酶双循环法测定一氧化氮合酶活性实验条件探讨

目的运用Wang法与酶双循环法联合测定血清中一氧化氮合酶（NOS）活性。方法先改良Wang法测定NOS活性的实验条件,再探讨Wang法与酶双循环法偶联的实验条件,比较酶双循环前后检测物性质。结果总NOS（tNOS）测定试剂由20mmol／L L-精氨酸、25μmol／L还原型辅酶Ⅱ（NADPH＋H^＋）、50．0μmol／LCaCl2、45．0μmol／L二硫苏糖醇（DTT）、36．0μmol／L乙二胺四乙酸（EDTA）、1．8μmol／L苯甲磺酰氯（PMSF）、80μmol／L尼克酰胺、1μg／ml钙调蛋白（CalM）和10μg/ml蛋白酶抑制剂Antipain组成。以上试剂添加诱导性NOS（iNOS）抑制剂N^W-硝基-D-精氨酸用于测定结构型NOS（cNOS）。对NOS生成的氧化型辅酶Ⅱ（NADP^＋）采用酶双循环产物6-磷酸葡萄糖酸（6PG）脱氢生成的大量NADPH＋H^＋,其放大倍数约为70～80倍。结论酶双循环法提高了测定NOS的灵敏度。     

β-羟丁酸对高磷诱导的血管钙化的影响

目的:探讨β-羟丁酸(BHB)对高磷诱导的血管钙化的影响。方法:分离野生型C57BL/6小鼠胸主动脉制备动脉环模拟在体研究,离体分离小鼠原代主动脉平滑肌细胞(VSMCs)。动脉环及VSMCs均采用高磷(Pi)诱导钙化。动脉环分为三组:对照组、高磷组(2.6 mmol/L Pi)、BHB干预组(2.6 mmol/L Pi+4.0 mmol/L BHB);VSMCs分为空白对照组,高磷组(2.6 mmol/L Pi),BHB干预组(2.6 mmol/L Pi+4.0 mmol/L BHB),BHB对照组(4.0mmol/L BHB)。Von Kossa染色检测动脉环钙化情况;茜素红染色及钙沉积检测VSMCs钙化情况。结果:高磷组动脉环出现明显的钙化,而BHB干预组的动脉环钙化程度显著减轻;高磷组VSMCs也出现明显钙化,BHB干预组的VSMCs钙化显著改善。结论:BHB可以改善高磷诱导的血管钙化。     

氯胺酮对N-甲基-D-天冬氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞损伤的作用

背景：氯胺酮是临床常用的静脉全麻药，静脉或硬脊膜外腔用药都有镇痛作用，它是N-甲基-D-天冬氨酸受体非竞争性拮抗剂，可拮抗兴奋性氨基酸的毒性作用。 目的：观察氯胺酮对N-甲基-D-天冬氨酸受体过度激活诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡的影响，探讨其可能的作用机制。 设计：随机对照观察。 单位：郧阳医学院附属太和医院麻醉科。 材料：实验于2003-09／2005-01在郧阳医学院基础医学研究所细胞生物学实验室完成。由武汉大学动物实验中心提供新生两三天Wistar大鼠。 方法：取Wistar大鼠T11～L6脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养。胶质纤维酸性蛋白鉴定星形胶质细胞纯度达98％后用于实验。将培养细胞24孔板随机分为6组（每组9份）：①对照组加Hanks液50μL。（爹N-甲基-D-天冬氨酸组加药浓度为100μmol／L。（爹氯胺酮组加药浓度为1mmol／L。④100μmol／L N-甲基-D-天冬氨酸＋0．1mmol／L氯胺酮组。⑤100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸＋0．5mmol／L氯胺酮组。⑥100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸＋1mmol／L氯胺酮组。1mmol几氯胺酮为临床镇痛剂量。培养24h后检测超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量，免疫细胞化学观察Bcl-2蛋白和形态学变化，流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率。 主要观察指标：①Bcl-2蛋白免疫组织化学苏木精-伊红复染细胞着色及形态学变化。②流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率。③丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性变化。 结果：①Bcl-2平均吸光度值似）作为半定量测量Bcl-2蛋白表达水平：100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸组低于对照组，差异显著[分别为0．0544&;#177;．021，0．108&;#177;0．039，P〈0．01]，100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸＋1mmol／L氯胺酮组高于100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸组，差异显著[分别为0．148&;#177;0．045，0．054&;#177;0．021，P〈0．01]。②流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率：100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸组高于对照组，差异显著[分别为（25．26&;#177;6．13）％，（5．66&;#177;2．24）％，P〈0．01]，100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸＋1mmol／L氯胺酮组低于100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸组，差异显著[分别为（24．41&;#177;4．82）％，（25．26&;#177;6．13）％，P〈0．01]。③丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性变化：100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸使星形胶质细胞内丙二醛含量显著升高，而超氧化物歧化酶活性明显降低；1mmol／L氯胺酮明显降低丙二醛含量，显著增强超氧化物歧化酶活性，该效应在临床镇痛剂量以内有明显量效关系，与N-甲基-D-天冬氨酸组相比差异显著（P〈0．01）。1mmol／L氯胺酮组与对照组相比、100μmol／LN-甲基-D-天冬氨酸＋0．1mmol/L几氯胺酮组与N-甲基-D。天冬氨酸组相比差异均无显著性。 结论：N-甲基-D-天冬氨酸受体过度激活可诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞大量凋亡，适量氯胺酮显著抑制细胞凋亡，其机制可能增强星形胶质细胞Bcl-2蛋白表达，同时抑制自由基的产生和增强超氧化物歧化酶活性。     

高磷对牛血管平滑肌细胞钙化及护骨素表达的影响

目的:研究不同浓度磷对体外培养的牛血管平滑肌细胞钙化及其分泌护骨素(OPG)的影响.方法:用不同磷浓度(1.4～2.0 mmol/L)的培养基体外培养牛血管平滑肌细胞,观察细胞钙沉积及骨桥素的表达.用甲σ-酚肽络合酮法测定钙化量,BCA法测蛋白含量,并以细胞蛋白含量标化钙化量.Western blot法测定OPG蛋白表达.结果:(1)培养基磷浓度1.4 mmol/L组细胞仅有少量钙沉积,培养基磷浓度增高及培养时间延长,细胞钙沉积增加,第9天时,培养基磷浓度2.0 mmol/L组与培养基磷浓度1.4 mmol/L组钙沉积差异有显著性[(138.00±12.53)μg/mg protein vs(22.67±2.52)μg/mg protein,P＜0.05].(2)随着培养基磷浓度增加,OPG蛋白表达量亦相应增加.结论:高磷培养基能诱导血管平滑肌细胞发生钙化和OPG表达,且与磷浓度和作用时间有关.     

药物防护电磁脉冲所致海马神经元损伤的可能性

背景：电磁脉冲照射可引起实验大鼠学习记忆能力下降，并可造成离体海马神经元的胞内钙超载，进而发生坏死和凋亡，物理屏蔽可减轻电磁辐射对实验动物的损伤，但缺乏在细胞模型上进行的药物防护研究。 目的：观察药物防护电磁脉冲致离体海马神经元损伤的可能性。 设计：随机对照动物实验。 单位：承德医学院基础部。材料：实验于2004—01／2005-01分别在军事医学科学院和承德医学院完成。实验动物选用Wistar乳鼠若干只。 方法：断头取脑分离海马组织，进行海马神经元原代培养与鉴定，原代培养的海马神经元经MK801（N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂）和尼非地平（L型钙离子通道阻断剂）预处理后进行电磁脉冲照射。电磁脉冲照射条件为6&;#215;10^4V／m，脉冲上升时间20ns，脉宽30μs，频率2．5脉冲／min，作用2min。将培养在特殊培养皿的细胞分为正常对照组、电磁脉冲照射组、MK801 20μmol／L组和MK80 120μmol／L＋尼非地平1μmol／L组。采用MTT法对细胞活力进行测定；FACS法检测细胞凋亡率；Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca^2＋]i。 主要观察指标：各组细胞内钙超载、细胞活力、细胞调亡的情况比较。 结果：①电磁脉冲组在照射后即刻的[Ca^2＋]i荧光强度显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（107．34&;#177;26．14），（54．93&;#177;16．08），P〈0．051；MK80 120μmol／L组比电磁脉冲照射组的[Ca^2＋]i荧光强度有所下降（81．29&;#177;19．96，P〈0．05），而MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol/L组的[Ca^2＋]i荧光强度呈进一步下降趋势（69．82&;#177;25．54，P〈0．05）。但两个给药组的[Ca^2＋]i荧光强度仍高于正常对照（P〈0．05）。②MK801 20μmol／L组和MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol／L组反映细胞增殖活力的吸光度值分别为0．25&;#177;0．06和0．27&;#177;0．07，明显高于电磁脉冲照射组（0．17&;#177;0．08，P〈0．05），但仍低于正常对照组（0．33&;#177;0．08，P〈0．05）。③电磁脉冲照射组在照后即刻的细胞凋亡率显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（68．63&;#177;9．04）％，（20．14&;#177;4．34）％，P〈0．011；MK801 20μmol／L组比电磁脉冲照射组的细胞凋亡率有所下降（62．12&;#177;11．08）％。MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol／L组的细胞凋亡率呈进一步下降趋势[（53．69&;#177;13．60）％，P〈0．05）1，但两个给药组的细胞凋亡率仍高于正常对照组（P〈0．01）。 结论：MK801和尼非地平预处理可部分阻断电磁脉冲所致的海马神经元损伤；细胞内钙超载在电磁脉冲损伤机制中发挥重要作用。     

稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌-一氧化氮的影响

目的探讨氯化镧（LaCl3）由对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264．7）分泌一氧化氮（nitric oxide，N01的影响。方法RAW 264．7细胞随机分成四组：空白对照组（培养基中不含LaCl3和LPS），氯化镧组（含LaCk2．5，5，10，20μmol／L培养24h）、氯化镧＋LPS组（分别以含LaCl3 2．5、5、10、20μmol／L的培养基培养24h后．更换含LPS 1mg／L的培养基继续培养24h）及LPS组（含LPS 1mg／L的培养基培养24h）。采用硝酸还原酶法测定各组细胞培养液上清一氧化氮（NO）的含量。结果LPS组培养上清NO浓度为52．82±12．60μmol／L与空白对照组（2．90±2．36μmol／L）和LaCl3组[（6．50±4．67μmol／L、9．52±4．47μmol／L、11．14±7．42μmol／L、6．74±2．00μmol／L]比较有显著性差异（P〈0．05）；LaCl3＋LPS组NO的浓度分别为26．00±5．83μmol/L（2．5μmol／L LaCl3＋LPS）、29．86±7．26μmol／L（5μmol／L LaCl3＋LPS）、34．62±6．24μmol／L （10μmol／L LaCl3＋LPS），与LPS组相比显著减少（P〈0．05），20μmol／L LaCl3＋LPS）组NO的产生为45．61±6．68μmol／L与LPS组比较无显著性差异。结论一定浓度的LaCl3可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的水平。     

稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌-一氧化氮的影响

目的探讨氯化镧（LaCl3）由对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264．7）分泌一氧化氮（nitric oxide，N01的影响。方法RAW 264．7细胞随机分成四组：空白对照组（培养基中不含LaCl3和LPS），氯化镧组（含LaCk2．5，5，10，20μmol／L培养24h）、氯化镧＋LPS组（分别以含LaCl3 2．5、5、10、20μmol／L的培养基培养24h后．更换含LPS 1mg／L的培养基继续培养24h）及LPS组（含LPS 1mg／L的培养基培养24h）。采用硝酸还原酶法测定各组细胞培养液上清一氧化氮（NO）的含量。结果LPS组培养上清NO浓度为52．82±12．60μmol／L与空白对照组（2．90±2．36μmol／L）和LaCl3组[（6．50±4．67μmol／L、9．52±4．47μmol／L、11．14±7．42μmol／L、6．74±2．00μmol／L]比较有显著性差异（P〈0．05）；LaCl3＋LPS组NO的浓度分别为26．00±5．83μmol/L（2．5μmol／L LaCl3＋LPS）、29．86±7．26μmol／L（5μmol／L LaCl3＋LPS）、34．62±6．24μmol／L （10μmol／L LaCl3＋LPS），与LPS组相比显著减少（P〈0．05），20μmol／L LaCl3＋LPS）组NO的产生为45．61±6．68μmol／L与LPS组比较无显著性差异。结论一定浓度的LaCl3可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的水平。     

兰州市正常新生儿血液生化26项指标参考范围调查

目的拟建立本地区正常新生儿生化指标的参考值范围。方法对400例出生24h内正常新生儿血液生化26项指标在全自动生化分析仪上进行检测,结果进行统计学分析,并与文献提供的参考值进行比较。结果试验所得出的正常参考范围：钾（K^＋）3．64～6．00mmol／L、钠（Na^＋）130～142mmol／L、氯（Cl^-）90～103mmol／L、钙（Ca^2＋）1．91～2．75mmol／L、二氧化碳（CO2）11～27mmol／L、血糖（Glu）1．09～5．17mmol／L、尿素氮（Urea）1．56～7．56mmol／L、肌酐（Crea）16～110μmol／L、尿酸（UA）82～446μmol／L、总蛋白（TP）41．8～66．8g／L、白蛋白（Alb）30．1～42．9g／L、总胆红素（TBIL）36．4～127．2μmol／l。直接胆红素（DBIL）4．3～15．9μmol／L、间接胆红素（IBIL）15．1～126μmol／L、谷丙转氨酶（ALT）1～32U／L、谷草转氨酶（AST）22～168U／L、肌酸激酶（CK）186～1074U／L、肌酸激酶同工酶（CK—MB）14～94U／L、乳酸脱氢酶（LDH）429～1045U／L、羟丁酸脱氢酶（HBDH）113～925U／L、免疫球蛋白IgG2．59～8．79mg／L、IgA0～0．45mg／L、IgM0～0．41mg／L,补体C30．11～0.55mg／L、C40．01～0．15mg／L、C-反应蛋白（CRP）0．92～3．84mg／L。结果无性别差异,但与文献提供的参考范围比较差异有统计学意义。结论结果分析表明,本试验人群与文献提供的参考范围存在很大的差异,应该建立本地区新生儿的参考范围。     

低剂量短效干扰素联合胸腺肽α1治疗失代偿期丙型肝炎肝硬化临床效果观察

目的观察失代偿期丙型肝炎肝硬化患者抗病毒、调节免疫治疗的疗效和安全性。方法将67例失代偿期丙型肝炎肝硬化患者随机分为3组。A组21例,给予传统治疗;B组23例,给予传统治疗＋干扰素;C组23例,给予传统治疗＋干扰素＋胸腺肽α1;3组患者治疗并观察12个月,分析对比其疗效。结果治疗后C组患者肝功能指标和血清肝纤维化指标无论6个月[肝功能指标：总胆红素（TBiL）为（34．6±14．9）μmo]／L,丙氨酸氨基转移酶（ALT）为（57±41）U／L,天冬氨酸氨基转移酶（AST）为（87±41）U／L;肝纤维化指标：透明质酸（HA）为（120．3±64．3）μg／L,Ⅲ型前胶原（PCⅢ）为（149．8±62．4）μg／L,层粘连蛋白（LN）为（103．7±34．9）μg/L]还是12个月[肝功能指标：TBiL（27．1±10．8）μmol／L,ALT（48±27）U／L,AST（69±32）U／L;肝纤维化指标：HA（162．3±71．3）μg／L,PCHI（167．8±63．4）μg/L,LN（94．7±25．7）μg／L]下降程度均优于A组[6个月肝功能指标：TBiL（64．2±31．3）μmol／L,ALT（157±97）U／L,AST（195±64）U／L;肝纤维化指标：HA（225．6±103．1）μg/L,PCⅢ（263．1±107．5）μg/L,LN（163．8±81．9）μg/L;12个月肝功能指标：TBiL（56．1±33．4）μmol／L,ALT（131±74）U／L,AST（197±71）U／L;肝纤维化指标：HA（237．3±106．9）μg/L,PCⅢ（297．5±99．1）μg/L,LN（179．7±98．6）μg／L]和B组[6个月肝功能指标：TBiL（56．7±29．8）μmol／L,ALT（134±57）U／L,AST（104±39）U／L;肝纤维化指标：HA（242．3±96．9）μg/L,PCⅢ（207．5±98．1）μg／L,LN（157．7±77．5）μg／L;12个月肝功能指标：TBiL（37．3±18．4）μmol／L,ALT（63±26）U／L,AST（87±27）U／L;肝纤维化指标：HA（171．6±73．1）μg/L,PCⅢ（203．1±93．2）μg/L,LN（127．7±72．0）μg/L],差异均有统计学意义（P均〈0．01）。C组治疗后HCV RNA转阴率12个月78．3％（18／23）好于A组4．8％（1／21）和B组60．9％（14／23）,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论失代偿期丙型肝炎肝硬化患者抗病毒治疗,能抑制丙肝病毒复制,同时应用胸腺肽α1调节免疫治疗可有效的改善患者肝功能及肝纤维化。     

蛋白酶体抑制剂对多巴胺能神经元的可能保护作用

目的：分析蛋白酶体抑制剂lactacystin（乳胞素）与多巴胺能神经元变性死亡的关系，为帕金森病的治疗探索新的思路。方法：实验于2005-03／11在国家人类基因组北方研究中心完成。实验细胞人神经母细胞瘤细胞系SH—SY5Y由北京神经科学研究所提供。用50μmol／L6-羟基多巴胺处理的多巴胺能神经细胞系SH—SY5Y作为帕金森病的细胞模型，于对数生长期时接种到培养皿、6孔板、96孔板中，24h后分不同组给药处理：对照组，50μmol／L6-羟基多巴胺组；50μmol／L6-羟基多巴胺加0．1μmol／L lactacystin组、50μmol／L6-羟基多巴胺加0．25μmol／L lactacystin组、50μmol／L6-羟基多巴胺加0．5μmol／L lactacystin组。镜下细胞计数，计算细胞存活率=活细胞数／对照组活细胞数&;#215;100％。磺酰罗丹明B法测定细胞括力，在酶联免疫检测仪测定吸光度值，检测波长为540nm。吸光度值=实验组细胞孔吸光度值-空白孔细胞吸光度值。取8复孔读数均值。细胞活性=实验孔吸光度值／平行对照孔吸光度值&;#215;100％结果：①50μmol／L6-羟基多巴胺组对细胞有明显毒性，细胞存活率与对照组相比只有（51,31&;#177;3．52）％，加用0．1，0．25，0．5μmol／L lactacystin后，细胞存活率分别提高到（72.16&;#177;97）％，（82.36&;#177;3．78）％，（91.44&;#177;3．06）％，各组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。而单用0．5μmol／L的lactacystln对细胞存活率无明显影响。②50μmol／L6-羟基多巴胺组对细胞有明显毒性可表现为细胞数量的减少，6-羟基多巴胺组细胞存活率只是对照组的（47．33&;#177;3．25）％，加用0．1，0．25，0．5μmol／L的lactacystin后，细胞存活率分别提高到（69．67&;#177;2．13）％，（80．38&;#177;1．12）％，（90．59&;#177;2．01）％，各组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。而单用0.5μmol／L的lactacystin对细胞存活率无明显影响。③正常培养的神经元细胞密度大，轮廓清晰，突起明显，胞体折光性好,6-羟基多巴胺处理的神经元，多数细胞死亡，残存细胞突起缩短或消失，胞体皱缩，轮廓不清，胞体折光性差，6-羟基多巴胺加lactacystin处理的细胞细胞密度和形态介于前二者之间。结论：蛋白酶体抑制剂对多巴胺能神经元有保护作用，可能是通过阻断细胞凋亡，但确切机制有待于进一步的研究     

他汀类药物对高磷介导血管平滑肌细胞成骨细胞转分化和钙化的影响

目的探讨他汀类药物对高磷介导血管平滑肌细胞成骨细胞转分化和钙化的影响。方法将体外培养的人主动脉平滑肌细胞（HASMC）分成对照组（常规Medium 231培养基）、正常磷浓度组（Pi1.5mmol/L）和高磷组（Pi2.5mmmol/L）。Real-time PCR测定干预72h后细胞的核结合因子α（cbf α）和骨桥蛋白（OPN）水平,测定干预14d后上清液的钙浓度。HASMC在浓度为0.1umol/L的阿托伐他汀和2.5mmol/L的Pi培养基中共同孵育14d后,检测HASMC的钙含量。结果培养72h后,cbf-α在Pi 2.5mmol/L组的mRNA表达明显高于对照组[（50.02±0.38）vs（1.02±0.35）,P〈0.001],而Pi 1.5mmol/L组与对照组无明显差别[（1.07±0.15）vs（1.02±0.35）,P〉0.05]。Pi 2.5mmol/L组的OPN表达亦明显高于对照组[（14.62±0.35）vs（1.05±0.16）],而Pi 1.5mmol/L组与对照组无明显差别[（0.99±0.10）vs（1.05±0.16）]。高磷组钙含量明显高于对照组[（115±2.43）vs（4.08±0.32）,P〈0.001],而Pi 1.5mmol/L组与对照组相比无明显变化[（5.01±0.21）vs（4.08±0.32）,P〉0.05]。阿托伐他汀能使高磷诱导HASMC的钙沉积明显减少[（115±2.43）vs（58±2.65）ug/mg蛋白,P〈0.01]。结论高磷作用能明显增加HASMC的cbfα-1的表达,明显增加HASMC成骨细胞标志性蛋白OPN的表达,使HASMC向成骨细胞转分化,进而促进HASMC钙化;阿托伐他汀能抑制高磷诱导的HASMC的钙化作用。     

维生素K2干预肝癌的实验研究

目的：研究维生素K2对人肝癌细胞的凋亡诱导作用,并探讨其作用机制;研究维生素K2的干预对荷瘤裸鼠肝癌肺转移及生存期的影响。方法：用流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT—PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、bcl-2及bax的mRNA表达。建立人肝癌裸鼠原位移植模型,给予荷瘤裸鼠口服维生素K2（30mg·kg^-1·d^-1）,另设对照组,观察两组裸鼠肝癌肺转移和生存期变化。结果：100μmol·L^-1的维生素K2与细胞共育6h后细胞的凋亡率为（28．5±1．6）％,与时照组（2．8±4．8）％比较。有显著差异（P〈0．05）。caspase-3mRNA的表达随着维生素K2浓度及作用时间的增长而增强;当100μmol的维生素K2分别作用细胞24h和72h后,caspase-3mRNA的表达分别为（0．495±0．250）和（0．603±0．098）,与对照组比较（0．270±0．132）均有显著差异（P〈0．05）。人肝癌细胞中未检测到bcl-2mRNA表达。baxmRNA的表达于用药前后无变化。维生素K2干预荷瘤裸鼠后,其生存期（83．6±5．18d）较对照组（58．2±9．47d）明显延长（P〈0．05）;其肺转移灶（4．6±1．95个）较对照组（12±6．6个）明显减少（P〈0．05）。结论：维生素K2对人肝癌细胞有凋亡诱导作用,凋亡相关基因caspase-3参与了凋亡的调控;维生素K2能减少裸鼠肝癌肺转移率,能延长荷瘤裸鼠的生存期。     

罗格列酮对人腹膜间皮细胞和脐静脉内皮细胞水孔蛋白-1的影响

目的探讨体外条件下核受体Peroxisome proliferator-activated receptor gamma（PPAR-gamma）激动剂罗格列酮（RosiglitazoneRGZ）对人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells HPMCs）、人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells HUVECs）水孔蛋白-1（aquaporin 1 AQP1）增殖以及基因水平的影响。方法以HPMCs和HUVECs为研究对象,将实验分成四组：对照组、RGZ组（10uMRGZ）、GW9662组（peroxisome proliferator-activated receptor gamma antagonist 20uMGW9662）以及GW9662＋R组（20uMGW9662提前作用1H后加入10uMRGZ）。应用比色法（CCK-8）观察RGZ等对HPMCs和HUVECs增殖的影响。应用Realtime-PCR方法检测罗格列酮等对水孔蛋白-1基因水平表达的影响。结果①GW9662＋R组与对照组相比,可以明显抑制HPMCs增殖（P〈0.01）,其他组对HPMCs增殖没有明显影响（P〉0.05）。而对HUVECs,RGZ组、GW9662组以及GW9662＋R组都可以促进其增殖（P〈0.01）;②罗格列酮上调这两种细胞AQP1基因水平的表达。结论在体外,罗格列酮可影响HPMCs和HUVECs水孔蛋白质1基因水平的表达。其作用机制可能是通过激活PPAR-gamma从而影响上述两种细胞的AQP1的表达。     

2-甲氧基雌二醇对慢性髓系白血病K562细胞Caspase-3及Survivin表达的影响

本研究探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对慢性髓系白血病（CML）K562细胞caspase-3和survivin表达的影响。实验分3组：对照组,培养基中不含2-ME;实验组,分别用1、2、4、8及16μmol／L的2-ME处理K562细胞;阴性对照组,培养液中以不合RNase的灭菌蒸馏水代替K562细胞。应用TUNEL、流式细胞术（FCM）、半定量RT—PCR分别检测K562细胞凋亡率、caspase-3及survivin蛋白及其基因表达水平。结果表明：2-ME在一定的浓度范围内呈剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）,且TUNEL和FCM方法检测的K562细胞凋亡率呈正相关（γ=0．845,P=0．034）。随着2-ME浓度增加,caspase-3蛋白表达量逐渐增加,而survivin蛋白表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;且caspase-3与survivin蛋白表达量之间呈负相关（γ=-0．956,P=0．001）。随着2-ME浓度增加,caspase-3基因表达量逐渐增加,而survivin基因表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（p均〈0．01）,且caspase-3与survivin基因表达量之间呈负相关（γ=0．966,P=0．001）。结论：2-ME能够以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,显示了其对CML有潜在的治疗价值。     

阿托伐他汀钙对人脐静脉内皮细胞adropin表达的影响

目的：探讨阿托伐他汀钙对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）adropin表达的影响。方法不同浓度的阿托伐他汀钙（0.002、0.02、0.2、2和20μmol/L）与HUVEC共培养6、12和24 h。采用MTT法检测HUVEC的增殖情况。半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HUVEC adropin mRNA的表达。ELISA法测定细胞上清液中adropin的浓度。结果阿托伐他汀钙在0.002-20μmol/L范围均能促进HUVEC的增殖，20μmol/L（与对照组比较P＜0.05）和24 h（与6 h时比较P＜0.05）时作用最强。阿托伐他汀钙呈浓度依赖性和时间依赖性增加了adropin mRNA的表达和培养上清液中adropin蛋白的浓度，在20μmol/L（与对照组比较P＜0.01）和24 h（与6 h时比较P＜0.01）作用最强。HUVEC上清液中adropin蛋白浓度与反映细胞增殖的OD值呈明显正相关（12 h，P=0.001；24 h，P＜0.001）。结论阿托伐他汀钙在一定范围内能够促进HUVEC adropin相关基因及蛋白的表达，且呈剂量和时间依赖性。     

骨髓间充质干细胞来源成骨细胞培养体系中加入α-玉米赤霉醇干预后的骨保护素表达

背景：研究显示α-玉米赤霉醇对绝经后骨质疏松症具有明显的防治作用。目的：观察α-玉米赤霉醇对体外大鼠成骨细胞骨保护素分泌及其mRNA表达的影响。方法：将体外培养的成骨细胞中分别加入雌激素和α-玉米赤霉醇（10-5^10-10mol/L）进行干预。结果与结论：ELISA法和RT-PCR检测发现,不同浓度的α-玉米赤霉醇（10-5^10-10mol/L）作用于成骨细胞后,骨保护素的分泌量及细胞骨保护素mRNA表达较对照组均增加（P〈0.05）。结果证实,在骨髓基质细胞来源的成骨细胞中加入α-玉米赤霉醇可促进成骨细胞骨保护素的分泌及其mRNA的表达。     

马钱子碱对多发性骨髓瘤中成骨细胞及破骨细胞代谢的影响

本研究旨在探讨体外马钱子碱对多发性骨髓瘤(MM)中成骨细胞早期分化和破骨细胞代谢途径的影响,同时比较马钱子碱与硼替佐米在体外对多发性骨髓瘤的影响。用MTT法检测硼替佐米与马钱子碱对多发性骨髓瘤细胞株U266的半数抑制浓度(IC50);将多发性骨髓瘤细胞株U266的上清液加入到成骨细胞MC3T3-E1诱导分化体系中培养后,用RT-PCR方法测定碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OC)、骨保护蛋白(OPG)及骨保护蛋白配体(RANKL)的mRNA水平。结果表明,硼替佐米作用于多发性骨髓瘤细胞株U266 48小时后半数抑制浓度(IC50)为22.4 nmol/L,马钱子碱为0.16 mg/ml;经马钱子碱及多发性骨髓瘤细胞上清液共同干预组的成骨细胞中ALP、OC及OPG的mRNA水平高于只经多发性骨髓瘤细胞上清液干预组的成骨细胞的表达水平(p<0.05),而RANKL的mRNA水平则降低(p<0.05),且它们增高或降低的程度大于硼替佐米作用组(p<0.05)。结论:马钱子碱对多发性骨髓瘤中骨代谢机制的影响可能通过成骨细胞对破骨细胞的调节而发挥作用。实验证实,马钱子碱对多发性骨髓瘤的治疗效果优于硼替佐米。     

磷酸肌酸预处理对体外循环未成熟心肌细胞凋亡的影响

目的探讨外源性磷酸肌酸对体外循环未成熟心肌细胞凋亡的影响。方法 60例法洛四联征或室间隔缺损患儿随机分为观察组与对照组各30例,对照组应用高钾冷晶体心脏停搏液（St.Thomas’s停搏液）,观察组St.Thomas’s停搏液中加入磷酸肌酸。比较2组术前、术后24h心肌酶谱指标、能量物质及心肌细胞凋亡率。结果观察组术后24h肌酸激酶（（452.24±123.65）u/L）、肌酸激酶同功酶-MB（（21.78±11.10）u/L）、乳酸脱氢酶（（458.34±123.45）u/L）、肌钙蛋白T（（1.81±1.02）μg/L）及心肌细胞凋亡率（（6.58±1.21）%）均明显低于对照组（（568.57±135.36）u/L、（38.42±5.36）u/L）、（647.12±162.33）u/L、（2.98±1.12）μg/L及（14.21±1.63）%）（P〈0.05）;术后三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷、磷酸激酶及各物质能量恢复率明显高于对照组（P〈0.05）。结论外源性磷酸肌酸可有效维持缺血期间能量供应,提高心肌细胞抗氧化能力,减少心肌细胞凋亡率,对婴幼儿未成熟心肌有保护作用。     

15d-PGJ2对骨髓间充质干细胞培养上清中细胞因子的影响

PPARy配体15d-PGJ2（15-deoxy-△12,14prostaglandinJ2）对细胞有抑制增殖、促进分化和凋亡的作用,但是它对骨髓间充质干细胞（BM-MSC）培养上清中细胞因子的影响还未见报道。本研究探讨15d-PGJ,对BM-MSC培养上清中细胞因子的影响。首先对正常人骨髓进行分离培养获得可传代的贴壁生长的成纤维细胞样细胞,然后应用流式细胞术检测细胞的表型,应用条件培养液诱导细胞向成脂和成骨分化以鉴定所获得细胞为BM-MSC。在BM-MSC培养体系中加入10、20、40和60μmol／L的15d-PGJ,并培养24h,用实时定量PCR测定PPARγ的RNA水平,共聚焦免疫荧光技术检测PPARγ的表达水平。结果发现,当15d-PGJ：的浓度达到20μmoL／L时细胞出现了凋亡并大量从培养瓶表面脱落;而10μmol／L的15d-PGJ：刺激细胞24h后PPARγ的mRNA表达水平增高,与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）。然后用含有10μmol／L15d-PGJ。和不含15d-PGJ,体系分别培养BM-MSC24h并用蛋白芯片检测培养上清,发现有部分因子表达水平发生了变化。结论：TIMP-2在15d-PGJ,刺激后下调,且信号值及变化水平有意义。     

高糖介导入牙周膜细胞凋亡中bcl-2、bax的作用及机制（英文）

背景：高糖环境下人牙周膜细胞会发生凋亡,其中bcl-2,bax是否启动？如何发挥作用？此方面尚未见有文献报道。目的：应用不同浓度葡萄糖影响人牙周膜细胞,观察细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的变化。方法：原代培养并鉴定人牙周膜细胞,取5-8代细胞用于实验。采用5.5 mmol/L葡萄糖（生理对照组）和25 mmol/L葡萄糖（高糖组）作用细胞24 h和48 h;以Hoechst 33258免疫荧光染色观察人牙周膜细胞凋亡;以Real-time PCR检测bcl-2、bax表达。结果与结论：25 mmol/L葡萄糖促进人牙周膜细胞凋亡,bcl-2、bax表达显著高于对照组（P〈0.05）;bcl-2/bax比值显著低于对照组（P〈0.05）。结果说明高糖可增加人牙周膜细胞凋亡,Bcl-2家族发挥了重要作用。