多重耐药基因MTrR突变对淋病奈瑟菌多重耐药的影响及其相关性

目的:研究多重耐药基因MTrR突变对淋病奈瑟菌的多重耐药的影响及其相关性。方法:采用琼脂稀释法检测34株淋病奈瑟菌菌株对临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),选取不同耐药淋病奈瑟菌株,提取DNA;采用PCR法扩增MTrR基因并测序扩增产物,比较其与淋病奈瑟菌标准敏感菌的差异。结果:34株淋病奈瑟菌菌株中,其中32株的多重耐药率为94.12%,8株MTrR基因突变发生在第45位Gly(GGC-GAC)Asp段,4株发生在第51位Phe(TTC-GTC)Val段。结论:淋病奈瑟菌有较高的多重耐药率,MTrR基因第45位与第51位基因突变与淋病奈瑟菌多重耐药间具有相关性。     

淋病奈瑟菌4种抗生素耐药基因研究

目的检测淋病奈瑟菌(淋菌)临床分离株青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素耐药基因。方法对分离自常州地区的42株淋菌进行耐药相关基因TEM-1、penA、tetM、gyrA、16SrRNA基因检测分析。结果42株淋菌中31株TEM基因阳性,22株tetM基因阳性;并均存在penA、gyrA基因的突变。16SrRNA基因无突变。多种基因检测证实这些淋菌已对青霉素、四环素、环丙沙星2种或3种同时耐药。结论临床常用于治疗淋病的青霉素、四环素、环丙沙星已有较高的耐药率,大观霉素是淋病治疗的有效药物。     

多重耐药MRSA耐消毒剂基因及抗生素耐药相关基因检测

目的明确浙江湖州解放军第98医院临床分离的多重耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin—resistant Staphylococcus aureus，MRSA)耐消毒剂基因及抗生素耐药相关基因存在状况。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测20株多重耐药MRSA中耐消毒剂基因(qacA)、β-内酰胺类耐药相关基因(mecA、blaTEM)、氨基糖苷类耐药相关基因(氨基糖苷类修饰酶基因)[aac(6’)／aph(2″)、aph(3’)-Ⅲ、ant(3″)-1、ant(4′，4″)、ant(6)-1]、四环素耐药相关基因(terM)、红霉素耐药相关基因(erm)和万古霉素耐药相关基因(vanA、vanB)。结果20株MRSA中，qacA、mecA、blaTEM、aac(6’)／aph(2″)、aph(3’)-Ⅲ、tetM和eyYn基因PCR扩增均阳性，1株ant(4’，4″)基因阳性，而ant(3″)-1、ant(6)-1、vanA和vanB4种基因均阴性。结论临床分离的多重耐药MRSA中qacA、mecA、blaTEM、aac(6′)／aph(2″)、aph(3’)-Ⅲ、tetM和PM基因携带率均很高；在MRSA中发现qacA基因为我国首次报道，应引起医院感染监控部门高度重视。     

淋病奈瑟菌对大观霉素耐药性及耐药基因

目的 探讨淋病奈瑟菌对大观霉素耐药及其机制。方法 采用琼脂稀释法对临床分离的95株淋病奈瑟菌进行大观霉素敏感性测定,根据结果对耐药菌株和部分敏感菌株进行PCR扩增核苷转移酶、16S核糖体核糖核酸(16SrRNA)等特异基因片段,并对后者进行测序分析。结果根据最小抑菌浓度(MIC),95株淋病奈瑟菌对大观霉素的敏感率、中度敏感率及耐药率分别为94．7％(90／95)、4．2％(4／95)和1．1％(1／95)。未检测出核苷转移酶ANT基因,对耐药株的16SrRNA基因序列进行分析时发现其相当于大肠杆菌的第1192位发生了C→T的突变。结论 大观霉素仍为目前治疗淋病的首选药物,但已出现耐药株,应引起重视。淋病奈瑟菌对大观霉素的耐药与16SrRNA的突变有关。     

19株诺卡菌的药敏与克拉霉素及四环素类耐药相关基因的关系研究

目的 研究诺卡菌临床分离株的药敏及与克拉霉素和四环素类耐药相关基因的关系。方法 以微量肉汤稀释法检测诺卡菌对15种抗菌药物的耐药性；以PCR法检测19株诺卡菌克拉霉素的耐药相关基因ermA、ermB、mefA、msrD，对四环素类的耐药相关基因tetO、tetM、tetL。结果 19株诺卡菌中，ermA基因检出率为15.8%(3/19)，未检出tetO、tetM、tetL、ermB、mefA、msrD基因。药敏结果显示19株诺卡菌对米诺环素和多西环素耐药率均为5.3%，未见克拉霉素耐药菌株。耐药率最高的为环丙沙星，占78.9%，其次为庆大霉素和头孢吡肟，分别占21.1%和15.8%。对其余药物均具有较高的敏感性。结论 诺卡菌对米诺环素、多西环素耐药与tetO、tetM、tetL基因无关，存在另外的四环素类相关耐药机制。ermA基因并不能引起克拉霉素耐药。     

山西地区91株淋球菌耐药性分析

目的检测山西地区淋病奈瑟菌（NG）对5种抗生素的敏感性,分析其耐药特点。方法K—B琼脂扩散法测定NG对抗生素的敏感性及产色头孢噻吩法检测β-内酰胺酶。结果91株淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、头孢曲松和大观霉素的耐药率分别为69．23％、87．91％、97．80％、0和5．49％,检出质粒介导的产青霉素酶的淋病奈瑟菌（PPNG）38株（41．76％）,同时耐2种及2种以上抗菌药物的多重耐药率为94．51％。结论青霉素、四环素及环丙沙星已不宜用于山西地区淋病的治疗;头孢曲松和大观霉素耐药率较低,可以作为山西地区治疗淋病的首选药物。但是大观霉素已出现耐药株．应引起重视。同时山西地区多重耐药现象十分严重。持续监测淋球菌的耐药性十分必要。     

多重PCR技术检测沙门菌两种四环素耐药基因

应用两对特异性引物同时检测四环素耐药基因tetB和tetC通过对35株沙门菌分离株的四环素耐药性检测，表明所有沙门菌分离株均含tetC基因，与药敏试验结果阳性符合率65．7％，8株同时含有tetB基因，与药敏试验结果阳性符合率100％，tetB基因和tetC基因双阳性的菌株与药敏试验结果阳性符合率也为100％。取其中部分菌株扩增出tetB和tetC基因片段进行序列分析，5株菌的tetB基因扩增产物序列完全相同，与质粒pRT11相应序列同源性达99．7％；14株菌的tetC基因扩增产物与质粒pBR322中的相应序列同源性为100％。证实沙门菌耐药基因普遍存在，且同时含有tetB和tetC基因的菌株表现耐药。多重PCR技术同时检测两种四环素耐药基因，适合大量样本的检测，对开展沙门菌四环素多种耐药基因的分子流行病学监测提供了有效途径。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的 了解临床分离的铜绿假单胞菌中β-内酰胺类抗生素耐药相关基因的存在状况。方法 自临床分离20株铜绿假单胞菌，采用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因（blaTEM、blaSHV、blaOXA-10、blaPER、blaVEB、blaGES、blaCARB、blaIMP、blaVIM、blaDHA、blaMOX、blaFOX和oprD2）。结果 20株中blaTEM阳性20株（100％）、blaGES阳性20株（100％），5株oprD2基因缺失（25％），其余基因均阴性。结论 临床分离的铜绿假单胞菌blaTEM及blaGES基因携带率高。从铜绿假单胞菌中检出blaGES基因为国内首次报道。     

大肠埃希菌连续分离株耐药表型及复方磺胺甲嘿唑耐药相关基因研究

目的了解临床分离的大肠埃希菌耐药性和复方磺胺甲噁唑（SMZ／TMP）耐药相关基因存在状况。方法测定临床连续分离的60株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应（PCR）检测SMZ／TMP耐药相关基因（sull、dfrAl、dfrA17）。结果60株中sul1、dfrA1、dfrA17基因阳性分别为34株（56．7%）、1株（1．7%）、35株（58．3％）。结论临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重；复方磺胺甲嗯唑耐药相关基因携带率高。     

淋病奈瑟菌的耐药性与喹诺酮耐药基因突变的相关性分析

目的 分析本地区淋病奈瑟菌临床菌株gyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药的相关性.方法 采用琼脂稀释法检测37株淋病奈瑟菌临床菌株对6种抗生素的最小抑菌浓度(MIC),PCR法扩增淋病奈瑟菌临床菌株gyrA基因片段并测序.结果37株淋病奈瑟菌临床菌株对大砚霉素、头孢曲松、四环素、青霉素、氧氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为0、...     

多重耐药淋病流行株孔蛋白和泵蛋白的表达

为探讨外排系统、外膜通透性与淋病流行株多重耐药性的关系。应用KB法和琼脂稀释法从湛江地区分离出62株淋球菌多重耐药株；利用SDS—PAGE法测定淋球菌外膜孔蛋白的表达；采用直接荧光法测定能量抑制剂NaNa加入前后淋球菌对抗生素的摄入和积累情况，比较耐药菌与敏感菌内膜泵蛋白表达的差异。结果显示，5株多重耐药菌均有外膜孔蛋白表达的缺失或下降，同时伴有外排泵蛋白的表达。提示外排系统、外膜通透性与淋病流行株的多重耐药性密切相关。     

淋球菌对大观霉素等5种抗生素的耐药性监测

目的　监测广州地区 2 0 0 2～ 2 0 0 3年度分离的淋球菌对青霉素、四环素、大观霉素、头孢曲松和环丙沙星的耐药性 ,分析耐药菌株的流行特点。方法　采用琼脂稀释法测定菌株对 5种抗生素的最小抑菌浓度(MIC) ,判断敏感性按 WHO西太区淋球菌耐药性监测统一标准。用纸片酸度法检测产 β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)菌株。结果　 10 7株淋球菌中检出 96株对青霉素耐药 (89.7% ) ,产 β-内酰胺酶淋球菌 (PPNG) 2 0株(占 18.7% ) ;四环素耐药率为 6 5 .4 % ,其中质粒介导高度耐四环素淋球菌 (TRNG)为 31株 ,占 2 9.0 % ;环丙沙星耐药率为 88.8% ;未发现对大观霉素和头孢曲松耐药菌株。青霉素 四环素和环丙沙星的 MIC50 及MIC90 均已超过耐药标准 ,尤其是青霉素为甚 ,其 MIC50 及 MIC90 均超过耐药标准的 8倍和 6 4倍。结论　淋球菌对大观霉素和头孢曲松的敏感性较高 ,可作为治疗的首选药物 ,对青霉素、四环素和环丙沙星耐药率较高 ,提示对淋病的治疗作用差     

Analysis of mutations within multiple genes associated with resistance in a clinical isolate of Neisseria gonorrhoeae with reduced ceftriaxone susceptibility that shows a multidrug-resistant phenotype

A Neisseria gonorrhoeae strain with a reduced susceptibility to ceftriaxone (minimum inhibitory concentration (MIC) = 0.5 microg/mL) was isolated among 398 clinical isolates obtained from 2000-2001 in Fukuoka City, Japan. The N. gonorrhoeae strain was negative for penicillinase production but it showed multidrug resistance against penicillin (MIC = 8 microg/mL), tetracycline (MIC = 4 microg/mL), azithromycin (MIC = 0.5 microg/mL) and ciprofloxacin (MIC = 16 microg/mL). The molecular mechanisms of the multidrug-resistant phenotype in this strain were analysed. Polymerase chain reaction and direct DNA sequencing were performed to identify mutations within the penA, ponA, mtrR, penB, gyrA and parC genes of the gonococcal strain, which thus explain the multidrug-resistant phenotype. The N. gonorrhoeae strain contained a significantly different sequence of the penA gene from that of the ceftriaxone-susceptible strains. Some regions of the transpeptidase domain within this penA gene were closely similar to those found in other Neisseria species such as Neisseria subflava, Neisseria flavescens or Neisseria perflava/sicca. This strain also included a ponA mutation that is associated with high-level resistance to penicillin, mtrR mutations that mediate overexpression of the MtrCDE efflux pump responsible for resistance to hydrophobic agents such as azithromycin, and penB mutations that reduce porin permeability to hydrophilic agents such as tetracycline. Moreover, this strain contained gyrA and parC mutations that confer high-level resistance to ciprofloxacin. These results indicate the emergence of a N. gonorrhoeae strain with reduced susceptibility to ceftriaxone, which also showed a multidrug-resistant phenotype that can be explained by the presence of multiple loci mutations associated with antibiotic resistance.     

Antimicrobial susceptibilities and distribution of resistance genes for beta-lactams and macrolides in Streptococcus pneumoniae isolated between 2002 and 2004 in Tokyo

Antimicrobial susceptibilities of 205 Streptococcus pneumoniae strains isolated between 2002 and 2004 in Japan were examined and the distribution of genes for resistance to penicillins and macrolides were investigated by polymerase chain reaction. The molecular epidemiology of 92 randomly selected isolates was also examined by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). The numbers of S. pneumoniae isolates resistant to benzylpenicillin, clarithromycin and tetracycline were, respectively, 39 (19%), 111 (54%) and 155 (76%), and the numbers increased annually. All isolates were susceptible to amoxicillin, fluoroquinolones, vancomycin and linezolid. Analysis of mutations in the genes for penicillin-binding protein showed that 92% of isolates had mutations in pbp1a, pbp2b and/or pbp2x. Susceptibility to benzylpenicillin decreased with increasing number of mutated pbp genes. The macrolide resistance genes ermB and mefA were found in 99 (48%) and 76 (37%) isolates, respectively. The presence of ermB was associated with high-level resistance to macrolides, and the percentage of isolates with ermB increased annually. The presence of mefA also increased with increasing number of mutated pbp genes. Although the 92 isolates belonged to 74 PFGE types, three groups with an 80% similarity in their PFGE patterns were found at high frequency. Two of the three groups contained no isolates susceptible to penicillin and/or tetracycline, and their percentages increased annually. Our results suggest that the number of S. pneumoniae isolates with reduced susceptibility due to accumulation of resistance genes has been increasing.     

2010年～2012年某区127株淋球菌抗生素敏感性的分析

目的了解江门地区2010年²012年淋球菌对抗生素的敏感性及变化趋势。方法采用琼脂稀释法测定6种抗生素对127株淋球菌的最小抑菌浓度(MIC)及质粒介导的高度耐四环素淋球菌(TRNG),采用纸片酸度法检测菌株是否产β-内酰胺酶(PPNG)。结果淋球菌对大观霉素及头孢克肟的敏感率均为100%,头孢曲松为77.95%,环丙沙星敏感率最低,其耐药率高达92.13%;127株淋球菌中检出PPNG菌株48株(37.80%),TRNG菌株51株(40.16%)。结论淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星的耐药率较高,大观霉素及头孢克肟可作为治疗本地区淋病的首选药物。     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的探讨我院肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因分布规律。方法对20株经双纸片试验确证为ESBLs表型阳性的肺炎克雷伯菌进行bla TEM-1、blaSHV-1、CTX—M-1组、TOHO-1组等4种基因PCR扩增，并对16株blaSHV-1基因PCR扩增阳性的菌株进行基因序列测定，在Internet网上与GenBank中的已知序列进行核苷酸相似性分析，并进行编码基因对位和氨基酸序列对比分析。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌中blaTEM-1，blaSHV-1，CTX—M-1组等3种基因扩增阳性率分别是50．0％、95．0％、20．0％。16株肺炎克雷伯菌中有4株序列与SHV—1a（序列号：X98101，74→934）氨基酸序列完全相同；有3株序列与SHV-2（序列号：AY570959，42→812）100％相同；有2株序列与SHV-11（序列号：AY293069，41→817）100％相同；有4株序列与SHV-27（序列号：AF293345，2→821）氨基酸序列完全相同；有1株序列与SHV-28（序列号：AF538324，12→823）100％相同；有2株序列在GenBank中未找到与之完全相同的序列。结论本地肺炎克雷伯菌中有SHV—1a、SHV-11、SHV-28广谱β-内酰胺酶基因和SHV-2、SHV-27 ESBLs基因存在。     

淋球菌耐药现状及耐药机制研究进展

淋球菌对青霉素、四环素、氟喹诺酮和阿奇霉素等耐药严重,对头孢菌素敏感性降低的淋球菌株正在增加中,偶有大观霉素耐药的淋球菌株。淋球菌对青霉素和四环素耐药机制包括染色体介导的低度耐药和质粒介导的高度耐药。氟喹诺酮耐药主要是gyrA和parC基因发生突变引起。大环内酯类药物耐药与ermF、ermB、ermC基因及mtrR基因突变有关。淋球菌对头孢曲松敏感性降低主要由于penA、mtr等基因突变相关。淋球菌spe位点单步突变导致对大观霉素高度耐药。多重耐药主要与mtrR编码区内的基因突变或多位点突变相关。     

儿童淋球菌感染及耐药状况分析

目的：探讨重庆儿童医院就诊的儿童中淋球菌感染的特点，并对淋球菌的耐药状况进行分析。方法：采用儿童眼分泌物和阴道分泌物进行淋球菌分离培养与鉴定及常用药物敏感试验。结果：幼女是淋球菌最主要的侵袭对象，主要表现为阴道炎。淋球菌对壮观霉素是敏感，其耐药率为0.对头孢曲松钠和环丙沙星较敏感，其耐药率分别为25％和35％，而青霉素治疗效果不肯定，敏感率为35％，耐药率为55％。结论：儿童淋球菌感染抗菌药物治疗时，应根据病情、耐药特性及经济能力选用敏感抗生素。