肿瘤坏死因子α诱导胶质瘤细胞凋亡和p38丝裂素活化蛋白激酶表达

一、材料和方法1.材料 :胶质瘤细胞Ｃ6购自本校全军神经外科研究所。重组人肿瘤坏死因子α(ＲｈＴＮＦ α)购自Ｓｉｇｍａ公司 ,按照所需浓度以ＰＢＳ稀释。噻唑蓝 (ＭＴＴ)购自Ａｍｒｅｓｃｏ公司。二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)购自Ｆｌｕｋａ公司。ＲＰＭＩ 16 40培养液购自Ｓｉｇｍａ公司。小牛血清购自杭州四季青生物制品公司。ｐ38丝裂素活化蛋白激酶 (ｐ38ｍｉｔｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓ,ｐ38ＭＡＰＫ)抗体由新加坡国立大学林圣彩教授惠赠。免疫组织化学ＳＡＢＣ试剂盒购自武汉博士德公司。2 .方法 :(1)Ｍ…     

p38 MAPK与内毒素性肺损伤

MAPK是信号由细胞表面转导到细胞内部的重要传递者,参与了LPS激活效应细胞产生活性物质的细胞内信号转导过程.p38 MAPK通过磷酸化转录因子引起多种相关基因转录,调控活性物质的表达,参与炎症反应过程.在信号通路水平阻断和调控p38 MAPK的表达将成为治疗急性肺损伤的新途径.     

MAPK信号转导通路和Caspase-3,Akt与脑缺血损伤

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是信号从细胞表面转导到细胞内部的重要传递者.MAPK信号转导通路与神经元的存活和凋亡密切相关.多种胞外刺激包括缺血、兴奋性氨基酸中毒、电刺激等均可激活MAPK信号转导通路,引起神经元的凋亡.     

TNF家族新成员TRAIL及其受体与细胞凋亡

肿瘤坏死因子家族(TNF)成员在细胞凋亡的调控中发挥重要作用。TRAIL(TNF related apoptosis inducing ligand)是最近发现的TNF家族成员。在体外史验中,TRAIL能诱导多种肿瘤细胞凋亡,而正常组织细胞却对其不敏感,提示TRAIL可能成为一种新的抗肿瘤药物。TRAIL受体的发现揭示了一种新的细胞凋亡调控机制,即通过假受体竞争性抑制配体,从而诱导细胞凋亡作用。TRAIL可能与Fas系统互补而发挥作用,并且与HIV-1感染所致的T细胞减少及p53介导的DNA损伤所致细胞凋亡有关。     

JNK和p38通路与正常及异常造血

c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和P38蛋白激酶是信号从细胞表面转导到细胞内部的重要传递者,与细胞的生物学功能有密切关系.JNK和P38活性受到多种造血因子的调节,JNK和P38通路参与了对正常及恶性造血细胞分化和凋亡的调控.     

内毒素诱导p38MAPK信号转导作用的研究进展

The diseases caused by endotoxin have seriously affected human health. Previous studies have shown that p38 MAPK pathway is involved in the intracellular signal transduction induced by lipopolysaccharide (LPS), which plays an important role in the activation of inflammation-related cells to release inflammation mediator. Recently there have been some progresses in the isoforms distribution, substrate, molecular mechanism of regulating the release of inflammatory mediators, cellular specific activation and levels of p38 MAPK.     

FasL与TNF引起凋亡的研究进展

死亡分子与死亡分子受体相互作用引发的细胞凋亡在保持自身平稳发挥着无法代替的重要作用。目前ＦａｓＬ,ＴＮＦ和ＴＲＡ１三个死亡分子及ＦａｓＴＮＦＲ,ＤＲ３／ＷＳ１－１和ＣＡＲ１四个死亡分子受体已被确定,本文就ＦａｓＬ和ＴＮＦ两个死亡分子在与其受体Ｆａｓ下调免疫反应,效应分子和免疫特赦的研究现状予以综述。     

MAPK和NF-κB上调脂多糖诱导的小鼠肺微血管内皮细胞Toll-like受体4的表达

目的 观察MAPK和NF-κB在经脂多糖（LPS）诱导的小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）Toll-1ike受体4（TLR4）表达增强中的作用。方法 分离培养PMVECs。不同浓度的LPS与PMVECs共培养2h，或与LPS（100μg/L）作用不同时间。用ELISA法检测培养上清液中TNF-α含量。分别用ERK抑制剂PD98059和P38MAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂PDTC进行干预。用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TLR4和TNF-α mRNA。用Western-blot检测ERK／P38MAPK和核蛋白NF-κB的表达。结果 在LPS浓度为50～500μg／L时，作用于PMVECs 2h，或LPS100μg/L作用不同时间时，培养上清液中TNF-α含量呈剂量和时间依赖性显著增加（P〈0．01）。PMVECs表达TNF-α及TLR4mRNA增加，6h时达高峰。分别用上述抑制剂均可缓解上述变化，而同时联合使用PD98059和SB203580则进一步增强该抑制作用。上述抑制剂分别缓解LPS诱导的PMVECs表达ERK／P38MAPK和NF-κB蛋白增强。结论 MAPK和NF-κB上调给脂多糖诱导的小鼠PMVECs TLR4的表达。     

p38MAPK通路参与炎性痛及电针干预的可能性

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)是细胞内重要的信号传导系统之一.p38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶的重要组成部分之一,在炎症性疼痛的发生发展过程中发挥着重要作用,已有大量资料表明电针具有较好的抗炎镇痛作用,同时有研究发现电针具有调节p38MAPK活化的作用,所以电针在炎性痛疾病中对p38MAPK通路干预存在可能性.     

周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡中p38MAPK信号通路的作用

背景：当牙齿受异常咬合力时会导致牙体吸收、牙周组织的大量破坏。 目的：研究牙周膜成纤维细胞在受到周期性张应力刺激后是否发生凋亡及p38MAPK信号通路是否参与该凋亡过程。 方法：取4~7代成纤维细胞,同步化后随机分为对照组、加力组和SB203580组。加力组和SB203580组细胞加载力值为12%表面应变率,加力频率为6个循环/min,即5 s拉伸,5 s松弛。SB203580组细胞在加力前1 h加入终浓度为20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580。分别在加力6,12,24 h,取各组细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡基因bax mRNA的表达。 结果与结论：与对照组比较,加力后成纤维细胞凋亡率及bax mRNA表达增加 (P < 0.05),且随着加力时间的延长而增强,12 h达高峰,之后逐渐下降。与加力组比较,SB203580组对应时间点细胞凋亡减少 (P < 0.05),bax mRNA表达降低。说明细胞受到力学刺激会发生凋亡,而丝裂原活化蛋白激酶p38MAPK信号通路参与了该凋亡过程。     

肿瘤坏死因子与细胞凋亡

肿瘤坏死因子具有多种生物学活性，其与细胞膜上特异性受体结合后，能诱导某些非肿瘤细胞和大多数肿瘤细胞凋亡，对清除病理状态下机体受损的细胞及杀灭肿瘤细胞，起着重要的作用。ＤＮＡ? 转录和蛋白合成抑制剂可增强其诱导的凋亡效应，其他协同因素也得到进一步的研究     

MAPK级联途径在脑发育与脑损伤修复中的作用

中枢神经系统内存在丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)级联 (cascade)途径 ,是细胞内主要的信号转导系统。MAPK级联途径主要包括Ras ERK通路、JNK SAPK通路、p3 8MAPK通路等 ;它与神经营养因子 (NTFs)、神经细胞表面受体如G蛋白偶联受体 (GPCR) ,蛋白酪氨酸激酶受体 (TKR)、神经递质如钙离子、乙酰胆碱等作用有关 ,具有极其重要的生理功能。此外 ,MAPK级联途径还参与了脑发育异常、脑细胞凋亡、脑损伤及脑损伤的保护等病理生理机制。     

MAPK和NF-κB上调脂多糖诱导的小鼠肺微血管内皮细胞Toll-like受体4的表达

目的观察MAPK和NF-κB在经脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)Toll-like受体4(TLR4)表达增强中的作用。方法分离培养PMVECs。不同浓度的LPS与PMVECs共培养2 h,或与LPS(100μg/L)作用不同时间。用ELISA法检测培养上清液中TNF-α含量。分别用ERK抑制剂PD98059和P38MAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂PDTC进行干预。用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4和TNF-αmRNA。用W estern-b lot检测ERK/P38 MAPK和核蛋白NF-κB的表达。结果在LPS浓度为50~500μg/L时,作用于PMVECs 2 h,或LPS 100μg/L作用不同时间时,培养上清液中TNF-α含量呈剂量和时间依赖性显著增加(P<0.01)。PMVECs表达TNF-α及TLR4 mRNA增加,6 h时达高峰。分别用上述抑制剂均可缓解上述变化,而同时联合使用PD98059和SB203580则进一步增强该抑制作用。上述抑制剂分别缓解LPS诱导的PMVECs表达ERK/P38 MAPK和NF-κB蛋白增强。结论MAPK和NF-κB上调给脂多糖诱导的小鼠PMVECs TLR4的表达。     

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶是一类丝 /苏氨酸和酪氨酸双重底物特异性的磷酸酶 ,对于丝裂素活化蛋白激酶活性的调节起着十分重要的作用。目前已发现的MKPs家庭成员有MKP 1 (CH1 3 4 ,CL1 0 0 ) ,MKP 2(hVH 2 ) ,MKP 3 (Pyst 1 ) ,MKP 4 ,hvH 3 (B2 3 ) ,hvH 5(m3 /6) ,PAG1 ,Pyst 2 ,其中除Pyst 1外 ,都是即早基因编码的产物。MKPs受MAPK信号通路中多种成分的诱导 ,决定了它与MAPK之间作用的特异性。它通过去磷酸化作用调节MAPK信号途径的活性 ,确保了细胞内信号的精确传递 ,参与了多种主要的细胞功能的调节。     

丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路研究进展

丝裂素活化蛋白激酶（MitogenActivatedProteinKinase,MAPK）是信号从细胞表面转导到细胞内部的重要传递者，包括ERK，JNK，P38及ERKS亚族。MAPK家族参与了细胞生长、发育、分裂及细胞间功能的同步等多种生理过程，并在细胞恶性转化等病理过程中起重要作用。本文就近年来MAPK家族的级联反应，及各亚族的生物学特征作一综述。     

p38MAPK参与千金藤素诱导的心肌细胞凋亡

目的: 探讨千金藤素(CEP)致Sprague-Dawley(SD)乳大鼠心肌细胞的凋亡作用及其信号途径。方法: 应用MTT法检测千金藤素对心肌细胞活性的抑制作用;利用Hoechst 33342染色及Western blotting方法检测凋亡相关信号分子caspase-3,观察CEP致心肌细胞凋亡的作用;采用Western blotting法观测 CEP对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族3个主要信号分子c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38 MAPK磷酸化水平的影响,并利用ERK和p38 MAPK的特异性抑制剂,分别验证两种分子所介导的信号通路在CEP致心肌细胞凋亡中的作用。结果: (1)CEP能够剂量依赖和时间依赖地抑制心肌细胞的活性。(2)CEP作用于心肌细胞,出现细胞核碎裂现象和caspase-3激活。(3)CEP作用下p38 MAPK和ERK磷酸化水平显著增强,JNK的磷酸化状态未发生显著改变。(4)p38 MAPK磷酸化抑制剂SB203580显著减轻CEP对心肌细胞活性的抑制作用;ERK磷酸化抑制剂PD98059不能影响CEP对心肌细胞活性的抑制作用。结论: p38 MAPK参与CEP致心肌细胞凋亡作用。     

FAP-1与细胞凋亡抑制

凋亡或细胞分化紊乱在肿瘤生成中起着重要作用,Fas(MPO-1/FasR/CD95)是肿瘤坏死因子/神经生长因子受体(TNR/NGFR)超家族中的一员,是介导细胞凋亡的一种重要的细胞表面分子。Fas胞质区(C端)的15个氨基酸为负性调节区,其最末端的3个氨基酸残基(SLV)对FAP-1的PDZ3(GLGF)结构域起了关键作用。 FAP-1是一种250kD的蛋白质酪氨酸磷酸酯酶(PTP),由N端(膜结合区)、C端(催化区)和6个PDZ结构域组成。它与Fas在胞浆区结合后,能影响凋亡信号的传导,从而阻止Fas诱导的细胞凋亡。1995年,FAP-1首次被发现与FasC端15个氨基酸结合,从而抑制Fas信号的转导。而在拮抗Fas介导的细胞毒性作用的组织或细胞系中均有FAP-1的高表达,而提高FAP-1在T细胞系中的表达可以部分抑制Fas诱导的凋亡。从而推定FAP-1是Fas信号转导中的负性调节因子。FAP-1广泛表达     

癌基因p21^ras、raf和细胞外信号调节蛋白激酶参与刺激Jurkat细胞产生TNF—β和IL—2

目的 明确p21^ras－细胞外信号调节蛋白激酶（the extracellular signal-regulated protein ki-nase,ERK）系列是否参与调节Jurkat细胞产生TNF－β和IL－2。方法 用负向突变基因p21^ras(ras17N或ras15A),raf-1(raf1-130)及ERK1（erk1K71R)或活性结构p21^ras(H-ras6IL)和raf（raf22W）转染细胞,以PMA／PHA刺激细胞,ELISA法检测细胞因子。结果 PMA／PHA刺激细胞产生较正常对照细胞约2倍PMA／PHA刺激细胞,ELISA法检测细胞因子。结果 PMA／PHA刺激细胞产生较正常对照细胞的2倍的TNF－β和IL－2（P＜0．001）。负向突变基因去除了PMA／PHA增加细胞因子分泌的作用。活性突变基因本身不影响TNF－β和IL－2产生,但明显增强细胞对PMA／PHA的应答（P＜0．05）。结论 p21^ras-ERK系列在调节Uurkat细胞在PMA／PHA刺激下产生TNF－β和IL－2中起重要的作用。     

Xaf1调节TNFR信号转导而诱导细胞凋亡的机制研究

目的： 利用基因开关调节的Xaf1-Saos诱导细胞株， 检测Xaf1对TNFR信号转导通路的影响，探索Xaf1与TNF-α协同诱导细胞凋亡的机制。方法： 以免疫印迹法和RT-PCR检测Xaf1对TNFR1 表达的影响，细胞周期 DNA 含量流式细胞术检测NF-κB对Xaf1诱导细胞凋亡的影响，gel mobility shift assay 检测NF-κB的DNA结合活性， luciferase 活性检测法及RT-PCR检测NF-κB的转录活性，激酶分析法检测SAPK/JNK 激酶的活性。结果： Xaf1不影响TNFR1蛋白及mRNA水平的表达，细胞内诱导活性的NF-κB可抑制Xaf1诱导的细胞凋亡， Xaf1的表达抑制TNF-α所介导的NF-κB的DNA结合活性和转录活性，也抑制了SAPK/JNK 激酶的活性。结论： Xaf1 对TNFR信号转导的抑制是Xaf1协同TNF-α诱导细胞凋亡的机制之一。     

Fas和Fasl在细胞凋亡中的作用

Ｆａｓ是位于细胞膜上的跨膜受体，ＦａｓＬ为Ｆａｓ的配体，二者的结合将启动死亡信号，导致细胞凋亡。本文着重对Ｆａｓ和肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦＲ）的关系以及Ｆａｓ和Ｆａｓｌ调节细胞凋亡的机理作一综述。