日本血吸虫裸露DNA疫苗pCDSj32免疫小鼠血清抗体的 …

为了进一步探讨ｐＣＤＳｊ３２诱发小鼠抗血吸虫感染的保护免疫机制，分别用１００μｇ和３００ｇｐＣＤＳｊ３２质粒免疫小鼠，观察血清ＩｇＧ抗体滴度的动态变化。结果显示，单剂量免疫后４ｗｋ，血清ＩｇＧ滴度可达１：３２０以上，以后血清抗体滴度均维持在１：６４０－１２８０，最少可持续２４ｗｋ。     

不同剂量日本血吸虫裸露DNA疫苗pCDSj32诱发小鼠保护 …

应用已构建的日本血吸虫裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＳＳｊ３２经骨骼肌免疫小鼠，获得了较好的保护性免疫效果，１００μｇ和２００μｇ ｐＣＤＳｊ３２免疫后，减成虫率分别为５２．４３％和３６．４７％；肝组织减卵率分别为５４．１９％和５７．７９％；并对各组小鼠肝脏虫卵肉芽肿的面积进行了测量。结果表明，ｐＣＤＳｊ３２免疫小鼠后可减少虫荷，降低血吸虫的产卵量，抑制肝脏虫卵肉芽肿的形成。     

裸露DNA疫苗pCDSJ32的构建,鉴定及在小鼠骨骼肌细胞的表达

应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行了ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞得到表达。表达产物可被小鼠抗３２ｋＤａ蛋白分子单抗识别。     

不同剂量日本血吸虫裸露DNA疫苗pCDSj32诱发小鼠保护性免疫力的初步研究

应用已构建的日本血吸虫裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２经骨骼肌免疫小鼠，获得了较好的保护性免疫效果。１００μｇ和２００μｇｐＣＤＳｊ３２免疫后，减成虫率分别为５２．４３％和３６．４７％；肝组织减卵率分别为５４．１９％和５７．７９％；并对各组小鼠肝脏虫卵肉芽肿的面积进行了测量。结果表明，ｐＣＤＳｊ３２免疫小鼠后可减少虫荷，降低血吸虫的产卵量，抑制肝脏虫卵肉芽肿的形成。     

裸露DNA疫苗pCDSj32的构建、鉴定及在小鼠骨骼肌细胞的表达

应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞得到表达。表达产物可被小鼠抗３２ｋＤａ蛋白分子单抗识别。免疫荧光定位显示，表达产物不但存在于细胞浆，而且可结合于胞膜并被分泌至胞外。     

日本血吸虫表膜蛋白23kDa的DNA疫苗的研制及其诱导小鼠的 …

目的 研究日本血吸虫表膜蛋白２３ｋＤａ的ＤＮＡ疫苗及其诱导小鼠的保护性免疫作用。方法 以已克隆的质粒ｐＢｌｕｊｅｓｃｒｉｐｔ－Ｓｉ２３为模板，设计２条引物，经ＰＣＲ扩增的Ｓｊ２３基因克隆于真核表达载体ｐＣＤ中，重组质粒定位注入小鼠骨髂肌，共注射２次，间隔时间９ｄ，第１４ｄ处死小鼠，取定位处肌组织，荧光标记检测抗体，证实肌细胞可表达抗原Ｓｊ２３。大量提取亚克隆后的质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２３。把雄性ＢＡＬＢ     

含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白（SjFABPc）基因DNA重组质粒 …

目的 观察裸ＤＮＡ重组质粒ｐＣＤ－ＳｊＦＡＢＰｃ在体外转染ＨｅｐＧ２细胞以及质粒ＤＮＡ免疫鼠肌组织中的表达，为进一步应用该质粒进行ＤＮＡ免疫实验奠定基础。方法 用脂质体介导ＤＮＡ转染法将ｐＣＤ－ＳｊＦＡＢＰｃ转染贴壁细胞ＨｅｐＧ２，Ｇ４１８加压筛选获得阳性克隆细胞并传代培养，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定目的基因在ＨｅｐＧ２细胞中的表达，将ｐＣＤ－ＳｊＦＡＢＰｃ质粒肌注免疫ＢＡＬＢ     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S—转移酶DNA疫苗的研究及其保 …

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注     

日本血吸虫 26 kDa 谷胱甘肽S-转移酶DNA疫苗的研究及其保护性免疫效果观察

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫３次后，免疫鼠产生一定水平的抗血吸虫抗体。用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫小鼠，结果ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６免疫鼠减虫率分别为３７．１９％和４４．４４％，肝组织减卵率为７３．８０％和４７．２０％，每对成虫产卵减少５６．８８％和１５．６７％。实验结果表明，日本血吸虫Ｓｊ２６ＤＮＡ疫苗免疫小鼠后能诱生一定水平的抗血吸虫抗体，免疫鼠可形成一定水平的保护性免疫力，预防血吸虫尾蚴感染。同时可减轻宿主肝组织血吸虫卵所致的病理损害作用     

日本血吸虫副肌球蛋白全基因克隆、测序及体内表达

目的： 将日本血吸虫大陆株副肌球蛋白（ Ｓｊｃ９７） 编码区全基因克隆及测序, 并研究 Ｓｊｃ９７ 全基因核酸疫苗在小鼠体内的表达。方法： 抽提日本血吸虫成虫总 Ｒ Ｎ Ａ, 逆转录 聚合酶链反应 （ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 扩增编码 Ｓｊｃ９７的全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ, 双脱氧链末端终止法测 Ｄ Ｎ Ａ 序列。构建含 Ｓｊｃ９７ 全基因的质粒表达载体 （ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７） , 并用免疫荧光染色法研究ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 在小鼠体内的表达特性。结果与结论： 用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增获得了 Ｓｊｃ９７ 的编码区全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ, 并测定了该基因编码区的全序列。与日本血吸虫菲律宾株、日本株及曼氏血吸虫副肌球蛋白编码区全基因比较, 核苷酸序列同源性分别为： ９９４ ％ 、９９２ ％ 和９１０ ％ ; 推导的氨基酸序列同源性分别为：９９７ ％ 、９９８ ％ 和９６０ ％ 。ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 核酸疫苗能在注射的小鼠局部肌肉组织表达 Ｓｊｃ９７ 。     

日本血吸虫Sj32DNA疫苗免疫效果的观察

目的：探讨血吸虫Ｓｊ３２ＤＮＡ疫苗抗血吸虫感染的免疫效果。方法：采用ＰＣＲ技术,人工合成引物,以重组ＤＮＡｐＳｊ３２为模板,扩增出编码３２ｋＤａ天冬酰胺肽链酶,即Ｓｊ３２全长ｃＤＮＡ和引入了起始密码子终止密码子的部分ｃＤＮＡ片段,将其分别克隆到ｐＫＢ－ＣＭＶ,构建真核表达载体ｐＢＫ－Ｓｊ３２－１和ｐＢＫ－Ｓｊ３２－２。采用脂质体介导的基因转移将两种重组ＤＮＡ导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞,间接免疫荧光法证实Ｓｊ３２在真核细胞中表达。小批量制备纯化ＤＮＡ,进行动物免疫试验。将两种构建的真核表达载体分别直接ｉｍＢＡＬＢ／ｃ小鼠,共免疫３次,攻击感染后６ｗｋ剖杀小鼠。收集血清,ＥＬＩＳＡ法检测抗体水平,并计数成虫负荷及肝组织虫卵数。结果：ｐＢＫ－Ｓｊ３２－１组与ｐＢＫ－Ｓｊ３２－２组免疫小鼠后的减虫率分别为３８．６％和３０．９％,肝组织减卵率分别为５５．７％和５５．２％,与对照组比较,其间差别均具有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）。各ＤＮＡ疫苗免疫组能诱导一定水平的抗血吸虫抗体。结论：Ｓｊ３２ＤＮＡ疫苗可诱导小鼠产生一定程度的保护性免疫力,有可能作为血吸虫疫苗候选抗原分子。     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S—转移酶在大肠杆菌的温控高？…

以重组质粒ｐＳｊ２６为模板，ＰＣＲ扩增出编码２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ｃＤＮＡ，双酶切后克隆到ｐＢＶ２２０ＤＮＡ，构建ｐＢＶ２２０－Ｓｊ２６温控表达载体，ＣａＣｌ２法转化大肠杆菌ＤＨ５α，氨苄青霉素筛选转化子，酶切图谱分析及ＰＣＲ鉴定阳性克隆。阳性克隆菌在３０℃培养，４２℃温控表达Ｓｊ２６。测定表达产物ＧＳＴ活性，并用ｒＳｊ２６抗原免疫的鼠血清及日本血吸虫感染鼠血清进行Ｄｏｔ     

日本血吸虫（中国大陆株）22.6kDa抗原编码基因在C2C12细胞内的 …

目的 为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性,方法以ＰＣＲ法对此编码基因改造后将其亚克隆入真核表达载体质粒ｐＣＭＶ－β并转化入大肠杆菌ＪＭ１０９进行大量扩增,将提纯的ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６的基因重组持粒在体外转化Ｃ２Ｃ１２真核细胞,结果 免疫组化试验证明,该重组质粒能够在体外培养的Ｃ２Ｃ１２细胞中表达Ｓｊ２２．６抗原,结论 表明该重组质粒有用作     

日本血吸虫22.6 kDa重组抗原的高效融合表达及特性鉴定

目的： 大量获得纯化的日本血吸虫２２６ ｋ Ｄａ 重组抗原。方法： 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ １λ Ｔ 进行表达。结果： 得到了融合表达的蛋白抗原。此融合蛋白表达量大, 用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组２２６ ｋ Ｄａ 抗原。结论： 以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验, 表明 Ｓｊ２２６／ Ｓｊ２６ Ｇ Ｓ Ｔ 融合重组蛋白具有与 Ｓｊ２２６ 蛋白一样的免疫学活性。     

恶性疟原虫FCC—1／HN株pcDNA3—EBA175／HRPII重组质粒直？…

为观察恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ｐｃＤＮＡ３－ＥＢＡ１７５／ＨＲＰⅡ重组质粒肌肉途径接种后在宿主体内的表达。ＢＡＬＢ／ｃ小鼠分为３组,１组（实验组）经后腿股四头肌注射重组粒ｐｃＤＮＡ３－ＥＢＡ１７５／ＨＲＰⅡ１００μＧ;２组（实验对照组）注射空白质粒ｐｃＤＮＡ３１００μＧ,３组（正常对照组）注射ＰＢＳ（ｐＨ７．４）１００μｌ。每隔２０ｄ加强注射,于第１次接种后２０ｄ和第２次接种后１０ｄ取小鼠双侧     

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因的核酸疫苗研究

为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性,将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验,结果表明此重组质粒能在小鼠体内持续存在、稳定表达并诱导小鼠产生特异性的抗Ｓｊ２２．６ 抗体,但未能诱导有效的保护力     

日本血吸虫（中国大陆株）磷酸丙糖异构酶DNA疫苗的研制及其保护性免疫的研

目的 研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶ＤＮＡ疫苗诱导Ｃ５７ＢＬ／６小 保护性免疫作用。方法 分别以ｐＵＣ１９－ＳｊＣＴＰＩ和ｐｃＤＮＡ１．１－ＩＬ－１２为模板设计引物。将ＰＣＲ扩增到的ＳｊＣＴＰＩ基因以及ＩＬ－１２的亚单位Ｐ３５和Ｐ４０基因克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ．３．１中大量制备ｐｃＤ－ＮＡ３．１－ＳｊＣＴＰＩ和ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ３５、ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ４０的质粒ＤＮＡ,把４５只５～６周龄Ｃ５７ＢＬ／６小鼠分成３组。对照组（ｐｃＤＮＡ组）肌肉注射１００ｕｇ的ｐｃＤＮＡ３．１;实验组（ＴＰＩ组）肌肉注射１００ｕｇ的ｐｃＤＮＡ３．１－ＳｊＣＴＰＩ;加强组（ＴＰＩ＋ＩＬ－１２组）肌肉注射１００ｕｇ的ｐｃＤＮＡ３．１－ＳｊＣＴＰＩ及１００ｕｇ的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ３５和ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ４０的混合物     

弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒免疫小鼠后的免疫应答

目的： 用构建的弓形虫ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 真核表达重组质粒, 直接免疫小鼠, 观察其所诱导的细胞及体液免疫反应。方法： 碱裂解法大量制备ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 质粒, 经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠, 每鼠注射１００ μｇ,２ ｗ ｋ 后同量加强免疫１ 次, 以ｐｃＤＮＡ３ 空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后３０ ｄ、５０ ｄ、７０ ｄ 共３ 次用ＭＴＴ 法测定小鼠脾脏Ｔ 淋巴细胞增殖活性及ＮＫ 细胞活性; 用间接免疫荧光抗体法测定Ｔ淋巴细胞亚群数目;ＥＬＩＳＡ 法测定ＩｇＧ 抗体滴度。结果： 用ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 质粒免疫小鼠３０ ｄ 后, 脾脏明显增大; 免疫组脾淋巴细胞增殖活性明显高于生理盐水及空质粒对照组。ＮＫ 细胞杀伤活性３ 次的测定结果免疫组均高于对照组。Ｔ 细胞亚群, ＣＤ４＋ 细胞数与对照组相比较无明显变化, 而ＣＤ８＋ 细胞数显著增高。血清抗体ＩｇＧ７０ ｄ 内检测结果, 与对照组相比较, 无明显增高; 而免疫后９０ ｄ 检测明显增高, 抗体滴度１∶１００。结论： 用ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 重组质粒ＤＮＡ免疫小鼠, 可诱导产生细胞及体液免疫应答。     

佐剂对日本血吸虫31/32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白（ Ｓｊ３１／３２ 蛋白）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ Ｐ Ａ Ｏ）佐剂免疫小鼠,同时比较了 Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以福氏完全佐剂（ Ｆ Ｃ Ａ）对小鼠保护性免疫力的影响。 Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｐ Ａ Ｏ 组小鼠减虫率为３７５５％ ,肝减卵率为６７０２％ ; Ｓｊ３１／３２ 蛋白组小鼠减虫率为２１１８％ , 肝减卵率为 ４９０３％ ; Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｆ Ｃ Ａ 组小鼠减虫率为 ２４０２％ , 肝减卵率为５２２４％ 。结果提示, Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以 Ｐ Ａ Ｏ 佐剂的减虫作用优于 Ｓｊ３１／３２ 辅以 Ｆ Ｃ Ａ 的减虫作用（ Ｐ＜ ００５）,且明显强于单纯 Ｓｊ３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白的保护性免疫作用（ Ｐ＜ ００１）。     

日本血吸虫DNA疫苗pCDSj32在小鼠皮肤组织内的表达及其保护性免疫效果观察

目的用皮内基因免疫注射的方法定位显示重组质粒pCDSj32在皮肤细胞的表达及其诱发小鼠抗日本血吸虫尾蚴攻击感染的保护性免疫效果.方法用生理盐水做媒体,将大量制备的质粒pCDSj32溶至100μg/100μ1,于小鼠尾根部远端1～2cm处进行皮内注射,4wk后取注射部位皮肤,石蜡包埋、切片,用间接免疫荧光法和免疫组化技术观察pCDSj32在皮肤细胞的表达.对照组和100μg/100μ1 pCDSj32单剂量免疫组小鼠各10只,于免疫后4wk,分别用40条日本血吸虫尾蚴攻击感染,计数成虫数和每克肝组织虫卵数.结果 pCDSj32皮内免疫注射后,可在朗罕细胞、表皮的角质形成细胞、真皮的成纤维细胞和毛囊基底细胞的胞浆内表达,表达产物具有免疫原性.与对照组相比,100μg/100μ1 pCDSj32单剂量免疫后4wk,可产生较好的保护效果,减成虫率达38.30%,肝脏组织减虫卵率为56.01%.结论首次用皮内基因免疫的方法证明日本血吸虫DNA疫苗pCDSj32可在皮肤多种细胞内表达,并可诱导小鼠产生较强的抗血吸虫感染的保护力.该免疫方法是继肌肉免疫注射之后又一种颇为有效的基因免疫途径,它将为抗血吸虫感染免疫提供一种模拟生理应答的有效途径.