褪黑素对PDGF诱导的肝星状细胞中JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨褪黑素对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞-T6(HSC-T6)JAK2/STAT3信号通路的影响。方法将HSC-T6细胞分为6组:对照组、模型组、实验组(褪黑素1 nmol·L^-1、1μmol·L^-1、0.1 mmol·L^-1)、抑制剂组(AG490为JAK2/STAT3通路的抑制剂),MTT实验检测褪黑素对PDGF激活的HSC-T6细胞增殖的影响;免疫组化和Western blot检测褪黑素HSC-T6细胞中p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达。结果与对照组比较,PDGF能明显激活HSC-T6细胞增殖,明显上调HSC-T6细胞中p-JAK2、p-STAT3的表达;与模型组比较,褪黑素和抑制剂均可抑制PDGF激活的HSC-T6细胞增殖,显著下调p-JAK2、p-STAT3的表达。结论褪黑素可抑制PDGF诱导的HSC-T6的活化与增殖,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

苦参素对肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的:研究苦参素对肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响,阐明其抗肝纤维化的作用机制.方法:采用袁桃霞[1]等的肝星状细胞的分离方法和MTT法(甲基噻唑基四唑,metyl thiazolyl tetronzolium)及ABC免疫酶染色方法分别检测肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响.结果:苦参素能明显抑制肝星状细胞的增殖及Ⅰ型胶原的合成,并呈剂量依赖性.     

瘦素对肝星状细胞活化的调控及其在肝纤维化进展中的作用

摘要：瘦素是一种主要由白色脂肪组织产生的激素,与肝星状细胞活化有着密切联系。瘦素与其功能性受体结合后可以通过JAK2/STAT3、PI3K/Akt、MAPK等信号通路及相关分子对肝星状细胞的活化产生影响;而肝星状细胞活化是肝纤维化发生发展的关键环节。该文就瘦素与肝星状细胞活化的相关信号通路及分子在肝纤维化发生发展中的作用进行综述,为肝纤维化的治疗提供依据。     

秦皮素通过调节JAK1/STAT3信号通路抑制肝纤维化

目的探讨秦皮素对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的防治作用及其机制。方法将48只成年雄性SD大鼠随机均分为4组,即正常对照组、模型组、秦皮素低剂量组和秦皮素高剂量组。除正常对照组外,其余3组大鼠给予50%CCl4花生油混合液(2 mL·kg-1)灌胃,每周2次,建立肝纤维化模型,持续8周。给药组造模的同时每日给予秦皮素干预,剂量分别为25 mg·kg-1和50 mg·kg-1。正常对照组给予等量的生理盐水。8周后处死各组大鼠,称量体重和肝重;全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL);放射性免疫法测定血清透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)。HE和Masson染色考察肝组织病理学改变,免疫组织化学染色检测肝组织α-SMA的表达;Western blot检测肝脏组织中α-SMA和JAK1/STAT3信号通路关键蛋白的表达水平;Q-PCR检测肝窦毛细血管化调控因子(VEGF、β-FGF和PD-ECGF)基因的表达水平。结果与模型组相比,秦皮素给药组中肝纤维化大鼠肝功能指标(ALT、AST、TBIL)和纤维化指标(HA、LN、CⅣ、PⅢNP)血清水平明显减低。HE和Masson染色结果显示秦皮素能显著改善肝纤维化大鼠肝脏组织病理学结构和胶原沉积程度。与此同时,秦皮素能够抑制肝星状细胞激活标志物(α-SMA)以及肝窦毛细血管化调控因子(VEGF、β-FGF、PD-ECGF)的表达。与模型组相比,秦皮素给药组大鼠肝脏中p-JAk1和p-STAT3蛋白的表达水平显著降低。结论秦皮素可改善大鼠肝纤维化,其机制可能与抑制JAK1/STAT3信号通路有关。     

IL-10抑制转化生长因子β1诱导的大鼠肝星状细胞Ⅰ型胶原合成作用观察

目的探讨IL-10抗纤维化的可能机制.方法体外培养大鼠肝星状细胞系rHSC-99,分别用不同浓度的IL-10、TGF β1干预和两者共同干预,用ELISA法检测肝星状细胞(HSC)的Ⅰ型胶原合成的影响.结果TGF β1显著增强HSC的Ⅰ型胶原的合成.IL-10单独干预对HSC的I型胶原的合成无明显影响,但IL-10可显著抑制TGF β1促进HSC的Ⅰ型胶原的合成.结论TGFβ1显著促进HSC的Ⅰ型胶原的合成,IL-10对TGF β1的促HSC Ⅰ型胶原合成有抑制作用,这可能是IL-10发挥抗肝纤维化作用的途径之一.     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠肝星状细胞中的瘦素与Ⅰ型胶原水平的影响

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcys-teine,NAC)影响大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖,及其对瘦素与Ⅰ型胶原蛋白分泌的变化。方法:HSC以1×105/mL浓度接种于96孔培养板,每孔100μL,进行以下实验分组:NACⅠ、Ⅱ、Ⅲ组,加入NAC使得各组培养液中NAC浓度分别是10、20、40mmol/L;加生理盐水为对照组。培养48h终止后吸取上清液-20℃冰冻保存,ELISA法检测细胞培养上清液瘦素与Ⅰ型胶原蛋白水平;MTT法观察细胞增殖情况。结果:NACⅢ组平均吸光度低于NACⅠ组和对照组(P<0.05);NACⅡ、Ⅲ组其HSC培养上清液瘦素水平均显著低于对照组(P<0.01);NAC各组Ⅰ型胶原蛋白水平均显著低于对照组(P<0.01)。结论:HSC在NAC作用下增殖减少;瘦素与Ⅰ型胶原蛋白分泌受到抑制,这可能是NAC抗纤维化的机理之一。     

IL-0抑制转化生长因子β1诱导的大鼠肝星状细胞工型胶原合成作用观察

的探讨IL-10抗纤维化的可能机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞系rHSC-99，分别用不同浓度的IL-10、TGFβ1干预和两者共同干预，用ELISA法检测肝星状细胞（HSC）的Ⅰ型胶原合成的影响。结果TGFp1显著增强HSC的Ⅰ型胶原的合成。IL-10单独干预对HSC的Ⅰ型胶原的合成无明显影响，但IL-10可显著抑制TGFβ1促进HSC的Ⅰ型胶原的合成。结论TGFβ1显著促进HSC的Ⅰ型胶原的合成，IL-10对TGFβ1的促HSC Ⅰ型胶原合成有抑制作用，这可能是IL-10发挥抗肝纤维化作用的途径之一。     

苦参素对肝星状细胞增殖及I型胶原合成的影响

目的：研究苦参素对肝星状细胞增殖及I型胶原合成的影响，阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法：采用袁桃霞等的肝星状细胞的分离方法和MTT法（甲基噻唑基四唑，metyl thiazolyl tetronzolium）及ABC免疫酶染色方法分别检测肝星状细胞增殖及I型胶原合成的影响。结果：苦参素能明显抑制肝星状细胞的增殖及I型胶原的合成，并呈剂量依赖性。     

KLF4基因沉默对大鼠肝星状细胞 HSC-T6胶原代谢的影响及机制研究

目的：探讨大鼠KLF4基因沉默,对大鼠肝星状细胞HSC-T6胶原代谢的影响及其机制。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒（pGPU6-1,pGPU6-2,pGPU6-3）以及阴性对照。采用实时荧光定量RT-PCR（ Real-time RT-PCR ）和western blot的方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况,筛选出沉默最好的干扰质粒,将筛选出来的干扰质粒pGPU6-3,转染大鼠HSC-T6细胞。转染24 h和48 h后分别采用Real-time RT-PCR法和western blot的方法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA和蛋白的表达。 Real-time RT-PCR法以GAPDH为内参照,用2－ΔΔCt法进行分析计算。 western blot的方法以β-actin蛋白为内参照,进行分析。结果 Real-time RT-PCR结果显示, pGPU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1相对于对照组的mRNA表达分别下降为0敂．358±0．038,0．298±0．041和0．478±0．048;而MMP-13 mRNA的表达则上升为1．712±0．034。 Western Blot检测中,pG-PU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后,以β-actin为内参照,Ⅰ型胶原蛋白,Ⅲ型胶原蛋白和TIMP-1蛋白的表达分别下降为0．326±0．051,0．283±0．074和0．331±0．039;而MMP-13蛋白的表达则上升为1．273±0．038。结论 KLF4基因沉默可以显著减少大鼠HSC-T6细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,其机制与增加MMP-13表达,而抑制TIMP-1的表达有关。     

苦参素对肝星状细胞胶原合成能力的影响

近年来关于苦参素的实验研究很多,大多是在抗病毒方面[1,2].大量临床实践证实,苦参素可以阻止甚至逆转肝脏纤维化,但其作用机制及调节途径尚不明确.肝纤维化以肝脏细胞外基质(ECM)大量增生沉积为特征,是各种慢性肝病所共有的病理特点,肝星状细胞(HSC)是胶原合成和降解的关键细胞,苦参素可能是通过抑制HSC总胶原及Ⅰ型胶原的合成,从而产生抗肝脏纤维化作用的.     

白及多糖对氧化损伤的人角质形成细胞JAK/STAT信号通路的影响

摘要目的探讨白及多糖对氯化钴（CoCl2）诱导人角质形成细胞（HKC）氧化应激形成炎症损伤的JAK/STAT信号通路的保护作用机制。方法用白及多糖对HKC进行预处理后,用CoCl2处理HKC细胞,建立化学性低氧化剂诱导皮肤细胞氧化应激导致炎症损伤的细胞模型,以噻唑蓝法检测细胞生存活率,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞培养液中白细胞介素（IL） 6和IL 8的水平;以ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF） α的分泌量,检测JAK2蛋白的表达。结果白及多糖提高CoCl2诱导角质形成细胞的存活率具有剂量依赖性。白及多糖高、中剂量组TNF α、IL 6和IL 8含量与CoCl2对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论CoCl2通过产生氧化应激反应导致HKC炎症损伤;白及多糖通过调节JAK/STAT信号通路的JAK2表达水平抑制TNF α、IL 6和IL 8的释放,可能是其对HKC抗氧化损伤保护作用机制之一。     

黄芩素通过抑制JAK2/STAT1通路减轻Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤

本研究旨在探讨黄芩素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制.采用20 μmol·L-1 Aβ25-35损伤PC12细胞,通过细胞形态观察、Hoechst 33342染色和炎症因子检测考察黄芩素对Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用,采用Western blotting方法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨...     

盐霉素抑制大鼠肝星状细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的研究

目的 研究盐霉素抑制大鼠肝星状细胞胶原蛋白合成的作用机制.方法 体外培养大鼠肝星状细胞(HSC-T6),以酶联免疫吸附(ELISA)法检测HSC-T6上清液中Ⅰ型(ColⅠ)和Ⅲ型(ColⅢ)胶原蛋白的分泌,以实时定量聚合酶链反应(Real time-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测Wnt/β-连...     

茯苓多糖对高糖诱导乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及JAK1/STAT3通路影响

目的:探讨茯苓多糖对高糖诱导下乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及Janus激酶1/信号转导和转录激活因子3(JAK1/STAT3)通路的影响.方法:0,10,20,30,40,50,60 mmol·L-1的葡萄糖分别作用MCF-7细胞48h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各浓度葡萄糖对MCF-7细胞增殖的影响,筛选最佳的...     

过氧亚硝基阴离子通过JAK/STAT信号途径促进系膜细胞纤连蛋白的合成

目的:通过高糖环境下ONOO-对系膜细胞合成纤连蛋白的影响,对其作用机制进行相关探讨。方法:根据人肾小球系膜细胞情况进行分组,组别为正常组,高糖组,高糖尿酸组,高糖AG490组,通过培养收集细胞和上清液,进行细胞总蛋白提取。采用ELISA检测细胞上清液FN含量、免疫细胞化学与Westernblot检测NT总蛋白、p-JAK2、P-STAT3蛋白的表达。结果:高糖两组NT总蛋白、p-JAK2、p-STAT3、FN表达明显增高,随时间延长表达逐渐增多,48h时表现最为显著。高糖尿酸组和高糖AG490组NT、p-JAK2、p-STAT3、FN相较单纯高糖组明显减少(P<0.05);但三组间NT表达无统计差异。结论:高唐环境下ONOO-表达过量,通过JAK/STAT信号托经可促使系膜细胞FN合成。     

JAK/STAT信号通路在类风湿关节炎致病机制及治疗靶点中的作用进展

类风湿关节炎(RA)是一种以滑膜炎及骨破坏为特征的全身炎症性自身免疫性疾病,若未及时治疗,最终会发展为关节畸形、功能障碍,甚至残疾。Janus激酶(JAK)转录活化子(STAT)信号通路在RA的发生发展中扮演关键角色,针对该通路的治疗靶点使RA疾病缓解成为现实,故成为近年来研究的热点。本文就JAK/STAT信号通路的结构与功能,对该通路参与RA滑膜炎症、软骨及骨侵蚀的作用机制进行阐释,总结基础实验和临床药物对该通路治疗靶点的最新研究成果,重点对目前全球批准的14种JAK抑制剂最新研究现状进行综述,为更多RA治疗药物的研发提供新思路。     

基于JAK/STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型的建立基于JAK/STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型的建立

目的建立基于JAK/STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型,筛选调节免疫系统、造血系统和抗肿瘤药物。方法构建以串连的多个STAT的DNA结合序列为调控序列,以荧光酶基因作为报告基因的表达载体。通过将该载体分别转入体外培养的不同细胞系中使之稳定表达,建立具有激活STAT活性的药物筛选模型,并利用多个抗过敏和抗肿瘤药物样品进行检测。结果建立多株药物筛选细胞模型,筛选方法简便,操作容易,灵敏度高,结果稳定。结论本细胞株可以用于大规模高通量药物筛选。     

当归对阴虚哮喘小鼠气道杯状细胞及JAK1/STAT6信号通路的影响

目的 探讨当归对阴虚哮喘小鼠气道杯状细胞增生及JAK1/STAT6信号通路的影响。方法 采用卵清白蛋白与甲状腺复制阴虚哮喘动物模型,观测当归对阴虚哮喘小鼠肺通气功能、哮喘气道杯状细胞增生、肺组织中Muc5ac、IL-13、IL-4含量以及JAK1与STAT6表达水平的影响。结果 当归可明显缓解阴虚哮喘小鼠呼吸频率、潮气量及增强呼气间歇的异常变化,改善肺功能,降低肺指数及肺组织湿干重比值,抑制气道杯状细胞增生,降低肺组织中Muc5ac、IL-13及IL-4含量,抑制肺组织JAK1及STAT6蛋白的表达(P＜0.05, 0.01)。结论 当归具有明显缓解气道杯状细胞增生及Muc5ac高表达而平喘的作用,抑制JAK1/STAT6信号通路是其改善哮喘气道黏液分泌失衡的作用机制之一。     

黄精多糖通过调节JAK2/STAT3通路改善异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌肥厚

目的探讨黄精多糖调节JAK2/STAT3通路改善异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚的作用。方法异丙肾上腺素背部皮下注射5 mg/(kg·d),1次/d,连续给药14 d,建立大鼠心肌肥厚模型。将60只SD大鼠随机分为6组,包括对照组,模型组,黄精多糖低剂量组(200 mg/kg)、中剂量组(400 mg/kg)、高剂量组(800 mg/kg),普萘洛尔组(150 mg/kg)。造模第2天开始灌胃给药治疗1个月。给药结束后分别检测各组大鼠全心质量指数(HMI)、左心室质量指数(LVMI);取心脏切片进行HE染色;生物化学法检测血清中氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、过氧化脂质(LPO)的含量;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量;Western blot检测心肌组织中JAK2、P-JAK2和STAT3、P-STAT3蛋白表达。结果模型组大鼠HMI、LVMI高于对照组(P<0.01),心肌细胞增大;与模型组比较,黄精多糖中剂量组HMI降低(P<0.05),高剂量组HMI、LVMI降低(P<0.05,P<0.01),两组大鼠心肌细胞均缩小。模型组血清SOD、GSH-Px含量低于对照组(P<0.05,P<0.01),血清MDA、LPO、TNF-α、IL-6水平及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达高于对照组(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,黄精多糖低剂量组血清MDA、LPO降低(P<0.05);中剂量组血清GSH-Px含量升高(P<0.05),MDA、LPO、TNF-α、IL-6水平及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);高剂量组血清SOD、GSH-Px含量升高(P<0.05),MDA、LPO、TNF-α、IL-6水平及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。药物作用呈一定的剂量依赖性。结论黄精多糖对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌肥厚有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化、抗炎、抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制.方法:培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10-6、10-7、10-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达.结果:在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成;西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达.结论:西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关.