增殖型血管平滑肌细胞模型的培养改良

以往使用的血管平滑肌细胞(VSMC)模型是直接用正常血管贴壁培养传代细胞,并认为传至第5代以后即为分泌型。但我们通过检测特异性表型表达基因SM22α发现,按以往传代培养的VSMC仍有表达。因此,有必要探讨一种在     

胆固醇诱导人血管平滑肌细胞表型转化

目的观察胆固醇对人血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响。方法体外培养人血管平滑肌细胞株,分别用(12.5、25.0、50.0)mg/L浓度的胆固醇作用细胞48 h;50.0 mg/L的胆固醇分别作用细胞24、48、72 h。采用实时定量PCR检测VSMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;采用Western blot法检测胆固醇对VSMC中α-SMA、SM22α及单核细胞趋化蛋白-1诱导蛋白(MCPIP)表达的影响;CCK-8法检测VSMC增殖。结果 (12.5、25.0、50.0)mg/L胆固醇作用VSMC 48 h较对照组相比,α-SMA及SM22αmRNA水平及蛋白水平表达均降低(P0.05),50.0 mg/L胆固醇作用后表达水平最低,存在剂量依赖效应;用50.0 mg/L胆固醇分别作用VSMC 48、72 h后,α-SMA及SM22αmRNA及蛋白表达与对照组相比均降低(P0.05)。与对照组相比,胆固醇作用均明显促进VSMC增殖(P0.05)。50.0 mg/L胆固醇作用VSMC48 h可诱导MCPIP蛋白表达增加。结论胆固醇作用VSMC后可降低收缩型标志蛋白α-SMA及SM22α的表达、促进VSMC增殖,提示胆固醇可诱导VSMC表型转化。     

微小核糖核酸对血管平滑肌细胞表型转换影响的研究进展

血管平滑肌细胞(VSMC)作为血管中膜的主要构成细胞,其功能作用与其表型变化密切相关。合成表型具有增生及迁移能力,是各种心血管及周围血管病发生发展的主要病理基础,而收缩表型对维持血管弹性和收缩功能至关重要。较多微小核糖核酸(microRNAS,miRNAS)可通过相关途径和方式调控VSMC表型转换,从而在机体病理生理变化中发挥重要作用。本文综述涉及上述调节的miRNA研究的有关进展。     

去甲肾上腺素促进血管平滑肌增殖和细胞表型转化

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖的影响及作用机制.方法:用NE分别作用体外培养和血清饥饿的血管平滑肌细胞,用5-BrdU标记VSMC的增殖、RT-PCR检测VSMC表型标志基因SM22a和增殖负性调控基因高血压相关基因-1(HRG-1)的表达.结果:NE和OX-LDL分别作用血清培养的VSMC后,SM22α和HRG-1表达下凋,5-BrdU标记的阳性增殖细胞增多;NE分别与α1-肾上腺素受体拮抗剂(α1-R-)和β1-肾上腺素受体拮抗剂(β1-R)共作用时,SM22α和HRG-1的表达明显上调.而当NE作用血清饥饿VSMC时,NE上调SM22α和HRG-1的表达.结论:NE对VSMC有促表型转化和增殖作用,且这种作用呈现像神经样的可逆性调节作用.其作用机制主要通过肾上腺索受体α1和β1来实现的.     

人腹主动脉瘤平滑肌细胞表型变化

目的:研究腹主动脉瘤(AAA)中血管平滑肌细胞(VSMC)表型改变,探讨其在AAA发病中的作用。方法:选取人体AAA、动脉闭塞性疾病(AOD)和正常腹主动脉(NA)组织,采用α-肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白(desmin)及肌球蛋白重链3种表型(SM1、SM2和SMemb)单克隆抗体,利用免疫组化及电镜技术,检测VSMC收缩型与合成型。结果:AOD及NA中VSMC以收缩表型α-SMA、desmin、SM1和SM2表达为主,SMemb在AOD的表达较低,而在NA无表达。AAA中VSMC以合成表型SMemb为主,α-SMA、SM1和SM2明显低于AOD及NA,desmin不表达;其中破裂者的SMemb和SM2低于非破裂者。结论:VSMC表型变化参与腹主动脉壁损伤重构,促进AAA形成和发展。     

培养的血管平滑肌细胞表型转变过程中张力纤维及中间丝变化的扫描电镜观察

为揭示体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)在表型转变过程中张力纤维及中问丝三维构筑的变化，采用Triton消化和扫描电镜技术，对不同表型的VSMC进行了观察。结果证实，收缩型VCSM胞质中含大量平行排列的张力纤维；中间丝则密布于张力纤维之间，形成支撑和连接张力纤维的复杂网络。随着VSMC由收缩型向合成型转变，胞核附近的中间丝逐渐向细胞周边胞质分布，以至核周出现明显的“中问丝稀疏区”。张力纤维亦逐渐分解变细，且在部分合成型VSMC中完全消失。本文对上述变化的可能机制进行了讨论。     

内皮素-1对大鼠血管平滑肌表型转化和增殖的影响

目的:通过内皮素-1作用于大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)及对内皮素-1受体信号的阻断,探讨内皮素-1对VSMC表型转化和增殖的影响及机制.方法:取大鼠主动脉贴块培养VSMC,用内皮素-1及其受体阻断剂BQ123分别作用于一般培养的VSMC和血清饥饿培养的VSMC.用BrdU标记细胞增殖;RT-PCR检测高血压相关基因-1(HRG-1)和SM22α表达变化.结果:内皮素-1作用后VSMC增殖显著增多,HRG-1和SM22α mRNA在一般培养和饥饿培养的VSMC中表达均明显减少;而加入阻断剂BQ123后增殖细胞大大减少,HRG-1和SM22α mRNA表达明显上调.结论:内皮素-1有促进VSMC增殖作用并可使VSMC从收缩型向合成型转化,并且内皮素-1对VSMC的作用是不可逆的;受体信号途径是内皮素-1对VSMC表型转化和增殖作用的机制之一.     

去甲肾上腺素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化和骨架蛋白表达的影响

目的研究去甲肾上腺素(NE)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化与骨架蛋白表达之间的关系,探讨神经因素对VSMC调控作用。方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,分为血清对照组(control)、NE+血清培养组、血清饥饿组、NE+血清饥饿组。RT-PCR检测表型基因SM22 α mRNA的表达,免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白F-actin的表达。结果与血清培养相比,血清饥饿上调SM22 α表达水平,使F-actin的荧光强度明显增强;NE可降低SM22 α表达水平和使F-actin的荧光强度明显减低,细胞由长梭形转变为多角形或短梭形,细胞板状突起增多,可见细胞分裂。结论 NE对VSMCs表型转化和骨架蛋白形态和数量表达改变有重要作用,为研究神经因素在心血管疾病发生发展中的作用提供理论依据。     

香烟尘粒对血管平滑肌细胞生长的影响

目的观察二甲基亚砜溶解的香烟尘粒 (DSP)对血管平滑肌细胞(VSMC)生长的影响。方法以兔主动脉血管平滑肌细胞为实验对象 ,将1、2、3、4、8μl·ml -1剂量DSP加入培养基中。采用四氮唑盐 (MTT)比色试验和细胞蛋白测定评价DSP对VSMC生长的影响 ;透射电子显微镜 (TEM)观察细胞超微结构变化 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡情况。结果1、2μl·ml-1DSP可刺激VSMC增殖 (P<0.01) ,4、8μl·ml -1DSP能抑制VSMC增殖 (P<0.05,P<0.01) ,减少细胞总蛋白 (P<0.05,P<0.01)。电镜下 ,2、4μl·ml-1 DSP组均有典型的细胞凋亡形态学变化。2μl·ml-1 DSP组凋亡率为(10.2±3.2) % ,4μl·ml-1DSP组凋亡率为 (29.2±8.7) % ,均较对照组显著增高 (P<0.05,P<0.01)。结论DSP既可刺激VSMC增殖 ,又可促进VSMC凋亡 ,吸烟参与动脉粥样硬化病理过程的机制 ,可能与其影响VSMC增殖和凋亡两者的平衡有关。     

雌激素受体在大鼠血管平滑肌细胞中的表达及其调控

目的：观察血管平滑肌细胞(VSMC)中雌激素受体(ER)的表达，研究雌激素和血清(含多种生长因子)对细胞中：ER表达的影响。方法：原位杂交和RT-PCR检测大鼠主动脉中层VSMC中的ERmRNA。分别在有或无他莫昔芬(TAM)(ER拮抗剂)预处理的情况下，免疫细胞化学观察VSMC中的ER蛋白，比较雌二醇(E2)以及新生小牛血清(NCS)对VSMC中ER表达的影响。结果：VSMC中存在ERmRNA和蛋白，E2以及NCS均能上调细胞中ER的表达，TAM能阻断其效应。结论：ER是雌激素作用于VSMC的靶基因之一。     

NKT细胞一种新型的T细胞

NKT细胞 (natural killer T cell)主要是指携带一恒定的 T细胞受体 (TCR) αβ和 NK细胞活化性受体的 CD4- CD8-CD4 CD8- T细胞 ,是由 Budd等在 1987年首先报道的 ,以后有大量的研究表明这类细胞是不同于传统 T细胞的新一类T细胞 ,在发育、表型、及免疫功能等方面有其自身的特殊性 ,尤其是近年来的研究认为 NKT细胞在机体免疫自稳、抗感染和抗肿瘤免疫等方面具有重要的作用。1　 NKT细胞的表型特征NKT细胞具有与成熟的激活 /记忆型 T细胞相似的一些表型 (见表 ) ,其中 NKT细胞最显著的特征是其表达的TCR和 NK细胞的激活受体…     

早期胃印戒细胞癌免疫表型的临床病理意义

目的 探讨胃、肠免疫表型标志物在早期胃印戒细胞癌中的表达及其与临床病理参数和预后的相关性.方法 免疫组织化学EnVision法检测91例早期胃印戒细胞癌中胃免疫表型标志物MUCI、MUCSAC、MUC6和肠免疫表型标志物MUC2、CDX2的表达,并根据肿瘤细胞胃、肠免疫表型标志物表达水平的差异,将早期胃印戒细胞癌分为3种类型:胃型、肠型和混合型.结果 胃型、混合型和肠型印戒细胞癌分别为53例(58.2%)、22例(24.2%)和16例(17.6%).胃、肠免疫表型标志物表达水平与印戒细胞癌形态学分型无相关性(P>0.05).两种肠免疫表型标志物MUC2和CDX2在早期黏膜下层浸润癌中阳性表达率均显著高于黏膜内癌,差异有统计学意义(均P<0.01).两种胃免疫表型标志物MUCSAC和MUC6在早期黏膜下层浸润癌中的阳性表达率分别为52.9%(18/34)和20.6%(7/34)均显著低于黏膜内癌91.2%(52/57)和31.6%(18/57),差异有统计学意义(P<0.01和P<0.05).在淋巴结转移阳性组和脉管浸润阳性组中,MUC2和CDX2的阳性表达率均明显高于无淋巴结转移组和无脉管浸润组,差异有统计学意义(P<0.05).随着肿瘤病变范围的扩大,CDX2阳性表达率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).肠型印戒细胞癌比胃型印戒细胞癌更多见于早期黏膜下层浸润癌且有更高的淋巴结转移率(P=0.000和P=0.003).生存分析显示,肠型和混合型印戒细胞癌5年生存率明显低于胃型印戒细胞癌(P<0.05).结论 肠型胃印戒细胞癌临床生物学行为和预后均较胃型印戒细胞癌差.胃、肠免疫表型标志物的胃印戒细胞癌分型有助于评估预后并有可能指导治疗.     

血流切应力变化导致颈总动脉重建及其对血管平滑肌细胞凋亡和分化的影响

目的　探讨动脉血流切应力变化对动脉壁形态结构、零应力状态以及血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)凋亡和去分化的影响。方法　结扎大鼠左侧颈总动脉的部分分支，使血液全部经由枕动脉流出，造成左颈总动脉(LCA)低血流和低切应力以及对侧右颈总动脉(RCA)高血流和高切应力状态，以假手术不结扎动脉的动物为正常对照。取LCA和RCA，光镜和透射电镜观察血管壁组织形态学变化；测量血管零应力状态下的张开角；TUNNEL法进行原位细胞凋亡检测；免疫印迹法检测VSMC表型分化标志分子hl-calponin的表达。结果　术后7d，低切应力LCA的内径减小了13%左右，壁厚内径比显著增加，张开角显著减小；内皮下层明显增厚，VSMC凋亡数量显著增加，VSMC表型分化标志分子hl-calponin的表达量显著降低。结论　血流切应力显著降低会在短期内引起血管重建，提示VSMC凋亡和去分化可能是低血流和低切应力导致血管重建的早期事件之一。     

细胞外基质促血管平滑肌细胞迁移及β3整合素和粘着斑激酶表达

目的:研究细胞外基质(ECM)蛋白促血管平滑肌细胞(VSMC)迁移与β₃整合素及粘着斑激酶(FAK)表达之间的关系。方法:应用细胞迁移实验观察骨桥蛋白(OPN)和纤连蛋白(FN)对VSMC迁移活性的影响,利用RT-PCR和Western印迹探讨β₃整合素、FAK和转录因子Gax表达与细胞迁移之间的关系。结果:VSMC经10、20mg/LOPN和20mg/LFN处理后,迁移活性分别达对照组的1.36、1.57和1.26倍(P＜0.05)。用相同浓度(20mg/L)OPN和FN刺激细胞,随着作用时间延长,VSMC迁移距离逐渐增加。Western印迹和RT-PCR结果证实,两种基质蛋白促进VSMC迁移与诱导β₃整合素和FAK基因表达及抑制转录因子Gax表达有关。结论:β₃整合素-FAK是介导OPN和FN促VSMC迁移的信号途径之一。     

浆细胞样树突状细胞研究进展

浆细胞样树突状细胞(pDC)是一类近年来被认识并被证明在免疫应答与免疫耐受中发挥重要作用的免疫细胞,其最突出的功能特点是在病毒、CPG ODN的刺激下产生大量的Ⅰ型干扰素,因此又被称为是天然Ⅰ型干扰素产生细胞(IPC)。由于其在来源、表型等方面都与我们以前所熟知的髓系树突状细胞有着很大的差异并具备独特的功能而引起广泛的关注。本文综述了pDC的来源、表型、功能特点,包括对T细胞的诱导分化及其与疾病的关系等方面的研究进展。     

浆细胞样树突状细胞研究进展

浆细胞样树突状细胞(pDC)是一类近年来被认识并被证明在免疫应答与免疫耐受中发挥重要作用的免疫细胞，其最突出的功能特点是在病毒、CPG ODN的刺激下产生大量的Ⅰ型干扰素，因此又被称为是天然Ⅰ型干扰素产生细胞(IPC)。由于其在来源、表型等方面都与我们以前所熟知的髓系树突状细胞有着很大的差异并具备独特的功能而引起广泛的关注。本文综述了pDC的来源、表型、功能特点，包括对T细胞的诱导分化及其与疾病的关系等方面的研究进展。     

ET-1促进人血管平滑肌细胞的表型变化和增殖

目的：研究ET-1与VSMC表型变化和增殖的关系。方法：用MTT法研究ET—1对平滑肌细胞增殖的影响，^3H-TdR法测定ET-1对平滑肌细胞DNA合成的作用，流式细胞仪法观察对平滑肌细胞增殖周期的影响，逆转录聚合酶链法观察对平滑肌细胞表型变化的影响。结果：与对照组比较，ET-1明显促进平滑肌细胞增殖；促进平滑肌细胞DNA合成；促进平滑肌细胞从G0期向S期的转变，G0／G1期细胞百分比明显降低，而S期细胞百分比增加；促进平滑肌细胞的表型转化，从第2d到第7d随时间延长1-Caldesmon表达逐渐增高。结论：ET-1促进平滑肌细胞表型转化，同时对平滑肌细胞增殖亦有明显的促进作用。     

不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞外基质的影响

为研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞(VSMC)细胞外基质(ECM)的影响,探讨不同频率张应变与血管重建(remodeling)的关系,本文应用 FX-4000TTM细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠VSMC施加10%张应变,频率分别为0.5、1和2 Hz,加载时间为24 h,以未加载张应变的VSMC为对照组.采用Real-time RT-PCR、western blot等技术检测不同频率张应变对fibronectin、collagen I和collagen III表达的影响,以及可能参与调节的蛋白激酶p38的活性变化.结果显示:①张应变频率可以明显影响细胞外基质Fibronectin、collagen I和collagen III的mRNA的表达,其影响效果与频率大小是一种非线性关系;②蛋白激酶p38参与调节了一定频率张应变诱导的ECM的表达变化.结果表明不同频率的张应变可以影响VSMC细胞外基质表达的变化,提示频率的改变可能参与调节细胞外基质的合成与分泌;在应力引起的血管重建中频率的改变可能起着重要的作用.     

降钙素基因相关肽对大鼠血管平滑肌细胞增殖及表型转化的影响

目的:探讨降钙基因相关肽(CGRP)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及表型转化的影响,并对VSMC增殖模型的应用价值作出评估。方法:取大鼠主动脉,分成CGRP作用和无CGRP作用2个实验组,体外培养8d,收集血管前24h用BrdU标记。H-E染色和5-BrdU免疫细胞化学染色观察增殖变化;RT-PCR检测高血压相关基因1(HRG-1)和SM22α基因表达。结果:血管中膜可见大量棕黄色标记增殖的细胞核,VSMC明显增生,HRG-1和SM22α mRNA表达明显减少;而加入CGRP共培养组标记的增殖细胞大大减少,也未见有斑块增生,HRG-1和SM22α mRNA表达明显上调。结论:CGRP对VSMC增殖有抑制作用并可使VSMC从合成型向收缩型转化。     

MUM1蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中活化的B细胞相关蛋白MUM1的表达与临床病理特征之间的关系.方法 利用组织微阵列免疫组化检测60例DLBCL石蜡包埋组织中MUM1、bcl-6和CD10的表达.结果 60例DLBCL被分为两种抗原表达表型:一种为活化的B细胞表型(A型)表达MUM1;另一种为生发中心B细胞表型(B型),表达CD10和(或)bcl-6但不表达MUM1.60例DLBCL中61.67%为A型,31.67%为B型,其中59.25%中心母细胞型,3/4免疫母细胞型,2/2间变性大B细胞型均为A型.A型在结外和结内DLBCL中分别占61.76%和61.54%,而在胃肠道DLBCL中的比例(47%)显著低于在其他结外DLBCL中的比例(80%,P=0.079).在MUM-1( )/bcl-6( )/CD10( /-)的病例中,75.00%(12/16)为结外DLBCL,高于在MUM-1( )/bcl-6(-)/CD10(-)病例中的比例43.75%(7/16),但差异没有显著性(P=0.149).结论 A型(表达MUM1)在DLBCL中的比例较高,提示MUM1表达很可能与DLBCL组织学变异有关,联合检测CD10和bcl-6,可协助DLBCL分型诊断.