复方昆明山海棠颗粒对小鼠淋巴细胞体外增殖活化影响的研究

目的：研究复方昆明山海棠颗粒（composite tripterygium hypoglaucum hutch，CTHH）对小鼠脾淋巴细胞增殖、活化标志CD69和CD25及细胞因子IL-4及γ-IFN的影响，为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法：无菌分离小鼠脾淋巴细胞，加入不同浓度的复方昆明山海棠颗粒溶液，MTT法检测ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖；流式细胞仪检测活化标志CD69及CD25；酶联免疫法检测细胞因子IL-4及γ-IFN。结果：CTHH对脾淋巴细胞增殖活化及分泌均有抑制作用。     

黄芩苷对T淋巴细胞增殖与活化的影响

目的:研究黄芩苷对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并探讨其免疫调节机制。方法:以刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA) 离子霉素(ionomycin,Ion)诱导小鼠淋巴细胞中T细胞增殖,用MTT法测定细胞增殖;利用ConA或PMA诱导T细胞激活,流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子与CD25分子表达情况。结果:在ConA或PMA Ion刺激48h后,小鼠淋巴细胞MTT吸光度显著高于对照组(P<0.01)。黄芩苷(10~40uM)显著降低了ConA或PMA Ion引起的MTT吸光度增加(P<0.01)。在ConA或PMA刺激18h后,小鼠T细胞CD69表达率显著提高(P<0.01),ConA或PMA刺激36小时后,T细胞CD25表达率显著提高(P<0.01),黄芩苷(10~40uM)能显著降低活化(P<0.01)。结论:黄芩苷可以显著抑制多克隆刺激剂ConA或佛波醇酯(PMA)介导的小鼠T细胞的活化和增殖。     

淫羊藿提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料CFDA-SE染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果MTT法检测淫羊藿提取物在50mg/L时细胞存活率达52.36%。ConA作用6h后,对照组CD69 表达率为(4.61±0.85)%,ConA组CD69 T细胞的比率上升至(38.30±2.54)%,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L时均抑制ConA诱导的CD3 T淋巴细胞CD69的表达(P<0.01),其表达率分别下调为(36.16±2.14)%,(30.5±1.72)%,(15.99±0.87)%。培养48、72后,对照组增殖指数(PI)分别为1.01±0.01和1.05±0.01,ConA组PI分别达到1.42±0.01、2.32±0.01,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L均抑制T淋巴细胞增殖(P<0.01),48h时PI分别为1.28±0.01、1.26±0.01、1.21±0.01;72h时PI分别为2.30±0.03、2.13±0.02、2.10±0.01。结论淫羊藿提取物能明显抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性。     

昆明山海棠片对小鼠淋巴细胞体外增殖活化影响的研究

目的：研究昆明山海棠片对小鼠脾淋巴细胞增殖、活化标志CD69和CD25及细胞因子IL-4及IFN-γ的影响。方法：无菌分离小鼠脾淋巴细胞,加入不同浓度的昆明山海棠溶液,MTT法检测刀豆蛋白A刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖;流式细胞仪检测活化标志CD69及CD25;酶联免疫法检测细胞因子IL-4及IFN-γ。结果：昆明山海棠片对脾淋巴细胞增殖活化及分泌均有抑制作用。     

雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

目的:研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL-2及IFN-γmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA的表达的影响.结果:TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL-2及IFN-γmRNA的表达.结论:TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一.     

人参皂苷Rb1、Rg1与5-氟脲嘧啶对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:探讨人参皂甙Rb1、Rg1与5-氟脲嘧啶联合应用对荷瘤小鼠免疫功能的交互影响作用。方法:建立荷瘤小鼠模型,随机分为6组,人参皂甙Rb1和Rg1灌胃给药,每天0.2 mL/20 g,每日1次;5-氟脲嘧啶腹腔注射,每天0.2 mL/20 g,每日1次;模型组给予生理盐水0.2 mL/20 g,每日1次。10 d后检测NK细胞杀伤功能、T淋巴细胞增殖功能和腹腔巨噬细胞TNF-α含量。结果:5-氟脲嘧啶可降低NK细胞杀伤功能、T淋巴细胞增殖功能和腹腔巨噬细胞TNF-α含量(P<0.05);人参皂苷Rb1能够显著提高NK细胞功能和TNF-α含量,并可拮抗5-氟脲嘧啶的抑制作用(P<0.05),但对T淋巴细胞增殖功能无影响(P>0.05);人参皂苷Rg1能够显著提高T淋巴细胞增殖功能和TNF-α含量,并可拮抗5-氟脲嘧啶的抑制作用(P<0.05),但对NK细胞功能无影响(P>0.05)。结论:人参皂甙Rb1、Rg1可拮抗5-氟脲嘧啶对免疫功能的抑制作用。     

通痹灵总碱对T淋巴细胞活化CD71表达的影响

目的 :通痹灵总碱 (TBL)是从通痹灵中提取出来的总生物碱部位。本研究旨在探索TBL对T淋巴细胞活化CD71表达的影响 ,探讨通痹灵免疫调控作用的机理。方法 :对清洁级小鼠T淋巴细胞进行培养 ,体外加入通痹灵总碱 ,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞CD71的表达率。结果 :TBL(10 0 μg mL)对ConA或PDB激活的大鼠T淋巴细胞活化表达CD3+ CD71+ 抗原有明显的下调作用 (P <0 0 1) ,并且随着剂量的增加 ,其抑制作用加强 (P <0 0 1) ,呈明显的量效关系 ;对ConA活化组的作用要强于PDB。结论 :TBL对ConA和PDB诱导活化T细胞的CD71表达率均有明显的抑制作用 ,而且呈明显的量效关系。提示对TBL在T细胞活化信号传导过程有明显作用 ,在治疗RA的过程中可能可以通过影响上游T淋巴细胞的活化 ,调节其细胞免疫机制来达到治疗RA的目的。     

人参皂苷Rb1 Rg1与5-氟脲嘧啶对地塞米松诱导S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞凋亡影响的实验研究

目的:探讨人参皂苷Rb1、Rg1与5-氟脲嘧啶对地塞米松诱导S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响。方法:建立荷瘤小鼠模型,随机分为6组,人参皂苷Rb1和Rg1灌胃给药,每天0.2mL/20g,日1次;5-氟脲嘧啶腹腔注射,每天0.2mL/20g,日1次;模型组给予生理盐水0.2mL/20g,日1次。10天后检测脾细胞凋亡率。结果:人参皂苷Rb1与Rg1均能够抑制地塞米松对脾淋巴细胞诱导的凋亡,5-氟尿嘧啶与人参皂苷Rb1无拮抗作用、与人参皂苷Rg1有拮抗作用。结论:人参皂苷Rb1、Rg1在体内具有抑制地塞米松对脾淋巴细胞诱导的凋亡作用。     

人参皂苷Rg3对鼻咽癌放疗患者CD 80/86表达及细胞免疫功能的影响

目的探讨人参皂苷Rg3对鼻咽癌放疗患者CD 80/86表达及细胞免疫功能的影响。方法选取鼻咽癌放疗患者60例作为研究对象,将其随机分为对照组和观察组,每组30例。放疗结束后分离收集2组患者外周血淋巴细胞。MTT法检测淋巴细胞增殖,流式细胞仪检测淋巴细胞亚群间接ELISA法检测Ig G、Ig M抗体水平及Th1/Th2、CD80、CD86细胞因子表达。结果 Rg3能够促进鼻咽癌放疗患者淋巴细胞增殖,上调CD4+、CD4+/CD8+、Ig G、CD 80/86、Ig M、IL-2,下调IL-6、CD8+,并呈现剂量依赖性。结论人参皂苷单体Rg3能够明显增强鼻咽癌放疗患者外周血淋巴细胞免疫功能,提示其可作为潜在的免疫增强剂应用于鼻咽癌患者放射治疗过程。     

人参皂苷Rb1抑制长春新碱诱导的骨髓基质细胞凋亡

目的:探讨人参皂苷Rb1抑制长春新碱诱导的小鼠骨髓基质细胞凋亡的作用。方法:研究分为正常对照组、长春新碱组、长春新碱凋亡诱导组,不同浓度人参皂苷Rb1(1.0、5.0、10.0、15.0μg/ml)抗长春新碱(5.0μg/ml)对骨髓基质细胞的生长抑制和凋亡组;采用MTT法测定骨髓基质细胞增殖,采用Annexin V/PI双染流式细胞术及Hoechst 33342荧光染色法测定细胞凋亡。结果:人参皂苷Rb1在5.0¹5.0μg/ml浓度范围内显著地降低了长春新碱对骨髓基质细胞的生长抑制;人参皂苷Rb1在5.015.0μg/ml浓度范围内显著地降低了长春新碱对骨髓基质细胞的生长抑制;人参皂苷Rb1在5.0¹5.0μg/ml浓度范围内显著地阻断长春新碱对骨髓基质细胞的生长抑制。人参皂苷Rb1抗长春新碱诱导的骨髓基质细胞凋亡具有浓度依赖性。结论:人参皂苷Rb1能够抑制长春新碱诱导的骨髓基质细胞凋亡。     

HPLC法测定乌参醒脑滴丸中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd

目的建立乌参醒脑滴丸(人参、首乌,银杏叶提取物)中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd的HPLC测定方法。方法采用Diamonsil-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5.0μm),柱温30℃;流动相为乙腈和水进行梯度洗脱,体积流量为1.0mL/min;检测波长为203 nm。结果人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd分别在11.68～58.4μg/mL、15.30～153.0μg/mL、13.25～132.5μg/mL、7.65～76.5μg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,4种皂苷类成分的平均回收率为97.5%(RSD为1.56%)、100.3%(RSD为2.13%)、97.6%(RSD为1.98%)、98.6%(RSD为1.53%)。结论该法灵敏、简便、准确,可用于乌参醒脑滴丸的质量控制。     

人参皂苷对DC2.4吞噬抗原和表达CD40分子的影响

目的:观察人参皂苷Rg1、Rb1及其联合使用对树突状细胞系DC2.4吞噬抗原和表面分子表达的影响。方法:体外培养DC2.4细胞,分别加入不同剂量人参皂苷Rg1、Rb1及Rg1+Rb1孵育24h后,分别加入异硫氰酸荧光素标记的卵白蛋白(FITC-OVA),流式细胞仪检测DC2.4细胞吞噬卵白蛋白抗原的情况;体外培养DC2.4细胞,分别加入LPS和不同剂量人参皂苷孵育24h,流式细胞仪检测细胞表面分子CD40的表达。结果:人参皂苷Rg1、Rb1、Rg1+Rb1在一定浓度可促进DC2.4细胞抗原吞噬的能力;三者均抑制CD40的表达。结论:人参皂苷Rg1、Rb1可通过影响DCs的抗原吞噬功能来发挥免疫调节作用;Rg1、Rb1联合使用与单独应用比较无明显差异。     

Effects of ginsenoside Rb1 at low doses on histamine, substance P, and monocyte chemoattractant protein 1 in the burn wound areas during the process of acute burn wound repair

AIM OF THE STUDY: We reported recently that the facilitating effects of ginsenosid Rb(1) on burn wound-healing might be due to the promotion of angiogenesis. Increased histamine, substance P (SP), and monocyte chemoattractant protein (MCP)-1 levels caused inflammation, and pain following severe burn wound injury. MATERIALS AND METHODS: We examined the effects of ginsenoside Rb1 on the histamine, SP, and MCP-1 levels in burn wound tissue during burn wound repair. RESULTS AND CONCLUSIONS: Ginsenoside Rb1 (1 ng/wound) and basic fibroblast growth factor (bFGF) (2.5 microg/wound) significantly increased the levels of MCP-1 on day 1 compared to the MCP-1 level in vehicle-treated mice. Histamine production of the burn wound area on day 7 was increased by topical application of ginsenoside Rb1 (100 fg-1 ng/wound) and bFGF. The number of mast cells migrating to the burn wound area was also increased by ginsenoside Rb1. Conversely, the increased SP production was reduced by ginsenoside Rb1. This finding suggests that the pain induction by burn injury may be reduced by ginsenoside Rb1. The facilitating actions of ginsenoside Rb1 on burn wound healing may be due to the increase in histamine production via the increase in mast cell migration to the burn wound area induced by the rapid elevation of MCP-1.     

HPLC-ELSD法同时测定复方丹参片中4种皂苷的含量

目的：建立复方丹参片中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Rd的含量测定方法。方法：采用HPLC-ELSD法,使用C_18色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL·min~-1,柱温25℃,蒸发光散射检测器漂移管温度50℃,载气流速1.5L·min~-1。结果：目标峰分离良好,三七皂苷R1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Rd的线性范围分别为5.14～102.80μg·mL~-1、20.16～322.56μg·mL~-1、40.24～402.40μg·mL~-1、10.06～100.60μg·~mL-1,平均回收率分别为98.1%、96.7%、101.5%和98.1%。结论：该方法简便、准确、耐用性好,可用于复方丹参片中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd含量的测定。     

根皮素对rBMECs摄取人参皂苷Rb1的影响

 目的 以原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞为模型,研究根皮素对大鼠脑微血管内皮细胞摄取人参皂苷Rb1的影响。方法 实验分为2组,人参皂苷Rb1对照组和根皮素干预组。运用LC-MS/MS测定大鼠脑微血管内皮细胞对人参皂苷Rb1的摄取量,BCA法测细胞蛋白浓度。结果 根皮素干预组大鼠脑微血管内皮细胞对人参皂苷Rb1的摄取量显著低于人参皂苷Rb1对照组(P<0.05)。结论 根皮素可显著抑制大鼠脑微血管内皮细胞对人参皂苷Rb1的摄取。     

HPLC测定复方血栓通胶囊中人参皂苷Rg_1Rb_1和三七皂苷R_1的含量

目的:建立HPLC测定复方血栓通胶囊中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1含量的方法。方法:采用Shi-madzu-C18柱,以乙腈为流动相A,以水为流动相B,进行梯度洗脱,检测波长为203nm,流速为1.0mL/min,柱温为40℃,理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于2000。结果:测得人参皂苷Rg1在0.868～8.680μg(r=0.9999,n=6)、人参皂苷Rb1在0.892～8.920μg(r=1.0000,n=6)、三七皂苷R1在0.308～3.080μg(r=1.0000,n=6)线性关系良好;平均回收率人参皂苷Rg1为100.11%,RSD0.71%;人参皂苷Rg1为99.91%,RSD0.87%;三七皂苷R1为99.90%,RSD1.61%,(n=5)。结论:本法准确,专属性强。     

人参皂苷Rb1拮抗肝癌细胞抑制NK细胞免疫功能的研究

目的研究人参皂苷Rb1拮抗肝癌细胞下调自然杀伤细胞(NK细胞)免疫功能的作用,并探讨其分子机制。方法获取经过人参皂苷Rb1作用后肝癌细胞(HepG2)的培养上清以及未经其作用的HepG2的培养上清,比较2种上清中TGF-β1的水平(ELISA法);比较2种上清对NK细胞的胞毒效应分子颗粒酶B及NK细胞杀伤功能的影响。结果HepG2培养上清中含有TGF-β1,经过上清预处理的NK细胞表达胞毒效应分子颗粒酶B减少,杀伤功能受抑制。人参皂苷Rb1可以拮抗HepG2的免疫抑制作用:降低HepG2培养上清中TGF-β1的含量;同时经过与未经过人参皂苷Rb1作用的HepG2培养上清分别用来处理NK细胞,前一种上清处理过的NK细胞在颗粒酶B的mRNA水平以及杀伤功能上都较后一种上清处理过的NK细胞有所增加。结论 HepG2通过分泌抑制性细胞因子TGF-β1以及减少NK细胞表达胞毒效应分子颗粒酶B从而抑制NK细胞的杀伤功能,而人参皂苷Rb1通过拮抗HepG2对NK细胞的免疫抑制,使得NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力有所恢复,从而发挥了抗肿瘤效应。     

人参皂苷Rb1和Re对乌头碱所致心肌细胞损伤的保护作用

目的观察人参皂苷Rb1和Re对乌头碱导致的心肌细胞损伤的影响。方法选用乳鼠心肌细胞,观察人参皂苷Rb1和Re分别与乌头碱配伍使用后,乳鼠心肌细胞上清心肌酶谱的改变,采用RT-PCR的方法,观察人参皂苷Rb1和Re与乌头碱配伍对心肌细胞钙离子通道基因Cav1.2 mRNA的影响。结果人参皂苷Rb1和Re可以有效对抗由乌头碱导致的心肌酶谱改变。同时,可以对抗乌头碱所致的钙离子通道基因Cav1.2 mRNA表达上调。结论人参皂苷Rb1和Re与乌头碱配伍具有减毒增效的作用,这可能与人参皂苷减轻了乌头碱所致的心肌细胞损伤和改善钙离子通道异常表达有关。     

HPLC测定调经养颜胶囊中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量

目的:研究调经养颜胶囊(黄芪、女贞子等)中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量测定方法。方法:采用HPLC法测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量。结果:人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1三者的平均加样回收率Rg1为99.03%、Rb1为98.95%、R1为99.18%,RSD分别为1.59%,1.40%,1.97%,n=6。结论:该方法简便,灵敏,重现性好,可作为调经养颜胶囊中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量测定方法。     

生脉注射液中人参皂苷Rb 1 在心绞痛患者体内的PK-PD结合模型研究

目的：建立生脉注射液中人参皂苷Rb 1 在心绞痛患者体内的PK-PD结合模型。方法：10名稳定性心绞痛受试者静脉滴注生脉注射液,连续给药14天,于给药后不同时间点采集血浆样品,采用质谱法检测人参皂苷Rb 1 的血药浓度,绘制药-时曲线,进行非房室模型拟合并计算PK参数;以受试者的收缩压和舒张压作为药效指标,进行PK-PD模型的拟合,计算PK-PD结合模型参数。结果：10名受试者静脉滴注生脉注射液后,人参皂苷Rb 1 在心绞痛受试者体内的药动学过程符合一室模型,生脉注射液中人参皂苷Rb 1 的降压效应滞后于血药浓度,效应与效应室浓度呈良好的相关性,符合Inhibitory Effect Imax模型。结论：该研究成功建立了生脉注射液中人参皂苷Rb 1 在心绞痛患者体内的PK-PD结合模型,可有效地用于评价生脉注射液的药效物质基础。