药物调控骨髓基质细胞成骨分化与骨质疏松症治疗的方向

目的：骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的潜能与骨质疏松密切相关，据此，探讨药物通过调控骨髓基质细胞分化方向从而治疗骨质疏松症的前景。资料来源：应用计算机检索Medline1985—01／2005—01期间的与药物调控骨髓基质细胞向成骨方向分化作用相关的文献，检索词“marrow stromal cells，osteoblast”，或“mesenchymal stem cells，osteoblast”，并限定文献语种为“English”。同时检索中国期刊网全文数据库、万方数据库1990—01／2005-01期间的药物调控骨髓基质细胞向成骨方向分化作用相关的文献，检索词“骨髓基质细胞，成骨细胞”，并限定文献语种为中文。并手工检索近期的相关中文期刊和相关书籍。资料选择：对资料进行筛选，选择观察药物（包括中药复方）对细胞分化方向进行调控的文章。排除观察其他因子对细胞分化方向进行调控的文章。资料提炼：共收集到调控骨髓基质细胞向成骨方向分化作用相关的文献293篇，21篇符合标准，排除272篇。资料综合：能调控骨髓基质细胞向成骨方向分化的药物包括地塞米松、雌激素、他汀类降血脂药、二甲胺四环素和中药生脉成骨方等。对各种药物调控的特点进行分析，并对通过调控骨髓基质细胞分化方向进行骨质疏松症的治疗的前景进行初步的展望和分析存在的困难。结论：药物如果能促进骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化，又对骨有较高的器官选择性的话，将可能有治疗骨质疏松症的作用，但也还存在很多尚未解决的问题。     

人骨髓基质细胞参与造血调控的研究进展

人骨髓基质细胞（ｈＢＭＳＣｓ）对造血细胞的增殖及分化有支持、诱导和调控作用。上述作用的分子基础主要涉及特异性细胞表面受体、生长因子、细胞粘附分子（ＣＡＭｓ）及细胞外基质（ＥＣＭ）分子等,这些分子的相互作用介导了细胞间的粘附和造血干细胞的归巢。     

骨髓基质细胞诱导分化成骨方法及相关研究进展

骨髓基质细胞在体外适当的培养条件下,可以向成骨细胞、成软骨细胞、成纤维细胞、脂肪细胞、成肌细胞等多种间充质来源的中胚层组织细胞分化,取材方便、对机体损伤小,是目前最为合适的骨组织工程种子细胞.现阶段诱导骨髓基质细胞分化成骨的方法人致分为以下6种:在化学药物作用下分化、在细胞因子作用下分化、与骨细胞共培养下的分化、物理方法下的分化、中药提取物作用下的分化、转基因作用下的分化.很多诱导骨髓基质细胞分化为成骨细胞的研究结果对于深入了解诱导分化机制有重要的指导和参考价值,但仍需进一步分析各种微环境因素在诱导分化过程中的作用机制.     

骨髓基质细胞修复关节软骨缺损的实验研究

目的研究骨髓基质细胞对关节软骨缺损的修复效果。方法抽取兔骨髓基质细胞在体外扩增,将其混合于Ⅱ型胶原凝胶内,再植入体内,观察其对兔膝关节软骨缺损的修复效果。结果软骨缺损由类似于透明软骨的组织修复,３个月后未见软骨退变。结论骨髓基质细胞对关节软骨具有修复能力,可望成为临床上修复关节软骨的新方法。     

骨髓基质细胞修复关节软骨缺损的实验研究

目的研究骨髓基质细胞对关节软骨缺损的修复效果。方法抽取兔骨髓基质细胞在体外扩增,将其混合于ＩＩ型胶原凝胶内,再植入体内,观察其对兔膝关节软骨缺损的修复效果。结果软骨缺损由类似于透明软骨的组织修复,３个月后未见软骨退变。结论骨髓基质细胞对关节软骨具有修复能力,可望成为临床上修复关节软骨的新方法。     

人骨髓基质细胞参与造血调控的研究进展

人骨髓基质细胞（hBMSs）对造血细胞的增殖及分化有支持、诱导和调控作用。上述作用的分子基础主要涉及特异性细胞表面受体、生长因子、细胞粘附分子（CAMs）及细胞外基质（ECM）分子等,这些分子的相互作用介导了细胞间的粘附和造血干细胞的归巢。     

骨髓基质细胞的成骨分化

目的 观察兔骨髓基质2细胞的生长特点及诱导条件下的成骨能力。方法 使用密度梯度离心分离兔骨髓基质细胞进行培养，保留贴壁细胞传代，观察在培养液中添加地塞米松，维生素C，β-甘油磷酸钠条件下骨髓基质细胞生长及成骨分化情况。结果 骨髓基质细胞呈成纤维细胞增表现，增殖能力强。诱导条件下第2代细胞的碱性磷酸酶活性明显增高，10－12d达到最高峰，并且出现矿化结节。结论 使用本实验方法，获得的骨髓基质细胞可作为骨组织工程的种子细胞。     

骨髓基质细胞在造血调控中的作用

骨髓基质细胞是造血诱导微环境的重要组成成分,一直是造血调近研究的重点。骨髓基质细胞通过与造血细胞密切接触而直到支持造血细胞的作用。随着近年分子生物学技术的发展,揭示了基质细胞通过其粘附结构对造血下／祖细胞的回髓定位以及基质细胞产生多种细胞因子调控造血的机理。本文就骨髓基质细胞的造血调控的研究进展作一综述。     

骨髓基质细胞的研究进展

骨髓基质细胞在造血调控,骨损伤修复等基础研究和临床应用中具有重要意义。骨髓基质细胞由多种形态各异的细胞成分组成,其中含少量基质干细胞,其表型独特,并有多向分化的潜能。基质细胞的成骨作用,缘于成骨前体细胞,并受多种细胞因子和牧场划性蛋白的调节作用。     

骨髓基质细胞的研究进展

骨髓基质细胞在造血调控、骨损伤修复等基础研究和临床应用中具有重要意义。骨髓基质细胞由多种形态各异的细胞成分组成,其中含少量基质干细胞,其表型独特,并直多向分化的潜能。骨髓基质细胞可分泌多种正负造血调控因子,以维持造血干细胞的增殖、分化和自我更新。基质细胞的成骨作用,缘于成骨前体细胞,并受多种细胞因子和特异性蛋白的调节作用。     

细胞因子在体外诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化过程中的作用

背景:骨髓基质细胞持续稳定地向软骨细胞转化一过程中,物理、化学和生物等诸多因素均发挥着作用,某些因素的共同作用会更有利于细胞的转化,而转化生长因子β1和胰岛素样生长因子等均可诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化.目的:拟验证转化生长因子β1与胰岛素样生长因子在体外联合诱导犬骨髓基质细胞向软骨细胞分化的效果.设计、时间及地点:细胞观察,于2006-05/10在中山大学附属第三医院中心实验室完成.材料:清洁级12月龄雄性成年杂种犬1只,用于分离培养骨髓基质细胞.转化生长因子β1、胰岛素样生长因子I由美国Sigma公司生产.方法:自犬髂后嵴处抽取骨髓10mL,密度梯度法分离培养骨髓基质细胞,传至第3代,调整细胞密度为2×109L-1.诱导组向细胞内加入含10 μg/L转化生长因子β1、50 μg/L胰岛素样生长囚了I、50mg/L维生素C、10-7mol/L地塞米松、1%ITS-A、100U/mL青霉素、100 mg/L链霉素、10%胎牛血清的高糖DMEM培养基.对照组仪加入含10%胎牛血清的高糖DMEM进行常规培养.主要观察指标:诱导后细胞形态学变化.诱导后组织化学及免疫组化检测结果.结果:与对照组比较,第3代骨髓基质细胞成软骨诱导48 h后能明显促进细胞集落生长,细胞增殖加快,但细胞形态无变化,仍为长梭形;诱导14 d后大部分细胞呈多角形或圆形,折光性增强.诱导后番红O染色、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性表达.结论:转化生长因子β1与胰岛素样生长因子I体外联合诱导可获得骨髓基质细胞源性软骨细胞.     

BMP6对小鼠骨髓基质细胞定向成骨分化的影响

目的初步研究BMP6对小鼠骨髓基质细胞定向成骨分化的影响,探讨其作为定向诱导细胞成骨分化细胞因子的可能性。方法BMP6腺病毒感染骨髓基质细胞（BMSC）。染色和定量检测碱性磷酸酶（ALP）的表达;实时荧光定量聚合酶链反应检测骨桥素（OPN）和骨钙素（OC）的表达;荧光素酶报告基因实验检测BMP6对于转录因子Smad和成骨关键基因Runx2的活化作用。结果BMP6能诱导BMSC细胞ALP的表达,且具有剂量依赖性;BMP6刺激后,BMSC细胞晚期成骨基因OPN、OC的表达均有明显的增加;BMP6可以活化Smad和成骨关键基因Runx2。结论BMP6可以促进小鼠骨髓基质细胞定向成骨分化。     

骨髓间充质干细胞向软骨的诱导分化

背景:骨髓间充质干细胞在体外不同环境及生物因子的作用下, 可以转化为软骨细胞,是目前软骨组织工程领域研究的重点.目的:对近年来细胞因子、应力刺激、三维空间结构在骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化过程中的作用作一综述.方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中2001-01/2010-06关于骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的文章,在标题和摘要中以"骨髓间充质干细胞,软骨细胞,诱导分化"或"bone marrow mesenchymal stem cells,chondrocyte,differentiation"为检索词进行检索.选择文章内容与骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章.初检得到109篇文献,根据纳入标准选择关于骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的26篇文章进行综述.结果与结论:细胞因子、应力刺激、三维空间结构等因素影响骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,优化这些因素的条件,可以更容易分化出软骨细胞表型.随着骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的深入研究,这些因素的应用必将更为广泛.     

体外培养骨髓基质细胞向成骨细胞的分化

背景:目前如何有效地诱导骨髓基质细胞向成骨细胞转化,建立稳定的体外培养诱导模式,研究诱导条件的作用机制是骨组织工程研究的重点.目的:建立一种兔骨髓基质细胞向成骨细胞分化的体外培养体系,观察其成骨过程.设计:对比观察.材料:4～8周龄新西兰大白兔,雌雄不拘,用于骨髓基质细胞的原代与传代培养.方法:将兔股骨骨髓基质细胞进行原代培养,待细胞铺满瓶底近80%后,加入2.5 g/L胰蛋白酶消化传代培养.取生长良好的对数期第2代细胞,以1×108 L-1的细胞浓度接种于预置盖玻片的6孔培养板内.细胞分为2组,实验组使用条件诱导培养基(RPMI1640标准培养基加入地塞米松10-8 mol/L,β甘汕磷酸钠10 mmol/L,维生素C 50 μg/L),对照组继续使用标准培养基.两组细胞持续培养(常规两三天换液1次)进行细胞成骨分化观察.主要观察指标:倒置相差显微镜观察细胞生长及形态变化:苏木精-伊红染色、碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色、钙结节染色及扫描电镜观察骨髓基质细胞形态变化.结果:经诱导培养的细胞,在体外逐渐转化,增殖、分泌细胞外基质、最终形成了矿化基质.苏木精-伊红染色显示实验组传代细胞在接近融合为单层时形态多为梭形,多角形等.胞浆内可见颗粒:碱性磷酸酶染色可见实验组传代细胞染色呈强阳性,阳性率达83.2%,并能大量分泌Ⅰ型胶原:对照组仅有个别细胞染色呈阳性.四环素染色观察实验组骨髓基质细胞形成金黄色钙结节,甚至是骨样组织,与典型成骨细胞的牛物学特性相似.扫描电镜观察实验组培养的传代细胞已接近融合为单层,细胞呈梭形或多角形表现,细胞表面及细胞间可见钙盐结晶沉积.结论:实验所建立的兔骨髓基质细胞体外诱导成骨转化体系,能够培养出生长活跃,增殖迅速,稳定、多量向成骨细胞转化的骨髓基质细胞培养模式,所培养的细胞可作为成骨细胞的一种来源,为构建组织工程化骨提供种子细胞.     

犬骨髓基质干细胞片层制备及向成骨细胞的分化

背景: 目前传统的胰酶消化法和单细胞悬液转移细胞的方法存在诸多缺点,限制了骨组织工程学的发展.目的: 培养骨髓基质干细胞并向成骨细胞诱导分化,制备细胞片层.方法: 密度梯度离心法分离犬骨髓基质干细胞,接种于DMEM成骨诱导培养基,向成骨细胞诱导分化,采用细胞片层技术,利用温度反应性培养基的温度变化,收获完整的细胞片层.结果与结论: 刚接种至培养皿的原代细胞在培养瓶底散在分布,呈圆形,胞体透亮,折光性好,12 d时细胞呈长梭形,完全融合,呈旋涡状生长;成骨诱导后的骨髓基质干细胞大部分变为方形、多角形和鳞片形,21-28 d形成明显的圆形或卵圆形钙化结节;温度反应性培养皿中的间充质干细胞降温至临界温度32℃以下时,细胞便逐步从培养皿底分离,形成完整的骨髓基质干细胞片层.实验结果证实密度梯度离心法可成功分离培养犬骨髓基质干细胞并向成骨细胞诱导分化,应用细胞片层技术可获取完整的骨髓基质干细胞片层.     

兔骨髓间充质干细胞培养及向成软骨细胞的诱导分化

背景:骨髓间充质干细胞没有理想的特异性表面标志物,对其鉴定尚无统一标准,大多数鉴定依赖于其形态水平、功能特征及培养过程中出现的分化表型来协助鉴定。目的:体外培养扩增、鉴定兔骨髓间充质干细胞,观察其诱导分化为成软骨细胞的可行性。方法:密度梯度离心法提取兔骨髓间充质干细胞,采用倒置显微镜进行形态学观察;用含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液培养细胞,每日定时进行细胞计数,观察细胞生长速度;采用流式细胞学方法分别检测原代及第3代细胞CD44、CD45、CD29的表达情况;取第3代生长良好的兔骨髓间充质干细胞,以特定培养液诱导(含体积分数为10%胎牛血清、转化生长因子110μg/L、胰岛素样生长因子Ⅰ110μg/L、转铁蛋白6.25mg/L、地塞米松10mmol/L、维生素C0.05mmol/L),倒置显微镜下观察形态变化,免疫组织化学检测软骨特异性Ⅱ型胶原的表达。结果与结论:培养的细胞长梭形,呈成纤维细胞样生长,传代细胞生长迅速。流式结果表明,原代细胞有62.4%的细胞表达CD29,有60.3%的细胞表达CD44,有2.79%的细胞表达CD45,第3代有99.9%的细胞表达CD29,有99.6%的细胞表达C...     

兔骨髓间充质干细胞培养及向成软骨细胞的诱导分化

背景：骨髓间充质干细胞没有理想的特异性表面标志物,对其鉴定尚无统一标准,大多数鉴定依赖于其形态水平、功能特征及培养过程中出现的分化表型来协助鉴定。目的：体外培养扩增、鉴定兔骨髓间充质干细胞,观察其诱导分化为成软骨细胞的可行性。方法：密度梯度离心法提取兔骨髓间充质干细胞,采用倒置显微镜进行形态学观察;用含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液培养细胞,每日定时进行细胞计数,观察细胞生长速度;采用流式细胞学方法分别检测原代及第3代细胞CD44、CD45、CD29的表达情况;取第3代生长良好的兔骨髓间充质干细胞,以特定培养液诱导（含体积分数为10%胎牛血清、转化生长因子110μg/L、胰岛素样生长因子Ⅰ110μg/L、转铁蛋白6.25mg/L、地塞米松10mmol/L、维生素C0.05mmol/L）,倒置显微镜下观察形态变化,免疫组织化学检测软骨特异性Ⅱ型胶原的表达。结果与结论：培养的细胞长梭形,呈成纤维细胞样生长,传代细胞生长迅速。流式结果表明,原代细胞有62.4%的细胞表达CD29,有60.3%的细胞表达CD44,有2.79%的细胞表达CD45,第3代有99.9%的细胞表达CD29,有99.6%的细胞表达CD44,有2.62%的细胞表达CD45。骨髓间充质干细胞诱导后体外扩增能力明显降低,诱导21d后形态变化比较显著,Ⅱ型胶原阳性细胞较多。结果显示应用密度梯度离心法可成功分离并扩增骨髓间充质干细胞,第3代细胞纯度较高,在适当的条件下,具有分化为成软骨细胞的潜能。     

猫骨髓源神经干细胞的诱导分化

目的观察家猫骨髓源巢蛋白阳性细胞诱导分化情况,为家猫骨髓基质细胞(BMSC)作为自体神经干细胞种子细胞提供理论依据。方法抽取家猫的骨髓,从中分离得到骨髓基质细胞,在体外给予神经干细胞培养基培养增殖,然后用分化诱导因子进行诱导分化,倒置相差显微镜下观察活细胞及免疫细胞化学染色情况。结果猫骨髓基质细胞在体外培养中体型增大,继之出芽,贴壁生长,可形成克隆团,同时可传代培养,这些具有克隆能力的骨髓基质细胞能表达神经干细胞特异性抗原巢蛋白,与5-溴尿嘧啶(BrdU)共培养3d后可见部分大圆形细胞BrdU染色阳性,这些细胞经进一步的诱导可分化为神经元样细胞,而且表达神经元特异性抗原NSE和NeuN。结论家猫骨髓基质细胞具有干细胞特征,可诱导为巢蛋白阳性细胞,并可进一步分化为表达烯醇化酶(NSE)和NeuN的神经元样细胞。证实家猫BMSC可作为移植修复神经系统损伤的神经干细胞种子细胞。     

普伐他汀对激素诱导骨髓基质细胞分化的影响

背景:普伐他汀最初作为降血脂药物广泛应用于临床,但随着人们对此类药物研究的深入,显示其对骨形成有一定影响,普伐他汀是否能抑制激素诱导骨髓基质细胞分化成脂肪细胞尚不清楚.目的:激素诱导骨髓基质细胞分化成脂肪细胞的条件下,观察普伐他汀对这一过程的影响,并探讨其预防和治疗激素性股骨头坏死的可能机制.方法:取幼兔双侧股骨骨髓,通过细胞贴壁,分离获取骨髓基质细胞,以地塞米松作为脂肪细胞分化的诱导剂,同时加入不同质量浓度的普伐他汀进行干预.培养21 d后,取培养细胞染色,光镜下观察脂肪细胞并采用病理图像分析仪计数;培养12 d后,取培养细胞进行免疫组化染色,观察细胞的碱性磷酸酶活性.结果与结论:培养21 d后,各组脂肪细胞数目随普伐他汀剂量增大而减少,有剂量依赖性.另外,以地塞米松及不同质量浓度普伐他汀处理细胞12 d后,通过免疫组化方法染色确定其碱性磷酸酶活性明显增高.结果表明地塞米松能够诱导骨髓基质细胞分化成脂肪细胞,使成骨分化减少,而普伐他汀可以抑制骨髓基质细胞分化成脂肪细胞,促进成骨.     

非诱导同种异体骨髓基质细胞心肌移植后细胞增殖分化的结局

背景：关于骨髓基质细胞心肌成形的研究。目前都集中在模拟自体细胞移植方面。而同种异体骨髓基质细胞心肌移植的研究，国内报道较少。目的：观察大鼠同种异体骨髓基质细胞移植到心肌梗死区后能否存活，并进一步增殖、分化，以及对宿主心脏的影响。设计：随机对照动物实验。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科实验室。材料：1月龄Wistar大鼠10只。雌雄不拘。体质量100-120g，用于取材培养骨髓基质细胞。3月龄雌性Wistar大鼠80只。体质量200—250g，用于制造动物模型。方法：实验于2004-06／12在华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科实验室完成。①80只大鼠结扎冠状动脉左前降支制作急性心肌梗死模型，45只大鼠制作模型成功。（2）4周后，取传两代非经诱导的体外培养的同种异体大鼠骨髓基质细胞，注射到大鼠心肌梗死区，为移植组（25只）。同时设置注射培养基的对照组（20只）。③移植4周后检测受体心脏的血流动力学指标。然后取标本，检测移植细胞存活、分化和组织的血管新生状况。主要观察指标：①两组大鼠血流动力学检测结果比较。②移植细胞的结局。③两组大鼠血管新生的改变。结果：细胞移植组13只，对照组11只大鼠进入结果分析。①移植组大鼠心脏血流动力学指标较对照组明显改善【左心室收缩压：（88．61&;#177;5．99），（76．93&;#177;4．75）mmHg，左心室舒张末压：（7．72&;#177;1．36），（12．77&;#177;2．76）mmHg，P均〈0．05；左心室收缩压最大变化速率：（2365．26&;#177;266．31），（2025．04&;#177;230．25）（mmHg／s），左心室舒张压最大变化速率：（2313．26&;#177;159．30），（2140．12&;#177;191．03）mmHg/s]。②同种异体骨髓基质细胞移植人心肌梗死区后能够度过急性炎症期而且不引起明显移植排斥反应；位于梗死区的移植细胞主要分化为成纤维细胞，部分位于心肌梗死区周围的细胞分化为血管内皮细胞，并促进了血管新生。⑧移植组心肌梗死区及其周围新生血管数目较对照组明显增加（P〈0．01）。结论：同种异体骨髓基质细胞移植后未能在梗死区形成心肌样细胞，但所形成的血管内皮细胞产生了促进心肌梗死后血管新生、改善心功能的作用。