肿瘤模型中B7-H4和BTLA的异常表达

目的:通过检测肿瘤组织和肿瘤抗原诱导的小鼠脾脏巨噬细胞B7-H4表达、同时检测荷瘤小鼠T细胞BTLA的表达,以进一步探讨这一对新的负免疫调节分子在肿瘤免疫逃逸机制中的作用。方法:应用RT-PCR检测体外培养肿瘤细胞株3LL和Renca、荷瘤后小鼠肿瘤组织B7-H4mRNA以及荷瘤小鼠T细胞BTLA mRNA表达的改变;应用流式细胞术检测荷瘤小鼠脾脏巨噬细胞和肿瘤可溶性抗原诱导的正常小鼠脾脏巨噬细胞B7-H4表面蛋白表达的改变;应用免疫组化技术检测荷瘤后小鼠肿瘤组织B7-H4表面蛋白表达的改变。结果:在体外培养的肿瘤细胞株3LL和Renca上未检测到B7-H4mRNA的表达,小鼠成瘤后肿瘤组织和脾脏巨噬细胞在mRNA水平和蛋白质水平上均高表达B7-H4。另外荷瘤小鼠的T细胞较正常小鼠T细胞BTLA的表达明显增高。在体外肿瘤抗原刺激下,正常小鼠脾脏巨噬细胞B7-H4表达量明显上升;而用正常同样组织来源抗原刺激时,正常小鼠脾脏巨噬细胞B7-H4表达量未见显著改变。结论:B7-H4和BTLA这对协同刺激分子的异常表达可能在肿瘤逃逸免疫应答过程中起调节作用。     

弥漫大B细胞淋巴瘤中B7-H1临床表达水平分析

目的 对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中B7-H1的表达水平进行分析.方法 收集DLBCL患者病理活检或手术切除的肿瘤组织标本50例,另收集瘤周正常淋巴组织标本50例作为对照.采用Western Blot法检测B7-H1在瘤周正常淋巴组织与DLBCL肿瘤组织中的表达水平;采用流式细胞仪检测瘤周正常淋巴组织与DLBCL肿瘤组织中B7-H1和调节性T细胞(Treg)的表达水平.结果 Western Blot检测结果显示,B7-H1在DLBCL肿瘤组织与瘤周正常淋巴组织中均有表达,与瘤周正常淋巴组织比较,DLBCL肿瘤组织中B7-H1的表达水平较高.HLA-DR+CD14+巨噬细胞在DLBCL肿瘤组织中表达B7-H1的比例较瘤周正常淋巴组织高(P﹤0.05).与瘤周正常淋巴组织相比较,DLBCL肿瘤组织中(包括IPI值≥2分与IPI值﹤2分)pDC、Treg、mDC与调节性T细胞(CD4+/CD8+)的比例较高(P﹤0.05).结论 B7-H1在DLBCL患者的淋巴组织中呈高表达,提示B7-H1与淋巴瘤细胞的免疫逃逸有关,从而造成了DLBCL细胞免疫平衡的失调.     

共刺激分子B7-H3在人食管鳞癌中的表达及临床意义

目的 分析人食管鳞癌组织中B7-H3分子的表达与患者临床病理因素以及术后生存时间之间的关系。方法 采用免疫组织化学法检测82例人食管癌组织、对应癌旁正常食管组织及食管鳞状上皮不典型增生组织中B7-H3分子的表达以及CD8+T淋巴细胞的浸润程度。结果 食管癌组织中B7-H3蛋白的阳性表达率为98.8%(81/82),而B7-H3在癌旁及鳞状上皮不典型增生组织中几乎不表达。B7-H3的表达与患者年龄、肿瘤浸润深度及TNM分期相关,差异有统计学意义（P<0.05）,与肿瘤组织中CD8+T淋巴细胞浸润程度呈负相关(P<0.05),与患者预后呈负相关（P<0.05）。结论 B7-H3在食管癌中过表达,和肿瘤的进展密切相关。食管癌中B7-H3分子的表达可能参与了抑制食管癌组织内CD8+T细胞功能,促使肿瘤细胞逃避免疫监视,提示B7-H3在食管癌诊断、判断预后及靶向治疗中具有潜在的临床应用价值。     

协同刺激分子B7-H4在食管癌前病变组织中的表达及临床意义

目的：研究协同刺激分子B7同系物4（B7-H4）在人食管癌前病变组织中的表达变化,探讨其在食管鳞状细胞癌形成中的临床意义。方法：收集内镜切除的食管组织标本58例,其中正常组织16例,低级别上皮内瘤变（LGIN）23例,高级别上皮内瘤变（HGIN）19例。通过苏木素-伊红（HE）染色评价食管组织病理变化。分别采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测B7-H4 mRNA在食管组织的表达;免疫组织化学和Western blot检测B7-H4蛋白在食管病变组织中的表达;酶联免疫吸附法（ELISA）检测食管组织细胞因子IL-6、IL-10和IFN-γ的表达,并分析各细胞因子与B7-H4蛋白表达的相关性。结果：免疫组化和HE染色结果提示,B7-H4表达与食管组织病理分级呈显著正相关（P < 0.01）。qPCR结果提示,与正常食管组织相比,食管癌前病变组织B7-H4 mRNA表达无显著改变（P > 0.05）。而Western blot实验结果显示,与正常食管组织相比,食管癌前病变组织B7-H4蛋白表达显著升高（P < 0.05）。Westernblot和ELISA实验结果显示B7-H4表达与IL-6表达呈正相关（P < 0.01）。结论：随着食管癌前病变病理分级的提高,B7-H4蛋白的表达逐渐上调,B7-H4可能与IL-6相互作用促进了食管鳞状细胞癌的发生发展。     

封闭B7-H1分子对肿瘤浸润树突状细胞介导T细胞免疫功能的影响

目的: 研究肿瘤浸润树突状细胞(tumor-infiltrating dendritic cell,TIDC)及脾脏树突状细胞(splenic dendritic cell,SDC)表面B7-H1、B7-1、B7-2分子的表达情况;探讨封闭TIDC及SDC表面B7-H1分子对其介导T细胞免疫功能的影响.方法:CD11c磁珠阳性分选法提取荷瘤小鼠的TIDC及SDC,流式细胞术检测其表面B7-H1、B7-1、B7-2分子的表达情况.TIDC及SDC作为刺激细胞,脾脏T细胞作为反应细胞行混合淋巴细胞反应,同时加入B7-H1抗体或其对照抗体,XTT比色法检测T细胞增殖指数,ELISA法检测T细胞分泌IL-10的量.结果:B7-1及B7-2分子在TIDC表面的表达水平显著低于SDC(P<0.01);B7-H1分子在TIDC及SDC表面皆中度表达,表达水平无明显差异(P>0.05).TIDC刺激T细胞增殖能力显著低于SDC,且诱导T细胞分泌更多的IL-10.封闭DC表面B7-H1分子后,TIDC刺激T细胞增殖能力显著提高(P<0.01),且诱导T细胞分泌IL-10的量明显减少(P<0.01);SDC刺激T细胞增殖能力及诱导T细胞分泌IL-10的量无明显变化(P>0.05).结论:封闭DC表面的B7-H1分子能显著提高TIDC活化T细胞的能力,可能解除TIDC介导的肿瘤免疫抑制.     

B7-H1及其受体与肿瘤免疫逃逸

B7-H1是近年来发现的B7家族的一个新成员。B7-H1与相应受体结合后，对T细胞、B细胞的功能有重要影响。近期研究发现许多肿瘤的细胞表面亦可大量表达B7-H1和相应受体：肿瘤细胞表达的B7-H1与其受体结合能抑制机体的特异性细胞免疫和体液免疫，参与肿瘤的免疫逃逸。阻断B7-H1与其受体的结合将是肿瘤治疗的一条新途径。现综述近年来B7-H1与肿瘤免疫逃逸的研究进展。     

B7-H1及其受体与肿瘤免疫逃逸

B7-H1是近年来发现的B7家族的一个新成员.B7-H1与相应受体结合后,对T细胞、B细胞的功能有重要影响.近期研究发现许多肿瘤的细胞表面亦可大量表达B7-H1和相应受体.肿瘤细胞表达的B7-H1与其受体结合能抑制机体的特异性细胞免疫和体液免疫,参与肿瘤的免疫逃逸.阻断B7-H1与其受体的结合将是肿瘤治疗的一条新途径.现综述近年来B7-H1与肿瘤免疫逃逸的研究进展.     

负性共刺激分子B7-H1和B7-H4在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的:检测结直肠癌组织中负性共刺激分子B7-H1和B7-H4的表达、T细胞亚群的浸润情况,探讨其临床意义。方法:收集苏州大学附属第四医院2003年1月至2003年12月50例结直肠癌患者的癌组织标本以及5例患者的癌旁组织标本,免疫组织化学法检测结直肠癌组织中B7-H1和B7-H4的表达以及T细胞亚群的浸润,分析B7-H1、B7-H4的表达与结直肠癌患者临床病理特征及T细胞浸润的相关性,分析B7-H1、B7-H4的表达和CD3+T、CD8+T淋巴细胞浸润程度与患者预后的相关性。结果:结直肠癌组织高表达B7-H1(44%)和B7-H4(56%),而癌旁组织不表达(P<0.01)。B7-H1在结肠癌组织中的表达较直肠癌显著升高(P<0.05);随着Duke’s分期的升高,B7-H4的表达水平也呈上升趋势(P<0.05)。结直肠癌组织中B7-H1的表达与CD3+T细胞浸润呈负相关(P<0.05),但与B7-H4的表达无关。B7-H1的表达水平与患者预后呈负相关(P<0.05),且B7-H1和B7-H4同时高表达的患者总体生存率显著降低(P<0.05)。结论:负性共刺激分子B7-H1和B7-H4在人结直肠癌组织中高表达,并与患者总体生存率相关,两者的共同检测对结直肠癌诊断和预后判断具有一定的临床价值。     

非小细胞肺癌组织B7-H3和CD133表达及其临床意义的研究

目的:探讨共信号分子B7-H3在人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系和组织中的表达及其临床意义,以及同CD133的关系。方法:利用逆转录-聚合酶链反应、流式细胞术及蛋白质印迹技术检测B7-H3在肺癌细胞系中的表达;采用免疫组化SP法检测102例NSCLC、25例癌旁组织及24例肺部良性病变组织中B7-H3及CD133的表达,并采用Image-ProPlus软件测定每张切片的平均积分光密度。结果:无论是mRNA水平还是蛋白水平,5个肺癌细胞系中均见B7-H3表达;B7-H3和CD133在NSCLC组织中的表达高于良性病变组织及癌旁组织,P<0.001;B7-H3的诊断灵敏度68.63%,特异度91.49%,CD133的诊断灵敏度54.90%特异度97.87%;CD133表达与肺癌细胞分化程度相关,分化差者阳性率高于分化好者,P=0.02;Cox回归分析显示,B7-H3阳性、CD133阴性表达患者的总体生存期明显优于B7-H3阴性及CD133阳性表达者,P<0.001。结论:B7-H3在NSCLC组织中过度表达,可能是NSCLC诊断和治疗的重要靶点,CD133与肿瘤细胞分化程度有关,它的表达与B7-H3呈负相关;B7-H3阴性或CD133阳性是NSCLC独立的风险因子。     

B7-H3沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化及生物学功能的影响

目的:探讨B7-H3沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化及生物学行为的影响。方法:通过脂质体Lipofectamine TM 2000转染B7-H3 siRNA干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3到乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选后获得B7-H3沉默细胞株MDA-MB-231-ShB7-H3,利用qRT-PCR及Western blot分别检测对照组(WT)、无关干涉组(ShNC)和B7-H3干涉组(ShB7-H3)细胞中B7-H3、EMT标志分子mRNA及蛋白表达水平;利用Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;利用MTT细胞增殖实验评价各组细胞增殖情况。结果:通过qRT-PCR和Western blot证实B7-H3沉默表达的MDA-MB-231细胞株构建成功;与对照组细胞相比,B7-H3沉默表达抑制MDA-MB-231细胞EMT进程,上皮细胞标志分子E-cadherin和ZO-1表达上调,而间质细胞标志分子vimentin和αSMA表达下调;Transwell实验及MTT细胞增殖实验结果表明B7-H3沉默抑制MDA-MB-231细胞迁移、侵袭及增殖能力。结论:我们的研究结果强调了B7-H3在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的重要作用,并提示B7-H3与乳腺癌细胞EMT、转移密切相关,并为以B7-H3为靶点的乳腺癌转移治疗提供初步的实验及理论基础。