ELISA检测HBsAg的非特异反应因素分析

目的 探讨乙型肝炎病毒表面抗原酶联免疫吸附试验中非特异性反应的形成原因。方法 采用酶联免疫吸附测定法检测固相载体，封闭剂，包被抗体与酶标抗体配伍，洗液离子强度对测定结果的影响。结果 进口微孔板的吸附性好于国产板，但非特异吸附也高于国产板；军产BSA作封闭剂非特异性反应高于进口BSA；合适的包被抗体与酶标抗体配伍可提高反应的特异性；NaCl浓度为0.15mol/L的PBS-Tween作洗液可满足本系统要求。结论 固相载体，封闭剂的选择，包被抗体与酶标抗体的配伍，洗液离子强度均与非特异性反应的产生有关。     

不同酶标反应板在人心肌特异性肌钙蛋白抗体检测中的性能分析

目的　考察不同种类的酶标反应板对酶联免疫吸附试验 (ELISA)的结果影响。方法　以 10 0 μl人心肌肌钙蛋白T(CTnT)为抗原 ,分别包被不同酶标反应板 ,运用普通酶联免疫吸附试验方法比较不同酶标反应板的性能。结果　 96孔硬脂进口反应板的CTnT抗体OD值 (P <0 .0 5 )和阴性血清OD值 (P <0 .0 1)高于国产 40孔硬板。结论　 96孔进口硬板的吸附能力最强 ,灵敏度高 ,且非特异性吸附较少     

表面微粒化酶联免疫固相载体的开发研究

目的:比较表面微粒化酶联免疫固相载体与平整光滑聚苯乙烯固相载体对HCV实验的影响.方法:在相同条件下,在采用华大吉比爱丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)原理的前提下,运用表面微粒化酶联免疫固相载体包被酶标板,与华大吉比爱试剂盒对照检测企业内部质控血清.结果:用表面微粒化酶标板包被的酶标板试验灵敏度、特异性及精密度明显好于华大吉比爱聚苯乙烯酶标板.结论:表面微粒化酶联免疫固相载体包被酶标板的开发研究应用将是未来发展的新趋势.     

斑点-ELISA检测AFP

目的 探讨硝酸纤维素膜为固相载体的酶免疫测定法检测甲胎蛋白(AFP).方法 以硝酸纤维素膜代替常规ELISA中的固相载体聚苯乙烯板,其余步骤按ELISA方法操作.结果 以AFP标准品作试验,进行方法学探索,测出最佳包被抗体浓度为100 mg.L-1,酶标抗体稀释度为1∶4 000.不同来源不同孔径的硝酸纤维素膜无差异;同时发现包被过程中的封闭处理能减少非特异性反应;保存试验证明包被抗体的硝酸纤维素膜至少可保存2周.结论 该法具有特异性强、重复性好、灵敏度高的特点,通过与常规ELISA检测血清标本AFP含量值的比较,表明该法可半定量测定AFP的含量,尤其适用于标本的初步筛选.     

肝炎血清标志的酶联免疫检测技术探讨

<正> 酶联免疫吸附试验(ELISA)是利用免疫酶标记技术在固相载体上进行抗原或抗体的测定,由于酶催化效率高,抗原抗体反应有高度的特异性,所以普遍应用于乙型肝炎血清标志物的检测,为了更好的使酶联免疫检测技术的日益完善,现把我们在检测中遇到的技术问题进行回顾及探讨。1、ELISA的原理1·1 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。1·2 使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。     

液相酶免疫分析的研究现状

酶联免疫吸附试验(简称 ELISA),又名酶免疫分析(简称 EIA),是 Engvall 等及 VanWeeman 等分别于1971年提出的一种将可溶性抗原或抗体吸附在固相上,利用酶标抗体或抗原定量检测相应的抗原或抗体的方法。本法已应用到免疫学、内分泌学、生物化学、微生物学和寄生虫学等方面。1972年 Ruben-stein 等建立了不需固相载体,可直接从溶液中测定反应结果的均相 EIA。1974年 Voller等以聚苯乙烯微量滴定板为载体,建立了微板法,是当前应用最广的一类 EIA 法。1976年 Belanger 等运用连续双抗体饱和法的原     

影响酶联免疫吸附试验结果的可控因素及控制方法

酶联免疫吸附试验是一种酶联免疫技术,用于检测包被于固相板孔中的待测抗原(或抗体),是酶免疫测定技术中应用最广的技术。在酶联免疫吸附试验具体操作中,由于诸多注意事项,试剂、样本等可控因素可直接影响试验结果的准确度[1],操作中各个环节的错误,均会导致异常结果的产生,     

SPA斑点酶联免疫吸附试验诊断流行性出血热

以硝酸纤维素膜为固相载体、酶标SPA为第二抗体,建立了检测EHF患者血清特异性IgG抗体的SPA斑点酶联免疫吸附试验。用此法检测87份EHF患者血清,与免疫荧光法的检出符合率为97.6％,抗体几何平均滴度为免疫荧光法的1.8倍。本法特异、敏感、快速、简便,可作为EHF特异性诊断的方法之一。     

酶联免疫吸附试验影响HBsAg常见因素与对策

<正>酶联免疫吸附试验(enayme liked immunosorbent assay ELISA)是一种常用的固相酶免疫测定法。ELISA的基本原理是:使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性;使抗原(或抗体)于某种酶联结成酶标抗原(或抗体)     

胆囊收缩素酶联免疫测定法的研究

为探索多肽类物质的酶联免疫测定方法，采用紫外线照射及戊二醛活化酶标板包被八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ８），并以此为基础进行酶联免疫吸附试验。结果显示：该方法可使ＣＣＫ８稳固地结合于酶标板上；竞争性抑制实验中游离的ＣＣＫ８与固相ＣＣＫ８可与抗体发生竞争结合，并呈良好的定量关系。该方法简便、重复性及稳定性好（批内及批间变异系数分别为４７５％及７８０％），可用于ＣＣＫ相关肽初步的结构分析。     

巨细胞病毒感染捕获ELISA分析方法的建立和应用

目的：建立CMVIgM抗体捕获ELISA法并用聚合酶链反应（PCR）技术对此方法进行了评价。评价：采用巨细胞病毒（CMV）AD－169株感染人胚肺细胞的方法制备CMV抗原，并采用冻化抗制备法及甘愿酸法制备抗原，羊抗人IgM（μ链）McAb包被酶标板，建立CMVIgM抗体捕获ELISSA法。结果：不同浓度抗μ链McAb包被，包被时间、包被液、封闭液等不同条件，以有抗原浓度、抗CMV抗体酶结合物浓度对此法的建立有不同的影响。PCR法与用最佳条件配合后的本方法CMVIgM抗体检出率无显著差异（P＞0．05）。结论：本法测定CMV－IgM抗体的敏感性和特异性较高，简便、适用，易于推广，可广泛应用于临床。     

MLCK定量检测的双抗体夹心ELISA方法建立

目的:建立定量检测人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的双抗夹心ELISA法.方法:用抗MLCK兔多克隆抗体包被酶标板,1％小牛血清白蛋白(1％BSA)作为封闭液,抗MLCK羊多克隆抗体和HRP-兔抗羊抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并进行了实验条件的优化;同时对新建立方法的灵敏度、精密度进行了评价...     

定点突变去除抗乙酰胆碱受体抗体的补体结合功能

[目的]制备无补体结合功能的免疫球蛋白样抗乙酰胆碱受体抗体,用于重症肌无力的特异性免疫治疗.[方法]应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体抗体IgG 637的重链CH 2区的第322位氨基酸进行K 322 A突变,获得的突变型抗体IgG 637/K 322 A基因经转化大肠杆菌XL 1-Blue进行增殖,测定序列证实为突变序列,转染哺乳类细胞CHO-k 1进行表达,其产物经酶联免疫吸附试验检测与补体C 1 q的结合活性.[结果]突变型抗乙酰胆碱受体抗体IgG 637/K 322 A不能与补体C 1 q结合,而对照抗体IgG 637可与补体结合.[结论]经定点突变,成功地获得了失去补体结合功能的抗乙酰胆碱受体抗体.     

化学发光法与酶联免疫吸附法检测血清抗结核抗体的比较研究

目的比较化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay,CLIA）与酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）两种抗结核抗体检测试剂盒在结核病辅助诊断中的应用价值。方法分别用CLIA和ELISA检测试剂盒对360例血清标本中的抗结核抗体进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果 CLIA和ELISA两种检测试剂盒对260例活动性肺结核患者血清标本的检出率分别为71.2%（185/260）和58.5%（152/260）,差异有统计学意义（P〈0.05）;100例健康人血清标本中两种试剂盒检测的阴性例数分别为89例和93例,两种试剂盒的特异性分别为89.0%和93.0%,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在结核抗体检测中CLIA检测试剂盒与ELISA检测试剂盒的特异性无显著性差别,CLIA检测试剂盒灵敏度显著高于ELISA检测试剂盒。     

双向离心法包被ELISA反应板制备乙型肝炎表面抗原检测试剂

目的通过提高包被板抗体的包被量来提高ELISA检测乙型肝炎表面抗原试剂的检出灵敏度。方法采用垂直自转离心和水平离心进行酶标板抗体包被,然后按常规ELISA法制成检测乙型肝炎表面抗原试剂,并对试剂各项性能指标进行检测。结果采用垂直自转离心和水平离心进行抗体包被制成的乙型肝炎表面抗原检测试剂灵敏度可达0.2ng/ml,特异性和精密性未受影响。结论可通过增加抗体包被量来提高ELISA试剂的灵敏度。     

子宫内膜异位症患者血清中靶抗体的检测和应用

目的 :建立一种ELISA方法 ,以检测子宫内膜异位症患者血清中抗转铁蛋白抗体。　方法 :用转铁蛋白包被的间接ELISA方法检测血清中的抗转铁蛋白抗体。血清标本来自 96例正常体检女性 ,6 4例妊娠妇女 ,72例儿科女童 ,以及 2 4例子宫内膜异位症患者。　结果 :子宫内膜异位症患者血清中的抗转铁蛋白抗体阳性率远远高于对照组 ,特异性为 99.0 % ,敏感度为 95 .8% ,准确性为 99.2 %。　结论 :子宫内膜异位症患者血清抗转铁蛋白抗体阳性率明显高于对照组 ,抗转铁蛋白抗体检测可作为子宫内膜异位症的非创伤性诊断方法     

抗CCP抗体与类风湿关节炎临床表现的相关性

目的：探讨抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）与类风湿关节炎（RA）的临床表现的相关性。方法：收录139例RA患者的临床表现及X线分期。以酶联免疫吸附（ELISA）法测定其抗CCP抗体水平,抗类风湿因子（RF）采用乳胶凝集法测定,魏氏法测定血沉（ESR）。结果：抗CCP抗体阳性患者在血沉的分布（阴性vs阳性）、X线分期的分布（Ⅰ＋Ⅱ期vsⅢ＋Ⅳ期）、关节外表现的分布（〈3个vs≥3个）、DAS 28评分的分布（〉5.1分vs≤5.1分）方面与抗CCP抗体阴性患者比较,差异均有高度统计学意义（χ2=14.89、6.87、14.63、7.27,均P〈0.01）。结论：抗CCP抗体与病情活动的指标（血沉、DAS 28评分）有关,与RA患者关节破坏程度（X线分期）和关节外表现有关。     

抗RA33、抗CCP抗体检测在RA诊断中的应用

目的 探讨抗RA33、抗CCP抗体对RA的诊断价值。方法 用ELlSA方法分别检测43例RA患者、23例非RA弥漫性结缔组织病患者、45例正常对照血清中抗RA33、抗CCP抗体水平。结果 抗RA33、抗CCP抗体对RA的诊断敏感性分别为20．9％、60．5％，特异性分别为88．2％、97．1％。结论 抗RA33抗体可作为RA的早期诊断指标，抗CCP抗体可以作为RA的特异性诊断指标。与RF联合检测能提高诊断RA的敏感度和特异性。     

分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株(6B_4、7C_4)的建立

将经正常人的精子细胞免疫的 BALB/c 鼠脾脏取出,使此细胞与 NS1小鼠骨髓瘤细胞融合。用间接免疫荧光法等方法检测抗体,得到12个孔抗人精子阳性的杂交瘤。经过2～3次有限稀释法克隆化后建立了分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株6B_4及7C_4。其染色体数目为86～88对,它对人精子有制动、凝集作用并有种间交叉反应,对人 LDH 活力有明显的消耗作用。证明该抗体有特异性。这些生物学特性对男性避孕有一定的实用价值。     

喉癌相关抗原的免疫原性及其应用的研究

目的：为了喉癌的早期诊断和预后疗效观察，制备了抗人喉癌多克隆抗体。方法：用间接血球凝集抑制试验和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测喉癌病人的血清及癌组织中喉癌相关抗原。结果：血清中及喉癌组织中喉癌相关抗原的检出率分别为８３．３％和９４．１％，与对照组相比差异非常显著（Ｐ＜０．０１）。结论：制备的抗人喉癌多克隆抗体可以作为喉癌诊断的标记物