β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。     

独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元的保护作用及机制研究

目的:研究独活香豆素对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及可能机制。方法:从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,与Aβ25-35、不同浓度独活香豆素和丹酚酸B共同孵育24 h,用噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)测定法检测细胞存活率与LDH释放量,用Hoechst 33258染色检测Aβ25-35诱导的神经元凋亡,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达量。结果:独活香豆素(10、50、100、150μg/ml)能明显提高Aβ25-35(30μM)损伤神经元的存活率,降低LDH释放量,抑制神经元凋亡,以浓度为100μg/ml时作用最显著,作用强度与丹酚酸B相当;独活香豆素能提高神经元Bcl-2 mR-NA、降低Caspase-3 mRNA的表达量。结论:独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能与抑制促凋亡基因Caspase-3、促进抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达有关。     

小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对胃癌细胞MKN45增殖凋亡及糖代谢影响研究

目的:探讨小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对胃癌细胞MKN45增殖、凋亡和糖代谢的影响。方法:用不同浓度的小檗碱处理MKN45细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性并计算半数抑制浓度(IC_(50)),分别采用24μmol/L的小檗碱(小檗碱组)、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535(FH535组)以及24μmol/L的小檗碱和FH535联合作用(联合组)MKN45细胞,MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞糖代谢指标己糖激酶、丙酮酸激酶相对活性和培养液上清中乳酸相对含量,Western blot法检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平。结果:与未使用小檗碱作用的MKN45细胞比较,小檗碱可降低MKN45细胞的吸光度值且呈剂量依赖性,IC_(50)值为(24.38±2.81)μmol/L,因此选用24μmol/L的小檗碱用于后续实验。与对照组比较,小檗碱组、FH535组、联合组细胞A值均显著降低,细胞凋亡率均显著升高,丙酮酸激酶、己糖激酶及乳酸相对含量均显著降低,β-catenin和c-myc蛋白表达水平显著降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著升高,且联合组的各检测指标均较小檗碱组和FH535组变化明显。结论:小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂均能够抑制MKN45细胞增殖和糖酵解并诱导其凋亡,且二者具有协同作用。     

远志皂苷+β-细辛醚对阿尔茨海默病细胞模型Akt/GSK-3β信号途径的影响

目的:通过观察远志汤有效成分即远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元损伤的影响,探讨远志汤对阿尔茨海默病(AD)氧化应激损伤的保护作用和可能机制。方法:通过Aβ_(25-35)诱导原代培养的C57BL/6J小鼠海马神经元建立Aβ毒性损伤细胞模型,把神经元分为正常对照组,Aβ_(25-35)诱导组,Aβ_(25-35)与远志皂苷+β-细辛醚共同孵育3个剂量组(5、10、20μmol·L~(-1)),采用WST-1比色法、流式细胞术、荧光显微镜和Western blot方法检测远志皂苷协同β-细辛醚对原代培养的海马神经元细胞活性、细胞凋亡率和ROS含量,以及AKt、GSK-3β和磷酸化蛋白表达的影响。结果:成功复制了Aβ_(25-35)致海马神经元氧化应激损伤模型;远志皂苷协同β-细辛醚可以提高Aβ_(25-35)损伤的海马神经元细胞活力,降低Aβ_(25-35)所致的细胞凋亡率,同时降低ROS含量,诱导Akt表达,抑制GSK-3β活化。结论:远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元氧化应激损伤发挥保护作用,可能是通过调控Akt/GSK-3β信号途径。     

木犀草素对Aβ25-35诱导神经元损伤的保护作用

目的:研究木犀草素对β淀粉样肽(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及其机制。方法:从BALB/c乳鼠大脑皮层培养原代神经元,实验设计为对照组,模型组(7μmol·L-1Aβ25-35),不同木犀草素给药治疗组(10~90μmol·L-1),孵育12 h,水溶性四氢唑盐(WST-1)法检测细胞存活率,Hoechst 33258/碘化丙啶(PI)双染检测细胞凋亡,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达,荧光酶标仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,ELISA法检测细胞上清中白介素(IL)-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:模型组细胞存活率为48.5%,与对照组相比显著降低(P0.05)。10,30,60,90μmol·L-1木犀草素给药组细胞存活率分别为60.8%,62.4%,71.7%,73.6%,选取60μmol·L-1木犀草素为后续实验浓度。60μmol·L-1木犀草素可以明显提高Aβ25-35损伤神经元的细胞活力,由48.5%增至71.7%(P0.01),并且能抑制神经元的凋亡。与模型组相比较,降低凋亡蛋白Caspase-3的过表达(P0.01);降低细胞内ROS,由模型组100.4%降至64.2%(P0.01)。与模型组相比,调节抗炎因子IL-10,给药组IL-10上调至634.8 ng·L-1,下调促炎因子TNF-α至176.7 ng·L-1(P0.01)。结论:木犀草素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能是抑制ROS水平,调节炎症因子从而达到抗凋亡作用。     

芍药苷预处理对皮质酮损伤皮层神经元保护作用机制研究

目的:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测芍药苷预处理对皮质酮损伤的大鼠皮层神经元凋亡相关基因以及营养因子BDNF mRNA表达的影响,初步阐明芍药苷对皮质酮损伤神经元的保护机制。方法:体外培养胎鼠皮层神经元,于原代第7天加入芍药苷低、中、高浓度(0.5,2,10μmol.L-1)预处理30 min后,加入皮质酮(200μmol.L-1)损伤,采用RT-PCR检测芍药苷预处理对神经元凋亡相关基因Bcl-2,Bax,Caspase-3以及营养因子BDNF mRNA表达的影响。结果:与模型组比较,芍药苷预处理组(2,10μmol.L-1)可显著下调Bax,Caspase-3 mRNA的表达,并显著上调Bcl-2和BDNF mRNA的表达(P0.05)。结论:芍药苷预处理对皮质酮损伤的大鼠皮层神经元的保护作用与芍药苷调控神经元凋亡相关基因Bcl-2,Bax,Caspase-3 mRNA的表达直接相关,同时可能与上调神经营养因子BDNF基因表达有关。     

基于DKK3调控探讨藏红花素对Aβ25-35诱导神经元损伤的保护作用

目的:探究藏红花素通过调控dickkopf WNT信号通路抑制因子3 (Dickkopf3,DKK3)对Aβ25-35诱导神经细胞损伤的保护作用及机制。方法:Aβ25-35诱导小鼠海马神经细胞系HT22细胞模拟细胞损伤,CCK8增殖实验检测藏红花素最佳干预浓度。qPCR检测DKK3沉默质粒(DKK3 siRNA)以及DKK3过表达质粒(DKK3-OE)的DKK3 mRNA表达,随后进行细胞转染。细胞分为正常组、Aβ25-35组、Aβ25-35+藏红花素组(1.0μmol/L)、Aβ25-35+DKK3 siRNA组、Aβ25-35+siRNA对照组、DKK3-OE组、空白质粒对照组、DKK3-OE+藏红花素组(1.0μmol/L)组。采用流式细胞数检测细胞凋亡,Tubulin β染色观察细胞神经突触形态,Western blot检测细胞Aβ、DKK3、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:0.5～2.0μmol/L藏红花素可显著上调HT22细胞活力(P<0.05)。与正常组相比,Aβ25-35组和DKK3-OE组...     

氧化槐定碱对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究氧化槐定碱对原代培养新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后细胞调亡的影响。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象建立氧糖剥夺再灌注损伤模型。Hoechst 33342和TUNEL染色法检测海马神经细胞凋亡,透射电子显微镜术观察凋亡细胞形态学变化,化学比色法测定海马神经细胞Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性,免疫蛋白印迹技术和实时荧光定量PCR技术检测凋亡相关因子Cytochrome C、Caspase-3、Bcl-2、Bax和PARP-1的蛋白和mRNA的表达。结果:与正常组比较,损伤组Hoechst 33342和TUNEL染色法显示神经细胞凋亡率明显升高;Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8活性显著提高;Cytochrome C、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA水平明显上调,Bcl-2蛋白和mRNA水平明显下调,Bcl-2/Bax比率也明显下调。与损伤组比较,氧化槐定碱治疗组(20、5、1.25mg/L)可显著改善氧糖剥夺再灌注损伤所致的神经细胞凋亡的形态学变化,并降低神经细胞凋亡率;明显抑制Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性。氧化槐定碱治疗组(20mg/L)可明显抑制Cytochrome C、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA表达,增强Bcl-2蛋白和mRNA的表达,使Bcl-2/Bax比率上升。结论:氧化槐定碱通过抗凋亡作用对氧糖剥夺再灌注损伤的大鼠海马神经细胞发挥保护作用。     

调心方有效部位对类AD大鼠脑组织凋亡信号转导分子Caspase-3及凋亡相关基因bcl-2、bax mRNA表达的影响

目的研究调心方有效部位（TX0201）对Aβ25-35所致类AD模型大鼠脑组织凋亡相关基因调节作用机制的异同。方法采用双侧杏仁核注射Aβ25-35造成类AD大鼠模型,观察大鼠Morris水迷宫空间记忆能力,并分别通过RTPCR和免疫组化方法研究类AD大鼠神经元细胞凋亡相关基因bax、bcl-2 mRNA,特异的凋亡信号转导分子Caspase-3和A8阳性神经元变化以及TX0201的影响。结果类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,App695 mRNA表达提高,Caspase-3和bax／bcl-2上升。TX0201能有效控制以上病理变化。结论TX0201提高模型大鼠定向学习记忆能力,可能通过降低bax／bcl-2、下调Caspase-3而减轻神经细胞凋亡而发挥作用。提示通过有效调节神经元凋亡相关基因是TX0201的重要作用机制之一。     

电针血清对β淀粉样蛋白损伤原代培养大鼠海马神经元的保护作用

目的观察电针血清对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的原代大鼠海马神经元的保护作用。方法通过Aβ1-40脑内注射建立阿尔茨海默病大鼠模型,予以电针治疗后,留取各组血清。Aβ25-35处理原代培养海马神经元建立体外神经元损伤模型,实验分为正常组、模型组和电针血清组,通过MTT法检测神经元的增殖,采用TUNEL染色法检测神经元的凋亡,通过免疫细胞化学染色检测Caspase-3的表达。结果 MTT检测结果发现,经Aβ处理后,细胞活力显著下降。而与模型组比较,电针血清组细胞增殖能力明显增强(P＜0.01);TUNEL 染色结果显示,与模型组比较,电针血清组凋亡细胞数目明显减少(P＜0.01);经Aβ处理48 h后,Caspase-3表达水平明显升高,电针血清组Caspase-3阳性细胞数目较模型组显著减少(P＜0.01)。结论电针血清能促进海马神经元的增殖,降低其 Caspase-3的表达,对抗Aβ的神经毒性,减少神经元的凋亡。     

红豆杉多糖对Beagle犬心肌缺血再灌注损伤模型心肌NADPH氧化酶mRNA及SOD、MDA的影响

目的观察红豆杉多糖对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)模型心肌损伤及心肌还原型辅酶II(NADPH)氧化酶mRNA、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响。方法将30只Beagle犬随机分为假手术组、模型组、红豆杉多糖低剂量组与高剂量组、卡维地洛对照组,每组6只,给药7 d后,建立MIRI模型。HE染色,光镜观察心肌组织病理改变;原位杂交检测NADPH氧化酶p47phox(NCF-47K)mRNA表达;比色法检测心肌SOD活性和MDA水平。结果光镜下可见,模型组心肌严重紊乱、断裂,核固缩及胞浆嗜酸性变明显,轻至中度充血、水肿,炎细胞浸润;红豆杉多糖高剂量组心肌细胞紊乱、断裂程度较轻,核固缩及胞浆嗜酸性变明显减少,部分组织仍有轻度充血、水肿。模型组、红豆杉多糖低剂量组心肌NCF-47K mRNA表达较假手术组显著升高(P<0.01),红豆杉多糖高剂量组NCF-47K mRNA表达显著低于模型组(P<0.05)。除红豆杉多糖高剂量组心肌SOD活性显著高于模型组(P<0.01)外,模型组及各治疗组心肌组织SOD活性较假手术组显著降低(P<0.01)。模型组及红豆杉多糖低剂量组心肌组织MDA水平较假手术组显著增加(P<0.05),红豆杉多糖高剂量组心肌MDA水平显著低于模型组(P<0.05)。结论红豆杉多糖可能通过降低心肌组织NADPH氧化酶NCF-47K mRNA表达,升高SOD活性,减少O2÷等氧自由基对心肌细胞的损伤,减轻缺血再灌注导致的心肌损伤。     

冰片及石菖蒲促进羟基红花黄色素A透过血脑屏障的实验研究

目的考察芳香开窍药冰片及石菖蒲对羟基红花黄色素A(HSYA)血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法 ig给予大鼠20.00 mg/kg HSYA混悬液,分别配伍冰片及石菖蒲水提液,给药后采集大鼠血浆及脑组织。HPLC测定大鼠血浆及脑组织内HSYA浓度,以各组HSYA的AUC脑/AUC血为评价指标,进行冰片及石菖蒲对BBB通透性影响的评价。结果 HSYA、HYSA+冰片、HYSA+石菖蒲组HSYA在大鼠血浆及脑匀浆中的AUC0～8 h分别为(77 228.76±2 873.19)、(81 949.04±2 283.11)、(28 479.63±2 431.71)ng.mL-1.min及(55 925.0±2 434.28)、(82 768.53±3 277.00)、(70 914.29±2 900.71)ng.mL-1.min,各组AUC脑/AUC血分别为0.72、1.01、2.49。结论 HSYA配伍冰片及石菖蒲后,AUC脑/AUC血均显著升高(P<0.05)。冰片及石菖蒲均对BBB有开启作用,且石菖蒲可影响HSYA在大鼠体内的分布。     

氧化苦参碱对醛固酮诱导心肌成纤维细胞增殖抑制作用的机制

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖中C-Jun氨基末端激酶(JNK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK),蛋白激酶B1(Akt1)信号的调控机制。方法:采用胰酶消化及差速贴壁法分离纯化CFs,波形蛋白免疫荧光染色鉴定CFs,实验分为空白组(无血清DMEM),ALD组(1×10-7mol·L-1),OMT低剂量组(3.78×10-4mol·L-1),OMT高剂量组(7.57×10-4mol·L-1)及螺内酯组(Spir,1×10-6mol·L-1)。噻唑蓝(MTT)比色法检测OMT对ALD诱导CFs的增殖抑制作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析JNK,ERK,Akt1 mRNA及蛋白表达。结果:MTT结果显示,与空白组比较,ALD显著诱导CFs增殖(P0.05),给予OMT干预后,CFs的增殖被显著抑制(P0.05);Western blot及Real-time PCR结果显示,与空白组比较,ALD明显增加CFs中JNK,ERK及Akt1蛋白和mRNA表达(P0.05)。与ALD组比较,OMT可明显下调ALD诱导的CFs中JNK,ERK及Akt1 mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论:OMT可抑制CFs增殖,其机制可能与抑制JNK,ERK及Akt1信号有关。     

氧化苦参碱抑制p38MAPK磷酸化改善醛固酮诱导心肌成纤维细胞增殖

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用,并分析其对p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法:采用胰酶消化差速贴壁法分离纯化SD新生大鼠CFs做原代培养,建立ALD诱导CFs增殖模型。实验分为空白组(无血清DMEM),ALD组(1×10-7mol·L-1),OMT高、低剂量组(3.78×10-4,7.57×10-4mol·L-1)。波形蛋白免疫细胞化学法鉴定CFs。采用噻唑蓝(MTT)法分析ALD对CFs增殖的量效与时效关系和OMT的抑制作用。实时荧光定量PCR分析p38MAPK mRNA的表达。Western blot分析p-p38MAPK,p38MAPK的蛋白表达。结果:MTT结果提示1×10-7mol·L-1ALD能够诱导CFs的增殖,且在24 h时增殖作用显著,7.57×10-4mol·L-1OMT可显著抑制CFs增殖。OMT对p38MAPK mRNA的水平无影响。OMT能够抑制p-p38MAPK蛋白的表达。结论:OMT可抑制ALD诱导CFs增殖的作用,其机制可能与抑制p38MAPK磷酸化有关。     

小檗碱对体外HepG2细胞IR模型抗IR的效应及机制

目的:探讨小檗碱对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型的改善作用及机制。方法:HepG2细胞采用高糖(25 mmol·L~(-1))和高胰岛素(1×10~(-6)mol·L~(-1))联合诱导24 h,建立体外IR模型。模型培养液中分别加入1×10~(-5),1×10~(-6)mol·L~(-1)小檗碱,设1×10-3mol·L~(-1)二甲双胍作为阳性药,孵育24 h。葡萄糖氧化酶法检测培养液葡萄糖含量,计算细胞葡萄糖消耗量,细胞增殖活性检测(CCK-8)测定细胞增殖活性;生化法检测细胞丙酮酸激酶(PK)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞葡萄糖激酶(GCK)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞胰岛素受体(InsR),磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)和GLUT2 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1),磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞葡萄糖消耗量显著降低(P0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著降低(P0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA表达水平显著降低(P0.01),IRS-1,p-PI3K,p-Akt蛋白表达水平显著降低(P0.01)。与模型组比较,小檗碱组和二甲双胍组的细胞葡萄糖消耗量明显增加(P0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著升高(P0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA和IRS-1,p-PI3K,p-Akt1蛋白表达水平均明显升高(P0.05,P0.01)。结论:小檗碱体外对HepG2细胞IR模型有显著的改善作用,其机制可能通过调节IRS-1/PI3K/Akt信号通路促进肝脏葡萄糖转运和改善葡萄糖代谢。     

氧化苦参碱通过调控MAPK信息通路改善醛固酮诱导的心肌细胞损伤

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌细胞损伤的改善作用及其作用机制。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法分离和纯化新生大鼠心肌细胞进行培养,采用1×10~(-5)mol·L~(-1)ALD建立心肌细胞损伤模型。实验分为空白组,模型组(1×10~(-5)mol·L~(-1)ALD),ALD+OMT高浓度(3.78×10-4mol·L~(-1))组,ALD+OMT低浓度(1.89×10-4mol·L~(-1))组,ALD+JNK抑制剂(JNK I,5×10~(-6)mol·L~(-1))组,ALD+阿司匹林(Asp,1×10~(-5)mol·L~(-1))组,即OMT,JNK抑制剂和阿司匹林组先以相应药物预处理2 h后加入终浓度为1×10~(-5)mol·L~(-1)的ALD共同孵育24 h。二甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Giemsa染色观察心肌细胞形态学变化情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析OMT对ALD诱导JNK蛋白表达水平,JNK磷酸化(p-JNK)水平及mRNA表达的影响。结果:与空白组比较,ALD可显著降低心肌细胞存活率(P0.01)并改变细胞形态,OMT可显著改善醛固酮诱导的心肌细胞存活率降低(P0.01)并使细胞恢复至正常形态;Western blot结果显示ALD可诱导JNK蛋白磷酸化水平升高(P0.01),而OMT可显著抑制ALD诱导的p-JNK表达增加(P0.01);Real-time PCR结果显示,与空白组比较,ALD可诱导JNK mRNA表达增加(P0.01),使用OMT进行预保护后,各组基因表达均没有显著改变。结论:OMT对ALD诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其作用机制与抑制JNK蛋白磷酸化密切相关。     

安寐丹调控OXA/CREB/PER1信号通路改善SD模型大鼠昼夜节律紊乱＊

目的 观察中医经典名方安寐丹对睡眠剥夺（Sleep disruption，SD）模型大鼠食欲素（Orexin）及其介导的食欲素A（Orexin A，OXA）/cAMP反应元件结合蛋白（cAMP Response Element Binding Protein，CREB）/Period1（period circadian regulator 1， PER1）基因信号通路的作用。方法 40只雄性6月龄SD大鼠随机等分为空白组、模型组、艾司唑仑组、安寐丹组，空白组常规进食进水，其他三组采用对氯苯丙氨酸（PCPA）腹腔注射叠加多平台水环境剥夺法构建SD模型，自主活动仪监测昼夜活动节律。空白组、模型组给予等容的0.9%氯化钠灌胃，艾司唑仑组给予艾司唑仑0.09 mg·kg^-1、安寐丹组给予安寐丹水煎剂9.09 mg·kg^-1灌胃治疗，连续4周。4周后运用Morris水迷宫检测其学习记忆，免疫荧光检测下丘脑Orexin神经元表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠下丘脑组织OXA、食欲素B（Orexin B，OXB）含量，蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）和实时荧光定量（Quantitative Real-time PCR，RT-PCR）检测各组大鼠下丘脑组织OXA/CREB/PER1信号通路蛋白和mRNA表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠24 h自主活动时间和活动距离均高于空白组；活动时间、活动距离显著增加（P<0.01），上平台潜伏期与游泳总路程显著延长（P<0.01），穿越站台次数和站台活动时间均减少（P<0.01）；下丘脑组织OXA、OXB含量高于空白组（P<0.01）；且OXA、CREB 蛋白和mRNA表达均显著升高（P<0.01），PER1 蛋白和mRNA表达均显著下调（P<0.01）。与模型组比较，安寐丹组大鼠上平台潜伏期缩短（P<0.01）、游泳总路程减少（P<0.05）、穿越平台数量增加（P<0.05）；下丘脑组织OXA、OXB含量降低（P<0.05），OXA蛋白表达下调（P<0.05）、CREB蛋白表达下调（P<0.01）、PER1蛋白表达上调（P<0.01），OXA和CREB mRNA表达降低（P<0.05），PER1 mRNA表达升高（P<0.05）。结论 安寐丹改善SD模型大鼠昼夜节律紊乱可能与调节Orexin及其介导的OXA/CREB/PER1信号通路相关。     

地黄饮子对卒中后抑郁大鼠海马5-羟色胺受体的影响

目的:通过观察地黄饮子对卒中后抑郁大鼠5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)与5-羟色胺2A受体(5-HT2AR)mRNA水平表达的影响,进一步探讨地黄饮子治疗脑卒中后抑郁的可能作用机制.方法:健康成年SD大鼠60只,雌雄各半,随机分为6组(空白组、模型组、百优解组、地黄饮子高、中、低剂量组)每组10只,除空白对照组每笼饲养5只外(雌雄分开),其余各组均采用单独饲养法,每笼饲养1只.卒中后抑郁模型建立成功后,模型组、氟西汀组和地黄饮子高、中、低剂量组分别以2.0mL蒸馏水、盐酸氟西汀(1.8 mg·kg-1)和地黄饮子(按生药)450,150,75 mg· kg-ig,1次/d,持续用药至行为学检测.在脑卒中后抑郁大鼠模型上,采用实时荧光定量RT-PCR方法,对卒中后抑郁大鼠5-HT1AR与5-HT2AR mRNA水平进行观察.结果:大鼠海马5-HT1AR相对表达水平与空白组(1.12±0.16)比较,模型组(0.23 ±0.13)有显著性差异(P＜0.01);地黄饮子中、高剂量组(0.76 ±0.13,0.75 ±0.11)与模型组比较,有显著性差异(P＜0.05).各组大鼠海马5-HT2AR mRNA表达水平与空白组(1.13 ±0.12)比较,模型组(2.21±0.21)有显著性差异(P＜0.05);地黄饮子高、中剂量组(1.21±0.21,1.25 ±0.26),与模型组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论:地黄饮子可能是通过上调5-HT1AR mRNA、下调5-HT2AR mRNA在海马区的表达,达到治疗卒中后抑郁的目的.     

苓桂养心汤对扩张型心肌病大鼠心肌保护作用及肌浆网钙调控蛋白的影响

目的:明确苓桂养心汤对扩张型心肌病(DCM)大鼠心功能、心肌的保护作用;观察苓桂养心汤对DCM大鼠损伤心肌肌浆网(SR)钙调控相关蛋白的影响,探讨其可能的作用机制。方法:以60只SD大鼠腹腔注射阿霉素1.0 mg/kg/次,每周2次,连续6周,总量12 mg·kg-1建立DCM模型,另设正常组(10只),观察2周,8周后将存活DCM模型大鼠随机分为培哚普利组、苓桂养心汤组、模型组,连续灌胃给药8周。治疗后对上述各组大鼠行心脏超声检查;采血测定大鼠血清B型尿钠肽(BNP)水平及肌钙蛋白-Ⅰ(cTnI);取大鼠左心室心肌进行苏木素-伊红(HE)染色和透射电子显微镜检测大鼠心肌病理学形态。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别测定大鼠心肌肌浆网钙泵(SERCA2a),钙释放通道(RyR2),受磷蛋白(PLB),肌集钙蛋白(Calsequestrin),L-型钙离子通道(CAV1.3)的mRNA及蛋白表达水平。结果:与模型组比较,苓桂养心汤组可以改善DCM模型大鼠的心腔大小、心功能、心肌损伤及心肌病理学形态。与模型组比较,苓桂养心汤组SERCA2a,RyR2,CAV1.3,Calsequestrin mRNA表达升高;PLB mRNA表达下降。与模型组比较,苓桂养心汤组SERCA2a及Calsequestrin蛋白表达升高;PLB蛋白表达下降。结论:苓桂养心汤能缩小DCM大鼠左心室内径,提高左心室射血分数和缩短率,降低血清BNP和cTnI水平,保护DCM大鼠损伤心肌,改善心功能。苓桂养心汤可部分调控DCM大鼠心肌肌浆网钙泵,兰尼碱受体,受磷蛋白,肌集钙蛋白,L-型钙离子通道的mRNA基因和蛋白表达。苓桂养心汤治疗DCM大鼠的作用机制,可能与通过调节DCM大鼠心肌肌浆网钙调控相关蛋白的基因及蛋白表达,改善心肌细胞钙转运及心脏舒缩功能有关。     

红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的机制研究

目的研究红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的作用及其作用机制。方法将MDA-MB-435细胞分为对照组和红花多糖0.5、1.0 mg/mL组。MTT法及流式检测仪分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞生长及凋亡的影响;RT-PCR及Western blotting法分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达的影响。结果与对照组比较,红花多糖0.5 mg/mL组MDA-MB-435细胞抑制率为(21.52±2.43)%,红花多糖1.0 mg/mL组细胞抑制率为(27.73±3.75)%,显著高于红花多糖0.5 mg/m L组(P0.05);与对照组比较,红花多糖能够显著提高MDA-MB-435细胞凋亡率(P0.01),且呈剂量依赖性。RT-PCR及Western blotting实验结果显示,与对照组比较,红花多糖能够使MDA-MB-435细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05、0.01)。结论红花多糖能有效抑制MDA-MB-435细胞的生长,促进其凋亡,作用可能是通过对PI3K/Akt/mTOR通路的阻断实现的。