全蝎抗凝活性成分的研究

目的研究全蝎提取液抗凝活性成分。方法以紫外分光光度法测其抗凝蛋白含量,以凝血酶时间(TT)为指标,以提取次数、提取工艺、加热时间、反复冻融及酸碱度考察全蝎提取液抗凝活性成分的稳定性。结果其凝血酶时间与蛋白质含量呈正比关系(γ=0.9988),全蝎以提取2次为宜,对热的稳定性较差,与冻融的次数无关(P>0.05),易受pH的影响,经酸碱处理后的TT有所降低P(<0.05),在3种提取工艺中,冷浸液的活性最强(P<0.01)。结论全蝎提取液的抗凝活性成分易受提取次数、提取工艺、受热时间及pH的影响。     

几种无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响

目的研究全蝎中无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响。方法以凝血酶时间为指标,分别在全蝎提取液中加入相应不同浓度的无机阳离子,考察其对全蝎抗凝活性的影响。结果加入无机阳离子后,明显缩短了全蝎的凝血酶时间(P<0.01)。结论铵离子等无机阳离子对全蝎提取液抗凝活性有明显的影响。     

全蝎抗凝研究进展

正全蝎为节肢动物门蛛形纲钳蝎科动物东亚钳蝎的干燥全体,主产于河南、山东、河北等地。历代医学记载全蝎具有熄风止痉、攻毒散结、通络止痛的功效,是治疗惊风抽搐,中风半身不遂、口眼歪斜、偏头痛,风湿痹病,风疹疮肿之要药。现代医学实验表明全蝎具有抗惊厥,抗癫痫,抗肿瘤,镇痛,抗凝,抗血栓等作用[1]。现将其在抗凝抗血栓方面的研究概况综述如下。     

中药全蝎活性成分、药理作用及临床应用研究进展

全蝎为钳蝎科(Scorpion)动物东亚钳蝎Buthus martensii Karsch的干燥体。全蝎中含有蝎毒、三甲胺、甜菜碱、核苷类等活性成分,具有抗哮喘、抗凝、抗血栓、促纤溶、镇痛、抗肿瘤、抗癫痫等药理作用,临床用于治疗支气管哮喘、白血病、扁桃体炎、乳腺炎、慢性肾炎等疾病。该文通过查阅近年来相关文献,对全蝎化学成分、药理作用和临床应用进行整理和归纳,为全蝎的进一步研究提供新的思路。     

僵蚕抗凝活性成分的稳定性和提取工艺研究

目的研究僵蚕提取液的抗凝活性成分的稳定性和提取工艺。方法以凝血酶时间(TT)为指标,考察僵蚕提取液中抗凝物质对酸、碱、热及反复融冻的稳定性;以紫外分光光度法测其蛋白含量为指标,用L9(34)正交试验考察僵蚕的提取工艺。结果僵蚕水提液的抗凝活性成分对酸、碱、热及反复融冻均具有较高的稳定性;僵蚕水提液的凝血酶时间与蛋白质含量成正相关(P<0.01);以蛋白质含量作为指标,僵蚕用8倍量水润湿15 min,提取2次,每次30 min,即为水煎提取优化工艺。结论为僵蚕抗凝活性成分的水煎提取和后续分离的样品处理提供了实验依据。     

全蝎不同部位抗凝活性的比较研究

目的 采用不同提取方法比较全蝎不同部位的抗凝活性.方法 用凝血酶时间(TT)为指标,测定全蝎不同部位水提醇沉和冻融法提取液的抗凝血活性.结果 水提醇沉法全蝎凝血酶时间长于冻融法,两种提取方法中,各部位的凝血时间比较是蝎尾>蝎全体>蝎身.结论 全蝎抗凝活性成分提取方法中水提醇沉优于冻融法,抗凝活性成分主要集中于蝎尾.     

全蝎胃蛋白酶酶解混合多肽体外抗凝活性研究及其组成分析

目的采用凝胶过滤层析法分离全蝎酶解液的抗凝活性部位,并检测活性部分的分子量分布范围。方法采用紫外检测法、考马斯亮蓝法检测,合并凝胶层析蛋白流分;以APTT凝血时间为指标,检验各组分体外抗凝活性;通过MALDI-TOF-MASS法检测分离部分的分子量分布范围。结果全蝎酶解液通过凝胶过滤层析分得的2组分抗凝效果显著,分子量分布范围850⁵300。结论体外抗凝试验表明:凝胶过滤层析法纯化分离全蝎胃蛋白酶酶解液方法可行,MALDI-TOF-MASS表明活性组分为小分子肽类。     

蝎毒及其分离组分对4种肿瘤细胞生长的抑制作用

目的:观察蝎毒(scorpion venom,SV)及其分离组分对4种人肿瘤细胞(肺癌A549细胞、人低分化胃腺癌细胞BGC-823、人肝癌细胞SMMC-7721、人骨髓细胞白血病细胞HL-60)生长的抑制作用.方法:采用Sephadex G-50柱层析法分离蝎毒;用MTT法检测肿瘤细胞的存活率.分别以丝裂霉素C(MMC)及顺铂(C-DDP)为阳性对照药,以蝎毒及其组分1 mg/L、10mg/L和100mg/L的浓度处理4种人肿瘤细胞,作用48 h后,分别观察蝎毒及其分离各组分对上述细胞的影响.结果:用Sephadex G-50柱层析法分得6个峰(AP Ⅰ1,APⅠ2,APⅡ,APⅢ1,APⅢ2,APⅣ),其中蝎毒组分APⅢ1(antineoplastic polypeptideⅢ1)对HL-60,SMMC-7721,BGC和A549细胞生长有明显的抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05,或P＜0.01).对A549细胞和HL-60细胞具有较好的剂量-效应关系.结论:蝎毒分离6个组分中,蝎毒组分APⅢ1对HL-60,SMMC-7721,BGC和A549 4种人肿瘤细胞具有明显的生长抑制作用,剂量效应关系明显.     

蝎毒多肽有效组分对辐射后M-NFS-60细胞的促增殖作用

目的：观察蝎毒多肽（SVP）及IL-3对M—CSF依赖细胞株M—NFS-60促增殖作用以及对辐射后M—NFS-60细胞增殖的影响。方法：采用Alamar Blue摄入法检测细胞的增殖情况。①选择10个细胞浓度．分别于0h、2h、4h、5．5h和20h,检测细胞的增殖情况,确定M—NFS-60细胞对Alamar Blue反应所需的最佳细胞密度和孵育时间;②采用最佳细胞密度和孵育时间,观察10个SVP组分促进M—NFS-60细胞的增殖作用,筛选出SVP的有效组分;⑧M—NFS-60细胞经60Coγ-射线照射后分别给予生理盐水、SVP、IL-3、SVP＋IL-3处理48h,测定细胞增殖情况。结果：①M—NFS-60细胞的接种密度为5×10^4cells／mL时,对AlamarBlue的还原能力最强,孵育时间8h后,M—NFS-60细胞对Alamar Blue的还原率开始增强,72h达最高;②从10个SVP组分中筛选出Ⅱ3、Ⅳ能明显促进M—NFS-60细胞的增殖;③SVPⅡ3、Ⅲ3、Ⅳ或IL-3处理辐射后的细胞48h,细胞的增殖率（％）分别为121．58±2．62（113）、123．39±4．45（Ⅲ3）、123．51±5．04（Ⅳ）、140．12±1．68（IL-3）,与空白对照组（100．00±0．01）相比差异有显著性（P〈0．01）;113、Ⅲ3、Ⅳ分别与IL-3联用处理细胞48h后的增殖率分别为163．98±9．20（113±IL3）、159．89±8．31（Ⅳ-IL3）、148．92±9．74（Ⅲ3±IL3）,与SVP处理组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论：蝎毒中存在促进M—NFS-60增殖的有效多肽组分,这些多肽组分能明显促进辐射后M—NFS-60细胞的增殖,并与IL-3对辐射后M—NFS-60细胞的增殖具有协同作用。     

蝎毒与吗啡中枢镇痛作用效果比较

蝎毒及其提取物有明显的镇痛作用，我们对其中枢镇痛作用效果与吗啡进行了比较。向大鼠中脑导水管周围灰质（PAG）内微量注射蝎毒（scorpionvenom，SV）和吗啡（morphine），以热辐射甩尾法为指标，观察比较二者中枢镇痛作用效果。结果表明：向大鼠PAG内恒速注射0．025％～0．10％SV0．5μL（相当于0．5μg／kg～2μg／kg）即出现痛阈升高，20min达峰值（痛阈最大提高150％以上），与对照组比较有显著差异（P＜0．01），而欲使大鼠痛阈提高150％，PAG内注射吗啡的用量约为10μg／kg。提示SV有很强的中枢镇痛作用，作用强于吗啡4倍以上。     

蝎毒多肽对小鼠与家兔凝血功能的影响

目的检测蝎毒、蝎毒多肽对家兔和小鼠凝血功能的影响。方法分别采用目测法、镜检计数法、血液学分析仪测定家兔和小鼠的出血时间、凝血时间、血小板计数及血浆纤维蛋白原，分析其注射蝎毒、蝎毒多肽前后的变化。结果二均能使出、凝血时间延长，血小板数量降低，血浆纤维蛋白原减少。蝎毒多肽降低血小板数目和血浆纤维蛋白原含量的作用强于蝎毒。结论蝎毒多肽对凝血系统的影响大于蝎毒。     

蝎毒和蝎毒多肽对家兔血小板聚集的影响

目的观察蝎毒多肽(PSV)和蝎毒(SV)对家兔血小板聚集的影响。方法麻醉家兔,颈动脉取血制备富含血小板血浆,分别加入PSV和SV,用CHRON0-IDG 540VS双通道血小板聚集仪测定二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集作用。结果PSV对血小板聚集具有明显的抑制作用,且呈明显的量效关系,当PSV的浓度在10．0～15．0mg／ml时,血小板聚集受抑制最为显著;SV对血小板聚集受其剂量及作用时间影响很大,但总的趋势为较低浓度时促进血小板聚集,较高浓度时则抑制血小板聚集。结论PSV对血小板聚集起抑制作用,且呈明显的量效关系;SV对血小板聚集的影响在高浓度和低浓度时产生的效应相反,推测由于SV成分较为复杂,各成分之间互相作用机制还需深入研究。     

基于毒素多肽BmK NaTx-13的全蝎质控工艺研究

目的 基于毒素多肽建立一种新型的全蝎质量检测工艺。方法 从东亚钳蝎毒液中分离得到了一种新型钠通道毒素BmK NaTx-13,制备并鉴定了BmK NaTx-13的特异性抗体,并通过竞争性ELISA法检测全蝎提取物中的BmK NaTx-13的含量。结果 建立的竞争性酶联免疫吸附法可快速检测全蝎提取物中的BmK NaTx-13的含量并呈现良好的浓度线性依赖。结论 该研究为全蝎质控提供了一种快速免疫检测方法,为提升全蝎入药质量标准提供了借鉴。      

动物类生药的鉴别研究——6.全蝎的鉴别

全蝎粉末显微特征主要为两种刚毛及体壁碎片,体壁碎片上有多边形纹理、圆形乳头状突起及毛窝。纸层析用正丁醇—冰醋酸—乙醇—水(4:1:1:2)做展开剂,0.5％茚三酮显色,显3个斑点,只Rf值为0.26、0.34、0.45。纸上电泳爪甲酸—乙酸缓冲液,200V恒压电泳2.5小时,0.5％茚三酮显色,显7个斑点,泳动值为6.4、11.3、12.4、14.1、15.2、17.1、17.9(cm)。紫外光谱测定在258.9nm处显示最大吸收。     

板蓝根有效组分的抗病毒活性研究

目的 考察板蓝根不同部位提取物,即30％醇沉多糖Ⅰ、50％醇沉多糖Ⅱ、70％醇沉多糖Ⅲ,及板蓝根水提取液的大孔树脂水洗脱部位Ⅳ、10％醇洗脱部位Ⅴ、30％醇洗脱部位Ⅵ、50％醇洗脱部位Ⅶ,以及分得的单体落叶松脂素-4,4'-二-O-β-D-二葡萄糖苷(CB) Ⅷ、异落叶松脂醇Ⅸ的抗甲型流感病毒A/PR8/34(H1N1)活性.方法 采用抗甲型流感病毒A/PR8/34(H1N1)体内实验,通过计算肺指数、肺指数抑制率等,综合检测板蓝根提取部位及单体化合物的抗甲型流感病毒作用.结果 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ及Ⅸ可明显延长甲型流感病毒感染小鼠存活天数,与病毒模型组比较,具有显著性差异(P＜0.05),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ及Ⅸ可减少感染小鼠死亡率;同时Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ及单体Ⅷ可明显降低肺指数(P＜0.05),肺指数抑制率分别为31.4％、28.5％、30.5％和34.0％.结论 板蓝根有效组分Ⅱ-Ⅸ对甲型流感病毒感染小鼠具有较好的保护作用,提示其中化合物CB可作为抗病毒的主要有效及指标性成分.