紫衫醇对大鼠肝纤维化的抑制作用及机制研究

目的:探讨紫衫醇对大鼠肝纤维化的抑制作用及其分子机制。方法:将30只Wistar大鼠随机均分为正常对照组、肝纤维化模型组,肝纤维化模型+紫衫醇组,肝纤维化模型用腹腔注射二甲基亚硝胺每日1次连续7 d诱导,之后,肝纤维化模型+紫衫醇组大鼠给予尾静脉注射紫杉醇液,隔日1次,共3次;实验结束时,处死大鼠观察肝脏病理学和血清学指标变化,及肝组织中肝星状细胞标志物α-SMA的表达。将大鼠肝星状细胞HSC-T6分别用TGF-β1、紫杉醇+TGF-β1处理,以无处理的HSC-T6细胞为对照,分别检测各组细胞纤连蛋白及I、III型胶原m RNA与蛋白的表达。结果:正常对照组肝组织无病理学改变,肝纤维化模型组出现肝纤维化病变,肝纤维化模型+紫杉醇组可见肝组织中度坏死,无明显坏死结节;与正常对照组比较,肝纤维化模型组与肝纤维化模型+紫杉醇组转氨酶、总胆红素(TIBL)、透明质酸(HA)水平均明显升高,白蛋白(ALB)水平明显降低(均P0.05),后者较前者在TBIL、ALB、HA方面有明显改善(均P0.05);正常对照组肝组织无明显α-SMA表达,肝纤维化模型组和与肝纤维化模型+紫杉醇组肝组织均有α-SMA表达,后者的α-SMA阳性细胞数明显少于前者(P0.05);与无处理的HSC-T6细胞比较,TGF-β1与紫杉醇+TGF-β1处理后的HSC-T6细胞纤连蛋白及I、III型胶原m RNA与蛋白均明显上调(均P0.05),后者的上调程度明显低于前者(均P0.05)。结论:紫杉醇可抑制大鼠肝纤维化的产生和发展,机制可能与其抑制肝星状细胞中TGF-β信号通路从而减少肝星状细胞活化有关。     

同种异体肝细胞移植促进大鼠肝纤维化逆转

目的 探讨肝细胞移植对大鼠肝纤维化的改善作用及其机制.方法 经腹腔注射四氯化碳制备的肝纤维化Wistar大鼠接受正常Wistar大鼠肝细胞移植(实验组),另以不接受肝细胞移植的肝纤维化大鼠(肝纤维化组)和接受肝细胞移植的正常Wistar大鼠(移植对照组)为对照.肝细胞移植于注射四氯化碳后21 d进行.分别于移植前及移植后第1、2、7和14天采集抗凝血(肝纤维化组同步采集),测定血浆总转化生长因子β1(TGF-β1)、活性TGF-β1、纤溶酶及α2-巨球蛋白(α2M)水平,并取其肝脏,进行肝脏的纤维成像和定量分析,检测肝脏星形细胞活性.结果 肝细胞移植后的第14天,实验组肝脏内成胶原纤维面积百分比为(3.69±0.44)%,低于肝纤维化组的(8.25±0.69)%(P＜0.01);实验组肝内α-SMA阳性信号面积百分比为(0.43±0.03)%,明显低于肝纤维化组同期的(2.79±0.40)%(P＜0.01).移植前实验组大鼠血浆中总TGF-β1和活性TGF-β1水平分别为(4543.2±307.2)μg/ml和(2380.7±150.8)μg/ml,移植后1 d,二者均显著下降,分别为(2109.9±425.2)μg/ml(P＜0.01)和(1758.9±429.2)μg/ml(P＜0.05).实验组肝细胞移植前血浆纤溶酶水平为(5.16±0.42)μg/ml,移植后下降至(2.96±0.11)μg/ml(P＜0.01).实验组肝细胞移植前血浆α2M水平为(152.4±27.6)mg/ml,移植后升高至(343.0±48.8)mg/ml,为移植前的2倍,而移植对照组的α2M水平移植后升高30余倍.结论 肝细胞移植能有效改善大鼠肝纤维化,其机制可能与肝内活性星形细胞减少及TGF-β1水平降低有关.     

紫杉醇对牛血清白蛋白诱导大鼠肝纤维化的抑制作用及机制

目的:探讨紫杉醇对牛血清白蛋白(BSA)诱导大鼠肝纤维化的抑制作用及机制。方法:用BSA诱导Wistar大鼠产生免疫性肝纤维化后,分别通过尾静脉注射生理盐水(模型组)与10μg/g紫杉醇(紫杉醇处理组),另取10只正常大鼠以相同的方式注射生理盐水作为对照组。每天注射1次,28d后处死大鼠获取血与肝组织标本,行肝组织病理学观察,检测血清肝功能生化指标与血清及肝组织胶原相关指标、肝组织α-SMA、TGF-β1表达,分离肝星状细胞(HSC),检测HSC中TGF-β/Smad信号通路相关分子的蛋白及mRNA的表达。结果:与对照组比较,模型组出现明显的肝纤维化改变、血清转氨酶水平明显升高,而白蛋白水平明显降低、血清与肝组织胶原相关指标明显升高、肝组织α-SMA与TGF-β1表达率明显升高、HSC中TGF-β/Smad信号通路相关分子的蛋白及mRNA明显上调(均P0.05)。紫杉醇处理组以上指标的变化程度均明显小于模型组(均P0.05),且部分指标与对照组无明显差异(部分P0.05)。结论:紫杉醇对BSA诱导大鼠免疫性肝纤维化有抑制作用,机制可能与其抑制TGF-β/Smad信号传导通路活化有关。     

大鼠肝移植中脂质体介导IL-10基因转染供肝的实验研究

目的观察供肝转染IL-10后基因表达情况.方法应用改良"二袖套法"行Lewis到BN大鼠肝移植11例,然后分为对照组3例; 空载体转染组4例,术中供肝冷保存期门静脉注射Lipofectamine 2000-pCR3.1空载体质粒复合物,保存45 min后行肝移植; 重组IL-10(rIL-10)转染组4例,术中供肝冷保存期门静脉注射Lipofectamine 2000-pCR3.1 rIL-10复合物,保存45 min后行肝移植.术后第6天处死全部大鼠,取血清检测IL-10水平,另取肝组织行免疫组化染色和RT-PCR检测肝细胞IL-10表达水平.结果 rIL-10转染组血清IL-10水平明显升高,肝上下腔静脉IL-10水平可达(639.27±67.11) pg/ml,是肝下下腔静脉IL-10水平的近1.4倍(P=0.024); 免疫组化染色结果示肝细胞胞桨呈棕黄色或深棕色,而其他两组肝细胞着色轻微或不明显.肝组织RT-PCR显示,IL-10 mRNA的表达在rIL-10转染组明显处于高水平(P=0.000).结论脂质体介导,体外冷保存期经门静脉途径进行供肝转染IL-10,可以使IL-10在肝脏获得较高水平的表达.     

外源性白细胞介素-10对梗阻性黄疸大鼠肝再生的作用

目的 探讨外源性白细胞介素-10(IL-10)对梗阻性黄疸大鼠肝再生的作用.方法 雄性Wistar大鼠随机分为假手术(SO)组、梗阻性黄疸(CJ)组和IL-10组.OJ组和IL-10组结扎切断胆总管建立梗阻性黄疽模型,SO组仅游离胆总管.IL-10组术后第1天开始每天腹腔内注射IL-10(4 μg/kg).实时荧光定量PCR法检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA表达,免疫组织化学法检测肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)标记指数,并检测血清总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)含量.结果 胆总管结扎术后3d,与SO组相比,OJ组大鼠肝组织TGF-β1 mRNA表达、PCNA标记指数及血清转氨酶均明显升高(P＜0.05).胆总管结扎术后7d,与SO组相比,OJ组大鼠上述各项实验指标均进一步升高(P＜0.05).应用IL-10治疗后,与OJ组相比,IL-10组大鼠肝组织TGF-β1 mRNA表达及血清转氨酶均明显降低,而肝组织PCNA标记指数明显升高(P＜0.05).结论 外源性IL-10可通过抑制肝组织TGF-β1的表达而促进梗阻性黄疽大鼠肝再生并改善受损肝功能.     

输注转染IL-2基因同源短发夹型RNA的淋巴细胞抑制大鼠肝移植急性排斥反应

目的 探讨输注转染白细胞介素2(IL-2)基因同源短发夹型RNA(shRNA)的受者淋巴细胞对大鼠肝移植后急性排斥反应的影响.方法 构建针对大鼠活化T淋巴细胞IL-2基因编码区的shRNA表达质粒,体外转染受者(BN大鼠)淋巴细胞.以Lewis大鼠为供者、BN大鼠为受者,进行肝移植,干扰组的受者于移植术中经门静脉回输转染IL-2-shRNA的BN大鼠淋巴细胞;环孢素A组(CsA组)的受者移植术中经门静脉输入生理盐水,肝移植后应用CsA肌肉注射;生理盐水对照组的受者移植术中经门静脉输入生理盐水;空载体对照组的受者移植术中经门静脉输入转染空载体的BN大鼠淋巴细胞.术后第7天,处死BN大鼠,取移植肝组织,观察组织和细胞超微结构改变情况以及肝细胞凋亡情况,同时测定肝功能指标、肝组织中IL-2基因的表达以及血清IL-2、肿瘤坏死因子a(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)水平.计算各组受者1周存活率.结果 移植后第7天,生理盐水对照组和空载体对照组的移植肝组织中可见中、重度急性排斥反应改变,而干扰组和CsA组病理切片中无或仅有轻度急性排斥反应征象.干扰组凋亡肝细胞数为(23±3.2)/mm2,CsA组为(26±4.0)/mm2,均明显低于生理盐水对照组和空载体对照组(P＜0.05).干扰组和CsA组的IL-2mRNA表达明显低于生理盐水对照组和空载体对照组(P＜0.05);干扰组和CsA组的血清IL-2、TNF-α和IFN-γ水平较空载体对照组和生理盐水对照组分别有不同程度降低(P＜0.05).干扰组和CsA组的丙氨酸转氨酶和总胆红素均明显低于空载体对照组和生理盐水对照组(P＜0.05).而白蛋白则高于空载体对照组和生理盐水对照组(P＜0.05).干扰组受者1周存活率为87.5%(7/8),明显高于生理盐水对照组的37.5%(3/8)和空载体对照组的37.5%(3/8,P＜0.05).结论 输注转染IL-2-shRNA的受者淋巴细胞可抑制大鼠肝移植后的急性排斥反应,但这种作用是短期的.     

雌二醇抗肝纤维化作用中对TGF-β1及TIMP-1影响的研究

目的 通过雌二醇对CCL4诱导的肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)及金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)影响的实验性研究,探讨雌二醇对肝纤维化的抑制作用机理及临床应用前景.方法 CCL4诱导大鼠肝纤维化动物模型,观察雌二醇对大鼠肝纤维化形成过程中TGF-β1、TIMP-1表达的影响.结果 雌二醇可以明显减少肝脏胶原沉积,可以明显降低TGF-β1、TIMP-1的表达(P＜0.05).结论 雌二醇可能通过下调TGF-β1、TIMP-1抑制胶原合成及加强胶原分解,从而抑制肝纤维化形成.雌二醇可以作为一种防治肝纤维化的药物.     

当归对兔肝纤维化肝癌介入治疗后肝纤维化的作用

目的 建立兔肝纤维化肝癌模型,观察当归对其行化疗栓塞(TACE)术后加重肝纤维化的预防作用,探讨当归预防肝纤维化的作用机制.方法 将55只新西兰大白兔随机表法分为对照组(n=10)、模型组(n=15)、介入组(n=15)和预防组(n=15).造模时给予腹腔注射纯CCl4剂量0.1 ml/kg,每周1次,共注射10周,同时给予5%的乙醇饮水,在第10周末于肝左叶种植VX2瘤.其中模型组:在第12周末经肝动脉注入生理盐水2ml;介入组:在行TACE术时注入平阳霉素1mg+碘油0.2ml;预防组:在行TACE术时注入平阳霉素1mg+碘油0.2ml+当归注射液6ml/kg.对照组:以相同剂量生理盐水注射.各组于第16周末检测透明质酸酶(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(CⅣ),并进行肝组织苏木素咿红(HE)染色、胶原纤维(VG)染色和转化生长因子(TGF)-β1免疫组织化学染色.结果 模型组(7/10)和预防组(6/10)的肝纤维化病理分期主要处于肝纤维化Ⅱ期(P>0.05),介入组(7/9)主要处于肝纤维化Ⅲ期,与模型组(3/10)和预防组(4/10)分期比较差异有统计学意义(P<0.05);模型组、介入组和预防组血清HA、LN、PCⅢ和CⅣ明显高于对照组(P<0.05),预防组低于介入组(P<0.05),与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组肝组织TGF-β1呈阴性表达,介入组肝组织TGF-β1表达明显增强,模型组和预防组TGF-β1表达较介入组减少.结论 用CCl4诱发兔肝纤维化后并种植VX2瘤,可以建立兔肝纤维化肝癌模型,行TACE术后可加重其肝纤维化的程度,当归对其有延缓作用,TGF-β1参与其调控机制.     

肝纤维化过程中整合素α5β1动态变化与扶正化瘀方干预作用

目的探讨肝纤维化形成过程中整合素α5β1蛋白的变化特点,及其扶正化瘀方影响该蛋白表达的抗肝纤维化作用机制.方法四氯化碳(CCl4)皮下注射与高脂低蛋白饲料复合建立大鼠肝纤维化模型.135只大鼠分为正常组、模型组与扶正化瘀方药物干预组.模型组又分为2 d、1、2、3、4、5、6周共7个动态观察点.药物组自造模之日起以扶正化瘀方稀释液灌胃,共用药6周.其余大鼠灌以等量生理盐水.天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积,盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸含量,Western印迹法分析肝组织纤维连接蛋白(FN)、α5β1与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量,并分析其相关性.结果随肝纤维化形成,模型组大鼠肝组织FN、α5β1与α-SMA蛋白表达量逐渐上升,早期以FN升高明显,而后以α5β1及α-SMA增加较为显著,三者之间呈明显正相关.与模型组比较,扶正化瘀方预防组大鼠肝脏胶原沉积减轻,肝羟脯氨酸含量下降,FN、α5β1与α-SMA蛋白表达减少.结论CCl4大鼠肝纤维化形成中肝脏整合素α5β1表达逐渐增加,肝损伤早期FN显著上升,并可通过α5β1促进肝星状细胞活化与肝纤维化.扶正化瘀方抑制肝纤维化大鼠肝脏FN与整合素α5β1表达,该作用为扶正化瘀方抗肝纤维化机制之一.     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞延长异种肝移植大鼠存活时间

目的 探讨人白细胞介素10(hlL-10)修饰的豚鼠骨髓间充质干细胞(hIL-10-MSCs)输注对异种肝移植大鼠存活的影响及其可能机制.方法 以携带hIL-10基因的慢病毒(hIL-10/LOX-ewGFP)为载体构建hIL-10-MSCs.以豚鼠为供者,Wistar大鼠为受者,制作非协调性异种原位肝移植模型,将受者随机分成3组,每组60只:空白对照组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射生理盐水和地塞米松1次;MSCs组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射MSCs和地塞米松1次;hIL-10-MSCs组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射hIL-10-MSCs和地塞米松1次.记录供者手术时间、供肝冷缺血时间、受者手术时间、肝上下腔静脉(SVC)吻合时间、无肝期及受者存活时间,测定术后各组受者血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,酶联免疫吸附试验法测定各组受者移植肝组织中自细胞介素2(IL-2)、IL-4、hIL-10、IL-12、IL-15、IL-18和TGF-β1的含量,逆转录聚合酶链反应法检测各组受者移植肝组织中上述各细胞因子mRNA的表达.结果 hIL-10-MSCs组受者存活时间为(72.0±5.5)h,空白对照组和MSCs组受者的存活时间分别为(29.0±2.2)h和(48.0±4.6)h,前者明显长于后二者,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05).hIL-10-MSCs组移植肝组织中IL-4和TGF-β1mRNA的表达明显高于空白对照组和MSCs组(P<0.05,P<0.05),而IL-2、IL-12、IL-15、IL-18 mRNA的表达明显低于空白对照组和MSCs组(P<0.05,P<0.05),hIL-10-MSCs组肝组织中hIL-10 mRNA的表达明显高于空白对照组和MSCs组.结论 静脉输注hIL-10-MSCs可延长异种肝移植大鼠的存活时间,其机制可能与hIL-10-MSCs抑制IL-2、IL-12、IL-15、IL-18等细胞因子的表达,促进IL-4和TGF-β1的表达有关.     

Transplantation of bone marrow-derived hepatocyte stem cells transduced with adenovirus-mediated IL-10 gene reverses liver fibrosis in rats

Bone marrow stem cells (BMSCs) transplantation alone may not be sufficient for treatment of liver fibrosis because of complicated histopathologic changes in the liver. Interleukin-10 (IL-10) is an anti-fibrosis cytokine. IL-10 gene transfer of beta2m(-)/Thy-1+ bone marrow-derived hepatocyte stem cells (BDHSCs) may be useful for treating liver fibrosis. To determine the effect of liver fibrosis in rats by transplanting BDHSCs transduced with adenovirus-mediated IL-10 gene (AdIL-10), rat BDHSCs were isolated by magnetic bead cell sorting, characterized for liver-associated phenotypes, transduced with AdIL-10, and transplanted into liver-fibrotic rats. We show that BDHSCs secreted high-level IL-10 and retained their albumin expression after AdIL-10 transfer in vitro. Intra-portal-infused BDHSCs were implanted into the liver 2 weeks after transplantation. Transplanting AdIL-10-transduced BDHSCs into liver-fibrotic rats downregulated inflammatory response, promoted liver regeneration, suppressed activation of hepatic stellate cells and improved liver histopathology and liver function. These findings demonstrated the potential utility of this novel combined strategy of IL-10 gene and BDHSCs for the treatment of liver fibrosis.     

白细胞介素-18结合蛋白联合骨髓来源间充质干细胞治疗肝纤维化的实验研究

目的：观察骨髓来源间充质干细胞（MSC）与白细胞介素-18结合蛋白（IL-18BP）联合治疗肝硬化大鼠的疗效。方法：由大鼠胫骨及股骨骨髓腔分离培养MSC,鉴定后制备成1×10^7／ml的细胞悬液。40只大鼠随机分为4组：正常对照组、肝硬化模型组、MSC治疗组和MSC＋IL-18BP治疗组。正常对照组不制模,其余3组采用四氯化碳（40ml／L）0．2ml／100g腹腔注射、每周2次、连续6周诱导大鼠肝硬化模型。MSC治疗组于制模后6周尾静脉注射MSCs 300μl;MSC＋IL-18BP组在给予MSCs的同时腹腔注射IL-18BP 0．5mg／kg;正常对照组和肝硬化模型组于相同时间给予等量磷酸盐缓冲液腹腔注射。4周后各组动物眼眶静脉取血检测血清白蛋白和丙氨酸转氨酶（ALT）水平;处死取肝组织,HE染色,光学显微镜下进行病理学观察及肝纤维化分级;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝组织匀浆中Ⅰ型胶原蛋白基因的表达量。结果：病理学观察显示肝硬化模型组肝纤维化明显,与正常对照组比较,血清白蛋白水平明显下降,ALT明显上升,Ⅰ型胶原蛋白基因表达明显增强（P〈0．05）。MSC治疗组和MSC＋IL-18BP治疗组纤维化程度均减轻,ALT和血清白蛋白水平明显改善,Ⅰ型胶原蛋白基因表达明显下降,且MSC＋IL-18BP治疗组比MSC治疗组各指标改善更加明显（P〈0．05）。结论：MSC联合IL-18BP治疗肝硬化较单纯MSC治疗效果更加明显,能更有效地减轻肝纤维化。     

骨髓单个核细胞经门静脉移植对大鼠肝纤维化的减轻作用

目的 对比研究骨髓单个核细胞经门静脉移植治疗大鼠肝硬化的疗效,为临床应用提供依据.方法 采用四氯化碳(CCl4)综合法制作Wisrar大鼠肝硬化模型,8周后经病理检查证实成模者共20只进入实验.随机分为治疗组和对照组,每组10只,两组大鼠分别经门静脉注入骨髓单个核细胞和等体积的肝素生理盐水.各组大鼠继续皮下注射CCl4(CCl4使用方法与前述造模方法相同),在原环境下继续饲养4周后处死.切取肝组织分别作HE及Masson染色.疗效评价指标包括:①一般情况;②肝脏羟脯氨酸和胶原纤维含量;③肝纤维化病理学分级.结果 (1)治疗组大鼠一般情况改善;对照组无明显改变.(2)治疗组与对照组中肝脏羟脯氨酸含量分别为(0.50±0.12)g、(0.59±0.34)g;胶原纤维含量百分数分别为(3.75±0.98)%、(5.02±0.44)%.两组之间各指标均有统计学差异(P<0.05).(3)治疗组肝纤维化病理分级也有下降,治疗前后差异明显(P<0.05),而对照组无明显变化.表明治疗组行骨髓单个核细胞移植后大鼠肝纤维化程度减轻.结论 骨髓单个核细胞肝内移植能改善大鼠肝纤维化程度,为临床肝硬化的治疗带来了新的手段.     

Bone marrow-derived liver stem cell and mature hepatocyte engraftment in livers undergoing rejection

BACKGROUND: The definitive therapy for end-stage liver disease is orthotopic liver transplantation (OLT). However, rejection is still a major cause of mortality and morbidity following OLT. Hepatocyte transplantation has been used experimentally to treat liver diseases. The aim of this study was to investigate whether bone marrow-derived liver stem cells (BDLSC) and mature hepatocytes could repopulate transplanted livers undergoing rejection. METHODS: OLT was carried out from D'Agouti (C3-positive female) into Lewis (C3-negative female) rats. BDLSC were transplanted from Lewis (male) into livers of D'Agouti (female) rats. Group A (n = 9) received intraportal normal saline. Groups B (n = 9) and C (n = 9) underwent intraportal transplantation of mature hepatocytes (Lewis female, 0.75 x 10(7)) and DBLSC (Lewis male, 5 x 10(4)) respectively. All groups received subtherapeutic immunosuppression (Cyclosporin 0.25 mg/kg/d) for 13 days. Liver repopulation was assessed using immunohistochemistry (C3 antigen-negative cells), in-situ hybridization, (Y-chromosome-positive BDLSC) and histologic assessment (hematoxylin and eosin) for rejection. RESULTS: BDLSC and mature hepatocytes repopulated 62 +/- 12.3% and 2.5 +/- 1.7% of rejecting livers, respectively. BDLSC demonstrated formation of hepatic lobules and portal triads with little evidence of rejection 36 days after discontinuation of immunosuppression. CONCLUSIONS: BDLSC can repopulate livers undergoing severe rejection. Moreover, BDLSC can differentiate into hepatocytes and cholangiocytes. This finding may have important clinical implications.     

大鼠诱发肝癌模型中脾内转染IL-2和IL-12基因激活NK细胞

目的研究大鼠诱发肝癌模型中脾内直接注射携带白介素2（IL-2）和（或）白介素12（IL-12）基因的逆转录病毒包装细胞株对血IL-2和IL-12,以及NK细胞活性的影响.方法大鼠随即分为生理盐水对照组、空载体对照组、IL-12基因治疗组、IL-2基因治疗组及IL-2/IL-12联合基因治疗组.构建携带IL-2和（或）IL-12基因的逆转录病毒载体.口服二乙基亚硝胺诱癌后,含IL-2和（或）IL-12基因的包装细胞转染脾细胞.比较大鼠血IL-2和IL-12浓度、NK细胞活性、病理变化和毒性反应.结果IL基因治疗后血IL-2和IL-12明显增加.联合基因组同时表达IL-2和IL-12,总水平高于单基因治疗组.病理示治疗后肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多.IL治疗组NK细胞活性较对照组显著增高（P＜0.01）.联合基因组较IL单基因增高（P＜0.05）.治疗后3 d血清IL达高峰,以后逐步下降.结论脾内直接注射携带IL-2和（或）IL-12基因的逆转录包装细胞株可明显增强NK细胞活性,IL联合基因治疗优于IL单基因.     

S-腺苷蛋氨酸对肝脏缺血再灌注损伤大鼠炎症因子的影响

目的：观察S-腺苷蛋氨酸对SD大鼠肝脏缺血再灌注损伤后HIRI炎症因子的影响。方法：将72只SD大鼠随机分为3组：假手术组（Sham组）、缺血再灌注对照组（IR组）、缺血再灌注腺苷蛋氨酸干预组（SAM组）,每组24只。Sham组打开腹腔,游离肝十二指肠韧带,不阻断肝脏血供,20 min后再关腹。IR组和SAM组开腹后游离肝十二指肠韧带,用无创微血管夹夹闭肝蒂,持续20 min后松开血管夹然后关腹。Sham组、IR组术后均予生理盐水1 mL（/kg.d）腹腔注射,SAM组予S-腺苷蛋氨酸100 mg（/kg.d）腹腔注射。3组分别于术后第1、4、7、10天各处死6只大鼠,测定血清和肝组织肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）含量变化,并取肝左叶部分组织行病理组织学观察。结果：SAM组各个时间点血清和肝组织的TNF-α、IL-1β、IL-6水平均明显低于IR组,差别有统计学意义（P〈0.001）;SAM组炎症细胞浸润明显少于IR组。结论：S-腺苷蛋氨酸能够降低HIRI时血清与组织炎症因子水平,减少肝组织炎症细胞浸润,保护肝脏组织。     

输注转染人白细胞介素10基因的骨髓间充质干细胞对移植肝的保护作用

目的研究输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞（hIL-10-MSC）对大鼠原位异种肝移植后移植肝的保护作用及机制。方法建立豚鼠对Wistar大鼠的非协调性异种原位肝移植模型,受体分为3组：空白对照组、骨髓间充质干细胞（MSC）对照组、hIL-10-MSC组。术后12h取移植肝,HE染色观察移植肝组织形态学变化,用RT-PCR、蛋白质印迹法观察移植肝组织IL-10、穿孔素、颗粒酶B的表达情况。结果与空白对照组、MSC对照组相比,hIL-10-MSC组大鼠移植肝排斥反应最轻,穿孔素、颗粒酶B的表达明显降低,而IL-10的表达显著升高（均P〈0.05）。结论 hIL-10-MSC对移植肝的保护作用可能与其减少穿孔素/颗粒酶B的表达有关。     

靶向性双自杀基因混合碘油对兔肝癌的介入治疗研究

目的评价携带血管内皮生长因子（VEGF）启动子调控的TK及CD融合双自杀基因重组腺病毒系统（AdVEGF-CDglyTK）与超液化碘油混合栓塞兔肝癌的治疗效果.方法 36只荷VX2瘤兔随机分4组,LP组（单纯超液化碘油栓塞组）;LP＋AdVEGF-CDglyTK组（超液化碘油＋AdVEGF-CDglyTK混合栓塞,介入术后腹腔注射GCV ＋5-FC治疗组）;AdVEGF-CDglyTK组（单纯灌注AdVEGF-CDglyTK,介入术后腹腔注射GCV ＋5-FC治疗组）;NS组（生理盐水治疗组）.于术前及术后第10、15天行CT检查观察肿瘤的体积,免疫组织化学法检测肿瘤组织VEGF的表达及微血管密度（MVD）.结果 4组兔术前肿瘤体积在统计学无显著性差异（P〉0.05）;介入治疗后10天、15天的各组之间肿瘤增长率均有显著性差异（P〈0.05）,LP＋AdVEGF-CDglyTK肿瘤增长率最小,而LP组肿瘤增长率小于AdVEGF-CDglyTK组,三个治疗组疗效均优于生理盐水对照组.VEGF表达方面：LP组表达最高,与其它三组相比有显著性差异（P〈0.05）,其它三组之间未见显著性差异.MVD表达：LP组最高,LP＋AdVEGF-CDglyTK组最低,与其它各组相比有显著性差异（P〈0.05）,而AdVEGF-CDglyTK组MVD表达也低于NS组,有显著性差异（P〈0.05）.结论在对兔肝癌的治疗中,与单纯碘油栓塞以及单纯灌注AdVEGF-CDglyTK相比,AdVEGF-CDglyTK与碘油混合肝动脉栓塞可以明显降低肿瘤的生长率,减少肿瘤组织VEGF的表达及减少肿瘤新生血管生成.     

兔肝匀浆诱导免疫性大鼠肝纤维化模型的建立

目的 建立一种新的免疫损伤性大鼠肝纤维化模型的制作方法.方法 将Wistar大鼠,雌性,随机分为正常对照组(8只),人血白蛋白肝纤维化模型组(15只),兔肝匀浆肝纤维化模型组(15只).免疫攻击8周后处死大鼠,取血清检测肝功能生化指标、肝组织羟脯氨酸;评价病理学分级.结果 与正常对照组比较,兔肝匀浆组大鼠肝脏重量显著增...