低渗刺激后大鼠视上核内星形胶质细胞和神经元的可塑性改变及其相互关系

为观察低渗刺激后大鼠视上核(SON)内星形胶质细胞和神经元的可塑性反应及其两者在反应时间和空间上的相互关系,我们采用大鼠尾静脉注射 5. 5ml/kg低渗盐水(0. 83% 葡萄糖+ 0. 3% NaCl)制作模型,应用抗Fos、抗胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)单标记,以及抗Fos/抗GFAP双标记、抗Fos/抗血管加压素 (VP) /抗GFAP三标记的免疫组化方法。结果发现:在SON中GFAP阳性星形胶质细胞数量在刺激后 15min增加,其胞体肥大,突起伸长变粗, 45min达高峰。Fos阳性星形胶质细胞胞核呈蓝黑色小点,刺激后 15~45min达高峰, 90min明显减少;Fos阳性神经元胞核较大,刺激后 15min未见表达, 45min少量表达, 90min表达增加。该结果表明低渗刺激后,SON内星形胶质细胞的Fos表达早于神经元,三重标记显示星形胶质细胞与神经元关系密切,提示SON内星形胶质细胞可能在低渗刺激的调节中发挥一定作用。     

大鼠腰骶髓和延髓星形胶质细胞及神经元对慢性结肠炎的反应

目的探讨大鼠腰骶髓和延髓星形胶质细胞及神经元对慢性结肠炎的反应,及反应性星形胶质细胞和反应性神经元之间的关系.方法成年雄性SD大鼠,实验组（n=17）给予三硝基苯磺酸（TNBS）灌肠诱导结肠炎;对照组（n=16）给予生理盐水灌肠.免疫组织化学法显示大鼠腰骶髓和延髓内胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性星形胶质细胞和Fos阳性神经元.结果TNBS灌肠后,GFAP阳性星形胶质细胞主要分布在脊髓背角浅层（Ⅰ～Ⅱ层）、中间外侧核（Ⅴ层）、后连合核（Ⅹ层）和腹角外侧核（Ⅸ层）.Fos阳性神经元集中分布在背角深层（Ⅲ～Ⅳ,Ⅴ～Ⅵ层）.在延髓,两者均主要分布在由孤束核、中间网状带和腹外侧区组成的延髓内脏带（MVZ）.TNBS灌肠后3、7、14 d,脊髓中GFAP阳性细胞密度明显高于对照组（P＜0.05）.TNBS灌肠后3 d,延髓中GFAP阳性细胞密度明显高于对照组（P＜0.05）.TNBS灌肠后28 d,脊髓和延髓中GFAP阳性细胞密度下降,与对照组无显著性差异（P＞0.05）.结论结肠炎性刺激引起脊髓和延髓中星形胶质细胞激活.随着结肠炎的恢复,星形胶质细胞的反应性下降.在延髓内脏带,反应性星形胶质细胞与反应性神经元关系密切.     

低渗刺激后大鼠视上核星形胶质细胞释放牛磺酸调节神经元的活动

目的:观察低渗刺激大鼠后,视上核(SON)内星形胶质细胞调节神经元活动的机制。方法:大鼠分为4组:(1)等渗对照组,经尾静脉注入生理盐水;(2)低渗刺激组,经尾静脉注入低渗盐水(0.83%葡萄糖+0.3%NaCl);(3)氟代柠檬酸(胶质细胞代谢抑制剂,fluorocitrate,FCA)+低渗刺激组,经侧脑室注射FCA(1 nmol/μl/只)2 h后,再经尾静脉注入低渗盐水;(4)甘珀酸(缝隙连接通道阻断剂,carbennoxolon,CBX)+低渗刺激组,经侧脑室注射CBX(50μg/只,10μg/lμl)2 h后,再经尾静脉注入低渗盐水。各组动物刺激后90 min,常规固定、取材、下丘脑连续冠状切片。应用抗牛磺酸(taurine,Tau)、抗加压素(vasopressin,VP)、抗甘氨酸受体(glycine recep-tor,GlyR)、抗缝隙连接蛋白(connexin43,Cx43)的抗体进行标记,以及Fos/胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)双标记的免疫荧光染色方法,观察其在SON神经元和星形胶质细胞内的表达。结果:与对照组相比,低渗刺激组大鼠,SON内星形胶质细胞的胞体增大、突起变粗;Tau,Cx43和GFAP的平均荧光强度(MFI)增强,神经元上的GlyR表达增强,但VP和Fos的表达减弱。FCA,而不是CBX,明显减少星形胶质细胞的Tau,GFAP,Cx43的表达。FCA和CBX均可抑制神经元上的VP、GlyR、Fos阳性反应。结论:低渗刺激激活SON内星形胶质细胞,被激活的星形胶质细胞经Cx43半通道释放牛磺酸而抑制神经元的活性,减少VP的释放。     

高渗刺激诱导大鼠视上核与孤束核内神经元-星形胶质细胞复合体反应

目的 探讨大鼠接受高渗刺激后,视上核和孤束核内神经元-星形胶质细胞复合体(N-ASC)反应.方法 成年雄性SD大鼠50只,随机分为光镜组(n=40)和电镜组(n=10).采用多重免疫荧光标记法,在光镜下观察高渗刺激(9%氯化钠,5.5ml/kg尾静脉注射)后15、45、90和180 min,视上核内胶质纤维酸性蛋白(GFAP,标记星形胶质细胞)、催产素(OXT,标记视上核神经元)、Fos(标记神经元胞核)和孤束核内GFAP、酪胺酸羟化酶(TH,标记神经元)、Fos表达的时程变化.采用双重免疫电镜法,观察高渗刺激后视上核N-ASC内星形胶质细胞(用Cx43标记)与神经元(用Cx32标记)之间接触处的超微结构.结果光镜下在视上核和孤束核可分别观察到3种N-ASC,即:由 GFAP阳性星形胶质细胞与 OXT(或TH)阳性神经元形成的N-ASC;由GFAP阳性星形胶质细胞与Fos阳性神经元形成的N-ASC;由GFAP阳性星形胶质细胞与Fos和OXT(或TH)双阳性神经元形成的N-ASC.高渗刺激后 N-ASC的数量明显增加.抗Cx43和抗Cx32的双重免疫电镜显示,高渗刺激后Cx43阳性星形胶质细胞突起(即Cx43半通道)以及Cx32和Cx43形成的异型缝隙连接(HGJ)的数量明显增加.结论视上核和孤束核内的N-ASC参与渗透压调节反应.     

低渗刺激下大鼠视上核星形胶质细胞对神经元反应的调控机制

目的观察低渗刺激后大鼠视上核(SON)星形胶质细胞对神经元反应的调节机制,以及牛磺酸拮抗剂(TAG)和缝隙连接阻断剂-甘珀酸(CBX)对反应的影响。方法成年SD大鼠20只,对照组经尾静脉注射0.9%盐水;低渗组经尾静脉注射低渗盐水(0.83%葡萄糖 0.3%NaCl);TAG 低渗组和CBX 低渗组分别经侧脑室注射TAG或CBX,2h后经尾静脉注射低渗盐水。常规固定取材制片。切片进行抗Fos、抗加压素(VP)、抗甘氨酸受体(GlyR)、抗胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、抗缝隙连接蛋白43(Cx43)免疫荧光染色,镜下观察在视上核神经元和星形胶质细胞的表达。结果低渗组视上核星形胶质细胞的GFAP和Cx43表达高于对照组,GlyR阳性神经元较对照组多,Fos和VP阳性神经元较对照组少;TAG 低渗组和CBX 低渗组,星形胶质细胞的反应同低渗组,而GlyR阳性神经元较低渗组少,VP-、Fos-阳性神经元较低渗组均有所增加。结论低渗刺激激活视上核星形胶质细胞,被激活的星形胶质细胞可能经缝隙连接释放牛磺酸而抑制神经元,减少VP的释放,此过程可被TAG和CBX所阻断。     

大鼠腰髓背角星形胶质细胞及神经元对一侧胫、腓骨骨折的反应及其相互关系

目的 研究大鼠脊髓内星形胶质细胞及神经元对一侧胫、腓骨骨折的反应及相互关系。方法 应用细胞免疫组织化学方法，观察脊髓内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、Fos蛋白双标记以及蛋白激酶C(PKC)在左侧胫、腓骨骨折后不同时程的表达变化。结果 1．左侧胫、腓骨骨折后，GFAP阳性反应产物主要分布于同侧腰髓背角的星形胶质细胞胞浆，Fos阳性产物在其胞核也有表达，且以浅层为主，神经元的胞核也有Fos阳性产物；2．Fos—LI神经元与GFAP／Fos-LI星形胶质细胞的分布基本一致，两者关系密切；3．GFAP／Fos—LI星形胶质细胞表达高峰期在骨折后45min，而Fos—LI神经元的表达高峰期在骨折后90min；PKC—LI星形胶质细胞出现及达到高峰的时间比PKC—LI神经元要早。结论 腰髓背角的星形胶质细胞参与了下肢骨折伤害性刺激的应激反应及调节过程，而且Fos—LI、PKC-LI的表达早于神经元，可能主动地影响神经元的活动。     

大鼠脑内星形胶质细胞对渗透压改变的反应及其和神经元的相互关系

为观察大鼠在饮用 3 % Na Cl溶液 2 d和 5 d时的脑内星形胶质细胞的反应变化及相互关系。本文应用免疫组织化学三重标记法 ,在脑原位切片同时显示 FOS、胶质原纤维酸性蛋白、酪氨酸羟化酶 (或加压素 )的表达、相互关系及分布规律。结果显示 :(1)实验组大鼠脑内孤束核、味觉核、臂旁核、蓝斑、导水管周围灰质的腹外侧区、上丘中灰层、下丘脑室旁核外侧大细胞部、视上核、和穹隆下器同时出现 FOS阳性神经元胞核和胶质原纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞。 (2 )在孤束核、蓝斑、下丘脑室旁核外侧大细胞部和视上核出现酪氨酸羟化酶阳性神经元 ,在下丘脑室旁核外侧大细胞部、下丘脑室旁核腹侧部和视上核等出现加压素阳性神经元。(3 )在孤束核、蓝斑、或下丘脑室旁核外侧大细胞部、视上核的三重免疫组化染色切片上见到胶质原纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞包绕 FOS阳性和酪氨酸羟化酶阳性 (或加压素阳性 )神经元 ,形成复合体。提示 :脑内相关核团内的星形胶质细胞与神经元共同参与对渗透压的调节 ,并以神经元—星形胶质细胞复合体作为功能单位     

单侧和双侧眼睑缝合后大鼠脑内视觉系统星形胶质细胞的反应

目的　探讨单侧和双侧眼睑缝合后 ,幼年大鼠脑内视觉系统星形胶质细胞可塑性的变化。　方法　分别缝合出生后 7d大鼠单侧或双侧眼睑并维持 80d ,正常光线环境下饲养大鼠作为对照组。应用免疫组织化学ABC法观察大鼠脑内视觉系统胶质原纤维酸性蛋白的变化。　结果　与对照组相比单眼与双眼缝合组大鼠脑内GFAP阳性结构均减少。单侧眼睑缝合组视交叉、视束及缝合眼对侧与视觉传导相关的脑区 (包括视交叉上核、外侧膝状体、枕叶视皮质、上丘视神经层、顶盖前区 )内GFAP阳性结构明显减少。双侧枕叶视皮质呈现“互补分布”的特点。双侧眼睑缝合组大脑两侧上述脑区内GFAP阳性结构基本消失。单侧和双侧眼睑缝合组两侧嗅皮层内GFAP阳性结构明显增加。　结论　提示发育过程中视觉经验可以影响星形胶质细胞的结构     

鞘内注射甘珀酸降低CX43的表达对大鼠镜像痛的影响

目的:研究大鼠脊髓星形胶质细胞CX43的表达变化及对镜像痛的影响。方法:96只SD大鼠随机分为四组:Sham组,SNI组,SNI+NS组,SNI+CBX组,每组24只。各组分别于术前l d、术后3、7、10、l4和21 d观察大鼠疼痛行为学变化,其中Sham组,SNI组于术后14 d采用免疫组化法分析缝隙连接蛋白43(Cx43)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况;SNI+CBX组于术后第5~9 d鞘内注射甘珀酸10μl(20μg),SNI+NS组注射等量生理盐水,并于术后10、14和21 d三个时间点采用Western Blot的方法检测脊髓内CX43蛋白表达情况,采用免疫组化法分析GFAP的表达变化情况。结果:SNI组与Sham组相比,行为学上大鼠双侧机械缩足阈值降低,脊髓星形胶质细胞CX43及GFAP表达增加(P0.05);SNI+CBX组与SNI+NS组相比,Western Blot显示CX43表达降低,免疫组化显示脊髓背角双侧GFAP表达降低(P0.05),术后14 d,21 d大鼠双侧机械缩足阈值升高。结论:鞘内注射甘珀酸降低CX43的表达可抑制星形胶质细胞的活化,并缓解大鼠双侧的机械痛。     

大鼠束缚后脑内星形胶质细胞的反应

为了探讨束缚后大鼠脑内星形胶质细胞的反应,本实验将大鼠束缚于小的塑料桶内1、3或6 h,于解束后30 min处死,正常大鼠不被束缚作为对照。脑组织进行抗glial fibrillary acidic-protein(GFAP)免疫组织化学染色。结果显示:在正常大鼠脑内有少数散在静止状态的星形胶质细胞,表现为胞体小、突起细、GFAP淡染,缺乏机能定位分布特点;束缚后脑内星形胶质细胞表现为胞体肥大、突起变粗、GFAP深染、形成激活状态,其分布有明显的机能定位特点,表达于与应激反应调节相关的核团,主要有(1)端脑:扣带回、新皮质(尤其是第Ⅲ和V层)、隔外侧核、杏仁中央核;(2)间脑:丘脑室旁核、外侧膝状体、内侧膝状体、下丘脑的视上核、室旁核、第三脑室室周区、弓状核;(3)脑干:中脑的上丘浅层、中脑导水管周围灰质、下丘的皮质部;脑桥的臂旁外侧核、蓝斑、A5区;延髓的耳蜗核、延髓内脏带(MVZ)等处。反应性星形胶质细胞表达的时程变化是束缚1 h最高,3 h次之,6 h最少。本文结果表明,大鼠被束缚后全脑多处核团的星形胶质细胞发生不同程度的改变,随着束缚时间的延长,动物产生适应性,星形胶质细胞表达减少。     

大鼠脑内星形胶质细胞对低血压的反应及其与神经元的关系

目的　观察大鼠血压降低后脑内星形胶质细胞 (AS)和神经元的反应及其相互关系。　方法　硝普钠静脉注射制作瞬间低血压模型 ,用抗Fos、抗GFAP和抗TH三重标记免疫组织化学方法 ,观察GFAP和Fos表达和分布规律及其与TH阳性神经元的关系。　结果　在脑内血压调节相关区域均出现GFAP和Fos表达 ,两者部位一致 ,且有亚核分布特点 ;在延髓和蓝斑等部位Fos或TH单标 ,或Fos与TH双标阳性神经元周围有GFAP阳性纤维包绕 ,形成 3种形式的复合体样结构。　结论　AS对血压变化反应敏感 ,并具机能定位特异性 ,推测星形胶质细胞可能与神经元共同参与脑内的信息处理     

大鼠前脑星形胶质细胞和神经元对一侧胫、腓骨骨折的反应及其相互关系

目的　研究大鼠前脑内星形胶质细胞 (ASs)及神经元 (Ns)对一侧胫、腓骨骨折的反应及相互关系。方法　应用细胞免疫组织化学方法观察前脑内胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、Fos蛋白以及酪氨酸羟化酶 (TH)在左侧胫、腓骨骨折后的表达变化。　结果　 1 一侧胫、腓骨骨折后 ,前脑GFAP阳性表达的ASs有明显的核团定位。在缰外侧核内侧区 (LHb)、下丘脑室旁核 (Pa)、视上核 (SON)、视交叉上核 (SCh)、终纹床核 (BST)、杏仁中央核 (Ce)和内侧杏仁核 (Me)及皮层等脑区内均可观察到有GFAP阳性ASs分布 ,且两侧分布无明显差异。 2 Fos阳性Ns的分布与GFAP阳性ASs上述分布部位基本一致 ,两者关系密切。 3 Pa等部位有大量Fos TH双标Ns,四周是密集的GFAP阳性ASs包围 ,形成以神经元为中心 ,周围包绕ASs,共同构成神经元 星形胶质细胞复合体 (N ASC)。　结论　上述核团的ASs参与了下肢骨折伤害性刺激的应激反应及其调节过程 ,且与Ns关系密切 ,可能主动地影响Ns的活动。     

地塞米松和苯妥英钠对癫痫大鼠脑内的GFAP和Fos表达的抑制作用

目的：探讨糖皮质激素（GC）的抗痫效应和抗痫机制。方法：动物行为学观察和免疫细胞化学染色。结果：戊四氮（PTZ）可诱发癫痫大发作,如诺在注入PTZ前30min先注入地塞米松或苯妥英钠（DPH）能减轻或抑制大鼠癫痫发作症状。免疫细胞化学染色结果表明,PTZ致痫组大鼠大脑皮质、海马回、齿状有大量肥大的胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性的星形胶质细胞。GC或DPH抗痫组GFAP免疫反应明显减弱,阳性细胞数量减少,突起短而少,Fos蛋白在PTZ组大鼠致痫后1－1．5h有大量表达,而在上述两抗痫组显著少于PTZ致痫组。结论：1．通过与苯妥英钠（传统抗痫药）的抗痫效果相比较,进一步证明糖皮质激素具有抗痫效应。2．糖皮质激素的抗痫机制可能与抑制星形胶质细胞的活动有关。3．Fos蛋白表达的变化与癫痫活动有直接关系。     

反义GFAP逆转录病毒表达载体的构建及其对反应性星形胶质细胞的作用

目的　构建反义 GFAP逆转录病毒表达载体 ,评价其对培养正常及损伤星形胶质细胞 (Ast)形态及GFAP基因表达的影响。　方法　用定向克隆技术 ,将 1.1kb的 GFAP基因片段反向插入逆转录病毒载体 p L XSN上 ,获得重组体 PL Bsk G,经病毒包装、抗性克隆筛选、滴度测定等 ,挑选滴度高的抗性克隆细胞株扩展培养 ,收获病毒上清液感染体外培养的 Ast,通过免疫组织化学、原位杂交、RT- PCR、Southern blot和流式细胞仪分析等方法 ,研究 PL Bsk G对正常及损伤 Ast的生长、细胞增殖周期、细胞形态结构、GFAP基因表达的影响。　结果　插入PL Bsk G中的 GFAPc DNA片段序列、方向完全正确 ,Southern杂交及 RT- PCR分析表明 ,PL Bsk G成功整合入PA317细胞中 ,并实现了在 NIH3T3细胞中的表达。PL Bsk G使正常及反应性 Ast生长抑制 ,G1期阻滞 ,Ast胞体变圆、胞浆减少、突起变细、回缩 ,核浆比例增大。GFAP免疫组织化学染色减弱 ;GFAP m RNA表达水平降低。　结论　获得了构建正确的反义 GFAP逆转录病毒表达载体 ,并证实其对正常及反应性 Ast形态结构、GFAP表达水平等均有明显的影响 ,为深入研究 Ast反应及 GFAP基因的功能创造了条件。     

渗透压变化对缝隙连接蛋白在培养的大鼠下丘脑星形胶质细胞和神经元表达的影响

目的观察渗透压改变对培养的下丘脑星形胶质细胞的缝隙连接蛋白Connexin43（Cx43）和神经元的缝隙连接蛋白Cx32表达的影响。方法体外培养孕14d或新生1d SD大鼠下丘脑的神经元和星形胶质细胞并进行纯化和鉴定。实验各分两组,第1组：细胞由等渗培养液移至高渗培养液（含9％NaCl）分别放置1min、3min、5min、10min和15min后将液体吸出常规固定;第2组：细胞先置于高渗培养液中15min后换成等渗培养液,分别在1min、3min、5min和10min后将等渗培养液吸出常规固定。两者均进行抗Cx43或抗Cx32的免疫荧光染色,Confoeal显微镜观察。结果第1组,Cx43在刺激1min后在星形胶质细胞表达比对照组有所增加,3min达到高峰,以后逐渐降低,15min恢复正常;而Cx32在刺激后1min的神经元中表达比对照组增加,5min达到高峰,以后降低。15min恢复正常。第2组同样为Cx43在星形胶质细胞刺激1min后表达增加,3min达到高峰,以后降低,10min恢复正常;神经元的Cx32表达在刺激后5min达到高峰,以后降低,10min恢复正常。两组Cx43表达的高峰期均早于Cx32。结论Cx43和Cx32可能参与星形胶质细胞与神经元渗透压的调节。     

大鼠三叉神经尾侧亚核内星形胶质细胞对疼痛刺激的反应及与神经元的关系

目的 研究大鼠三叉神经尾侧亚核(Sp5C)星形胶质细胞对唇下注射福尔马林所致疼痛的反应及其与神经元的关系。方法 用免疫组织化学方法，显示注射后不同时间Sp5C星形胶质细胞与神经元内抗磷脂酶C(PLC)、抗Fos和抗胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学产物的表达和分布。结果 正常大鼠Sp5C无免疫组织化学阳性染色，唇下注射福尔马林后，Sp5C内的星形胶质细胞出现抗PLC、抗Fos和抗GFAP阳性染色，神经元出现抗PLC和抗Fos阳性染色，且有相同的亚核分布，关系密切。抗PLC和抗Fos免疫组织化学阳性先出现于星形胶质细胞，而后在神经元出现表达。结论 Sp5C内星形胶质细胞可能参与中枢神经系统对疼痛刺激的调节，并主动调节神经元的活动。     

低温对原代星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白和微丝的影响

用荧光染色方法，观察了低温（２～２２℃）对原代培养的星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）和微丝（ＭＦ）的影响。发现在低于２２℃中处理后，ＧＦＡＰ束和ＭＦ束变细，ＭＦ数量减少。处理时间越长，变化越明显。形态分化良好的细胞的ＧＦＡＰ束耐低温能力提高。结果表明，低温时ＧＦＡＰ束间联结断裂，而其本身无解聚；ＭＦ束间联结断裂，ＭＦ本身出现解聚。