不同产地草珊瑚优良种源筛选研究

目的 测定46个不同产地种源草珊瑚叶、茎的生物量以及活性成分落新妇苷、迷迭香酸、异嗪皮啶含量,以总量为考查指标,筛选优良种源。方法 样品来自福建三明三元吉口采育场草珊瑚种植栽培示范区3年生成熟草珊瑚,每个产地随机取20株,分叶与茎,晾干,称量,计算成每10株叶、茎干品重量作为生物量;含量测定采用HPLC。色谱柱：Ultimate C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相A为乙腈-0.2%磷酸溶液(18∶82),B为乙腈-0.2%磷酸溶液(30∶70);梯度洗脱：0~30 min,A→B;流速：1 mL·min^-1;柱温：室温;检测波长：茎部位(测定迷迭香酸、异嗪皮啶)为344 nm,叶部位(测定落新妇苷、迷迭香酸)为290 nm;分析有效成分含量、生物量以及总量。结果 不同地理种源草珊瑚生物量差别显著,含量差别较大,计算总含量与总量均有较大差异,筛选5个高产质优的产地有3个来自福建三明。结论 多指标有效成分总含量结合生物量筛选高产优质良种,指导科学种植有很大意义。     

HPLC法同时测定草珊瑚中富马酸、异嗪皮啶和迷迭香酸的含量

目的:建立HPLC法同时测定草珊瑚中富马酸、异嗪皮啶和迷迭香酸含量。方法:采用Ultimate XB C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0～10 min,2%A→20%A;10～35 min,保持20%A),流速1.0 mL.min-1,检测波长为208 nm,柱温为30℃。结果:富马酸,异嗪皮啶和迷迭香酸的线性范围分别为0.0190～0.133(r=0.9999),0.0204～0.143(r=0.9999),0.0212～0.148μg(r=0.9999);平均回收率(n=6)分别为101.3%(RSD=1.4%),99.1%(RSD=1.1%),98.2%(RSD=1.9%)。结论:该方法简便、快速、准确,适用于草珊瑚中富马酸、异嗪皮啶和迷迭香酸的含量测定。     

中药草珊瑚中异嗪皮啶和总黄酮含量的分析研究

目的建立草珊瑚中主要有效成分异嗪皮啶和总黄酮的含量测定方法.方法异嗪皮啶的测定采用高效液相色谱法,μ-Bondapak C18柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸(17∶83),检测波长为344 nm;总黄酮采用比色法测定.结果不同产地和采收季节草珊瑚药材中总黄酮和异嗪皮啶含量差异较大,总黄酮和异嗪皮啶含量在10～12月份期间较高.结论提供了对草珊瑚质量控制的方法,草珊瑚的采收季节应为每年10～12月.     

高效液相色谱波长切换法同时测定肿节风中多指标成分的含量

目的：建立肿节风药材中反丁烯二酸、异秦皮啶和落新妇苷的含量测定方法。方法：采用DiamonsilC18（200mm×4．6mm，5μm）柱，以乙腈为流动相A，以0．1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，检测波长分别切换为210，344nm，290nm。结果：反丁烯二酸在0．0710～1．4020μg范围内线性关系良好，平均回收率为103．0%，RSD为=1．1%；异嗪皮啶在0．071，6～0．716，0μg范围内线性关系良好，平均回收率为99．8％，RSD为1．9％。落新妇苷在0．0413～0．6195Mg范围内线性关系良好，平均回收率为99．5％，RSD为2．0％。结论：本方法简便、准确，重复性好，在同一色谱条件下可同时测定反丁烯二酸、异秦皮啶和落新妇苷的含量。     

草珊瑚不同部位及不同采收期有效成分含量的考察

目的：探讨草珊瑚药材的采收及最佳采收期。方法高效液相色谱法测定异秦皮啶、迷迭香酸含量。结果异嗪皮啶在根中含量最高,其次是茎,叶中含量最低;迷迭香酸的含量则在叶中含量最高,根及茎中含量较低;不同的采收月份草珊瑚中有效成分的含量差异较大,异嗪皮啶的含量以3月、6月、7月3个月为最高;迷迭香酸的含量以2月、3月、11月、12月4个月的含量较高。结论草珊瑚药材的采收应以全草为宜,采收期为每年的2～7月较为适宜。     

HPLC-DAD法测定多穗金粟兰不同部位中异嗪皮啶和党参内酯的含量

摘要：目的:建立HPLC测定多穗金粟兰中异嗪皮啶和党参内酯含量的方法,并比较多穗金粟兰不同部位（根、茎、叶）中两种成分的含量差异,为金粟兰科药材多穗金粟兰资源深入开发提供参考依据。方法:色谱柱:Phenomenex C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）,进行梯度洗脱;流速:1.0 ml·min-1;检测波长:230 nm;柱温:30℃;进样量:20μl。结果:异嗪皮啶和党参内酯分别在0.001～0.050μg（r=0.999 8）和0.002～0.100μg（r=0.999 6）范围内与峰面积呈良好的线性关系,精密度、重复性及稳定性均良好,异嗪皮啶和党参内酯平均回收率分别为99.09%（RSD=1.53%）,98.35%（RSD=1.89%）（n=6）。多穗金粟兰不同部位中异嗪皮啶和党参内酯的含量次序为:根>茎>叶。结论:本方法简便快捷、准确可靠,重现性高,可为多穗金粟兰的质量控制提供依据。多穗金粟兰根、茎、叶中均含有异嗪皮啶和党参内酯,但不同部位的含量差异较大,其根中异嗪皮啶和党参内脂含量最高,具有较高药用开发价值。     

HPLC-VWD-ELSD法同时测定消炎宁胶囊中7个成分的含量

目的 采用高效液相色谱-紫外检测器-蒸发光散射检测器(HPLC-VWD-ELSD)法同时测定消炎宁胶囊中苦玄参苷IA、异嗪皮啶、迷迭香酸、金丝桃苷、甘草苷、冬青素A和毛冬青皂苷A₁的含量。方法 采用Waters Symmetry C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为乙腈(A)-0.15%醋酸水溶液(B),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1。苦玄参苷IA、异嗪皮啶、迷迭香酸、金丝桃苷、甘草苷采用VWD进行检测,切换波长分别为270 nm及342 nm;冬青素A和毛冬青皂苷A₁采用ELSD进行检测,漂移管温度为85℃,载气流速3.5 L·min^-1。结果 苦玄参苷IA、异嗪皮啶、迷迭香酸、金丝桃苷、甘草苷、冬青素A和毛冬青皂苷A₁进样量分别在1.764～35.28μg、0.6903～13.81μg、0.9524～19.05μg、0.4067～8.134μg、0.2136～4.272μg、0.9182～18.36μg和0.7665...     

HPLC法比较野生刺五加中的异嗪皮啶

目的 建立刺五加中异嗪皮啶的定量方法,并对主产区采集的刺五加野生药材的不同部位、不同生长年限及不同生长环境的异嗪皮啶的量进行测定,为分析刺五加野生药材的质量提供参考。方法 刺五加异嗪皮啶的提取采用超声提取法,HPLC法测定,色谱柱为Diamonsil C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 mm）,流动相为乙腈-0.1%磷酸（20：80）,检测波长344 nm,体积流量1.0 mL/min。结果 异嗪皮啶进样量在16.8～252.0 ng呈现良好的线性关系（r=0.999 9）,平均回收率为100.4%,RSD值为1.0%（n=6）。刺五加不同部位中,皮的异嗪皮啶含量最高,茎次之,根及根茎含量较低。不同生长年限中,5年生刺五加异嗪皮啶含量最高,3年生含量次之,2年以下含量最低。阳坡生长的异嗪皮啶含量高于阴坡生长的药材。总体分析异嗪皮啶的含量黑龙江高于吉林。结论 本方法可操作性强,简便快速,重复性好,回收率高,稳定可靠,可作为刺五加药材的质控方法。鉴于野生药材生长年限不一,分布不集中,与栽培的药材相比含量波动大,因此,在药品生产过程中,根据对中间体或成品中异嗪皮啶含量的要求,有必要建立刺五加药材异嗪皮啶的含量标准,以保证生产药品的质量。     

HPLC同时测定胜红清咽含片中异嗪皮啶、迷迭香酸、绿原酸的含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定胜红清咽含片中异嗪皮啶、迷迭香酸和绿原酸的含量。方法采用DIKMA Diamonsil C18（4.6mm ×250mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈（A）-0.2％磷酸溶液（B）,梯度洗脱（0～8min,15％A;8～20min,15％A～18％A;20～25min,18％A～22％A;25～40min,22％A;40～50min,22％A～25％A;50～60min,25％A～55％A）;流速为1.0mL· min －1;柱温30℃;检测波长为334nm,进样量为10μL。结果异嗪皮啶、迷迭香酸和绿原酸分别在11.70～234.00μg· mL －1（r＝0.9998）、13.58～271.60μg· mL －1（r ＝0.9999）、5.656～     

HPLC法测定清热消炎宁颗粒中异嗪皮啶和迷迭香酸的含量

目的建立高效液相色谱测定清热消炎宁颗粒中异嗪皮啶和迷迭香酸含量的方法。方法采用HPLC方法,色谱柱为AgilentZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80),流速为1.0 ml/min,检测波长为340 nm。结果异嗪皮啶浓度在2.074～41.48μg/ml范围内,迷迭香酸浓度在2.062～41.24μg/ml范围内均呈良好的线性关系,相关系数r分别为0.999 9、0.999 2,平均回收率分别为98.89%、99.16%,RSD分别为1.59%、1.02%。结论该方法操作简便、结果准确、重现性好,可用于清热消炎宁颗粒的质量控制。     

HPLC-UVD法测定肿节风水提物及相关制剂中迷迭香酸及异嗪皮啶的含量

目的采用HPLC法测定肿节风水提取物及相关制剂中迷迭香酸和异嗪皮啶的含量,为肿节风提取物及制剂的质控方法奠定基础。方法采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水(分别含体积分数为0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,流速1.00 mL.min-1,检测波长330 nm,柱温35℃。结果迷迭香酸的质量浓度在4.746~189.8 mg.L-1内、异嗪皮啶的质量浓度在1.018~40.72 mg.L-1内线性关系良好;仪器精密度试验、重复性试验、稳定性试验RSD均不大于2.0%。肿节风水提取物中迷迭香酸与异嗪皮啶的回收率分别为99.8%和99.2%,RSD分别为0.70%和0.63%(n=6);迷迭香酸与异嗪皮啶在相关制剂中回收率分别为100.7%和98.4%,RSD分别为1.6%和0.44%(n=6)。12批肿节风水提取物供试品中迷迭香酸的含量在1.479~6.447 mg.g-1内、异嗪皮啶的含量在1.912~3.540 mg.g-1内;在以肿节风水提取物制成的相关制剂中,迷迭香酸的含量在0.847~15.946 mg.g-1内、异嗪皮啶的含量在2.032~4.093 mg.g-1内。结论作者建立的肿节风及制剂的定量分析方法简便、快速、专属性强、重现性好,为肿节风水提取物及相关制剂质量标准的提升奠定了基础。     

肿节风药材的HPLC指纹图谱研究及其异嗪皮啶与迷迭香酸的含量测定

目的：研究肿节风药材的高效液相色谱（HPLc）指纹图谱,并测定药材中异嗪皮啶与迷迭香酸的含量,以建立药材有效的质量评价方法。方法：色谱柱为Inertsil ODS-4（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为0．1％磷酸溶液．乙腈（梯度洗脱）,流速为1．0ml／min,检测波长为342nm。结果：所得肿节风药材的HPLC指纹图谱分离度、精密度、重复性和稳定性均良好;10批肿节风药材指纹图谱的平均相似度为0．853,不同产地样品的指纹图谱差异不大,但4个代表性色谱峰的峰面积有所区别。异嗪皮啶与迷迭香酸的质量浓度均在5-500mg／ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系（r分别为0．9995、0．9989）;平均加样回收率分别为105．20％、99．52％,RSD分别为1．39％、1．56％（n均为6）;10批肿节风药材中异嗪皮啶与迷迭香酸的含量存在明显差异,尤以迷迭香酸含量差异较大。结论：该方法简便、准确、重复性好,可以作为肿节风药材的质量控制方法。     

高效液相色谱波长切换法测定老慢清糖浆中异嗪皮啶、迷迭香酸和柚皮苷的含量

目的:建立同时测定老慢清糖浆中异嗪皮啶、迷迭香酸和柚皮苷含量的液相色谱测定法。方法:色谱柱为Waters SunFire^TM C₁₈ (4.6 mm×150 mm, 5 μm);以乙腈-0.1%磷酸水溶液(18:82)为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,柱温:30℃,检测波长:0~12 min为342 nm;12~18 min为284 nm; 18~35 min为342 nm。结果:嗪皮啶进样量在0.019~0.335 μg范围内线性关系良好(r=0.9998, n=6),平均回收率为99.57%,RSD为1.5%(n=9);迷迭香酸进样量在0.022~0.397 μg范围内线性关系良好(r=0.9999,n=6),平均回收率为99.55%,RSD为1.3%(n=9)。柚皮苷进样量在0.085~1.531 μg范围内线性关系良好(r=0.9999,n=6),平均回收率为99.19%,RSD为1.5%(n=9)。结论:该方法准确、快捷、可靠,可更好地用于老慢清糖浆中异嗪皮啶、迷迭香酸和柚皮苷的质量控制。     

HPLC法测定氯霉素滴眼液的含量

目的:建立测定氯霉素滴眼液的含量测定方法.方法:高效液相色谱法ODS柱,流动相为水-甲醇-O.1%H3PO4(55:45:O.1),检测波长为280nm,流速1.Oml/min.结果:线性回归方程为:A=1.08×104C 2.85×1O4 r=O.9997,线性范围为2.05～10.25μg/ml,平均回收率为99.6%,RSD为O.6%.结论:该方法准确,灵敏度高,重现性好,可作为质量检验的定量方法.     

HPLC法测定野生与栽培肿节风中迷迭香酸的含量

目的建立野生与栽培肿节风中迷迭香酸含量的测定方法,分析比较肿节风不同部位中迷迭香酸含量的差异。方法采用HPLC法,固定相为Phenomenex C18色谱柱(250mm×4.6mm,4μm);流动相为乙腈-1mL.L-1磷酸溶液(25∶75);流速为1.0mL.min-1,柱温为40℃,检测波长为342nm。结果野生肿节风根、茎、叶中迷迭香酸的平均含量分别为0.25%,0.42%和1.43%,栽培肿节风根、茎、叶中迷迭香酸的平均含量分别为0.29%,0.49%和1.50%。结论肿节风药材根、茎、叶3个部位中的迷迭香酸含量差异较大,叶中含量最高,茎中其次,根中最低。相同部位比较,栽培肿节风较野生的迷迭香酸含量高。     

Coronatin-1 isolated from entomopathogenic fungus Conidiobolus coronatus kills Galleria mellonella hemocytes in vitro and forms potassium channels in planar lipid membrane

Entomopathogenic fungi are important natural regulatory factors of insect populations and have potential as biological control agents of insect pests. The cosmopolitan soil fungus Conidiobolus coronatus (Entomopthorales) easily attacks Galleria mellonella (Lepidoptera) larvae. Prompt death of invaded insects is attributed to the action of toxic metabolites released by the invader. Effect of fungal metabolites on hemocytes, insect blood cells involved in innate defense response, remains underexplored to date.C. coronatus isolate 3491 inducing 100% mortality of G. mellonella last instar larvae exposed to sporulating colonies, was cultivated at 20 °C in minimal medium. Post-incubation filtrates were used as a source of fungal metabolites. A two-step HPLC (1 step: Shodex KW-803 column eluted with 50 mM KH₂PO₄ supplemented with 0.1 M KCl, pH 6.5; 2 step: ProteinPak™ CM 8HR column equilibrated with 5 mM KH₂PO₄, pH 6.5, proteins eluted with a linear gradient of 0.5 M KCl) allowed the isolation of coronatin-1, an insecticidal 36 kDa protein showing both elastolytic and chitinolytic activities.Addition of coronatin-1 into primary in vitro cultures of G. mellonella hemocytes resulted in rapid disintegration of spherulocytes freely floating in culture medium and shrinkage of plasmatocytes adhering to the bottom of culture well. Coronatin-1 stimulated pseudopodia atrophy and, in consequence, disintegration of nets formed by cultured hemocytes.After incorporation of coronatin-1 into planar lipid membrane (PLM) ion channels selective for K⁺ ions in 50/450 mM KCl solutions were observed. Potassium current flows were recorded in nearly 70% of experiments with conductance from 300 pS up to 1 nS. All observed channels were active at both positive and negative membrane potentials. Under experimental conditions incorporated coronatin-1 exhibited a zero current potential (E_rev) of 47.7 mV, which indicates K⁺-selectivity of this protein.The success of the purification of coronatin-1 will allow further characterization of the mode of action of this molecule, including ability of coronatin-1 to form potassium channels in immunocompetent hemocytes.     

Solid phase synthesis of peptides containing the non-hydrolysable analog of (O)phosphotyrosine,P(CH2PO3H2)Phe

Studies about phosphorylation-dephosphorylation mechanisms require the development of probes capable of being used in in vitro and in vivo conditions. We show in this work that the chemically and enzymatically stable p(CH₂PO₃H₂) Phe analog of (O)phosphotyrosine can be easily introduced in peptides by the solid-phase method. It has been incorporated in the 344-357 sequence of the β₂ adrenergic receptor in place of the Tyr residue in position 350 and/or 354 in order to investigate the role of tyrosine phosphorylation in the receptor agonist-induced down-regulation. Since p(CH₂PO₃H₂)Phe is an ionized hydrophilic residue, peptides containing this amino acid do not easily permeate the cellular membranes. Therefore the modified amino acid was introduced in the synthetic pathway in its N-Boc- p (CH₂PO₃Et₂)Phe form, which could be partially or completely deprotected. Coupling steps, including that of the new amino acid, were performed with good yields (~60% total yield) and further deprotections provided both the p(CH₂PO₃H₂)Phe and p(CH₂PO₃HEt)Phe containing peptides with yields of around 20% each. The structure of the peptides was assessed by NMR, mass spectroscopy and amino acid analysis and the new amino acid was characterized under its phenyl-thiocarbamyl form (PTC).     

RP-HPLC法测定刺五加中紫丁香苷和异秦皮啶的含量

目的建立高效液相色谱法测定刺五加中紫丁香苷和异秦皮啶的含量。方法采用KromasilC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-体积分数为1%乙酸水溶液(B),梯度洗脱;流速为1.0 mL.min-1;检测波长为265 nm(0 min),341nm(11 min)。结果紫丁香苷和异秦皮啶质量浓度分别在26.0～435 mg.L-1(r=0.999 7)和0.270～4.50 mg.L-1(r=0.999 6)内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为98.01%(RSD=1.2%,n=6)和97.53%(RSD=1.1%,n=6)。结论该方法可同时测定刺五加药材中紫丁香苷和异秦皮啶的含量。     

Bestimmung von Morphin und Codein im Urin mit Hilfe der Hochdruckflüssigchromatographie

A sensitive and specific method for the determination of morphine and codeine is described. The drugs are adsorbed from urine on Amberlite XAD-2 resin at pH 8.5 and eluted from it with organic solvent. After a clean up the residue is separated by high-pressure-liquid-chromatography on reversed phase column using 0.1 M NaH₂PO₄ in 25% CH₃CN/H₂O as mobile phase. The eluted drugs are detected by uv-absorption at 230 nm. The method is sensitive, specific and precise.     

HPLC法测定肿节风中绿原酸、异嗪皮啶和迷迭香酸的含量

目的建立同时测定肿节风药材中绿原酸、异嗪皮啶及迷迭香酸含量的高效液相色谱法。方法采用Phenomenex Gemini C18柱(250mm×4.6mm,5μm)分离,以乙腈和4mL·L-1磷酸水溶液进行梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长327nm。结果绿原酸在4.48⁴4.8mg·L-1范围内线性关系良好,平均回收率为101.5%(RSD为2.1%),异嗪皮啶在1.7244.8mg·L-1范围内线性关系良好,平均回收率为101.5%(RSD为2.1%),异嗪皮啶在1.72¹7.2mg·L-1范围内线性关系良好,平均回收率为97.7%(RSD为2.7%),迷迭香酸在1.8617.2mg·L-1范围内线性关系良好,平均回收率为97.7%(RSD为2.7%),迷迭香酸在1.86¹8.6mg·L-1范围内线性关系良好,平均回收率为99.3%(RSD为2.4%)。结论含量测定方法操作简便,准确度高,重复性好,为肿节风药材质量控制和评价提供了可靠的方法。