Vero细胞肠道病毒71型灭活疫苗的纯化及鉴定

目的建立Vero细胞肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的纯化工艺。方法病毒收获液经离心澄清、福尔马林灭活和超滤浓缩后,采用Sephacryl S-400 HR凝胶过滤层析和Source 30Q离子交换层析2步层析法纯化EV71,进行各项检定及分析后除菌过滤。结果经纯化的疫苗各项纯化指标均符合中国药典2010年版的要求,杂蛋白去除率>99.9%;病毒纯化液在电镜下观察到典型的EV71病毒颗粒,经SDS-PAGE及Western blot分析,检测到与文献报道大小相符的EV71 VP1、VP2、VP3及特异性免疫反应;制备成疫苗后免疫大鼠能产生特异性中和抗体。结论本实验建立了Vero细胞的EV71灭活疫苗的纯化工艺,纯化后制备的EV71灭活疫苗具有较好的免疫原性。     

肠道病毒71型灭活疫苗（Vero细胞）接种5年免疫持久性观察

目的 观察肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）疫苗III期临床试验接种5年的免疫持久性。方法 在III期临床试验免疫原性亚组中,对完成全程两针次免疫的免前抗EV71中和抗体阴性人群进行免疫后5年采血并检测抗EV71中和抗体,对0 d、56 d、8个月、14个月、26个月、64个月同时具有抗EV71中和抗体检测数据人群评价免疫持久性。结果 共614名受试者完成5年免疫持久性血样采集并获得中和抗体检测结果,其中490名受试者同时具有0天、56 d、8个月、14个月、26个月、64个月抗EV71中和抗体检测数据,疫苗组和安慰剂对照组分别为235名和255名。EV71疫苗免疫后5年,疫苗组抗EV71中和抗体阳性率（100.00%）和抗体几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）（369.57）均高于对照组（69.02%和55.58）。分别以抗体滴度8、16、32为阳性判定标准,疫苗组阳性率（100%、99.57%、97.87%）均高于对照组（69.02%、61.96%、59.61%）。对不同年龄亚组进行分析,6~11、12~35月龄受试者免疫后疫苗组5年抗EV71中和抗体阳性（滴度≥8）率（均为100.00%）和抗体GMT（367.14、370.64）均高于对照组（66.67%、71.27%和53.43、63.66）。在EV71疫苗免疫后的各个时间点,疫苗组抗EV71中和抗体阳性率和GMT均高于对照组。结论 该EV71疫苗两针基础免疫后能够诱导良好的免疫原性,在免疫后5年依然保持较好的免疫持久性。     

我国肠道病毒71型（EV71）疫苗株生物信息学分析

目的 比较3个EV71疫苗株病毒的生物信息学特点,为疫苗的质控和探讨该病毒疫苗的免疫机制提供参考.方法 本研究利用DNAstar MegAlign、DNAMAN Alignment、ANtheProt等生物学软件,比较了我国已进入临床试验的3家EV71全病毒灭活疫苗毒株的基因组及氨基酸序列,并对英衣壳蛋白二级结构及可能存在的抗原表位进行了预测分析.结果 3个疫苗株病毒基因同源性为97％～99％;氨基酸同源性为98％～99％;二级结构一致率在95％以上;均存在35个潜在抗原表位区域.结论 3个疫苗株生物信息学分析结果存在高度的一致性,提示疫苗具有相似的抗原性和免疫原性.     

肠道病毒71型重症手足口病71例临床分析

目的分析肠道病毒71型(EV71)重症手足口病的临床特点及治疗方法。方法对71例重症手足口病患儿的临床表现、辅助检查、治疗及转归进行回顾性分析。结果本组患儿以婴幼儿为主,临床表现以典型皮疹、易惊、持续高热、肢体抖动、恶心呕吐等为主。重症EV71感染的本质是以脑干脑炎为主的脑炎和脊髓炎,目前尚无特效的抗病毒药物,以对症等综合治疗为主,一旦出现神经系统症状,应立即采取积极的诊疗措施,将病情控制。结论 EV71引起的手足口病病情重,神经系统症状明显,早期诊断并积极治疗是降低病死率、致残率的关键。     

RNA干扰技术抗肠道病毒71型复制

目的肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV 71)是手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)主要的病原体之一。研究RNA干扰技术抑制肠道病毒71型复制。方法以RNA干扰技术(RNAi)为干预手段,抑制病毒EV 71在人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞中的复制。通过Western blot、Real-time PCR和病毒滴度3种方法验证,其抑制效果体现在感染细胞内部病毒RNA,病毒蛋白质的表达水平和培养基上清中子代病毒颗粒的数量上。结果靶向病毒基因组5'UTR和VP2的siRNAs具有明显的病毒抑制效应。结论此研究证实RNAi方法具有特异性抑制病毒复制的潜能和可行性。     

肠道病毒71型手足口病117例临床分析

目的:分析肠道病毒71型感染所致手足口病的临床及实验室特点。方法:回顾性分析2012年7月—2012年12月收治的117例肠道病毒71感染所致手足口病住院患儿的病例资料。比较普通病例组和重症病例组的临床表现及辅助检查资料。结果:肠道病毒71型手足口病多见于1～3岁婴幼儿(64.96%),主要症状为皮疹(98.29%)、发热(98.29%)。重症病例发生率较高(占82.05%),多有肢体抖动及易惊(77.78%)。常见并发症有支气管炎、支气管肺炎。经对症及抗病毒治疗,重症者早期使用免疫球蛋白、糖皮质激素、甘露醇等治疗,治愈113例(96.58%),好转1例(0.85%),死亡3例(2.56%)。结论:肠道病毒71型手足口病多见于婴幼儿,主要症状为发热、皮疹。重症病例发生率高,多有肢体抖动及易惊。重症手足口病患儿的救治关键在于早期干预,控制进展,减少难治性并发症的发生。     

金银花-连翘药对抗肠道病毒71型的初步探究

目的采用体内体外的方法初步探讨金银花-连翘(以下简称"银翘")药对提取物对肠道病毒71型的抑制作用。方法采用MTT法检测"银翘"药对提取物对Hela细胞的毒性以及抗EV71作用;采用腹腔注射20μl EV71建立感染模型,观察小鼠的一般体征,并在光学显微镜下观察心脏组织病理学变化。结果 "银翘"药对提取物对Hela细胞的半数有毒浓度(TC_(50))为123.3 mg/ml,最大无毒浓度(TC_0)为15.6 mg/ml(按生药计)。无论同时加入药物和病毒,还是药物在病毒感染后加入均能够有效抑制病毒,并呈现出一定程度上的剂量依赖关系。体内抗病毒研究显示,中、高剂量组的"银翘"药对提取物均能显著改善小鼠的不良症状和心脏组织的病理变化,效果接近利巴韦林。结论 "银翘"药对提取物能有效地抑制EV71,为其临床应用提供理论依据。     

新型肠道病毒71型(EV71)疫苗质量控制和评价标准的研究

目的 研究建立新型肠道病毒71型(EV71)疫苗质量控制标准和评价体系,为EV71疫苗研发提供基础.方法 根据创新型疫苗研发的要求,充分发挥技术优势,开展EV71疫苗质控标准、标准品和评价方法研究.结果与结论 建立EV71灭活疫苗的中和抗体和抗原定量测定标准品,统一不同企业疫苗的质控标准,规范疫苗的评价体系,为EV71疫苗的研发提供保障.     

肠道病毒71型灭活疫苗纯化用层析介质使用寿命的确定

目的  探索肠道病毒71型灭活疫苗纯化用层析介质最佳使用次数。方法  在规模化生产过程中,根据层析介质特性采用相应的清洗和消毒方式。在保证产品质量的前提下,综合考虑生产过程中相关参数及层析介质柱效,评估层析介质使用寿命。结果  随着层析介质使用次数的增多,纯化运行过程中层析介质的压力存在上升趋势,表明出现了污染物的聚集;同时层析柱的每米理论塔板数降低、对称性因子偏离,表明污染物在层析介质的聚集造成了填料分布不匀,导致分离效果下降。经过综合评估,将凝胶过滤层析介质和离子交换层析介质的纯化使用次数暂定为62和32次。结论  初步确定了层析介质的使用寿命,为规模化生产中层析介质的使用和更换提供了理论依据。     

肠道病毒71型感染与手足口病的诊治

手足口病（HFMD）是由肠道病毒感染引起的传染性疾病,引起手足口病的肠道病毒有20多种,包括柯萨奇病毒（Coxasckie virus）A组和、埃可病毒（ECHOviruses）的某些血清型和肠道病毒71型（Enterovirus71,EV71）。近年来,引起手足口病的病原体以EV71最常见。2008年1～5月在安徽省阜阳,2009年2～4月在山东菏泽儿童群体中分别中发生EV71感染流行,部分患儿因伴有心、脑、肺等器官严重并发症经抢救无效死亡,引起社会各界关注。     

EV71疫苗研究进展

肠道病毒71型(enterovims 71,EV71)是手足口病的主要病原体,由于尚无治疗手足口病的有效抗病毒药,因此,开发预防手足口病的有效EV71疫苗成为所有控制措施的首选.目前,EV71疫苗研究已取得一定的进展,正在研发的疫苗包括减毒或灭活疫苗、VP1亚单位疫苗和DNA疫苗.虽然各种疫苗均具有一定的免疫效果,但最适疫苗的确认还需对各种疫苗的安全性和保护效力进行评估.     

EV71疫苗研究进展

肠道病毒71型(enterovims 71,EV71)是手足口病的主要病原体,由于尚无治疗手足口病的有效抗病毒药,因此,开发预防手足口病的有效EV71疫苗成为所有控制措施的首选.目前,EV71疫苗研究已取得一定的进展,正在研发的疫苗包括减毒或灭活疫苗、VP1亚单位疫苗和DNA疫苗.虽然各种疫苗均具有一定的免疫效果,但最适疫苗的确认还需对各种疫苗的安全性和保护效力进行评估.     

Optimized development of a candidate strain of inactivated EV71 vaccine and analysis of its immunogenicity in rhesus monkeys

Enterovirus type 71 (EV71) is one of the main etiologic agents responsible for periodic epidemics of hand-foot-and-mouth disease (HFMD). The prevention and control of EV71 epidemics with effective anti-viral agents and vaccines is very important for public health. Because the pathogenesis of EV71 in the human body is not completely clear and genetic variations in the virus during its replication are difficult to control, we have focused on the development of an inactivated whole-virus vaccine. In this study, we screened 16 strains isolated from different areas of China and selected one strain for the development of an inactivated EV71 vaccine. The results of our study suggest that the FY-23K-B strain, which is a candidate strain for an EV71 inactivated vaccine, satisfied the requirements of vaccine production in terms of genetic stability, biological activity, and good immunogenicity. The experimentally inactivated vaccine produced using this strain was capable of inducing an immune response and offered protection to rhesus monkeys against future virus attacks.     

轮状病毒基因重配株Ls(G3型)在Vero细胞上的适应性培养及免疫原性分析

目的:研究轮状病毒基因重配株Ls(G3型)在Vero细胞上的适应性及其免疫原性。方法:将轮状病毒基因重配株Ls(G3型)在Vero细胞上连续传代20代,进行适应培养,通过RNA-PAGE、PCR、核酸电泳、病毒滴度及小鼠免疫试验鉴定其遗传稳定性和免疫原性。结果:筛选出1株Vero细胞适应株(Ls)。该毒株在Vero细胞上稳定传代20代,具有遗传稳定性,且自第5代后病毒滴度均稳定在7.0 lgTCID50.mL-1以上。动物免疫结果表明,Vero细胞适应株Ls诱导小鼠产生高滴度的血清抗体。结论:Ls株可在Vero细胞上稳定增殖,具有遗传稳定性和良好的免疫原性。     

肠道病毒71型感染对儿童心肌损害的影响

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)感染对手足口病患儿心肌损害的影响.方法 我院2010年5月至2011年9月收治的126例手足口病患儿分为EV71(+)组和EV71(-)组、重症组和非重症组,分别比较EV71(+)组和EV71(-)组之间、重症组和非重症组之间的心肌酶谱和心电图结果,.结果 全部病例5项心肌酶均高于对照组,EV71(+)组患儿的心肌酶与EV71(-)组比较差异无显著性(P＞0.05),重症组与非重症组比较,重症组心肌酶谱中肌酸激酶同工酶(CK-MB)为(43.65±13.78)U/L、乳酸脱氢酶(LDH)为(413.50±143.83)U/L、羟丁酸脱氢酶(HBDH)为(446.08±161.77) U/L,较非重症组均有明显升高(P＜0.05);心电图异常以窦性心动过速为主,EV71(+)组心电图异常率与EV71(-)组比较差异无明显性(P＞0.05),重症组心电图异常率高于非重症组(P＜0.05).结论 手足口病患儿可出现心肌酶升高和心电图异常表现,存在心肌损害,但EV71感染对心肌损害与其他手足口病肠道病毒感染比较无显著差异,但心肌损害可作为发现重症病例的早期观察指标.     

EV71感染型手足口病患儿特征及高危因素分析

目的:研究分析EV71感染型手足口病患儿特征及高危因素。方法:选取2010年1月～2017年12月某院儿科收治的80例EV71感染型手足口病患儿作为研究对象,并采取同期确诊的75例普通手足口病患儿进行对照,比较EV71感染型手足口病患儿与普通手足口病患儿的临床特征以及高危因素。结果:比较患儿的年龄、患儿首次确诊、患儿嗜睡萎靡、患儿肢体震颤以及各实验室检查结果共17项指标,差异具有统计学意义(P0.05)。根据Logistic回归分析EV71感染型手足口病患儿特征或高危因素有:非典型皮疹、嗜睡萎靡、肢体震颤、影像学表现以及血压升高。结论:3岁及其以下EV71感染型患儿出现非典型皮疹、胸片、血压以及血糖异常提示患儿病情出现恶化。