代谢型谷氨酸受体4在ES细胞体外分化为心肌细胞中的表达研究

目的:探索代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,mGluR4)在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)体外分化为心肌细胞中的表达情况。方法:采用悬滴培养法,体外诱导ES细胞分化为心肌细胞,分别以维甲酸(retinoic acid,RA)和溶剂二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)作为阳性对照和阴性对照;利用免疫荧光法和流式细胞术,鉴定ES细胞衍生心肌细胞团中心肌特异性蛋白α-actinin/Troponin-T和mGluR4共表达情况;用Western Blot法,考察ES细胞定向分化为心肌细胞过程中mGluR4蛋白表达水平;同时观察了小鼠胚胎心脏发育过程中mGluR4基因和蛋白表达变化。结果:ES细胞及其分化来的早期心肌细胞团均表达mGluR4,随着心肌细胞逐渐成熟,mGluR4蛋白表达水平下调。流式细胞术结果显示,贴壁分化11 d的细胞团中mGluR4与心肌特异性蛋白Troponin-T共表达细胞比率仅为(3.00±1.00)%。同时,小鼠胚胎心脏发育过程中mGluR4基因和蛋白表达也呈下降趋势,直至成体小鼠心脏中不表达mGluR4蛋白。结论:ES细胞体外分化为心肌细胞过程中mGluR4有表达并呈下调趋势,与小鼠体内心脏发育过程中mGluR4表达情况基本一致。     

淫羊藿苷诱导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞方法学研究

目的 采用药物淫羊藿苷(icariin,ICA)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养的微环境,建立一种药物介导提高ES细胞体外定向心肌细胞分化率的实验体系.方法 采用悬滴培养法,构建ICA诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞的实验评价体系;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定心肌细胞.结果 ICA在10-7mol·L-1浓度时,对ES细胞定向分化为心肌细胞呈现最佳诱导效应,分化率最高达84%(P＜0.001).ES细胞源心肌细胞表达心肌特异性基因肌球蛋白重链(α-MHC)和心室肌球蛋白轻链(MLC-2v),且心肌特异性肌小节α辅肌动蛋白(α-actinin)和肌钙蛋白T(troponin T)呈阳性表达.结论 悬滴培养法结合药物改善微环境,可用于药物诱导ES细胞定向分化心肌细胞的实验体系.     

抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞

目的探讨采用抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cell,mESC）分化为心肌细胞的可行性。方法未分化ES细胞在滋养层上长至汇合,胰酶消化成单个细胞经旋转生物反应器（RCCS）制备拟胚体（em-bryoid bodies,EBs）,EBs贴壁后用抗坏血酸诱导分化为心肌细胞。通过光镜观察跳动的心肌细胞,采用免疫组织化学、激光共聚焦显微镜（CLSM）和RT—PCR的方法鉴定心肌细胞。结果抗坏血酸能有效地诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化,诱导效率为90％;分化的心肌细胞自发而有节律地收缩,心肌肌钙蛋白T（cTnT）、α-辅肌动蛋白（α—actinin）、肌动蛋白（actin）表达阳性。此外,分化的心肌细胞还表达调控心肌发育的基因α—MHC、β—MHC。结论抗坏血酸能有效地诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞。     

小鼠胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞的实验研究

1981年，英国Evans等首先报道了由小鼠囊胚内细胞群经体外培养而成功获得胚胎性干细胞(embryonic stem cells，ES)。同年，美国Martine。建立了小鼠ES细胞系，由于ES细胞具有分化的全能性，在体外培养过程中加入合适的诱导分化剂可以诱导出所需要的特殊类型细胞和组织，从而引起了人们的极大关注。ES细胞向心肌细胞定向分化的研究将为临床心肌损害的治疗提供一条新的思路。     

小鼠胚胎干细胞体外发育分化模型

胚胎干细胞 (Embryonicstemcell ,EScell)是多潜能性细胞 ,它在体外既可维持不分化而无限增殖 ,又能参与胚胎发育分化为各种类型细胞和组织而形成器官 ;小鼠ES细胞可供的数量大、在体外培养条件可进行精确调控、实验比较经济加上现代基因及其他生物操作等技术 ,因此小鼠ES细胞体外发育分化系统被广泛地作为模型系统加以利用。小鼠ES细胞体外发育分化研究为推动其他哺乳类动物以及人的ES细胞研究 ,从而将更好地进行细胞、组织工程实验为人类细胞组织和基因治疗服务创造了有利条件。本文将ES细胞体外发育分化情况加以概述 ,以便更好地开展ES细胞体外研究     

胚胎干细胞向造血细胞分化的研究进展

0 引言 成熟血细胞和造血干细胞来源的缺乏一直严重阻碍着临床输血和造血干细胞移植的发展,将胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)这一能在体外大量扩增的全能干细胞体外分化为成熟血细胞和造血干细胞有可能解决这些难题。ES 细胞向造血细胞的体外分化也可为阐明哺乳动物造血发育的细胞和分子机制提供良好的模     

胚胎干细胞生物学特性

来源于早期胚胎或原始生殖细胞的胚胎干细胞(ES细胞)可在体外抑制分化培养条件下无限扩增,并保持未分化状态和多能性.ES细胞研究是国际生物科学的热点课题之一.多年来,众多学者对ES细胞形态结构、核型、分化潜能、碱性磷酸酶、胚胎阶段特异性细胞表面抗原的表达以及一些分子标记等生物学特性作了大量研究报道,为ES细胞分离鉴定提供了理论基础.     

心脏毒性的临床前检测

胚胎干细胞（ES）衍生心肌细胞代表一个系统，介于原位细胞和培养细胞之间。未分化ES细胞允许进行标准化、扩展和基因操控处理，已分化细胞可提供反映其原始细胞正常生理活动的图像。本文对检测心脏毒性的几种常见模型与含有体外分化的纯心肌细胞的检测系统进行比较。     

川芎含药血清诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

目的:探讨川芎含药血清诱导小鼠胚胎干细胞(ES)分化为心肌细胞的特征,建立简便、高效的定向诱导ES细胞向心肌细胞分化的体系。方法:观察川芎含药血清作用下ES细胞活性,诱导第3天起可见自发性、有节律跳动的类胚体出现,第5天达到高峰,约有70%的拟胚体产生跳动。用RT-PCR法在跳动的拟胚体中检测心肌细胞特异性标志物β-MHC的表达。结果:川芎含药血清培养下的细胞β-MHC的表达水平和分化率均明显升高,与大鼠血清组和胎牛血清组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:川芎含药血清可明显提高体外诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化的效率。     

川芎含药血清诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

目的:探讨川芎含药血清诱导小鼠胚胎干细胞(ES)分化为心肌细胞的特征,建立简便、高效的定向诱导ES细胞向心肌细胞分化的体系。方法:观察川芎含药血清作用下ES细胞活性,诱导第3天起可见自发性、有节律跳动的类胚体出现,第5天达到高峰,约有70%的拟胚体产生跳动。用RT-PCR法在跳动的拟胚体中检测心肌细胞特异性标志物β-MHC的表达。结果:川芎含药血清培养下的细胞β-MHC的表达水平和分化率均明显升高,与大鼠血清组和胎牛血清组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:川芎含药血清可明显提高体外诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化的效率。     

胚胎干细胞的体外培养及分化的研究现状和前景

胚胎干细胞(Embryonicstemsell,ES细胞)是从早期胚胎内细胞团(Innercellmass,ICM)或原始生殖细胞(Primordialgermcell,PGCs)经体外分化抑制培养分离克隆的,ES细胞在组织工程、基因治疗和发育生物学等的应用研究中起着重要作用。本文介绍了ES细胞的生物学特点及国内外研究进展和动态,阐明了建立ES细胞系的技术要点以及它的应用前景。     

胚胎干细胞的研究新进展

随着干细胞生物学研究热潮的掀起，胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）的研究也取得了巨大进步。ES细胞是指胚泡期的内细胞团中分离出的尚未分化的、能在体外培养、具有发育全能性的早期胚胎细胞。ES细胞具有胚胎细胞和体细胞的某些特性，既可进行体外培养、扩增、转化和制作基因突变模型等遗传操作，又保留了分化成包括生殖细胞在内的各种组织细胞的能力。因此，具有无限增殖、自我更新和多向分化的潜能。ES细胞在临床移植医学、细胞治疗、组织工程、药理学及发育生物学基础等研究领域具有重要的科学意义和巨大的应用前景，对于有效地治疗人类多种疾病，维护和促进人类健康具有巨大的潜在价值。     

胚胎干细胞的体外培养及分化的研究现状和前景

胚胎干细胞（Embryonic stem sell，ES细胞）是从早期胚胎内细胞团（Inner cell mass，ICM）或原始生殖细胞（Primordial germ cell．PGCs）经体外分化抑制培养分离克隆的，ES细胞在组织工程、基因治疗和发育生物学等的应用研究中起着重要作用。本文介绍了ES细胞的生物学特点及国内外研究进展和动态，阐明了建立ES细胞系的技术要点以及它的应用前景。     

小鼠胚胎干细胞体外非定向分化培养系统的建立及其形态学观察

目的 建立胚胎干细胞(embryonic stem cells，ES cells)体外非定向分化培养系统，为其向各种成熟细胞的定向诱导分化提供方法学和形态学基础。方法 选用BALB／c小鼠ES细胞，分别进行未分化培养和非定向分化培养，对培养系统中ES细胞的发育和分化情况进行观察。结果 ①ES细胞在含小鼠白血病抑制因子的培养液中保持未分化状态，呈克隆性生长；②ES细胞在分化第2～10天和11～13天分别发育为拟胚体(embryonic bodys，EBs)和囊胚；③分化第14天，囊胚贴壁形成以贴壁点为中心的细胞群落并分化多种类型细胞，包括类上皮细胞、心肌细胞和神经细胞等；④分化第17～30天，三维组织结构形成；⑤分化第36天，细胞出现衰退裂解。结论 ES细胞在该培养系统中自然分化为包括三个胚层的多种类型细胞，为下一步定向分化提供技术支持。     

牛胚胎干细胞分离克隆及定向分化研究

胚胎干（embryonic stem,ES）细胞自Evans和Kanfman（1981）首次从小鼠胚胎中分离到后,胚胎干细胞技术一度成为各国学者研究的热点。ES细胞是自附置前早期胚胎或附置后胚胎原始生殖细胞分离克隆的一种具有自我更新和全向分化潜能的细胞,其具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能,同时又可以在体外进行培养、扩增、转化、筛选和冻存。它为克隆治疗以及深入研究基因结构与功能、胚胎发育、各种遗传病模型以及克隆动物和转基因动物等提供了新型实验材料。ES细胞在发育生物学基础研究、组织工程研究、临床医学等方面具有诱人的应用前景和重要的科学意义。本研究以牛为实验材料,探讨影响牛ES细胞分离克隆的因素,完善牛ES细胞的分离克隆程序,为人类ES细胞的研究提供相关的技术参数,主要取得了如下几方面的成果。     

心肌干细胞研究现状及展望

心肌干细胞是一类具有分化为心肌细胞潜能的干细胞，其来源有：胚胎干细胞、骨髓干细胞、胚胎的心肌细胞以及脐带血干细胞。本文就心肌干细胞的研究现状、表面标记物、体外分化及诱导方法、心肌干细胞分化前后电生理特点、存在的问题及展望作一综述。     

胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞 (embryonicstemcell,ES细胞 )是从哺乳动物的囊胚内细胞群 (innercellmass,ICM)和原始生殖细胞 (Pri mordialgermcells,PGCs)经体外分化、抑制培养并分离克隆出来的一种原始、高度未分化细胞[1 ] 。ES细胞是一种具有自我复制、更新和发育全能性并能产生后代能力的早期胚胎细胞。在特定条件下可分化为人体 2 0 0多种细胞类型 ,并可构建成心、肝、肾等各种组织和器官 ,最后能发展成一个完整的个体。自 1 998年Thomson[2 ] 等分离并克隆了人的ES细胞后 ,国内外掀起了ES细胞研究的高潮 ,打开了体外生产可供移植治疗的所有类型…     

特异性标记胚胎干细胞分化的成血管细胞

克隆小鼠flk1基因启动子和增强子,构建成血管细胞特异性表达GFP载体,并转染小鼠胚胎干细胞(ES).将ES分化形成胚胎体(EB),观察EB中GFP表达,收集第4天的EB细胞进行流式细胞分析和分选,以获得GFP+细胞进行血细胞集落形成实验,以确定GFP标记细胞造血分化潜能.结果显示,成功构建成血管细胞特异性表达GFP载体;转染的ES形成的EB中可见绿色荧光细胞.流式细胞分析结果发现,转基因组EB中的GFP+细胞(27.5%)与对照组EB中FLK1+细胞(28.1%)比较差异无统计学意义;GFP+和FLK1+细胞形成集落数比较差异无统计学意义.表明对ES分化产生的成血管细胞实现了特异性标记,为后续研究ES体外造血分化的分子机制奠定了基础.     

人胚胎干细胞分化研究进展

胚胎干细胞（Embryonic Stem Cell,ES细胞）是由着床前囊胚期内细胞团（Inner Cell Mass,ICM）或早期胚胎原始生殖嵴的胚胎生殖细胞（Primordial Germ Cells,PGCs）建立的、可在体外未分化状态下长期增殖传代的、具有稳定的二倍体核型和多能干细胞表面特异抗原标记的、可分化为3个胚层来源的各种组织和细胞类型（包括生殖腺和生殖细胞）的永久细胞系。基于其特性,目前普遍认为,ES细胞对体外研究动物和人胚胎的发生发育,新基因的发现,药物的筛选和致畸实验及作为细胞组织移植治疗,克隆治疗和基因治疗的细胞源及产生克隆和转基因动物等领域将产生重要的影响。本文综述了人胚胎干细胞诱导分化研究进展。     

胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞包括来自囊胚内细胞群的ES细胞和来自胚胎原始生殖嵴的EG细胞，其中ES细胞维持不分化传代培养已达80代。由于这些细胞具有高度复制能力及多向性分化潜能，近年来的研究使人们对胚胎干细胞的培养条件、表面分子标记和鉴定方法、诱导分化及其应用前景，以及当前研究方面存在的主要问题有了进一步的认识。