白藜芦醇对星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨白藜芦醇( RES)对过氧化氢诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法星形胶质细胞传代培养,随机分为阴性对照组(以正常培养液培养),模型对照组(100μmol·L-1的过氧化氢作用12 h),RES小剂量组(20μmol·L-1 RES孵育24 h后,加入过氧化氢作用12 h)和RES大剂量组(40μmol·L-1 RES孵育24 h后,加入过氧化氢作用12 h),采用MTT比色法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hochest33258染色观察凋亡细胞形态,比色法检测凋亡相关因子caspses-3及caspase-9的表达。结果 MTT结果显示5,10,20,40μmol·L-1 RES孵育24 h后细胞活性分别为(100.46±3.17)％,(101.33±3.14)％,(101.33±1.30)％,(99.67±2.62)％,与阴性对照组(98.33±2.13)％比较,差异无统计学意义(P>0.05)。表明RES对星形胶质细胞活性无影响。用20及40μmol·L-1 RES处理后,星形胶质细胞在过氧化氢作用12 h后引起损伤,其活性分别提高到(54.67±4.11)％和(70.33±2.61)％,与模型对照组比较,差异有统计学意义(t=3.59,7.13,P<0.01)。 RES可以抑制过氧化氢诱导的细胞活性的下降,流式细胞计数结果显示用20,40μmol·L-1RES处理后,星形胶质细胞凋亡率分别下降到(35.51±3.56)％和(14.12±3.19)％,与模型对照组(46.31±4.16)％比较,差异有统计学意义(t=4.26,6.33 P<0.01)。 Hochest33258染色结果显示RES可以抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡。此外,RES还可以减少过氧化氢所致星形胶质细胞内caspses-3及caspase-9的表达,并且伴随RES作用时间的延长其表达量呈下降趋势。结论 RES通过抑制caspses-3及caspase-9的表达有效抑制了过氧化氢对星形胶质细胞的损伤,从而为其用于治疗中枢神经疾病提供实验依据。     

羟乙基葛根素对过氧化氢致牛脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究牛脑微血管内皮细胞(BCMEC)过氧化损伤机制并探讨羟乙基葛根素对牛脑微血管内皮细胞损伤的保护作用。方法用MTT法和LDH活性检测测定BCMEC的损伤；倒置相差显微镜下一般形态学观察、透射电子显微镜超微结构观察及流式细胞术测定BCMEC凋亡变化。结果H₂O₂ (200 μmol·L^-1)损伤BCMEC后，细胞存活率下降，LDH释放增加，羟乙基葛根素和edaravone可减轻此损伤。H₂O₂ (100 μmol·L^-1)可诱导BCMEC凋亡，羟乙基葛根素 和edaravone对此有保护作用。结论羟乙基葛根素和edaravone对H₂O₂导致的BCMEC坏死和凋亡有保护作用，该作用与其抗氧化作用有关。     

他克莫司对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究他克莫司(FK506)对缺血缺氧损伤星形胶质细胞(Ast)凋亡的影响及其可能作用机制.方法 将Ast分为缺血缺氧(A组)、缺血缺氧+0.01μM FK506(B1组)、缺血缺氧+0.1 μM FK506(B2组)、缺血缺氧+1μM FK506(B3组)及正常对照(C组)五组.细胞计数试剂盒8(CCK-8)和Hoechst 33342分别检测Ast活力和凋亡;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与C组相比,A组Ast存活率下降(P<0.01),凋亡率及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达均增加(P<0.01);而与A组相比,B3组Ast存活率提高(P<0.05),凋亡率及Caspase-3、Bax蛋白表达下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01).结论 FK506通过增加Bcl-2表达和降低Bax、Caspase-3表达水平,从而抑制缺血缺氧损伤Ast凋亡.     

7-羟乙基白杨素对低压低氧致脑组织损伤的保护作用

目的 研究7-羟乙基白杨素（7-HEC）对低压低氧诱导大鼠脑组织损伤的保护作用。方法 将52只健康♂ Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、乙酰唑胺组、7-HEC组,每组13只。连续灌胃给药5 d,末次给药后,除正常组,将其余3组置于低压低氧动物实验舱,升至8 000 m海拔缺氧处理24 h。HE染色观察脑组织病理改变,酶标法检测脑组织中过氧化氢（H₂O₂）和丙二醛（MDA）水平,以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和ATP酶的活力;Western blotting检测蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白抗体（Bax）及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的表达。结果 与正常组相比,低压低氧导致大鼠脑组织出现明显损伤,H₂O₂和MDA水平显著升高,抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px以及Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase的活力显著降低。7-HEC预处理能够逆转这些变化。此外,低压低氧能够显著升高脑组织中促凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,而7-HEC能够下调Bax和cleaved caspase-3表达,上调Bcl-2的表达。结论 7-HEC对低压低氧致脑组织损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其缓解氧化应激,抑制细胞凋亡,改善能量代谢有关。     

体外缺氧／复氧对星形胶质细胞AQP4表达的影响及葛根素干预的实验研究

目的 观察缺氧,复氧条件下星形胶质细胞形态和AQP4 mRNA的表达变化以及葛根素对其表达变化的影响,探讨脑缺血再灌注损伤与AQP4的关系以及葛根索的干预作用.方法 原代培养星形胶质细胞,用5%CO2+95%N2混合气体造成缺氧,以LDH漏出率及MTT降解率作为细胞受损指标,应用RT-PCR技术检验星形胶质细胞缺氧/复氧各个时间点AQP4 mRNA的表达变化及葛根素的干预效果.结果 体外培养的星形胶质细胞在缺氧环境下损伤不明显,随着复氧时间的延长细胞损害加重.AQP4 mRNA在缺氧时表达与正常对照组无明显差异,复氧后表达升高并随时间延长呈增高趋势(P＜0.05).葛根素干预组AQP4 mRNA表达丰度与缺氧/复氧组无明显差异(P＞0.05).结论 星形胶质细胞AQP4 mRNA表达变化与细胞损伤有明显的相关性,葛根素对星形胶质细胞损伤的保护作用不是通过改变AQP4的表达来实现的.     

新型番荔枝酰胺衍生物FLZ对去血清培养损伤星形胶质细胞的保护作用

目的评价番荔枝酰胺衍生物FLZ对去血清培养损伤星形胶质细胞的作用,并探讨其可能的作用机制。方法在去血清培养的星形胶质细胞模型上,以3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测细胞存活率,Hochest 33342染色观察细胞核形态变化,荧光比色法检测细胞内活性氧簇（ROS）生成。酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测细胞培养液中S100B蛋白含量。生化法检测超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力及丙二醛（MDA）与谷胱甘肽（GSH）含量。结果去血清培养损伤星形胶质细胞使其存活率下降,细胞内ROS生成增多,S100B分泌增加,细胞内SOD活力下降,GSH-Px活力升高,MDA生成增多,GSH含量减少。FLZ能提高星形胶质细胞在去血清培养状态下的存活率,减少去血清培养引起的S100B过度分泌,减少细胞内ROS和MDA过度生成,减少GSH含量,抑制SOD活力下降,降低GSH-Px活力过度升高,从而降低去血清培养对星形胶质细胞引起的氧化应激损伤。结论 FLZ对星形胶质细胞去血清培养损伤有明显的保护作用,这种保护作用可能与降低去血清培养损伤引起的S100B分泌增加、减少细胞内ROS的生成及增强细胞自身抗氧化系统相关。     

钩藤碱对缺血再灌注诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的:以原代培养的大鼠大脑星形胶质细胞进行缺血再灌注损伤处理,观察钩藤碱(Rsy)对星形胶质细胞损伤的保护作用.方法:1～3 d龄SD大鼠乳鼠大脑星形胶质细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液进行缺血缺氧处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst 33258荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞坏死、凋亡率,用LDH试剂盒测定LDH漏出率.结果:与模型组比较,钩藤碱0.02、0.2 mg·mL-1均能显著提高细胞存活率,显著降低细胞坏死率和细胞凋亡率,也能显著降低细胞LDH漏出率.结论:钩藤碱对缺血再灌注损伤后星形胶质细胞的坏死凋亡具有显著抑制作用,提示钩藤碱可能通过抑制星形胶质细胞凋亡和坏死而对脑缺血损伤产生保护作用.     

羟乙基淀粉对失血性休克大鼠脑的保护作用

目的:研究羟乙基淀粉200/0.5注射液(Hydroxyethyl Starch,HES)对失血性休克大鼠脑的保护作用。方法:25只SD大鼠随机分为对照组(A组)、休克组(B组)、全部自体血复苏组(C组)、2倍出血量的HES(超常量,>33 mg.kg-1)复苏组(D组)、1倍出血量的HES(常规量,≤33 mg.kg-1)加1/2出血量的自体血复苏组(E组),每组5只。采用大鼠股动脉放血休克模型,休克1 h后分别输入上述液体,复苏30 min后取脑。脑组织切片行HE染色观察脑水肿和炎性细胞浸润的程度;用免疫组化染色和Western-bloting法检测脑组织中NF-κB的核移位及其表达活性。结果:在休克1 h时脑组织NF-κB的表达即有增加;C组和D组NF-κB的表达增加明显,脑水肿和炎性细胞浸润较严重;E组NF-κB的表达增加下调,脑水肿和炎性细胞浸润亦较轻。各组NF-κB的核移位与脑组织中NF-κB的表达活性变化基本一致。结论:在急性失血性休克(出血量为估计总血量的35%)时,大鼠脑组织中NF-κB的核移位和表达增加;常规量HES复苏使NF-κB表达增加下调、核移位减少、脑水肿和炎性细胞浸润亦减轻,对脑可能具有保护作用。     

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol·L-1孵育4 h,制备OGD模型。FH 5和10μmol·L-1在OGD前2 h加入。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(Ed U)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)%,下降了4倍(P<0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7)U·L-1(P<0.01)。加入FH 5和10μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)%和(43±5)%,LDH释放分别下降至290±18和(268±20)U·L-1(P<0.01),细胞Ed U阳性率由OGD模型组的(47±6)%,分别下降到(35±6)%和(29±5)%(P<0.01)。Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P<0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义。结论FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。     

钩藤碱诱导Nrf2核转位对大鼠星形胶质细胞缺血再灌注损伤的保护作用及调控机制

目的观察钩藤碱对星形胶质细胞缺血再灌注损伤过程中胞质和胞核的NF-E2相关因子2(Nrf2)表达变化,分析其核转位情况与细胞氧化损伤水平的相关性。并观察磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在钩藤碱诱导Nrf2核转位中的作用。方法大鼠原代星形胶质细胞分为对照组、模型组、钩藤碱组和PI3K抑制剂组。对照组用DMEM正常培养;钩藤碱组用3μg·mL-1钩藤碱预孵育6h;PI3K抑制剂组用3μg·mL-1钩藤碱和Wortm annin(PI3K抑制剂)共同预处理6h,更换无糖无血清培养基,放入缺氧培养箱1h后再复氧并更换原培养条件1h,诱导原代培养的大鼠星形胶质细胞损伤。分光光度法检测细胞MDA、GSH及培养液LDH水平,。流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS),用荧光强度(FI)来表示ROS水平。Western blot检测胞质和胞核内Nrf2表达水平。结果钩藤碱明显诱导Nrf2核转位,其诱导作用可被Wortm annin部分阻断。模型组ROS、MDA、LDH水平较对照组显著升高(P<0.01),钩藤碱组ROS、MDA、LDH水平较模型组显著降低(P<0.01),抑制剂组ROS、MDA、LDH水平显著高于钩藤碱组,低于模型组(P<0.01)。结论钩藤碱可诱导Nrf2核转位,减轻缺血再灌注引起的氧化损伤,PI3K信号通路是钩藤碱诱导Nrf2核转位的重要信号通路,抑制该通路可减弱钩藤碱对星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用。     

卡维地洛对过氧化氢致血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的观察卡维地洛(carved ilol)对过氧化氢(hydrogenperoxide,H2O2)致内皮细胞损伤及表面粘附分子表达的影响。方法采用H2O2作为外源性自由基生成系统,模拟内皮细胞的脂质过氧化损伤,建立离体培养的ECV-304细胞氧化应激损伤模型,观察卡维地洛对H2O2致内皮细胞损伤及表面粘附分子表达的影响。结果卡维地洛各浓度组均明显改善H2O2(1.0×10-6mol.L-1)所致ECV-304细胞形态学损伤,提高细胞生存率,降低LDH释放,并可使细胞内及细胞培养液中MDA含量降低,SOD活性升高,亦可下调ICAM-1蛋白及细胞内ICAM-1mRNA表达水平,上述作用随药物浓度增加呈增强趋势。结论卡维地洛可保护内皮细胞结构和功能的完整性,提高内皮细胞抗氧化能力,并从转录水平抑制脂质过氧化诱导的粘附分子表达增加,降低单核-内皮细胞粘附,有利于减少动脉粥样硬化的始动环节和早期事件的发生。     

Protective effects of raw and cooked blackcurrant extract on DNA damage induced by hydrogen peroxide in human lymphoblastoid cells

Context: Blackcurrant (Ribes nigrum L.) is a classical fruit that has long been used to make juice, liqueur and sometimes medicines in Europe. The beneficial effects of blackcurrant, which are inhibition of lipopolysaccharide-stimulated inflammatory, anticarcinogenesis and other health effects, have been reported.

Objective: Previously, we reported the antimutagenic activities of blackcurrant using a yeast gene mutation assay. In this study, we investigated whether this antimutagenicity of blackcurrant was confirmed in human cells.

Materials and methods: We prepared four types of aqueous blackcurrant extracts (BCE) from mature and premature with or without heat treatment by microwave. Antioxidant activities of BCE were measured by the DPPH radical scavenger assay. In the DPPH radical scavenger assay, the maximum concentration of BCE was 1.6?mg/reaction. We investigated the antigenotoxic activities of BCE by the comet assay and micronucleus test using the human lymphoblastoid cell line TK6. In the comet assay, TK6 was treated with 300?μM?H₂O₂ without or with BCE at concentrations of 0.5,?1.0,?2.0 and 3.0?mg/mL. In the micronucleus test, TK6 was treated with 1?mg/mL BCE without or with H₂O₂.

Results: All BCEs exhibited more than 90% of inhibition rates of DPPH radicals at the maximum concentration of BCE. DNA damage and micronuclei induced by H₂O₂ significantly decreased in the each BCE-treated condition.

Conclusion: The results suggest that BCE treatment can reduce the genomic instability induced by H₂O₂ in human cells. We consider that these antigenotoxic effects are related to polyphenols, l-ascorbic acid and other antioxidant compounds.     

羟乙葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及p53表达的影响

目的观察异黄酮类羟乙葛根素在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时的抗凋亡作用。方法利用大鼠大脑中动脉栓线阻断法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,利用病理学检查、免疫组织化学方法观察羟乙葛根素对缺血再灌注大鼠的脑组织细胞凋亡及p5 3表达的影响。结果羟乙葛根素能改善局灶性脑缺血再灌注损伤的病理学改变 ,减轻细胞凋亡的程度 ,抑制p5 3的表达。结论羟乙葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用 ,其作用机制可能与羟乙葛根素抗细胞凋亡 ,抑制p5 3表达有关。     

依达拉奉对过氧化氢致血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨依达拉奉对过氧化氢(H2O2)致内皮细胞氧化损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用H2O2作为外源性自由基生成系统,模拟血管内皮细胞氧化应激损伤模型,观察不同剂量依达拉奉对H2O2所致内皮细胞的影响。通过检测各组丙二醛(MDA)的含量反应细胞的损伤程度,检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性及总抗氧化能力(T-AOC)反应细胞的抗氧化能力。结果依达拉奉各浓度组均明显降低MDA的含量,提高SOD的活性及总T-AOC,上述作用随药物浓度增加呈增强趋势。结论依达拉奉能降低内皮细胞的氧化损伤程度,提高内皮细胞抗氧化能力。     

促红细胞生成素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对过氧化氢氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的保护作用及其机制。方法采用600μmol.L-1的过氧化氢造成体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤模型。实验设计分为5组:对照组,过氧化氢模型组,过氧化氢+10 kIU.L-1EPO组,过氧化氢+20 kIU.L-1EPO组和过氧化氢+40 kIU.L-1EPO组。MTT法检测细胞活性,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞法测定细胞的凋亡率。结果过氧化氢模型组RPE细胞的活性明显降低,不同浓度的EPO药物干预组的细胞活性较模型组明显升高,并随着EPO浓度的升高而升高。过氧化氢模型组RPE细胞SOD活性降低,MDA的含量增加;而EPO药物干预组SOD活性较模型组明显升高,MDA含量减少,差异有显著性。过氧化氢模型组RPE细胞的凋亡率升高,而不同浓度的EPO药物干预组降低RPE的凋亡率,凋亡率随着EPO浓度的升高而降低。结论促红细胞生成素对过氧化氢诱导的人RPE细胞的氧化损伤有保护作用,其机制可能与抑制氧化反应、提高抗氧化酶活性、减少细胞凋亡有关。     

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。     

Protective effects of prostaglandin E1 on human umbilical vein endothelial cell injury induced by hydrogen peroxide

Aim:

To investigate the protective effects of prostaglandin E₁ (PGE₁) against H₂O₂-induced oxidative damage on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs).

Methods:

HUVECs were pretreated with PGE₁ (0.25, 0.50, and 1.00 μmol/L) for 24 h and exposed to H₂O₂ (200 μmol/L) for 12 h, and cell viability was measured by the MTT assay. LDH, NO, SOD, GSH-Px, MDA, ROS, and apoptotic percentage were determined. eNOS expression was measured by Western blotting and real-time PCR.

Results:

PGE₁ (0.25−1.00 μmol/L) was able to markedly restore the viability of HUVECs under oxidative stress, and scavenged intracellular reactive oxygen species induced by H₂O₂. PGE₁ also suppressed the production of lipid peroxides, such as MDA, restored the activities of endogenous antioxidants including SOD and GSH-Px, and inhibited cell apoptosis. In addition, PGE₁ significantly increased NO content, eNOS protein, and mRNA expression.

Conclusion:

PGE₁ effectively protected endothelial cells against oxidative stress induced by H₂O₂, an activity that might depend on the up-regulation of NO expression.     

羟乙葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注氧化损伤的保护作用

目的探讨羟乙葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注氧化损伤的保护作用。方法制备大脑中动脉阻塞再灌注损伤模型,测定脑缺血再灌注损伤大鼠神经病学评分、脑组织超氧阴离子和羟自由基水平和脑梗死面积。结果羟乙葛根素能明显降低局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经病学评分、缩小脑梗死面积,降低脑组织超氧阴离子和羟自由基水平。结论羟乙葛根素的脑保护作用可能与清除体内超氧阴离子和羟自由基有关。