塞来昔布抑制人结肠癌细胞COLO205增殖及对COX-2、MMP-9mRNA表达影响的体外实验研究

目的研究塞来昔布在体外对人结肠癌细胞COLO205生长增殖及对环氧化酶2(COX-2)、金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA表达的影响。方法体外培养人结肠癌细胞COLO205,分组为正常对照组和塞来昔布干预组,MTT法检测正常对照组和塞来昔布组抑制率,塞来昔布在不同时间且相同浓度的条件下,不同时间对于结肠癌细胞增殖的影响,测得抑制率并算得半抑制浓度(IC50)值;RT-PCR检测COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同浓度的塞来昔布干预结肠癌COLO205细胞,分别在24 h,48 h,72 h测算IC50结果为:96.620±9.044μmol/L、71.561±5.706μmol/L、58.982±11.069μmol/L,塞来昔布浓度提高和干预时间延长,结肠癌COLO205细胞活力下降。RT-PCR结果显示:正常对照组与塞来昔布干预组COX-2 mRNA灰度值分别为:0.832±0.012,0.113±0.001,干预组塞来昔布干预细胞的COX-2mRNA表达降低,所应显示的条带消失,无表达率,两组比较差异有显著性(t=18.051,P=0.000);正常对照组与塞来昔布干预组MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.756±0.050,0.171±0.001,干预组MMP-9 mRNA表达明显降低,条带消失,无mRNA表达,两组比较差异有显著性(t=17.286,P=0.001)。结论体外实验表明:塞来昔布抑制结肠癌COLO205细胞增殖,通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现抗肿瘤作用。     

塞来昔布抑制人结肠癌细胞Caco-2细胞增殖及其分子机制

目的研究塞来昔布在体外抑制人结肠癌细胞Caco-2生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,分组为正常组(无任何干预)及塞来昔布组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50)值;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检环氧化酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为:99.519±10.355μmol/L、71.546±6.446μmol/L、59.622±15.999μmol/L;RT-PCR结果显示:人结肠癌细胞Caco-2正常对照组及塞来昔布干预组COX-2mRNA灰度值分别为:0.808±0.021,0.101±0.002(t=19.037,P=0.000);MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.798±0.031,0.190±0.002(t=18.987,P=0.002)。结论塞来昔布可能通过抑制COX-2、MMP-9的mRNA的表达,从而抑制结肠癌细胞增殖。     

低频低剂量超声逆转卵巢癌细胞多药耐药及机制研究

目的 研究低频低剂量超声逆转卵巢癌耐药细胞株(SKVO3/MDR1)多药耐药的有效性及其机制.方法 MTT法检测获得0.3 MHz,1.0 W/cm2超声辐照下逆转SKVO3/MDR1多药耐药的最适辐照时间,免疫荧光法检测最适超声辐照前后多药耐药糖蛋白P-gp的表达变化.结果 40 s为逆转肿瘤细胞多药耐药的最适超声辐照时间.最适辐照有效逆转了SKVO3／MDR1多药耐药性,显著降低了P-gp的表达(P＜0.01).结论 低频低剂量超声能有效逆转SKVO3/MDR1细胞株的多药耐药性,其机制与降低细胞膜P-gp的表达密切相关.     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度>40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

塞来昔布联合 PDTC 对人结肠癌细胞 HT-29 的抑制增殖和促凋亡作用及其机制

目的研究塞来昔布联合吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）对人结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及其对COX-2、NF-κB、Caspase-3基因表达的影响,探讨塞来昔布联合用药抗肿瘤的机制。方法用不同浓度的塞来昔布（30、60、120、240μmol／L）（单药组）以及不同浓度塞来昔布联合不同浓度的PDTC（50、100μmol／L）（联合组）分别处理人结肠癌细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞COX-2、NF-κB、Caspase-3表达的变化。结果塞来昔布单药组对结肠癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡作用,其作用随着药物浓度、给药时间的增加而增强（P均〈0．05）;同时检测到COX-2、NF-κBKBmRNA的表达降低（P均〈0．05）,Caspase-3表达升高（P〈0．05）,且具有浓度依赖性;联合组较同一塞来昔布浓度的单药组上述作用更明显（P均〈0．05）。结论塞来昔布单药组和联合组均能抑制人结肠癌细胞的增殖,促进其凋亡;联合组作用强于单药组;其机制可能与COX-2、NF-κB的下调和Caspase-3表达上调有关。     

塞来昔布对胃癌细胞株BGC-823的增殖的影响

目的研究塞来昔布在体外对人胃癌细胞BGC-823生长增殖的影响及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人胃癌BGC-823,MTT法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50)值;RT-PCR法检测对COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24h、48h、72h的IC50分别为:158.98μmol/L、75.45μmol/L、45.08μmol/L;RT-PCR结果显示:人胃癌细胞BxPC-3正常对照组及塞来昔布干预组COX-2 mRNA灰度值分别为:0.873±0.026,0.115±0.008,P<0.05;MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.890±0.011,0.209±0.012,P<0.05。结论塞来昔布抑制胃癌细胞增殖,塞来昔布抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现的。     

shRNA干扰MDR1基因逆转胃癌细胞多药耐药性的研究

目的利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)技术沉默多药耐药基因1(multidrug resistance,MDR1),探讨其对SGC7901/L-OHP细胞株多药耐药性的逆转作用。方法采用逐步增加药物浓度法建立耐奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)的胃癌细胞株SGC7901/L-OHP,用shRNA技术沉默MDR1基因在SGC7901/L-OHP细胞中的表达,以real-time PCR检测细胞中MDR1mRNA的表达,Western blot检测细胞中P糖蛋白(P-glycopmtein,P-gp)的表达,MTT法检测转染后SGC7901/L-OHP细胞对L-OHP和5-FU的敏感性。结果shRNA沉默SGC7901/L-OHP细胞株MDR1基因后,与空白组和阴性质粒组比较,MDR1mRNA表达抑制(P0.01),且P-gp表达下调(P0.05)。干扰后的SGC7901/L-OHP细胞对L-OHP和5-FU的敏感性显著升高(P0.05)。结论shRNA可有效沉默SGC7901/L-OHP胃癌耐药细胞株MDR1基因的表达,提高耐药的胃癌细胞对化疗药的敏感性。     

塞来昔布对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

本研究旨在探讨塞来昔布（celecoxib）对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞技术分析细胞凋亡及细胞周期分布的变化,定量RT—PCR的方法检测细胞周期蛋白DJ、EI及COX-2mRNA的表达。结果表明,不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,细胞增殖明显受抑,且呈-定的浓度依赖性（r=0．955）,24h的IC50值为63．037μmol／L。塞来昔布可诱导HL-60细胞的凋亡,也呈剂量依赖性（r=0．988）。塞来昔布可使HL-60细胞明显阻滞于G0／G1期,可下调cyclinD1、cyclinE1mRNA的表达。塞来昔布可使细胞COX-2mRNA表达水平降低。结论：塞来昔布呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖,并可能通过下调cyclinD1、cyclinE1的表达引起细胞G0／G1,期阻滞,下调COX-2的表达诱导细胞凋亡。     

小柴胡汤逆转人肝癌细胞BEL-7402／5-FU 的多药耐药作用

目的:研究小柴胡汤对BEL-7402/5-FU细胞多药耐药的逆转作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同化疗药物以及小柴胡汤对BEL-7402/5-FU细胞的半数抑制浓度(IC50),计算耐药指数和小柴胡汤的逆转倍数;流式细胞仪检测细胞内阿霉素的荧光强度;RT-PCR检测mdr1基因表达;western blot检测p-gp蛋白表达。结果:BEL-7402/5-FU耐药株对5-FU和阿霉素顺铂均具有耐药性,耐药指数分别是6 501.99和31.73;0.5 mg/ml小柴胡汤和5-FU、阿霉素联合应用,其逆转倍数分别是1.66、1.50;1.0 mg/ml小柴胡汤和5-FU、阿霉素联合应用,其逆转倍数分别是3.44、5.58;小柴胡汤增强阿霉素的荧光强度;小柴胡汤降低mdr1基因表达和p-gp蛋白表达,各个浓度均具有统计学意义。结论:小柴胡汤可以抑制mdr1基因编码蛋白产物p-gp的表达,增加细胞内化疗药物的浓度,从而逆转了肝癌细胞的多药耐药性。     

塞来昔布对重型颅脑创伤后运动功能的影响

目的 探讨选择性环氧合酶( cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对重型颅脑创伤后神经元保护作用及可能作用机制.方法 72只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为颅脑创伤组、塞来昔布治疗组、模型组及对照组,每组18只.颅脑创伤组、塞来普布治疗组采用Marmarou方法建立大鼠重型闭合性颅脑创伤模型,模型组仅于麻醉后切开头皮、缝合,但不致伤,对照组不做任何处理.每组12只应用蛋白印迹Western blot法及免疫组织化学SP法检测COX-2表达,6只进行神经功能损害评分测试.结果 颅脑创伤组COX-2蛋白表达较对照组及模型组明显增加(P＜0.05),塞来昔布治疗组COX-2蛋白表达较颅脑创伤组下降(P＜0.05);对照组神经功能损伤评分与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05),塞来昔布治疗组神经功能损伤评分较颅脑创伤组明显降低(P＜0.05).结论 COX-2抑制剂塞来昔布对重型颅脑创伤大鼠有脑保护作用,可降低COX-2的表达,抑制脑创伤后的炎症反应,改善其伤后运动障碍.     

As2O3对人胃癌多药耐药细胞模型的逆转耐药作用

目的体外建立人胃癌细胞多药耐药模型,研究多药耐药机制及三氧化二砷（As2O3）对其逆转耐药作用。方法采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增法诱导建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADM,MTT法检测SGC7901/ADM细胞对ADM、长春新碱（VCR）、紫杉醇（TAX）的敏感性及As2O3对其逆转耐药倍数,免疫细胞化学法（PV法）检测细胞P-糖蛋白（P-gp）、Caspase3表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 SGC7901/ADM细胞对ADM、VCR和TAX均耐药,耐药倍数分别是7.49、7.56及5.33。在As2O3作用48h后,3种抗癌药物对SGC7901/ADM细胞生长抑制50%时的浓度（IC50）明显降低,差异有显著性（F=169.766-1 199.812,q=6.86-70.40,P〈0.01）;耐药细胞经As2O3及环孢素A（CsA）作用后,P-gp表达明显下调,差异有显著性（F=42.870,q=7.70-21.50,P〈0.01）;As2O3高浓度组细胞中Caspase3表达上调,差异有显著性（F=7.220,q=6.63,P〈0.05）。As2O3作用组SGC7901/ADM细胞凋亡率随As2O3浓度增加而增加（F=1 986.63,q=21.23-95.08,P〈0.05）。结论 SGC7901/ADM细胞具有多药耐药性,As2O3可逆转其耐药,并呈剂量依赖性。     

孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药及其分子机制研究

本实验室已研究证实,在细胞水平孤啡肽(OFQ)单独用药可逆转K562/ADM细胞多药耐药。本研究目的是探索OFQ联合阿霉素(ADM)逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及其与MDR1 mRNA/P-gp表达的相关性。MTT法检测OFQ和ADM单药及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达水平,Western blot检测P-gp的相对表达量。结果显示,OFQ(0.1μmol/L)联合ADM(15 mg/L)后细胞增殖抑制率增加,与ADM组比较,48 h数据具有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.01);OFQ联合ADM作用于细胞后MDR1 mRNA/P-gp表达水平明显低于ADM单独用药组(P<0.01),且MDR1 mRNA(r=0.91)及P-gp(r=0.98)表达水平在48 h内呈时间依赖性。结论:OFQ联合ADM可时间依赖性的逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48 h为最佳逆转时间,逆转机制与下调MDR1 mRNA和P-gp的表达量相关。     

Inhibition of bacterial multidrug resistance by celecoxib, a cyclooxygenase-2 inhibitor

Multidrug resistance (MDR) is a major problem in the treatment of infectious diseases and cancer. Accumulating evidence suggests that the cyclooxygenase-2 (COX-2)-specific inhibitor celecoxib would not only inhibit COX-2 but also help in the reversal of drug resistance in cancers by inhibiting the MDR1 efflux pump. Here, we demonstrate that celecoxib increases the sensitivity of bacteria to the antibiotics ampicillin, kanamycin, chloramphenicol, and ciprofloxacin by accumulating the drugs inside the cell, thus reversing MDR in bacteria.     

小檗胺逆转K562/A02细胞耐药性及其机制

为了探讨钙调素拮抗剂小檗胺 (berbamine,BBM )逆转多药耐药的可能性及其机制 ,采用人红白血病细胞K5 6 2及其阿霉素 (ADR)诱导的耐药细胞K5 6 2 /A0 2与不同浓度ADR和BBM共培养后 ,经MTT比色法计算半数抑制浓度 (IC50 )、耐药倍数和增敏倍数 ;用流式细胞术检测细胞内ADR相对含量和P gp表达水平 ;用半定量RT PCR检测mdr1mRNA和抗凋亡基因survivinmRNA表达。结果显示 ,ADR对K5 6 2和K5 6 2 /A0 2的IC50 分别为1 16± 0 .0 9μmol/L和 37.4 7± 1.76 μmol/L ,K5 6 2 /A0 2对ADR的耐药倍数是K5 6 2的 32 .30倍。 5 μmol/L ,10μmol/L和 2 0 μmol/LBBM增加K5 6 2 /A0 2细胞对ADR的敏感性 ,并呈剂量依赖性 ,增敏倍数分别达 2 .0 1,9.6 8和4 1.18倍 (P值均 <0 .0 1)。5 μmol/L或 10 μmol/LBBM作用 2小时 ,使K5 6 2 /A0 2细胞内ADR相对含量增加到1 4 1和 1 5 2倍 (P <0 .0 1) ;作用 72小时使K5 6 2 /A0 2细胞P gp表达分别下降 4 .12 % ( P <0 .0 5 )和 2 7.0 9% (P<0 .0 1) ,且下调mdr1mRNA和survivinmRNA表达。结论 :BBM提高耐药细胞K5 6 2 /A0 2胞内的ADR浓度 ,下调mdr1mRNA、P gp及survivinmRNA的表达 ,使其对ADR的敏感性显著增高 ,从而逆转耐药性。     

干扰素α对胃癌多药耐药细胞耐药性的影响

目的:研究干扰素α对SGC7901/VCR胃癌多药耐药细胞耐药性的影响。方法:用不同浓度的干扰素α(IFN-")(0、103、104、105U/mL)以不同时间(0、12、24、48、96h)长度作用于SGC7901/VCR胃癌多药耐药细胞,收集作用后的细胞,用RT-PCR方法检测多药耐药1(MDR1)基因mRNA随IFN-α作用的不同时间和浓度变化情况,用流式细胞仪检测MDR1蛋白表达随IFN-α作用的不同时间和浓度变化情况。用MTT方法检测经IFN-α(105U/mL)作用SGC7901/VCR细胞48h后,与不经过IFN-α作用的SGC7901/VCR细胞相比耐药谱的变化。结果:随作用时间增加和IFN-α浓度增大,MDR1的mRNA和蛋白的表达都减少,在α=0.05水平均有统计学意义;在IFN-α浓度为105U/mL,作用时间为48h,MDR1的mRNA和蛋白的表达都减少最明显。SGC7901/VCR细胞被IFN-α作用后,其对各化疗药物耐药性的变化为,对长春新碱和羟喜树碱的逆转倍数最大,IC50分别减少了22倍和12倍,最明显;其次为对5-氟尿嘧啶的耐药的变化;对丝裂霉素和卡铂的耐药性的逆转倍数不是很大。结论:IFN-α对SGC7901/VCR胃癌多药耐药细胞的耐药性有部分逆转的作用,但对不同抗癌机制的化疗药物逆转效果不同。其机制可能为抑制MDR1基因RNA的合成,进而影响MDR1蛋白的合成,最终减少MDR1蛋白对化疗药物的泵出效应。     

大蒜素联合红霉素逆转K562／A02细胞多药耐药机理的研究

本研究比较大蒜素、红霉素单用及两药联用逆转K562/A02细胞多药耐药的效果并探讨相关机制,为临床采用低剂量药物联合逆转多药耐药提供实验依据。采用MTT法比较非细胞毒剂量大蒜素、红霉素单用及两药联用对K562/A02细胞多药耐药的逆转效果差异及毒性叠加情况,RT-PCR检测K562/A02细胞mdr1基因表达情况,免疫组织化学法检测P-gp表达情况,流式细胞仪检测细胞内阿霉素平均荧光强度。结果表明:大蒜素1、4、8 mg/L对K562/A02细胞的逆转倍数分别为1.80、2.26、2.82,呈浓度依赖性。红霉素60 mg/L的逆转倍数为2.20,大蒜素与红霉素联用的逆转倍数为4.94,无毒性叠加作用。大蒜素与红霉素单独作用均可下调耐药株mdr1、P-gp的表达,增加胞内阿霉素浓度,而两药联合作用时上述作用明显增强。结论非细胞毒剂量的大蒜素和红霉素联合应用逆转K562/A02细胞多药耐药效果明显强于单用,且无毒性叠加作用。联合用药在下调mdr1/P-gp表达、增加细胞内化疗药物浓度方面具有协同作用。     

Cyclooxygenase-independent down-regulation of multidrug resistance-associated protein-1 expression by celecoxib in human lung cancer cells

The recent finding of a link between cyclooxygenase-2 (COX-2) and p-glycoprotein expression suggests that COX-2 is involved in the development of the multidrug resistance (MDR) phenotype. MDR-associated protein 1 (MRP1) is another major MDR-related protein that is frequently overexpressed in cancer patients, including those with lung cancer. Based on our observation that among four human epithelial lung cell lines both MRP1 and COX-2 protein were highly expressed only in A549 cells, we have investigated whether COX-2 regulates the expression of MRP1. The COX-2 inhibitor celecoxib down-regulated the expression of MRP1 protein in A549 cells, which was accompanied by increased accumulation and enhanced cytotoxicity of doxorubicin, an MRP1 substrate. However, enforced expression of COX-2 in human H460 lung carcinoma cell lines, which express minimal level of COX-2, did not cause enhancement in MRP1 expression. Celecoxib down-regulation of MRP1 was observed independent of COX-2 expression. Moreover, in COX-2-overexpressing cell lines, celecoxib down-regulation of MRP1 was observed only at a concentration far exceeding that required for inhibiting COX activity, and exogenous addition of prostaglandin E(2) did not restore MRP1 expression. These results suggest that celecoxib down-regulates MRP1 expression in human lung cancer cells in a COX-independent manner. The use of celecoxib for adjuvant therapy in lung cancer patients may contribute to their decreased resistance to chemotherapeutic drugs transported by MRP1.