hoxb4转基因斑马鱼造血发育中rap1b基因的表达

目的 为了发现在早期造血发育中关键的调控因子,利用hoxb4转基因斑马鱼研究rap1b基因的表达变化情况,以期明确hoxb4与rap1b在早期造血发育中的关系.方法 选取过表达hoxb4的斑马鱼系为研究对象,分为3组:实验组(表达hoxb4-EGFP的斑马鱼),实验对照组(表达EGFP的斑马鱼),空白对照组(野生型斑马鱼).通过流式分选技术将实验对照组和实验组18hpf(斑马鱼胚胎受精发育18h)、24、30、36、48hpf胚胎中带有绿色荧光(enhanced green fluorescent protein,EGFP)信号的细胞分选出来,利用实时荧光定量PCR检测分选出的细胞中的rap1b基因的表达变化;然后收集野生型斑马鱼多时相胚胎,制备rap1b基因的反义mRNA探针,通过胚胎原位杂交观察探针在3组斑马鱼胚胎18、24、30、36、48hpf杂交信号表达部位.结果 qRT-PCR结果显示实验组30、36、48hpf的斑马鱼胚胎的rap1b基因的表达明显增强(P＜0.05);制备了rap1b基因的反义mRNA探针,胚胎整体原位杂交结果显示:rap1b基因在3组斑马鱼胚胎18 ～ 48 hpf之间神经发育和造血发育部位都有表达.结论 在过表达hoxb4转基因斑马鱼中rap1b基因表达有明显的升高趋势,提示rap1b基因与hoxb4基因可能共同参与调节早期造血发育过程.     

小鼠体外受精、胚胎培养及胚胎快速冷冻的研究

目的　为扩大胚胎来源并获取特定胚龄胚胎 ,建立小鼠冷冻胚胎库。方法　运用超数排卵、体外受精与胚胎培养及胚胎冷冻技术系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律。卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻。结果　 (1)注射hCG后 12～ 2 0h受精卵发育至原核期 ,4 2～ 4 8h为 2 细胞期 ,4 8～ 6 0h为 4 细胞期 ,6 0～ 6 8h为 8 细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75～ 78h为桑椹胚 ,78～ 80h为致密桑椹胚 ,90～ 92h为早期囊胚 ,92～ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中。 (2 )培养液中添加促性腺激素 (FSH与hCG) ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育。 (3)在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 细胞阻断 ,其 2 细胞胚的发育率达 10 0 % ,8 细胞胚发育率达 5 5 %以上 ;牛、羊上皮细胞培养液上清也能有效克服 2 细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞期胚的发育率显著提高。 (4)以D PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9 3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 4 %。结论　研究为将生物技术应用于小鼠 ,扩大卵子和胚胎来源     

TLI筛选猪胚胎初次卵裂时间以预测早期胚胎发育

目的研究猪孤雌激活胚胎初次卵裂时间对早期胚胎发育潜能的影响,以筛选最优胚胎。方法将猪卵母细胞进行体外成熟培养,孤雌激活后,胚胎采用时差成像系统(TLI)筛选,分为早期卵裂组(<24 h)、中期卵裂组(24～30 h)和晚期卵裂组(30～48 h)。各组分开培养至囊胚期,统计比较各组的桑椹胚率和囊胚率,并对囊胚中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53和细胞周期蛋白Cyclin B1、Cdk1、Cdk2的表达水平进行检测。结果早期卵裂组桑葚胚率、囊胚率高于中期卵裂组(P<0.05)和晚期卵裂组(P<0.01);凋亡相关基因Bax、P53表达在早期卵裂组中显著低于中期和晚期卵裂组(P<0.01),而抗凋亡基因Bcl-2表达则显著高于中期和晚期卵裂组(P<0.01);早期卵裂组细胞周期蛋白Cyclin B1、Cdk1和Cdk2的表达显著高于中期和晚期卵裂组(P<0.05)。结论猪孤雌激活胚胎初次卵裂时间较早的胚胎具有较高的发育潜能,利用TLI确定的初次卵裂时间可作为筛选优质胚胎的重要参数。     

人输卵管上皮细胞共培养和表皮生长因子对小鼠受精卵体外发育的影响

目的：通过人输卵管上皮细胞共培养体系及表皮生长因子（EGF）作用,探讨输卵管上皮及EGF对受精卵体外发育的影响。方法：建立人输卵管上皮细胞共培养体系,将小鼠雌雄原核（2PN）受精卵随机分为3组,即对照组、实验组Ⅰ和实验组Ⅱ。结果：（1）小鼠受精卵在对照组中单独培养,发育至2细胞、4细胞、8细胞及囊胚期的比率分别为：89．3％、48．7％、34．7％和29．3％。（2）小鼠受精卵在实验组Ⅰ中培养,发育至2细胞,4细胞、8细胞及囊胚期的比率分别为：86．3％、80．6％、75．4％和66．3％。（3）小鼠受精卵在实验组Ⅱ中培养,发育至2细胞、4细胞、8细胞及囊胚期的比率分别为：82．5％、76．3％、70．1％和62．7％。结论：（1）人输卵管上皮细胞共培养体系和EGF对小鼠早期胚胎克服体外发育中的阻断有帮助。（2）人输卵管上皮细胞共培养体系及EGF可以提高小鼠受精卵发育至多细胞及囊胚期的胚胎数。     

小鼠雌性和雄性胚胎原始生殖细胞发育的比较研究

目的 观察研究小鼠雄性和雌性胚胎中原始生殖细胞(primordial germ cell,PGCs)发育的差异,为进一步深入研究PGCs以及生殖细胞发育的基因调控提供实验依据.方法 在本研究采用C57BL/6J小鼠胚胎为实验材料,通过石蜡切片、免疫荧光组织化学染色方法,检测C57BL/6J小鼠胚胎在11至13.5d之间生殖嵴发育的形态学改变,比较雌性和雄性胚胎中原始生殖细胞数量与增殖的变化.结果 发现雄性和雌性胚胎中PGCs的数量在13.5d最多,而处于增殖期的PGCs在13d时最多;在13d的雄性胚胎中,PGCs数量上显著高于雌性,并且其中增殖期的PGCs也较雌性的多.结论 在胚胎发育早期(11至13.5d),小鼠PGCs的发育存在性别差异.     

OPS两步法玻璃化冷冻小鼠8-细胞胚胎生存发育率的研究

目的为实验动物、家畜和人类胚胎的冷冻保存探索简易、高效的玻璃化冷冻程序。方法以小鼠8-细胞胚胎为材料,在25℃室温和37℃恒温台条件下,利用玻璃化冷冻溶液EDFS30, 对小鼠8-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存,解冻后培养60 h后的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标,同时对解冻后培养1-3 h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。OPS(Open-pulled straw)两步法冷冻保存,即胚胎首先移入预处理液(10％EG 10％DMSO)中平衡30 s,再移入玻璃化溶液中吸入OPS平衡15、25、35、45和60 s连同胚胎直接投入液氮中冷冻保存。结果小鼠胚胎8-细胞冷冻后囊胚发育率最佳组高达95．6％,与对照组(96．8％)差异无统计学意义(P> 0．05)。利用最佳冷冻组获得的165枚胚胎移植于11只假孕63-67 h的受体母鼠,结果有4只妊娠,产仔23只,妊娠产仔率为38．3％(23/60),与对照组37．9％(22/58)差异无统计学意义(P>0．05)。结论 EDFS33为玻璃化冷冻液,OPS两步法能有效地冷冻保存小鼠8-细胞胚胎。     

层粘连蛋白在小鼠胚胎早期发育期间的表达与分布

目的:研究发育不同阶段早期小鼠胚胎中层粘连蛋白(1aminin,LN)的表达与分布变化,以进一步探讨LN与胚胎细胞分化及着床的关系.方法:取植入前发育不同阶段的单个小鼠胚卵,应用免疫荧光间接法和酶免疫组织化学ABC等方法观察早期胚胎中LN的表达时间、强弱及分布状况.结果:从原核期、Ⅱ细胞期至Ⅷ细胞期胚,卵裂球内均可见LN强免疫荧光或棕色LN阳性反应颗粒,卵裂球外间质中LN则为阴性反应.到桑椹胚期,卵裂球内及间质中同时出现LN阳性反应物质.早期胚泡中LN主要分布在内细胞团,滋养层细胞间质中也有分布.晚期胚泡滋养层细胞内LN表达增强,细胞间质中转为阴性,近内细胞团侧的滋养层与内细胞团处,均表达出LN强阳性反应.结论:早期小鼠胚胎的卵裂球中含有LN;桑椹胚期LN在细胞间质中出现;胚泡侵入子宫内膜期间近内细胞团侧的滋养层细胞及内细胞团中的LN含量增加;小鼠早期胚胎中LN与其发育及粘附着床正相关.     

授精第3天4～5-细胞胚胎的利用价值

目的探讨授精第3天4～5-细胞胚胎的利用价值。方法回顾性分析2017年1月至2018年12月河南省人民医院生殖医学研究所489例接受冻融移植(FET)助孕患者的资料。依据胚胎移植个数和胚胎发育情况将患者分为A组(移植1枚4～5-细胞胚胎,29例)、B组(移植2枚4～5-细胞胚胎,34例)、C组(移植1枚4～5-细胞胚胎和1枚优质卵裂期胚胎,156例)、D组(移植1枚优质卵裂期胚胎,211例)和E组(移植1枚冷冻复苏的囊胚,来源于新鲜周期4～5-细胞胚胎的体外延长培养,59例)。比较5组患者的着床率、临床妊娠率、早期流产率和分娩率。结果 E组着床率高于A组、B组、C组和D组,D组着床率高于A组和B组(均P<0.05)。E组临床妊娠率高于A组、B组和D组,C组和D组的临床妊娠率均高于A组(均P<0.05)。5组早期流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。E组分娩率高于A组、B组和D组,C组分娩率高于A组和D组(均P<0.05)。结论授精第3天4～5-细胞胚胎依然具有不同程度的发育潜能,是具有利用价值的。针对授精第3天4～5-细胞胚胎可以通过新鲜周期行囊胚培养、冷冻复苏获得较好的临床结局。     

2,3,7,8-四氯苯二噁英对NIH小鼠胚胎发育的影响

目的探讨2,3,7,8四氯苯二英(TCDD)对NIH小鼠胚胎发育过程的影响。方法在NIH小鼠妊娠早期的1～8d,胚泡着床前期的1～3d和着床后期的4～8d,经口腔灌服0、2、50和100ng(kg·d)剂量的TCDD,在小鼠妊娠第9天和第18天时观察子宫内的胚胎发育形态。结果50、100ng(kg·d)剂量在妊娠早期1～8d染毒,使多数妊娠小鼠在第9天观察时子宫内胚胎全部丢失;在妊娠1～3d和4～8d染毒,使部分妊娠小鼠胚胎丢失,另外有部分胚胎吸收或发育阻滞。同时发现早期成活胚胎在发育过程中继续死亡,妊娠第18天时,胎鼠出生前成活率下降。结论小鼠妊娠早期染毒,引起小鼠妊娠早期胚胎丢失,着床后胚胎发育异常,出现阻滞和死亡。     

IL-1β对体外培养不同时期的小鼠早期胚胎发育的影响

目的研究白细胞介素-1β（IL-1β）对体外培养不同时期的小鼠早期胚胎发育的影响。方法收集ICR小鼠2-细胞胚胎，连续培养96h，观察IL-1β对不同发育时期的早期胚胎的影响。结果在胚胎发育的4细胞期、8细胞期加入IL-1β可以提高囊胚发育率（P〈0．05），但不增加孵化率（P〉0．05）；在胚胎发育的8细胞期加入IL-1β，囊胚发育率高于在胚胎发育的2细胞期、4细胞期时加入IL-1β的囊胚发育率（P〈0．05），但孵化率也不增加（P〉0．05）。结论在着床前不同发育阶段的胚胎，对IL-1β的需要是不同的，并随着胚胎的逐渐发育对IL-1β的需要有增加的趋势。     

胰岛素样生长因子-Ⅱ对小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)对小鼠早期胚胎的影响,为人类胚胎培养系统的优化提供依据.方法 在mKSOM培养基中加入不同浓度的IGF-Ⅱ,Xgd,鼠1-细胞胚胎进行体外培养,观察囊胚发育率、孵化率及胚胎细胞数的变化.结果 小鼠1-细胞胚胎体外培养120 h后,IGF-Ⅱ添加组囊胚发育率、孵化率显著高于对照组,但囊胚细胞计数与对照组无明显差别.结论 添加IGF-Ⅱ对小鼠胚胎发育具有一定的促进作用.     

NO对小鼠卵母细胞及胚胎发育的影响

目的 评价外源性NO对小鼠卵母细胞体内成熟、体外受精及胚胎发育的影响. 方法受试雌性小鼠超排卵期间分别腹腔注射NO供体硝普钠(SNP)1.0、5.0和10.0 mg/kg,对照组雌性小鼠注射等量的生理盐水.注射hCG 15 h后处死小鼠,收集卵母细胞进行体外受精和胚胎培养,观察卵母细胞的成熟度、受精率、早期胚胎的发育能力及其形态学变化.结果 5.0 mg/kg SNP组M Ⅰ期卵母细胞和M Ⅱ期卵母细胞的比例较对照组和1.0 mg/kg SNP组升高(P＜0.05,P＜0.01),而受精率降低(P＜0.01),10.0 mg/kg SNP组小鼠在注射药物20 min后全部死亡;5.0 mg/kg SNP组2-细胞胚胎以后各阶段胚胎的卵裂率低于对照组和1.0 mg/kg SNP组(P＜0.01),并被阻滞在桑葚胚期;5.0 mg/kg SNP组形态异常胚胎的比例高于对照组和1.0 mg/kg SNP组(P＜0.01).结论 较高浓度NO抑制卵母细胞体内成熟、体外受精及早期胚胎发育并影响胚胎的质量.     

解剖、生理和组胚学

051236小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶-1mRNA的降调节作用/黄琼晓…∥现代妇产科进展.—2005,14(2).—126～128采用免疫组织化学方法检测DNA甲基转移酶Ⅰ(Dnmt1)在小鼠输卵管的组织学定位;Real timeRT-PCR检测正常妊娠和假孕小鼠在胚胎2细胞期、4细胞期和8细胞期     

斑马鱼sh3d19基因的结构和表达分析

目的 探索斑马鱼sh3d19基因生物信息学分析和基因表达模式。方法 利用生物信息学方法对斑马鱼sh3d19的基因结构和物种间进化等进行分析,并运用逆转录PCR技术和胚胎原位杂交技术分析斑马鱼sh3d19在胚胎早期发育中的表达。结果 斑马鱼sh3d19位于1号染色体（ZDB-GENE-050522-481）上,全长85994bp,能编码958个氨基酸,斑马鱼Sh3d19蛋白与其他物种的Sh3d19同源物具有较高保守性。逆转录PCR结果显示,斑马鱼sh3d19在胚胎发育的各个时期表达,但在bud时期表达量较低。原位杂交结果显示,sh3d19在4细胞到3.5h在胚胎所有细胞中广泛表达,在bud时期虽然表达但是表达量较低,在18体节时期该基因在体节中丰富表达,在24h时与非成熟的肌节表达。结论 sh3d19在胚胎发育早期各个时期均表达,但在体节发生时期在体节中丰富表达,该研究结果为今后探究sh3d19基因在组织器官发育中的功能及机制奠定基础。     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的 Whitten氏培养液对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎分别进行体外培养 ,研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含 0 .0 1%、0 .5 %、1.0 %、1.5 %、2 .0 %、3.0 %、5 .0 %、10 .0 %乙醇的 Whitten氏培养液对 2细胞胚胎进行培养 ,观察研究小鼠 2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含 1%和 3%乙醇的 Whit-ten氏培养液分别对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎进行培养。结果 :含低浓度乙醇 (1%以下 )的培养液对外细胞胚胎和桑椹胚的囊胚形成有促进作用 ,而在 2细胞和 4细胞胚胎…     

早期胚胎停止发育的超声表现与分析

目的：分析早期胚胎停止发育的超声表现。方法：选取我院自2011年3月～2013年3月超声诊断早期胚胎停止发育孕妇30例,分析其表现。结果：胚胎停止发育的声像图像多为胎囊呈圆形,椭圆形或变形不规则,内见胎芽未见胎心管搏动和血流信号,或内未见卵黄囊和胎芽。结论：早期胚胎停止发育超声诊断应重点观察妊娠囊的大小,胎芽的大小,有无胎心搏动,从而推测孕周和胎芽的发育情况,来证实胚胎是否存活。     

胞质去除、CB的处理对卵母细胞孤雌早期发育的影响

为了研究在细胞核移植过程中 ,去除供质卵母细胞核的同时去除了部分细胞质 ,以及卵母细胞在细胞松驰素 B(CB)作用后 ,对卵母细胞的早期发育的影响 ,将仅用 CB处理 (试验组 I)或仅去除细胞质 (不去核 ,试验组 II)或在 CB处理后再去除去除细胞质 (不去核 ,试验组 III) ,以及不作任何处理 (对照组 )的中 II期卵母细胞 ,经离子霉素处理 5 min,再在 6 - DMAP中处理 5 h后 ,移入同步发情的寄母山羊输卵内 ,培养 5 d后回收 ,观察发育情况。结果 :试验组 I、II、III以入对照组均获得了较高的囊胚期发育率 (分别为 6 1.5 4 %、75 .0 0 %、6…     

表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养，观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h，0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组，且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。     

瘦素在着床前小鼠胚胎中的表达及其对胚胎发育的影响

目的 探讨瘦素(leptin)在围着床期小鼠胚胎中的表达规律和分布情况以及leptin抗体对小鼠胚胎体外发育的影响.方法 雌性NIH小鼠超排后与雄鼠交配,分别在妊~4 d上午从输卵管或子宫角冲取相应时期的胚胎,用于以下实验:①分别提取总RNA,检测胚胎中leptin mRNA表达情况.②采用免疫荧光技术,观察leptin蛋白在囊胚的表达和分布情况.③将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度leptin抗体的培养液中,观察囊胚形成及脱透明带的情况.结果 leptin mRNA仅在囊胚期特异性表达,其余各时期胚胎未见表达;leptin蛋白在囊胚的滋养层细胞和内细胞团的细胞质和细胞膜呈阳性表达,而在细胞核无表达.一定浓度的leptin抗体可明显降低囊胚的形成率(1∶400, P<0.05) 和脱带率(1∶1 600, P<0.05),且随着抗体浓度的增加,这种抑制作用更明显.结论 leptin能促进着床前胚胎发育,同时也可能参与了胚胎着床过程.     

波尔山羊批量胚胎移植

目的提高波尔山羊繁殖率.方法采用激素处理经产母波尔山羊,超数排卵,经与纯种公波尔山羊配种后48～60 h,手术回收输卵管中早期发育的胚胎,再经手术移入同步发情的受体莎能奶山羊的输卵管内,妊娠产仔.结果①超排56头波尔山羊(其中10头重复使用),获1 222枚早期胚胎,其中2～8细胞的胚胎占84.0%(1 026/1 222),1细胞胚胎占15.0%(183/1 222),异常卵占1.0%(13/1 222);②移植559头受体,移植后30～35 d,B超妊娠诊断302头,其中177只怀孕,167只足月产仔;受体羊总怀孕率58.7%(328/559),妊娠羊足月产仔率80%(261/328),共产仔365头,其中产双胎的受体有79只,占妊娠羊数的30.3%(79/261);③羔羊出生重平均为(3.8±0.86) kg,最重达6.5 kg.以上结果表明,在半年内经过一次超数排卵、胚胎移植,每头波尔山羊(n=46)平均可产4.4(203/46)头羔羊;半年内重复超数排卵、胚胎移植,每头波尔山羊(n=10)平均可产16.2(162/10)头羔羊;结论与常规繁殖相比,不仅提高了纯种波尔羊的繁殖速度,创造了较好的经济效益,而且产生了很大的社会效益.