够诱导HuH-7、HepG2细胞阻滞在细胞周期的S期,S期细胞的比例随L-OHP作用浓度增加而明显增加（P<0.01）;L-OHP可激活p53信号通路,L-OHP改变2种细胞中p21、Bax、Bcl-2、p53、磷酸化p53（p-p53）蛋白表达（P<0.05）,但对HuH-7细胞p-p53的表达无明显影响。结论:L-OHP可通过激活p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与调控p53通路相关蛋白p53、p-p53、p21、Bax、Bcl-2的表达有关。     

MiR-30c通过靶向KRAS抑制肝癌细胞系生长侵袭能力的体外研究

目的 探讨MiR-30c对肝癌细胞生长和侵袭的影响.方法 采用脂质体Lipofectamine 2000将MiR-30c模拟物组和MiR-30c模拟物组阴性对照转染至肝癌细胞Huh7,qRT-PCR检测转染效果,细胞免疫荧光、Western blot检测转染后目的蛋白的表达,Transwell、划痕实验检测细胞迁移侵袭能力、MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布的改变.结果 成功构建稳定过表达MiR-30c的肝癌细胞亚系Huh7-MiR30c,荧光定量PCR结果显示MiR-30c表达量明显上调,过表达MiR-30c后Huh7细胞的侵袭和增殖能力均受到明显抑制;抑制MiR-30c能明显抑制KRAS蛋白和减低p-ERK蛋白表达水平,对ERK蛋白水平无明显影响.结论 抑制MiR-30c表达可能通过调控RAS/MAPK/ERK通路抑制肝癌细胞Huh7增殖和侵袭.     

HepaCAM secreted by renal cell carcinoma 786-0 cells through exosomes pathway inhibits cell proliferation

目的 探讨肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)在肾癌786-0细胞中通过exosomes途径分泌到细胞外及是否可以抑制肿瘤细胞增殖.方法 将携带hepaCAM基因的重组腺病毒质粒瞬时转染786-0细胞,Western blot鉴定hepaCAM基因在786-0中的表达;莫能星(monensin)和二甲基阿米洛利(DMA)处理转染后肿瘤细胞,检测肿瘤细胞上清液及exosomes中hepaCAM蛋白的量的变化.MTT法检测hepaCAM蛋白是否可以抑制肿瘤细胞增殖.结果 成功构建并转染hepaCAM重组腺病毒质粒,在肿瘤细胞上清液中检测到hepaCAM蛋白的分泌,经药物处理后,莫能星明显增加了转染后肿瘤细胞的hepaCAM蛋白的分泌量,而二甲基阿米洛利处理转染后肿瘤细胞,能显著抑制细胞上清液中hepaCAM的分泌量.Western blot进一步证明hepaCAM蛋白存在于exosomes上.成功转染hepaCAM基因的肾癌细胞分泌的exosomes明显抑制了肿瘤细胞增殖.结论 hepaCAM蛋白可能通过exosomes途径分泌到肿瘤细胞外并抑制肿瘤细胞增殖.     

HepaCAM蛋白通过exosomes途径分泌到细胞外并抑制肿瘤细胞增殖

目的探讨肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)在肾癌786-0细胞中通过exo-somes途径分泌到细胞外及是否可以抑制肿瘤细胞增殖。方法将携带hepaCAM基因的重组腺病毒质粒瞬时转染786-0细胞,Western blot鉴定hepaCAM基因在786-0中的表达;莫能星(monensin)和二甲基阿米洛利(DMA)处理转染后肿瘤细胞,检测肿瘤细胞上清液及exosomes中hepaCAM蛋白的量的变化。MTT法检测hepaCAM蛋白是否可以抑制肿瘤细胞增殖。结果成功构建并转染hepaCAM重组腺病毒质粒,在肿瘤细胞上清液中检测到hepaCAM蛋白的分泌,经药物处理后,莫能星明显增加了转染后肿瘤细胞的hepaCAM蛋白的分泌量,而二甲基阿米洛利处理转染后肿瘤细胞,能显著抑制细胞上清液中hepaCAM的分泌量。Western blot进一步证明hepaCAM蛋白存在于exosomes上。成功转染hepaCAM基因的肾癌细胞分泌的exosomes明显抑制了肿瘤细胞增殖。结论 hepaCAM蛋白可能通过exosomes途径分泌到肿瘤细胞外并抑制肿瘤细胞增殖。     

姜黄素通过Wnt信号转导通路抑制肺癌细胞A549增殖的研究

目的：从研究Wnt信号通路的关键因子-核蛋白β-catenin入手,探讨姜黄素（Curcumin,Cur）可能存在的抑制肺癌细胞增殖的分子学机制。方法：MTT法检测不同浓度的Cur对肺癌细胞A549的生长抑制情况,分析药物浓度和细胞增殖抑制率之间的关系;Westernblot法检测Cur作用后,A549细胞核蛋白B—catenin含量的变化;RT—PCR方法验证Cur对细胞c-myc基因表达的影响;流式细胞仪观察经Cur作用后细胞周期的改变。结果：Cur以浓度依赖方式抑制肺癌细胞A549的增殖,该药物浓度与抑制率之间有明显的线性相关性（r=0．9333）。细胞经Cur干预48h后,核蛋白β-catenin的含量和促癌基因c-myc的表达含量均有所下降。流式细胞仪观察细胞周期的结果提示,Cur能够阻止肺癌细胞A549由G,期进入S期,提高G0／G1期细胞的百分比。结论：Cur能够抑制A549细胞胞浆内β-catenin蛋白进入胞核,阻断Wnt信号转导通路,进而抑制下游靶基因c-myc的表达,阻止肺癌细胞A549由G1期进入S期,有效抑制了A549细胞的增殖。     

鳖甲煎丸通过RhoA/ROCK信号通路抑制肝癌细胞血管形成拟态的生成

目的观察鳖甲煎丸对肝癌细胞血管生成拟态（VM）形成的作用及其对RhoA/ROCK通路信号分子和VE-cadherin、PI3K 表达的影响,探讨鳖甲煎丸抑制肝细胞肝癌（HCC）转移侵袭的分子机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别以鳖甲 煎丸高（H）、中（M）、低剂量（L）及生理盐水（N）灌胃,4 d后采血,制备药物血清。肝癌HepG2细胞体外Matrigel三维培养,药物 血清及RhoA/ROCK抑制剂Y-27632（P）干预24 h后,应用图像采集和分析系统检测各组VM形成情况,采用Western blotting技 术检测各组细胞RhoA和ROCK1的表达水平,ELISA法检测各组细胞培养上清中VE-cadherin、PI3K的含量。结果鳖甲煎丸 可显著抑制HepG2 细胞VM的生成,且VM管径显著高于阴性对照组（P<0.01）,Y-27632 完全抑制了HepG2 细胞VM的生成 （P<0.01）;同时,鳖甲煎丸和Y-27632 都能够抑制HepG2 细胞中RhoA、ROCK1 的表达（P<0.05）,降低细胞培养上清中VEcadherin 、PI3K的表达水平（P<0.05）。结论鳖甲煎丸可抑制肝癌细胞VM的形成,其作用机制可能与其能抑制三维培养的 HepG2细胞中RhoA/ROCK通路信号分子及VE-cadherin、PI3K的表达有关。