化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤效应及其与Bcl－2表达的关系

目的观察化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤作用，探讨其与胃癌组织中Bcl-2蛋白表达的关系。方法新鲜胃癌组织制备单细胞悬液，分别加入紫杉醇（Tax）、顺铂（DDP）、阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5-Fu）和丝裂霉素（MMC）培养48h。四氮唑盐还原法（MTr）观察药物作用后癌细胞活力及代谢活性变化。免疫组织化学技术检测Bcl-2的表达。结果5种化疗药物平均抑制率依次为Tax（40．6±6．9）％、5．FU（38．9±9．2）％、CDDP（38．4±7．8）％、ADM（31．6±8．5）％、MMC（28．9±9．8）％。不同类型胃癌对5种化疗药物的敏感性由强到弱依次为印戒细胞癌、管状腺癌、黏液腺癌和乳头状腺癌。全组Bcl-2阳性率为80％，阳性者对5-FU、MMC和ADM有较强的耐药性。结论MTr比色法体外药敏试验。有助于筛选个体化有效治疗药物。Bcl-2的高表达可能是胃癌多药耐药的原因之一。     

47例结直肠癌的肿瘤药敏结果分析及临床意义

目的探讨肿瘤药敏试验对结直肠癌患者个体化化疗的应用价值。方法采用组织块培养-终点染色-计算机图像分析法（TECIA），测定47例结直肠癌患者对阿霉素（ADM）、5-氟脲嘧啶（5-Fu）、丝裂霉素（MMC）、卡铂（CBP）、顺铂（DDP）、氨甲喋呤（MTX）6种化疗药物的体外敏感性。结果47例结直肠癌对肿瘤组织的平均抑制率由高到低依次为5-Fu〉MMC〉ADM〉MTX〉DDP，联合用药的抑制率为MMC＋DDP＋5-Fu〉MMC＋5-Fu〉DDP＋5-Fu。结论结直肠癌是对化疗药物敏感性较好的肿瘤，且存在着明显的异质性。体外肿瘤药敏试验在指导结直肠癌的临床用药及个体化化疗方面具有重要的指导意义。     

CD133与胃癌细胞化疗耐药的关系及其机制

目的探讨CDl33阳性胃癌起始细胞对常规化疗药物氟尿嘧啶（5．FU）的敏感性及其耐药机制。方法免疫磁珠法分选KATO—III、SGC7901和MKN-45胃癌细胞株并分为未分选组、CDl33＋组及CDl33一组。Westernblot法和RT—PCR法分别检测分选后胃癌细胞CDl33、P—gP、Bax和Bcl-2蛋白及mRNA表达水平。免疫荧光法检测各组细胞P-gP及Bcl-2蛋白的表达。CCK-8法和Hoechest染色检测各组细胞对5．FU的敏感性。siRNA干扰MKN45细胞CDl33表达后，检测CDl33、P-gP、Bcl-2、Akt及p-Akt蛋白及mRNA表达。结果CDl33＋组胃癌细胞中CDl33、P—gP及Bcl-2蛋白和mRNA表达水平均显著高于未分选组及CDl33-组（均P〈0．05），而促凋亡因子Bax的表达水平则明显降低（P〈0．05）。在相同药物浓度下，5-Fu对CDl33＋组的抑制率显著低于CDl33一组（P〈0．05）。5-FU处理胃癌细胞后，CDl33＋组胃癌细胞中凋亡细胞比率明显低于CDl33-组及未分选组（P〈0．05）。CDl33特异siRNA干扰胃癌细胞后，干扰组P—gP、Bcl-2和p-Akt蛋白及mRNA表达显著降低（均P〈0．05），而Bax表达水平则显著增加（P〈0．05）。结论CDl33可能通过调节P-gp和Bcl-2的表达来促进胃癌的化疗耐药；在胃癌化疗耐药产生中，CDl33＋细胞可通过P13K／Akt通路起作用。     

缺氧诱导因子-1α在胃癌中的表达及其与化疗疗效关系的研究

目的观察缺氧诱导因子（HIF）-1α在胃癌组织中的表达及其与化疗疗效和临床预后的关系。方法对52例未接受过任何放化疗的中晚期胃癌患者予以四氢叶酸（CF）、氟尿嘧啶（5-FU）、草酸铂（L-OHP）为基础的联合化疗方案（CF200mg／m^2静脉滴注2h。5-FU1500mg／m^2静脉持续滴注46h,L-OHP85mg／m^2静脉滴注2h）,分别于第1天和第14天给药．4周为1个周期．至少需完成4个周期的化疗。化疗结束后进行疗效评价。并对患者加以随访以作生存分析。同时对该52例患者的胃癌组织标本进行免疫组织化学染色,检测HIF-1α、P糖蛋白（P—gP）和多药耐药相关蛋白（MRP4）在胃癌组织中的表达,另取27例正常胃黏膜作对照。结果HIF—1α、P—gP和MRP4在胃癌组织中的阳性表达率分别为53．9％、51．9％和57．7％,在正常胃黏膜组织中分别为0、18．5％和14．8％。两组间的差异均有统计学意义（均P〈0．05）。HIF-1α阳性表达者化疗有效率14．3％,显著低于HIF—1α阴性表达者（50．0％,P〈0．05）。HIF-1α阳性表达组中位无进展生存期（PFS）为4．9个月,中位总生存期（OS）为8．8个月,1年和2年生存率分别为37．5％和21．5％;而HIF-1α阴性表达组中位PFS为8．4个月．中位OS为12．6个月．1年和2年生存率分别为51．2％和33．5％：两组生存期的差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论HIF-1α表达可作为临床上预测胃癌化疗疗效及临床预后的的指标之一。     

胸苷酸合成酶、二氢嘧啶脱氢酶和胸苷磷酸化酶mRNA在胃癌中的表达及其意义

目的探讨胸苷酸合成酶（TS）、二氢嘧啶脱氢酶（DPD）和胸苷磷酸化酶（TP）在胃癌中的mRNA表达，及与临床病理特征和5-氟尿嘧啶（5-Fu）化疗敏感性的关系。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—RCR）检测了TS、DPD和TP mRNA在4株胃癌细胞、52例胃癌肿瘤和正常组织中的表达，比较了酶表达水平和临床病理特征之间的关系；噻唑蓝（MTT）法检测4株胃癌细胞的5-Fu半数抑制浓度（IC50），及30例标本的5-Fu体外药物敏感性，探讨其与氟尿嘧啶代谢酶mRNA水平的关系。结果4株胃癌细胞均阳性表达TS、DPD和TP mRNA，DPD mRNA水平与5-Fu IC50之间显著相关（r=0．999，P〈0．01），TS mRNA或TP mRNA与5-Fu IC50之间无显著相关性（P〉0．05）。肿瘤组织的TS和TP mRNA水平均显著高于邻近正常组织（1．32±0．70vs0．93±0．48，P〈0．01；0．65±0．37vs0．51±0．33，P〈0．01），DPD mRNA水平在肿瘤与正常组织间的差异无统计学意义（0．89±0．39vs0．93±0．47，P〉0．05）。TS表达与浸润深度（P〈0．05）、远处转移（P〈0．01）和TNM分期（P〈0．01）相关，DPD在肠型胃癌中的表达显著高于弥漫型（P〈0．01），且倾向高表达于肿瘤面积〈5cm者（P〈0．01），TP mRNA表达与浸润深度（P〈0．05）和远处转移（P〈0．05）有关。TS mRNA（r=-0．540，P〈0．01）及DPDmRNA水平（r=-0．672，P〈0．01）与5-Fu敏感性负相关，TP水平与5-Fu敏感性无显著相关（r=-0．317，P〉0．05）。结论胃癌肿瘤内TS和TP mRNA表达显著高于正常组织，且与胃癌分期关系密切，DPD mRNA与Laurén分型和肿瘤面积有关，细胞试验和原代培养均提示DPD mRNA低水平表达可能是5-Fu高敏感性的预测指标。     

化疗对胰腺癌组织及细胞中BAG-3表达的影响

目的初步分析BAG- 3在胰腺癌抗凋亡及产生耐药特性中的作用。方法通过免疫组化方法检测术前化疗与未化疗患者手术切除的胰腺癌组织中BAG-3的表达水平；通过蛋白质印迹方法检测MIACaPa-2、PANC-1及SWl9903株细胞在化疗药物（5-FU50μg/ml、MMC0．5μg/ml及E-ADM1．5μg/ml）作用18h后BAG-3蛋白表达的差异。结果术前化疗患者的胰腺癌组织中BAG-3呈中强度阳性表达者的比率与术前未化疗患者相比有升高趋势，但差异无统计学意义（P〉0．05）。化疗药物处理后18h，3株胰腺癌细胞中BAG-3的表达水平与未经化疗药物处理的对照组相比明显升高（P〈0．05）。结论化疗可使胰腺癌细胞中BAG-3的表达升高，BAG-3的上调可能与胰腺癌对化疗产生耐药相关。     

胃癌P-糖蛋白和谷胱甘肽S转移酶表达及其与化疗药物敏感性的关系

目的：评价谷胱甘肽S转移酶π（GST－π）和P－糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp)在胃癌组织中的表达及其与体外化疗药物敏感性的关系。方法：对39例胃癌新鲜手术标本，用SABC免疫组化法分别检测GST－π和P-gp表达。同时用MTT法检测原代胃癌细胞对T－FU，CDDP，ADM和MMC四种化疗药物的体外敏感性，以研究其间的关系。结果：在39例胃癌标本中GST－π和P-gp的表达阳性率分别为66．67％和58．97％；对GST－π表达阳性者，CDDP和MMC均显示了较强的体外耐药性，而对后者表达阳性者，ADM显示了较强的体外耐药性。GST－π和P-gp的高表达与肿瘤细胞对5－FU的体外耐药性未显示相关关系。结论：胃癌对CDDP，MMC和ADM等药物的耐药性与其GST－π和P－gp的高度表达相关，结合MTT体外药敏试验对判断化疗效果有一定参考价值。     

不同浓度化疗药物对人肝癌细胞BEL-7404及BEL-7404/ADM端粒长度的影响

目的观察几种化疗药物对人肝癌BEL-7404、BEI，-7404／ADM细胞端粒长度的影响。方法采用SouthernBlotting及凝胶电泳法测定不同化疗药对人肝癌BEI，-7404、BEL-7404／ADM细胞端粒限制片断长度（TRF）的变化。结果亲本肝癌细胞中的平均端粒长度较肝癌耐药细胞端粒长度长（P〈0．05）。端粒长度随化疗药物浓度的增加而逐渐缩短：A、B组中DDP，MMC，ADM对BEL-7404、BEL-7404／ADM细胞均表现出明显的抑制性，组间比较表现为显著差异性（P〈0．01）；VCR对两种细胞的端粒长度均不具抑制性。C组DDP，ADM，MMC，VCR中的平均端粒长度皆与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）。结论上述药物对端粒的抑制作用呈浓度效应关系，提示药物对端粒长度的影响不仅与药物的作用浓度有关，而且与其肿瘤细胞的耐药性有关。     

胃癌根治术后动脉区域灌注化疗与全身静脉化疗的临床疗效比较

目的 研究胃癌根治术后进行的动脉区域灌注化疗是否优于全身静脉化疗。方法从1997年7月至2002年7月，将行根治性切除术后的进展期胃癌患者随机分为两组，在术后3周开始化疗。全身静脉化疗组：188例，第1天氟尿嘧啶（5-Fu）750mg、吡柔比星（THP）50nag和丝裂霉素（MMC）8mg；第2天5-FU500nag；第8天5-FU 1000mg；第29天5-FU750mg、THP50nag和MMC8nag；第30天5-FU500mg；第36天5-FU 1000mg；均经外周静脉滴注完成1个疗程；间隔2周再进行1个疗程；共用2个疗程。动脉区域灌注化疗组：180例，按Seldinger法穿刺股动脉。在DSA电视荧屏监视下。将导管经股动脉、髂动脉、腹主动脉插入腹腔动脉。经导管注入5．FU1000mg、THP50mg和MMC8mg；每4周进行1次共4次。结果两组患者性别、年龄、肿瘤位置和组织学类型及TNM分期、手术类型的差异均无统计学意义（P〉0．05）。动脉区域灌注化疗组术后1、3、5年生存率分别为93．3％、72．2％和53．6％；而全身静脉化疗组则分别为87．2％、53．7％和43．1％；两组比较P〈0．01。差异有统计学意义。结论胃癌患者在根治术后进行动脉区域灌注化疗其生存率高于全身静脉化疗。     

缺氧诱导因子-1αsiRNA增强耐药肝癌细胞的化疗敏感性

目的 观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）特异性小分子干扰RNA（siRNA）对肝癌化疗的增敏作用。方法 构建HIF-1αsiRNA真核表达质粒，经脂质体稳定转染于耐药的C28肝癌细胞。研究分为实验组、阴性对照组和空白对照组。荧光定量PCR和Western blot技术分别检测3组细胞中多药耐药相关基因MDR1、LRP、MRP1在mRNA和蛋白水平的表达，PI法流式细胞术分析3组细胞在受到5-Fu作用后的凋亡指数。每组细胞分别随机注入10只裸鼠皮下，比较3组细胞成瘤后对ADM治疗的反应性。结果 HIF-1αsiRNA能有效抑制HIF-1α基因的表达，并能使C28耐药肝癌细胞内MDR1、MRP1、LRP基因在mRNA和蛋白水平表达明显下降。在5-Fu作用后第24、48、72小时，实验组细胞的凋亡指数分别是阴性对照组的2．88、3．56和3．87倍，实验组对化疗药物5-Fu的敏感性显著增强（P〈0．01）。注射阿霉素后，实验组裸鼠皮下的耐药肝癌瘤体明显缩小，肿瘤抑制率为41．35％，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 成功构建了HIF-1α—siRNA的真核表达质粒。HIF—1α靶序列特异性的siRNA可增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性，它与传统化疗药物的联合应用可望实现对肝癌的有效治疗。     

多种化疗药物对胃癌细胞杀伤效应的研究

目的：探讨不同分化的胃癌细胞对不同化疗药物的敏感性。 方法：选择低分化的MGC-803和高分化的AGS两种胃癌细胞系,以及正常胃黏膜上皮细胞GES-1,分别加入不同浓度的5-氟尿嘧啶（5-FU）、奥沙利铂（L-OHP）、多西他赛（DXT）、顺铂（DDP）、伊立替康（CPT-11）作用48 h后,用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,并计算药物半数抑制浓度（IC50）。用IC50的5-FU、DDP、L-OHP作用于MGC-803和AGS细胞48 h后,检测细胞凋亡及细胞周期分布情况。 结果：5种化疗药物对MGC-803、AGS细胞以及GES-1细胞均有明显的抑制作用（均P<0.05）,其中5-FU、DDP、CPT-11对AGS细胞的作用较强;L-OHP、DXT对MGC-803细胞作用较强;DDP对GES-1细胞的抑制作用较强。5-FU、DDP、L-OHP均明显诱导两种胃癌细胞凋亡,其中5-FU组与L-OHP组凋亡率高于DDP组（均P<0.05）;细胞周期分析显示,L-OHP增加两种细胞的S期阻滞,DDP增加MGC-803细胞的S期阻滞,5-FU与DDP增加AGS细胞的G1阻滞（均P<0.05）,但5-FU对MGC-803细胞周期无明显影响（P>0.05）。 结论：化疗药物对胃癌细胞的抑制作用与其病理类型有关,且对胃癌细胞凋亡的诱导和细胞周期阻滞作用均不同。     

化疗药物对荷人胆管癌裸小鼠移植瘤的药效试验

目的：观察化疗药物对荷人胆管癌裸小鼠移植瘤的治疗效果。方法：采用人中分化胆管癌裸小鼠移植瘤模型。将45只荷人胆管癌裸小鼠分为各治疗组和对照组,裸小鼠治疗组每组5只,对照组10只。分组当天称鼠重,由尾静脉用药1次。给药剂量：丝裂霉素(MMC)4mg／kg,阿霉素(ADM)10mg／kg,长春新碱(VCR)0．20mg／kg,泰素(TAXOL)20mg/kg,顺铂(DDP)10mg／kg,环磷酰胺（CTX)120mg／kg,5-氟脲嘧啶(5-Fu)120mg/kg,NS为0．2mL／只。第21天处死裸小鼠,称鼠重,计算体重变化。治疗期间每周测肿瘤瘤径2次,计算相对肿瘤增殖率T／C(％)。结果：MMC,ADM,VCR,TAXOL,DDP和CTX组第21天相对肿瘤增殖率分别为：1％,23％,39％,47％,51％和86％,裸小鼠体重增加分别为：21％,0％,11％,1％,14％和8％。5-Fu组80％裸小鼠死亡,有药物毒性反应。结论：MMC,ADM,VCR,TAXOL,DDP对荷人中分化胆管癌裸小鼠的移植瘤有明显的抗癌作用,CTX无效。     

P27KIP1和P53及P21WAF1/CIP1表达与胃癌临床病理及预后的关系

目的研究P27KIP1、P53、P21WAF1/CIP1蛋白表达与胃癌临床病理及预后的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测90例胃癌组织中P27KIP1、P53、P21WAF1/CIP1的表达。结果90例胃癌组织中P27KIP1、P53、P21WAF1/CIP1阳性表达率分别为48.9%、56.7%、51.1%;随肿瘤分化程度降低、浸润深度加深、恶性程度增加,P27KIP1、P21WAF1/CIP1阳性表达率逐渐降低(P<0.05),P53阳性表达则相反;P27KIP1与P53、P21WAF1/CIP1表达显著相关(P<0.05);P27KIP1、P21WAF1/CIP1表达与胃癌预后密切相关(P<0.05),P53表达与患者术后生存无显著相关(P>0.05)。结论P27KIP1、P53、P21WAF1/CIP1异常表达可加速细胞周期转化,促进胃癌的发生,其蛋白检测尤其是P27KIP1、P21WAF1/CIP1蛋白检测可作为判断胃癌恶性程度、预测肿瘤转移和预后的重要参考指标。     

p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体的构建鉴定及在胃癌细胞中的表达

目的 构建p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体,体外转染胃癌7901细胞,观察其在胃癌细胞中的表达及相关特性.方法 提取人全血总RNA,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增p21WAF1和p27WAF1基因并将其分别克隆到真核双表达载体pIRES中构建重组质粒pIPES-p27KIP1-p21WAF1,经酶切和测序鉴定重组质粒.脂质体介导重组质粒plRES-p27KIP1.p21WAF1"转染胃癌7901细胞,收集并提取转染后12、24、48、72 h和5 d各细胞的总RNA,逆转录成cDNA,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各细胞中p21WAF1和p27KIP1在RNA水平的表达.带有绿色荧光蛋白的pIRES-EGFP作为对照.结果 RT-PCR扩增分别获得约500和600 bp大小的产物,重组质粒pIRES-p27KIP1.p21WAF1经酶切和测序鉴定证实为p21WAF1和p27KIP1基因.转染胃癌7901细胞48 h时转染率为68%.与空质粒对照组比较,重组质粒转染胃癌7901细胞12、24、48、72 h和5 d后FQ-PCR证实p27KIP1的Ct值(cycle threshold,Ct)分别减少8.2、10、10、7.4和6.7,p21WAF1的Ct值分别减少7.4、8.2、8.2、6.3和5.70其中24 h和48 h的Ct值减少最大.结论 真核双表达载体pIRES-p27KIP1.p21WAF1构建成功并能在胃癌7901细胞内高效表达.     

胃癌中cyclin D1、cyclin E和p27的表达及其意义

目的 探讨cyclinD1、cyclinE和p27蛋白在胃癌中的表达及其意义。用免疫组化法检测60例胃癌组织中cyclinD1,Cyclin E和p27蛋白的表达。结果 胃癌组织中cyclinD1,cyclinE和p27蛋白表达阳性率分别为41．7％（25／60）、38．3％（23／60）和36．7％（22／60）;cyclinD1在胃癌中的表达与肿瘤Lauren分型相关,cyclinE在胃癌中的表达与肿瘤分化程度、浸润深度及肿瘤分期相关,而p27蛋白的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和肿瘤分期相关。另外,cyclinE和p27蛋白 在胃癌中的表达呈显著负相关。结论 检测胃癌细胞中cyclinD1,cyclinE和p27蛋白的表达有助于判断肿瘤的进展程度。     

Study on chemosensitivity test of urogenital tumors by ATP assay]

In order to improve the efficacy of chemotherapy against urogenital cancers, we developed a chemosensitivity test by measuring intracellular ATP in cancer cells. In the fundamental experiments using HeLa cells, a significant correlation was observed between intracellular ATP levels and numbers of viable cells. We employed 8 drugs, ADM, VCR, VLB, MTX, 5-FU, PEP, MMC, and CDDP for the assay Thirty-four renal tumors, 68 urothelial tumors and 19 testicular tumors were tested, and evaluable results were obtained in 25 specimens of renal tumors (76%) 55 specimens of urothelial tumors (80%) and 17 specimens of testicular tumors (98%). According to the ATP assay, renal tumors were sensitive to ADM and MMC, urothelial tumors to ADM, MMC and CDDP and testicular tumors to ADM and MMC. The ATP assay to determine the chemosensitivity to clinical specimens was sensitive and efficient. Thus the ATP assay could be applied for selection of anticancer drugs in the chemotherapy of urogenital cancers.     

An experimental study of anticancer agent sensitivity test in human gastric cancer cell lines by flow cytometry

The purpose of this study is to assess the lethal and kinetic effects of CDDP, ADM, MMC and 5FU on human gastric cancer cell lines, MKN28, MKN45 and KATO III. The lethal effect was examined by growth inhibition test and colony forming test. The DNA content and DNA synthesis rate of individual cells were simultaneously measured by DNA/BrdU double staining method. In growth inhibition test, MKN45 was sensitive to CDDP, and all cell lines were sensitive to ADM, MMC and 5FU. On the other hand, in colony forming test, these cell lines were sensitive to all drugs. In the cell kinetics, CDDP, ADM and MMC yielded a significant increase of G2 phase fraction at 24, 48 and 72 hours, and caused a significant decrease of BrdU labeling index at 48 hours. The changes of G2 phase fraction and BrdU labeling index were correlated well to the lethal effect of CDDP, ADM and MMC. However, 5FU did not cause these changes to the cell lines employed in the cell kinetic study. Therefore, it was suggested that these results of the cell kinetics might be applied to anticancer agent sensitivity test by selecting adequate anticancer drugs.     

化疗药物对胃癌细胞的杀伤效应

目的 探讨化疗药物对胃癌细胞的杀伤效应.方法 收集2006年4月至2007年2月济南军区总医院手术切除的84例胃癌标本,新鲜胃癌组织制备单细胞悬液,分别加入羟基喜树碱、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素培养48 h.MTT法观察药物作用后癌细胞活性变化.免疫组织化学检测生存素及PTEN的表达.采用χ~2、秩和检验和Fisher确切概率法分析数据.结果 不同化疗药物对胃癌细胞杀伤效应不同,分化差的胃癌较分化好的胃癌对化疗药物敏感.在印戒细胞癌、黏液腺癌及低分化腺癌中生存素阳性率高于乳头状腺癌及管状腺癌,差异有统计学意义(χ~2=10.625,P<0.05);而FFEN表达与生存素相反,差异有统计学意义(χ~2=6.060,P<0.05).生存素与5-氟尿嘧啶及阿霉素的体外耐药有关(χ~2=6.609,6.350,P<0.05).结论 MTT体外药敏实验有助于筛选个体有效化疗药物.生存素参与了肿瘤细胞化疗耐受,生存素与PTEN的表达有关.