HCA587基因在肝细胞癌中的表达及其生物信息学分析

目的 :本研究检测肝细胞癌抗原 5 87( HCA5 87)基因 m RNA在肝细胞癌 ( HCC)中的表达情况 ,结合病人临床资料进行分析 ,探讨 HCA5 87基因与 HCC病人临床指标及转移与复发的关系 ,为 HCA5 87基因编码蛋白用于 HCC治疗提供依据。方法 :用反转录 -聚合酶链反应 ( RT-PCR)方法对 HCC病人的癌组织和相应癌旁组织及对照 (肝硬化和正常肝组织 )中 HCA5 87m RNA的表达进行了检测 ,为验证结果的可靠性 ,随机选取RT-PCR呈阳性的产物 4例进行 DNA序列测定 ,结合 AFP、抗 HCV、HBs Ag、肿瘤直径、分化程度等临床指标进行分析。并通过互联网对 HCA5 87进行生物信息学分析。结果 :46例 HCC病人中 ,HCA5 87的阳性表达率为3 2 .6% ( 1 5 /4 6) ,相应的癌旁组织中均为阴性 ;所测的 1 0例肝硬化和 1 0例正常肝组织均未检测到 HCA5 87的表达。 DNA测序结果表明 RT-PCR产物确为 HCA 5 87c DNA。 HCA5 87的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清甲胎球蛋白 ( AFP)水平、HBV和 HCV感染无显著相关性 ( P >0 .0 5 )。在部分 AFP正常 ( <2 5 ng/L)HCC病人中存在 HCA5 87基因的表达。HCA5 87与 MAGE C2、MAGE E1、CT1 0的分子有很大的同源性 ;它精确定位于染色体 Xq2 7.2上 ,HCA5 87是一种新的 MAGE家族中的 CT抗原。结论 :H     

PBMCs中HBV逆转录酶P基因的mRNA表达X基因的整合与肝细胞癌变的关系

目的在外周血单个核细胞(PBMCs)中研究乙型肝炎病毒(HBV)DNA多聚酶/逆转录酶P基因的mRNA表达、X基因的整合与肝细胞癌变的关系。方法设计HBV P基因引物P1、P2,及X基因引物X1、X2。分离HBsAg阳性40例原发性肝癌病人及36例慢性乙肝病人PBMCs,分别提取其基因组总DNA和总RNA,RNA逆转录合成cDNA;PCR检测HBV的X基因整合;RT-PCR方法检测HBV的DNA多聚酶/逆转录酶P基因在PBMCs中的mRNA表达。结果PBMCs中X基因片段的整合率在HCC组为79.5%(31/40),与CH组的整合率50%(18/36)无统计学差异(P>0.05)。P基因的mRNA表达率HCC组为10%(4/40),与CH组表达率33.3%(12/36)有统计学差异(P<0.05)。结论在HCC阶段HBV病毒复制相对静止,大量X基因整合最终导致HCC的发生。     

HBV感染综合标志物特征性改变对HCC的诊断价值

目的 探讨HBV感染综合乙肝标志物(CHBM)特征性改变在提高肝细胞癌(HCC)早期诊断灵敏度中的作用。方法 选择2016年1月—2022年5月在华北理工大学附属医院确诊的患者为研究对象,共992例,其中慢性乙型肝炎组236例,肝硬化组202例,HCC组265例,健康对照组289例,分别检测四组中甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、总胆汁酸(TBA)、乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、乙型肝炎e抗原(HBe Ag)、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)、HBV DNA的水平及阳性率,寻找慢性乙型肝炎转归为HCC时综合乙肝标志物水平及阳性率变化趋势,并将此变化趋势视为“综合乙肝标志物阳性”。将此综合标志物与传统指标联合检测,对数据进行统计分析。结果 在合并HBV感染的HCC组中,血清HBs Ag滴度≤1000IU/ml者占61.82%,HBV DNA≤10000copies/ml者占61.41%,HBe Ag阳性者占20.33%,抗-HBe阳性者占67.22%。“AFP+GGT+综合乙肝标志物”和“AFP+CEA...     

肝细胞癌临床病理学特征与凋亡相关基因bcl-x表达的关系

目的:研究凋亡相关基因bcl-x在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其与HCC临床病理学特征的关系。方法:使用免疫组织化学检测石蜡包埋的HCC标本中凋亡相关基因bcl-x的表达。结果:免疫组织化学检测40例HCC中bcl-x阳性19例;14例肝硬变bcl-x阳性11例;bcl-x在HCC中表达低于肝硬变(P<0.05);bcl-x表达在高中分化型HCC高于低分化型,在AFP≤400μg/L的患者高于AFP>400μg/L的患者,在临床分期Ⅰ～Ⅱ期HCC高于Ⅲ期,其间均有显著性差异(分别为P<0.005,P<0.01,P<0.05)。结论:凋亡相关基因bcl-x在HCC中的表达对肝癌细胞凋亡起调节作用,并与HCC分化程度、临床分期、AFP水平有关。     

肝癌组织内乙型肝炎病毒基因组前C区终止密码的发现

用聚合酶链反应(PCR)在3例乙型肝炎病毒(HBV)C基因阳性的原发性肝癌(HCC)组织中扩增和克隆了HBV C基因片段(部分前C区和全部C区),获得了重组质粒pHBC_1,pHBC_2,pHBC_3。将重组质粒中HBV C基因亚克隆至M_(13)DNA序列测定系统,用双脱氧法测定了HBV C基因片段的核苷酸序列。在2例HCC中,发现前C区第1898位核苷酸点突变,结果形成了终止密码。在3例HCC中,C区也发现有核苷酸点突变,其中部分可致编码氨基酸改变。     

bcl-x,bax基因表达与肝细胞癌临床病理特征的关系

目的　研究凋亡相关基因 bcl- x及 bax在肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达与 HCC临床病理学特征的关系及其意义 .方法　采用免疫组织化学方法 ,检测石蜡包埋的 HCC标本中凋亡相关基因 bcl- x及 bax的表达 .结果在 40例HCC中 ,bcl- x和 bax阳性者分别为 2 0例和 19例 ;14例肝硬变 bcl- x和 bax阳性者分别为 12例和 11例 .bcl- x和 bax在 HCC细胞中的表达均低于肝硬变 (均 P>0 .0 5 ) ;bcl- x和 bax在高中分化型 HCC细胞中的表达均高于低分化型 . AFP≤ 40 0μg· L- 1的患者二者的表达均高于 AFP<40 0μg· L- 1 …     

乙型肝炎病毒DNA与血清标志物的检测结果分析

目的分析乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)与血清标志物的关系。方法选取340份乙肝血清标本采用实时荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清标志物(HBVM),并根据HBVM测定分为A、B、C、D、E 5组,A组44例,HBs Ag、HBe Ag均(+);B组75例,HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab均(+);C组68例,HBs Ag、HBc Ab均(+);D组115例,HBs Ag、HBe Ab、HBc Ab均(+);E组38例,全阴或HBs Ab单项(+)。结果 A、B、C组检测HBV DNA阳性率显著高于D组,A、B组检测阳性率高于C组(P<0.05),A组稍高于B组,差异无统计学意义(P>0.05),E组未检测到HBV DNA阳性。HBV DNA阳性中,HBs Ag阳性率高于HBV DNA阴性标本中HBs Ag阳性率(P<0.05)。HBV DNA与HBs Ag、HBe Ag相关性明显,与抗HBs、抗HBc、抗HBe无相关性。结论 HBs Ag对HBV感染的灵敏度较高;采用FQ-PCR定量进行HBV DNA检测可作为血清学方法的补充,对乙肝诊断有重要价值。     

应用组织芯片技术研究肝癌与乙肝病毒感染的关系

目的　研究肝细胞性肝癌 (HCC)与乙肝病毒感染的关系。方法　制作包含 40例肝细胞性肝癌及相应的癌旁和非癌组织的组织芯片。以免疫组织化学方法 (SP法 )检测 40例肝癌组织及其相应的癌旁组织及非癌组织中的 HBs Ag和 HBc Ag表达情况。结果　 40例肝癌组织及其相应的癌旁组织和非癌组织中的 HBs Ag检出率分别为 7.5 %、40 %和 45 %;HBc Ag的检出率分别为 2 0 %、5 2 .5 %和 6 7.5 %;HCC肿瘤组织中的 HBs Ag和HBc Ag的表达率明显低于癌旁及非癌组织 (P<0 .0 1)。结论　 HCC的发生与 HBV感染有密切关系 ,随着 HCC的发展 ,HBV抗原的表达降低。组织芯片技术是可高效进行肿瘤分子病理研究的技术平台 ,能够在严格、均一的实验条件下 ,高通量、快速、平行地检测大批量组织样本中的一个或多个实验指标。     

针对HBs基因的shRNA表达载体的构建及鉴定

目的以PGenesil-1(Pg)为载体构建针对乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的shRNA表达载体PGenesil-1-HBs(Pgs)。方法设计、合成针对HBs区的三对DNA序列,分别插入PGenesil-1中,并对重组质粒进行限制性内切酶谱和DNA序列测定分析。结果3个不同的重组shRNA表达载体经限制性酶识别和DNA序列测定完全正确。结论成功构建了3个针对HBs基因的shRNA表达载体。     

X线修复交叉补体因子1多态性与肝细胞癌风险的关系

目的：研究广西地区人群DNA修复酶X线修复交叉补体因子1(XRCC1)codon 399 Gln多态性与肝细胞癌(HCC)易感性的关系。方法：采用外周血白细胞DNA进行PCR-RFLP检测分析140例HCC患者和536例对照人群XRCCl基因399位点多态性。结果：①XRCC1 codon 399 Arg／Arg为HCC保护基因型,XRCC1 codon 399(Gln／Gln Arg／Gln)为HCC风险基因型(校正OR=2．18,95％CI=1．27～3．74);②在AFB1暴露有中低度与高度两个层次,XRCC1 399 Gln多态性在AFB1中低度暴露群体中增加HCC危险性(校正OR-2．06,95％CI-1．01～4．20)。结论：XRCC1 399 Gln多态性与HCC风险相关,且在AFB1中低度暴露时更易感HCC。     

肝癌及其癌旁组织中细胞凋亡抑制蛋白survivin的表达

目的：分析细胞凋亡抑制蛋白survivin在原发性肝癌（HCC）及其癌旁组织中的表达,探讨其在肿瘤血管形成和抵抗肿瘤血管内皮细胞凋亡中的作用。方法：采集HCC癌组织、癌旁组织和正常肝组织标本,通过免疫组织化学方法分析survivin蛋白表达阳性率与HCC病理参数的关系,采用流式细胞术分析survivin蛋白在不同组织中的表达水平,用荧光定量PCR方法分析不同组织中survivin基因的表达水平。结果：survivin蛋白在肝癌组织中表达水平与门静脉癌栓的形成有关联（P<0.05）,与肿瘤大小、包膜、甲胎蛋白（AFP）水平及HCC病理分期均无关联（P＞0.05）;流式细胞术结果,肝癌组织中survivin蛋白表达水平高于癌旁组织和正常肝组织（P<0.05）,癌旁组织中survivin蛋白表达水平高于正常肝组织,但差异无统计学意义（P＞0.05）;荧光定量PCR检测,survivin基因只在肝癌组织中表达,在癌旁组织和正常肝组织中无表达,其表达水平组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：细胞凋亡抑制蛋白survivin在肝癌组织中表达水平较高,但在癌旁组织中检测不到其基因的表达,survivin蛋白可能是通过旁分泌作用从肝癌病变处进入癌旁组织细胞中发挥抑制细胞凋亡的功能。     

原发性肝癌组织中陷井受体3基因表达与扩增的临床意义

目的　观察原发性肝癌组织中陷井受体 3(DcR3)基因的表达和扩增 ,探讨该基因在肝癌组织中过度表达的原因 ,分析临床病理学因素在肝癌DcR3基因表达和扩增中的作用。方法　对4 8例病理学证实的原发性肝癌患者的组织 ,利用RT -PCR检测癌组织及癌旁组织DcR3基因mRNA表达 ,荧光定量PCR检测该基因的扩增倍数 ,统计分析肝癌组织中DcR3基因表达与扩增的相关性 ,比较不同临床病理学类型肝癌中该基因表达及扩增的差异。结果　 4 8例肝癌组织中DcR3基因mRNA阳性表达 2 9例 ,阳性率为 6 0 4 % ;癌旁组织无阳性表达。mRNA表达与肿瘤大小、临床分期及肿瘤的浸润和转移有关 (P <0 0 5 )。mRNA阳性表达组的基因扩增倍数为 1 5 3± 0 82 ,阴性组为 0 75± 0 33,其差异有显著意义 (P <0 0 1)。 4 8例患者的DcR3基因扩增倍数为 0 18～ 3 86 ,平均值为 1 2 2± 0 77,扩增倍数超过 2的患者共 7例 ,占 14 6 %。不同扩增倍数肝癌患者该基因mRNA的表达差异有显著意义 (P <0 0 1) ;不同临床病理学特征肝癌间DcR3基因的扩增倍数差异无显著意义 (P >0 0 5 )。序列分析发现其mRNA序列与源序列有 3个碱基改变。结论　 (1)原发性肝癌组织中存在DcR3基因的高表达 ,对应的癌旁组织中未见表达 ;(2 )原发性肝癌组织中存在DcR3基     

Sonic Hedgehog信号通路分子Shh和Smo在肝细胞肝癌中表达与意义

目的:探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路分子Shh和Smo在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其意义?方法:用RT-PCR方法检测10例HCC组织及相应癌旁组织和肝癌细胞系HepG2?Huh7中Shh?Smo mRNA的表达?采用免疫组化方法检测30例肝癌组织及10例正常肝组织中Shh?Smo蛋白的表达?结果:RT-PCR结果显示HCC组织中Shh?Smo mRNA的表达率显著高于癌旁组织(P < 0.05);Shh?Smo mRNA在Huh7中的表达强度高于HepG2,但两者间无显著性差异(P > 0.05)?免疫组化结果显示Shh?Smo蛋白在HCC组织中阳性率分别为63.3%(19/30)?76.7%(23/30);Smo蛋白的表达与肿瘤大小相关(P < 0.05)?Shh?Smo蛋白在正常肝组织中均无表达?结论:Shh和Smo在肝癌中高表达,表明SHH信号通路可能参与肝癌的发生,为肝癌防治提供新的依据?     

姑息性肝切除术后残癌转移潜能及其基因功能网络变化的实验观察

目的 观察姑息性肝切除对肝脏残癌转移潜能的影响及其转移相关基因功能网络的变化.方法 以高转移人肝癌细胞(MHCC97H)建立裸鼠原位移植瘤模型,14 d后将36只成模裸鼠随机分成3组:姑息性肝切除组(获取肝癌标本A、B)、对照组1(假手术组,获取肝癌标本C1)、对照组2(无干预组,获取肝癌标本C2).姑息术后14 d每组随机处死6只裸鼠,采用肿瘤转移相关芯片检测肝癌基因表达,使用综合型GEArray分析配套软件分析芯片数据.差异基因显著性分析、分组关联度分析及支持向量机用于筛选肿瘤转移相关标志基因;应用基于特征性致病基因的基因聚类和多维量表构建基因功能网络,比较网络密度、凝聚度以及枢纽基因的变化特点;Real-time PCR用于检测mRNA表达.姑息术后35 d处死剩余裸鼠,检测肺转移.SAS 8.2软件包用于统计分析.结果 组间存在显著性差异基因表达,姑息组基因网络密度(B,0.0670)较对照组(A,0.0145;C1,0.0210;C2,0.0146)上调;残癌基因网络凝聚度(B,0.1940)明显高于自身对照组(A,0.0098).编码转移消失蛋白B(MIM-B)的人源性转移抑制基因1(MTSS1)处于残癌基因功能网络核心位置,残癌MIM-B mRNA相对表达水平(B,0.283±0.023)较对照组上调(A,0.142±0.018;C1,0.177±0.054;C2,0.156±0.017,P＜0.05).术后35 d,姑息组肺转移结节数目(14.3±4.7)多于假手术组(8.7±3.6,P＜0.01).结论 姑息性肝切除增强残癌肺转移潜能,MIM-B蛋白可能是肝癌患者重要的干预靶点之一.     

人肝细胞癌组织p15及Rb基因的表达意义

目的 探讨ｐ１５，Ｒｂ基因的肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的表达情况、相互关系及其临床病理意义。方法 用免疫组织化学方法（ＳＡＢＣ法）检测ｐ１５，Ｒｂ基因在３０例ＨＣＣ标本中的表达。结果 ｐ１５基因阳性表达率为６３％，Ｒｂ基因阳性表达率为４３％。ｐ１５，Ｒｂ基因阳性表达率在肿瘤分级间比较分别为Ｐ〈０．０５，Ｐ〉０．０５。ｐ１５，Ｒｂ基因在ＨＣＣ中阳性表达率无差异（Ｐ〉０．０５）。结论 ｐ１５，Ｒｂ基因在ＨＣ     

p53表达与肝细胞癌临床病理学特征及AFP、HBV感染之间的关系研究

目的:探讨p53与肝细胞癌临床病理学特征和患者预后、AFP、HBV感染之间的关系.方法:应用免疫组化方法,检测70例肝细胞癌和20例肝良性肿瘤标本p53的表达;结合肝细胞癌临床分期、病理分级、门静脉癌栓、术后生存期、血清甲胎蛋白(AFP)、乙型肝炎病毒(HBV)感染等资料进行统计分析.结果:肝细胞癌的p53阳性率显著高于肝良性肿瘤(P＜0.01);p53阳性表达与肝细胞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肝硬化、临床分期均无显著性相关(P＞0.05);包膜不完整、并有门静脉癌栓、分化未成熟及血清AFP阳性的肝细胞癌组织的p53阳性率明显高于有完整包膜、无门静脉癌栓、分化较成熟及血清AFP阴性的组织(P＜0.05) ;HBsAg阳性的肝细胞癌p53阳性率显著高于HBsAg阴性者(P＜0.01);p53阳性的肝细胞癌患者术后2年存活率显著低于阴性者 (P＜0.01).结论:p53是评价肝细胞癌恶性程度及预后的一个有价值的生物学指标;它的表达与肝细胞癌患者的血清AFP水平及HBV感染有密切相关性.     

肝癌中PTEN基因及蛋白表达的意义

目的:研究肝癌中PTEN基因mRNA和蛋白的表达与肝癌病理之间的关系。方法:应用RT-PCR法检测28例肝癌组织和对应的癌旁组织中PTEN基因mRNA表达,并通过电泳凝胶图像系统分析其相对表达量。同时采用免疫组化方法检验51例肝癌石蜡切片中PTEN蛋白表达(其中包括与28例新鲜组织相对应的标本)。结果:RT-PCR检测PTENmRNA表达率肝癌中为35.71%,癌旁组织中为71.43%,PTEN基因在肝癌细胞中表达显著低于癌旁肝组织。免疫组化检测肝癌中PTEN蛋白的检出率为66.7%,PTEN蛋白表达与肝癌的病理分级和癌栓形成呈负相关。结论:PTEN基因缺失和肝癌的分化程度以及癌栓形成、转移密切相关。     

原发性肝癌染色体17P微卫星不稳定性及突变型P53蛋白的表达

目的　探讨微卫星不稳定性 (microsatelliteinstability ,MSI)及突变型P5 3蛋白在原发性肝癌 (hepatocellularcarci noma ,HCC)发生中的作用。方法　采用PCR为基础的方法及免疫组织化学技术检测了 48例手术切除肝癌标本染色体17P的MSI及突变型P5 3蛋白的表达。结果　肝癌MSI总阳性率为 8.3 %( 4 /4 8) ,突变型P5 3蛋白表达阳性率为 3 9.6%( 19/4 8) ,MSI在肝癌的不同发病年龄、性别 ,是否伴有肝硬化、血清HBsAg和AFP是否阳性及是否存在突变型P5 3蛋白的表达组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,但AFP阳性肝癌突变型P5 3蛋白的表达阳性率明显高于AFP阴性肝癌 (P <0 0 1)。结论　MSI与大多数HCC发生无关 ,HCC中p5 3基因突变的致癌机制不是通过MSI病理途径。