中国人Wilson病患者ATP7B基因外显子突变研究

目的 对Wilson病(WD)患者ATP7B基因外显子进行PCR扩增测序,研究其突变的特点。方法 对41例患者(WD组)、10例健康者(对照组)以及1个WD家系(先证者女儿及其父母3人)提取基因组DNA,PCR扩增外显子相关片段,并对扩增产物进行直接测序。结果 健康对照组未见异常,WD组发现11例患者存在外显子8点突变,其中6例患者呈Arg778Leu的复合杂合突变;4例患者存在外显子12点突变,其中2例存在Arg952Lys突变。在Wilson病家系中,先证者女儿携带2种杂合性突变,分别是父源的外显子8中Arg778Leu杂合性突变和母源的外显子13中Pro992Leu杂合性突变,其父母均为表型正常的杂合子携带者。结论 中国人WD患者中ATP7B基因外显子8、12为突变的热点区,但也存在其他外显子的突变,如外显子13。     

高血压病患者胰岛素受体基因第20外显子突变的检测

目的 检测高血压病患者是否存在胰岛素受体基因第２０外显子突变。方法 以高血压病患者为观察对象，用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测胰岛素受体基因突变。结果 在１１６例原发性高血压患者中，未发现胰岛素受体基因第２０外显子存在突变。结论 高血压患者胰岛素受体基因第２０外显子突变可能并不常见。     

45例国人Wilson病基因第8外显子突变热区检测和序列分析

目的 检测中国人群Wilson病基因(ATP7B)第8外显子突变频率并进行序列分析。方法 采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)银染技术初步研究了30例患者和15例正常人ATP7B基因第8外显子突变频率，然后对突变个体直接测序，进而与临床表型作相关分析。结果 SSCP发现有6例患者出现第8外显子泳动异常(20％，6／30)，且均为杂合子；4例患者既存在2273G→T，又同时伴有2250C→G及2280G→T；前者是错义突变(即Arg778Leu)，累及Tm4区，后者由于氨基酸组成均为Leu仅是一种保守改变，对Tm4区无影响；1例患者同时存在2099A→G、2273C→T、2250C→G及2280G→T4个位点突变，前两者分别影响Tm3、Tm4区，后两者认为是保守改变；1例患者2245G insertion是一种新的突变类型，影响Tm4区。结论 提示中国人ATP7B基因第8外显子可能为一突变热区，2273G→T(Arg778Leu)是一种常见的突变类型，Tm4是常见受累功能区之一。     

人恶性卵巢上皮肿瘤p53基因5～8外显子突变的研究

为探明ｐ５３基因突变与恶性巢上皮肿瘤发生发展的关系,采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法对４０例恶性卵巢上皮肿瘤及３０例良性卵巢上皮肿瘤（对照）的ｐ５３基因第５￣８外显子突变情况进行了检测。结果显示：恶性卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因５￣８外显子点突变率为３０％,而３０例良性卵巢上皮肿瘤中未发现ｐ５３基因突变。结论：在卵巢良性肿瘤向恶性转化过程中,ｐ５３基因突变可能起着重要作用。     

家族性与散发性帕金森病Parkin基因4号外显子突变的差异性研究

目的: 通过聚合酶链式反应(PCR)、基因测序技术及TDI-FP技术,检测散发性与家族性帕金森病Parkin基因4号外显子突变的差异性,探讨Parkin基因突变在PD发病机制中的作用,同时建立一种新的突变检测方法.方法: 以36例家族性及114例散发性PD患者为实验对象,150名正常健康人为阴性对照,通过PCR扩增含Parkin基因4号外显子的DNA片段,电泳分析初次筛选片段缺失者.基因测序技术对无缺失片段进行克隆、测序,筛选出突变型及野生型.最后应用TDI-FP技术检测R110或TAMRA标记ddNTP的FP值,鉴定Parkin基因4号外显子的基因点突变型.结果: 在36例家族性PD患者中共发现10例4号外显子缺失突变,占27%,点突变有4例,占11%;114例散发性PD患者中仅有2例4号外显子缺失突变,占1%,而点突变则有48例,占42%.150例阴性对照组中无缺失突变,点突变10例,占6%.结论: Parkin基因突变可能是PD发病的重要因素之一,而散发性与家族性帕金森病具有不同的突变类型,可能与其具有不同的发病机制相关联.     

中国Darier病患者ATP2A2基因的5个突变及86例报道的文献综述

Darier病(DD)是一种常染色体显性遗传性皮肤病,其特点是表皮细胞间失去附着性(棘层松解)和异常角质化。迄今已确认至少有140个ATP2A2基因的突变是DD的遗传学基础。本文作者报道3例家族性和2例散发性中国DD患者ATP2A2基因的4个错义突变(N767D,M494I,M494L,C318F)及1个剪切位点突     

抑癌基因p53第5～8外显子突变与喉鳞癌关系的研究

为探讨抑癌基因ｐ５３基因突变与喉鳞癌之间的关系,应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染系统,检测６０例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因ｐ５３基因第５￣８外显子的突变情况。结果：６０例喉鳞癌组织中,发生４７例第５￣８外显子迁移率异常的ＳＳＣＰ区带,总的突变率为７８．３％。ＳＳＣＰ阳性病例在外显子５、６、７、８中的突变率由高到低依次为Ｅｘｏｎ５、Ｅｘｏｎ７、Ｅｘｏｎ８、Ｅｘｏｎ６。提示第     

PCR—SSCP—EB染色法检测大肠癌中P53基因外显子5—8的突变

应用一种建立的非放射性ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）技术－ＥＢ（溴化乙锭）染色法对３０例大肠癌组织中Ｐ５３基因外显子５￣８的突变进行了检测，结果显示突变率达６６．７％（２０／３０），表明Ｐ５３基因突变在大肠癌的发生过程中可能起了重要作用。实验还表明本方法具有简单、快速、敏感、安全、重复性好等特点和推广应用价值。     

散发性早发帕金森病parkin基因1、2号外显子突变的研究

[目的]研究parkin基因1、2号外显子突变与散发性早发帕金林病发病的关系。[方法]应用聚合酶链反应（PCR）、琼脂糖凝胶电泳和单链构象多态性（SSCP）方法检测52例散发性早发帕金森病病人外周血白细胞DNA的parkin基因1、2号外显子突变情况,并对SSCP有异常泳动外显子进行DNA测序。[结果]发现1例病人（1.9％）存在parkin基因2号外显子缺失,2例病人（3.8％）分别存在parkin基因1、2号外显子PCR产物 SSCP发生泳动变位,测序发现1号外显子为杂合突变（T103C）,2号外显子 为纯合突变（G237C）。[结论]parkin基因1、2号外显子突变可能与部分散发性早发帕金森病发病有关。     

卵巢恶性肿瘤p53基因5—7外显子突变及蛋白阳性的生物学意义

目的比较研究卵巢恶性肿瘤p53基因第5,6,7外显子突变与p53基因蛋白的过度表达和临床生物学行为的相关性.方法对50例卵巢恶性肿瘤及10例良性肿瘤石蜡切片进行p53蛋白免疫组化检测,其中23例卵巢恶性肿瘤的新鲜标本进行了p53基因第5,6,7外显子PCRSSCP检测.结果50例卵巢恶性肿瘤中12例p53蛋白阳性表达24%(12/50).上皮癌29%(9/28)生殖细胞肿瘤10%(1/10)间质细胞瘤25%(2/8),转移瘤25%(1/4)在23例标本PCRSSCP检测中突变率为35%(8/23)第5,6,7外显子突变率分别为9%(2/23).9%(2/23).17%(4/23).两者均阳性者为2例,即PCR-SSCP检测和蛋白表达均阳性第6,7外显子各1例.结论①卵巢恶性肿瘤存在p53基因突变蛋白的过度表达,但突变与蛋白阳性表达并非完全一致;②p53基因突变及其蛋白过度表达与卵巢恶性肿瘤组织类型和临床分期无明显相关件.     

中国人群迟发性耳聋家系及散发病例凝血因子C同源物基因突变分析

目的分析中国常染色体显性遗传非综合征性耳聋（DFNA）群体凝血因子C同源物（COCH）基因突变发生率及突变谱。方法在我国汉族人群中收集26个DFNA家系、19个遗传方式不明的迟发性耳聋小家系、22例迟发性耳聋散发病例和100例正常对照者的临床资料及外周静脉血并提取DNA,采取PCR扩增后直接测序的方法进行COCH全序列突变分析。结果在1个巨大DFNA家系中发现COCH 1625G〉A杂合突变,使原来542位的半胱氨酸突变成酪氨酸（C542Y）;在1个遗传方式不明的迟发性耳聋小家系中发现COCH 1535 T〉C杂合突变,使512位蛋氨酸突变为苏氨酸（M512T）。进化保守性分析提示C542、M512在小鼠、牛、鸡和斑马鱼中高度保守。2个家系成员的表现型与基因型共分离。100例正常对照未见COCH突变。结论COCH M512T和C542Y突变是这2个迟发性耳聋家系患者致聋的分子病因。     

美尼尔与美尼尔病

美尼尔生活在法国大革命之后医学繁荣时代。他长期从事耳科学实践活动,发现了传统上认为是卒中型脑充血的内耳疾病。尽管这种以他名字命名的疾病─美尼尔病被后世误解,但是,他的发现终于被科学发展所证实。现今人们正在为深入研究美尼尔病作不懈的努力,以期彻底将之征服。     

冠心病并高同型半胱氨酸血症患者甲硫氨酸合成酶基因突变的研究

目的: 研究中国人冠心病并高同型半胱氨酸血症患者甲硫氨酸合成酶(MS)基因突变的情况.方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)以及DNA测序技术,检测60例患者MS基因中与结构和功能密切相关的10个外显子的点突变情况.结果:除已知的31外显子区3个SNP位点比较常见外,还发现了1个新的点突变,3 869位为A/G杂合子(A→G的错义突变可使1 195位氨基酸由异亮氨酸变为缬氨酸),此患者的血浆同型半胱氨酸血水平明显高于正常,为30.93 μmol·L-1.此外发现32内含子1个新的G/T多态性.结论:MS某种基因突变可能是影响MS酶功能及高同型半胱氨酸血症的原因之一.     

家族性阿尔茨海默病早老素-1基因突变位点的检测

目的：探讨早老素－1基因突变在家族性阿尔茨海默病（FAD）发病中的作用。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）、变性高效液相（DHPLC）及DNA直接测序技术检测技术,对130人的阿尔茨海默病（AD）家系和50例正常对照组的早老素－1（PS－1）基因第4、5外显子进行了检测。结果：在早老素基因的第5外显子上发现除5例AD患者外,还有4例家系内正常人（Ⅳ－30、37、41、43）PCR－SSCP出现泳动异常。DHPLC检测进一步验证以上9例均表现双峰,提示可能有突变存在。DNA序列分析表明,这9例的早老素－1基因第5外显子的136号密码子发生了GCT→GGT错义突变,使氨基酸由丙氨酸变为甘氨酸（Ala136Gly);第4外显子未发现突变。家系内其他人及正常对照组的PS1基因第4、5外显子经以上检测均未发现异常。结论：PS1基因第5外显子的突变点可能为中国FAD患者早老素基因突变位点之一。     

梅尼埃病患者的垂直半规管功能分析

目的 评估梅尼埃病(MD)患者垂直半规管功能的变化并分析梅尼埃病患者垂直半规管功能与水平半规管功能的相关性.方法 应用自主研发的SRM-Ⅳ全自动化良性阵发性位置性眩晕诊断治疗系统,对45例正常人及66例梅尼埃病患者通过180°非阻尼摆动试验行垂直半规管功能检测,在诱发的同时记录下相应的眼震视频和眼震曲线,并采集垂直眼震的方向及其慢相速度(SPV)参数.计算出右前半规管与左后半规管、左前半规管与右后半规管两对垂直半规管垂直眼震平均慢相速度两侧不对称比(CP).结果 ①66例梅尼埃病患者垂直眼震引出率为96.97％ (128/132),两对垂直半规管CP值范围在0.13％ ～89.00％,不论是LARP垂直平面还是RALP垂直平面,MD患者诱发出的垂直眼震平均慢相速度(ASPV)均小于正常人,差异有统计学意义;②180°非阻尼摆动试验检测出的CP之减弱方向与冷热试验之CP方向一致者为63.64％.结论 梅尼埃病患者不仅有水平半规管功能异常,同时也存在垂直半规管功能异常.运用180°非阻尼摆动试验可成功诱发垂直眼震,联合冷热试验,有助于全面了解梅尼埃病患者半规管功能.     

中药联合氟桂利嗪治疗梅尼埃病临床对照研究

目的:探讨中药联合氟桂利嗪治疗梅尼埃病的疗效与安全性.方法:将80例梅尼埃病患者随机分为实验组(中药汤剂+氟桂利嗪)和对照组(氟桂利嗪+安慰剂),每组40例,连续治疗4周,治疗结束后随访6个月;比较两组治疗后主要症状和听力及语言识别能力的改善情况,同时观察比较治疗前、后6月内疾病发作频率以及不良反应.结果:与治疗前比较...     

妊娠期肝内胆汁淤积症与ABCB4基因外显子8突变的相关性研究

目的:研究ABCB4基因外显子8突变的情况,以探讨其与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)发病的关系。方法:对15例中国皖南地区妊娠期肝内胆汁淤积症患者抽外周血提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)结合DNA序列测定的方法对ABCB4基因外显子8的突变情况进行筛查,并确定其具体的突变性质。结果:15例标本均扩增出AB-CB4基因外显子8的目的片段。对DNA序列测定结果进行分析,发现其中有5例(33.33%)存在c.711A>T杂合性突变。结论:ABCB4基因外显子8的突变可能与中国人群ICP的发病存在一定的相关性。