改性载顺铂磁性纳米药物治疗鼻咽癌的体外实验*****★

背景：近年来载抗癌药物磁性纳米微粒作为一种新型靶向给药系统，利用其高载药量、靶向定位输送、以及磁粒的热效应、可生物降解等优点，为高效、低毒副作用的化疗带来了新的希望。 目的：观察顺铂耦合海藻酸钠改性磁性纳米球载体后对人鼻咽癌CNE2细胞的体外毒性效应。 设计、时间及地点：体外对比观察实验，于2005-03在中山大学北校区药理实验室完成。 材料：顺氯氨铂(CDDP)由山东齐鲁制药厂提供，海藻酸钠改性载顺铂四氧化三铁磁性纳米球(CDDP-SAMNP)，粒径大小43~52 nm，可逆释放的CDDP量(或利用率)约65%。鼻咽癌CNE2细胞株由中山大学肿瘤医院细胞病理实验室提供。 方法：实验分药物处理组及对照组，药物处理组分为CDDP组和CDDP-SAMNP组，CDDP和CDDP-SAMNP均用RPMI-1640培养液稀释，加药浓度按CDDP的含量计。对照组分别为RPMI-1640培养液组和单纯SAMNP组(加入四氧化三铁，磁核质量浓度为7 g/L，以培养液稀释)。 主要观察指标：采用MTT法分别观察1.89~11.34 mg/L的CDDP及相应剂量的CDDP-SAMNP对鼻咽癌CNE2细胞作用24, 48 h后的杀伤率；并通过透射电镜观察CNE2对CDDP-SAMNP的摄取。 结果：①单纯SAMNP对鼻咽癌CNE2细胞无杀伤作用，与培养液组相似(P > 0.05)。②随着CDDP和CDDP-SAMNP药物浓度的增加，药物对CNE2细胞的杀伤率呈明显的量效关系。同一药物相同浓度下，随着作用时间的延长，杀伤率提高，呈明显的时效关系。作用24 h，CDDP-SAMNP对鼻咽癌CNE2的杀伤率与CDDP相似(P > 0.05)。作用48 h，中低浓度(1.89~5.04 mg/L)时，CDDP-SAMNP的杀伤率低于CDDP(P < 0.05)，当达到6.93 mg/L时，杀伤率接近同浓度的CDDP。③CNE2细胞能够摄取CDDP-SAMNP和SAMNP。 结论：在高浓度下阴离子海藻酸钠改性载顺铂磁性纳米球对鼻咽癌CNE2细胞的体外毒性与同浓度单纯顺铂相近，杀伤作用来源于载体释放的顺铂。改性后顺铂的稳定性提高，药效没有降低。     

叶酸偶联聚合物靶向胶束的制备和表征

摘要背景：聚合物胶束具有对难溶性药物的增溶作用,是抗肿瘤药物的良好载体,在聚合物胶束表面修饰以靶识别分子叶酸,可以促进叶酸受体阳性的肿瘤细胞对载药聚合物胶束的摄取。目的：制备载疏水性小分子的叶酸偶联胶束并对其进行表征。方法：利用膜水化法制备载香豆素6的聚合物胶束,即将香豆素6的氯仿/甲醇溶液、甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺的氯仿/甲醇溶液和叶酸-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺的氯仿/甲醇溶液混合,旋蒸除去有机溶剂,形成药膜,真空干燥过夜,然后在 50 ℃水浴下加入Hepes缓冲液并磁力搅拌30 min,载药胶束即形成;同时制备不含叶酸-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺的普通载药胶束。对获得的普通胶束和叶酸偶联胶束利用透射电镜观察形态及粒径、动态光散射法检测粒径分布和高效液相色谱法分析载药量与包封率。结果与结论：载药的叶酸偶联胶束及普通胶束在透射电镜下粒径约为60 nm,粒径分布较均匀;动态光散射法检测到溶液中的胶束平均粒径约100 nm;利用高效液相色谱法检测得到胶束载药量和包封率分别在0.7%和15%左右。结果显示叶酸偶联载药胶束对于难溶性药物具有明显的增溶作用,可用于细胞及肿瘤模型评价其叶酸受体靶向性。关键词：聚合物胶束;叶酸受体靶向;香豆素6;增溶作用doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.47.021     

人转铁蛋白修饰载阿霉素海藻酸钠纳米粒的制备与评价

摘要 背景：对抗肿瘤药物靶向治疗和肿瘤细胞多药耐药产生的问题,载阿霉素海藻酸钠纳米粒经改性,偶联人转铁蛋白,生成的人转铁蛋白修饰载药纳米粒,可用于靶向肿瘤药物载体。 目的：制备人转铁蛋白修饰的载阿霉素海藻酸钠纳米粒并进行表征鉴定,检测其表面蛋白活性。 方法：采用优化的微乳化-离子交联方法制备包覆阿霉素的海藻酸钠复合纳米粒,以水溶性碳二亚胺为交联剂,将载阿霉素海藻酸钠纳米粒与人转铁蛋白连接,制备出人转铁蛋白修饰载阿霉素海藻酸钠纳米粒。透射电镜观察纳米粒的外观大小、形态;高效液相色谱法分析纳米粒的包封率和载药量;流式细胞仪检测其表面人转铁蛋白的活性。 结果与结论：人转铁蛋白修饰载阿霉素海藻酸钠纳米粒呈球形,平均粒径为170 nm。阿霉素的加入量可影响纳米粒的包封率,当阿霉素的加入量为纳米粒的10%时,包封率和包裹量均最佳。每毫克载药纳米粒可与约65 μg人转铁蛋白连接。人转铁蛋白修饰的载药纳米粒在流式细胞仪上除去非特异性吸附后还有67.3%荧光显示,说明人转铁蛋白修饰的载药纳米粒大部分都偶联上了人转铁蛋白抗体并能保持抗体活性,从而为载药纳米粒特异性靶向肿瘤细胞提供了足够的靶向动力。微乳化-离子交联方法制备方法简便可靠,制得的人转铁蛋白修饰载阿霉素海藻酸钠纳米粒有望成为具有潜在价值的一种特异性靶向药物载体。 关键词：海藻酸钠;阿霉素;人转铁蛋白;纳米粒;靶向;生物材料与纳米技术 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.014     

叶酸-壳聚糖介导survivin shRNA基因纳米载体的制备***★

背景：叶酸-壳聚糖纳米粒是一种新型的高靶向纳米载体，可进一步提高药物的靶向性，并进一步实现缓释和控释给药。 目的：探讨叶酸-壳聚糖纳米粒作为survivin shRNA重组质粒载体传递系统的可行性以及对大肠癌细胞(SW480)的转染效率。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2008-06/2009-01在中南大学卫生部纳米生物技术重点实验室完成。 材料：壳聚糖(脱乙酰度>90%)由上海伯奥生物科技有限公司提供，叶酸由国药集团化学试剂有限公司提供，survivin shRNA重组质粒由上海吉凯基因化学技术有限公司提供。 方法：首先制备粒径均匀的叶酸偶联壳聚糖纳米粒，然后将20 mg/L survivin shRNA重组质粒和10 mg/L 叶酸-壳聚糖混合制备基因纳米复合物，同时以阳离子脂质体基因复合物作为对照，将上述两者转染大肠癌细胞。 主要观察指标：基因纳米复合物的理化性质及转染效率；Western blotting检测转染后肿瘤细胞中survivin蛋白的表达。 结果：成功制备叶酸-壳聚糖介导的survivin shRNA重组质粒基因纳米复合物。该基因纳米复合物转染大肠癌细胞的效果强于阳离子脂质体基因复合物。且转染后大肠癌细胞中survivin蛋白的表达显著低于阳离子脂质体基因复合物。 结论：叶酸-壳聚糖纳米粒作为载体系统能将survivin shRNA重组质粒高效递送到大肠癌细胞，从而诱导人大肠癌细胞的凋亡。     

叶酸修饰乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒的制备及性能表征

以聚乙二醇二氨为偶联剂，通过叶酸活性酯和聚合物端基活性酯与聚乙二醇二氨反应，制得叶酸修饰的大分子，再通过乳化法合成载紫杉醇纳米粒，制备叶酸修饰的乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒子。紫外光谱、红外光谱、核磁光谱显示叶酸成功连接在高聚物分子上。所制得的纳米粒粒径（276±12）nm，扫描电镜观察其形态为规整的球形。该方法可成功制备叶酸修饰的乳酸-羟基乙酸共聚物载药纳米粒。     

磁性聚乳酸羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒的制备及其特性**★

背景：基于纳米技术发展起来的纳米载体介导的磁性载药系统，在外加磁场作用下，能实现位点特异性靶向给药的目的，有利于提高病灶部位的局部药物浓度，从而进一步提高治疗效果，减少全身毒副作用。 目的：研究磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒的制备工艺，评价纳米粒子特性。 设计：首先选择几个可能影响纳米微粒特性的因素进行了单因素实验，然后再根据实验结果，结合统计学中的正交设计，获得了最佳优化处方。 单位：解放军第二军医大学长海医院特诊科。 材料：实验于2005-01/2006-03在解放军第二军医大学药学院药剂教研室完成。实验用氧化酚砷购自美国Sigma公司，聚乳酸-羟基乙酸由山东医疗器械研究所提供，纳米级四氧化三铁购自美国Sigma公司，聚乙烯醇购自北京有机化工厂，二氯甲烷等其他试剂均为分析纯，购于上海国药集团化学试剂有限公司。 方法：运用超声乳化-溶剂挥发法制备磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒，通过透射电镜观察微粒形态，振动样品磁强计确证纳米微粒磁性的存在，激光粒径仪测定纳米粒的粒径大小和分布，高效液相法测定氧化酚砷的载药量及包封率,并计算氧化酚砷体外释放百分率。 主要观察指标：磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒的形态、粒径、载药量、包封率、磁性及体外释放情况。 结果：①微粒包封率和载药量：实验制备的纳米粒平均包封率为34.2%；5批纳米粒载药量分别为3.06%，3.15%，3.18%，3.21%，3.41%，平均载药量为3.20%，批间差异较小，说明工艺稳定性、重现性好。②微粒形态：纳米微粒呈圆形，表面光滑，分布均匀，不粘连，磁性微球中可见非均匀分散的黑色不透光区，为四氧化三铁微粒。③微粒粒径：分布范围窄（140~500 nm）,平均290 nm。④微粒磁性：在不断改变外加磁场的大小与方向的情况下，微粒具有不同的磁化强度，说明氧化酚砷聚乳酸纳米微粒具有一定的磁响应性。⑤体外释放实验：氧化酚砷经过最初的快速释放后，进入缓慢控释阶段，于第8天时达到最终基本稳定的平台期。 结论：实验获得了较满意的磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒制备工艺；该纳米微粒在外加磁场的情况下有较好磁靶向性的作用，同时具备良好药物缓释作用。     

叶酸受体靶向星形聚己内酯纳米胶束的制备和性质

背景：近年来,在药物载体材料领域,两亲性星形聚合物的自组装胶束化引起了人们的关注。叶酸官能团作为肿瘤靶向基团被越来越多地引入药物载体,显示出了良好的靶向效应。目的：制备一种新型的末端接叶酸的星形聚己内酯(StarPCL-FA)材料胶束,并对其性质进行表征,为其在控释给药系统中的应用提供基本依据。方法：以四氢呋喃为溶剂,采用溶剂挥发法制备StarPCL-FA的胶束溶液。动态光散射粒度仪、透射电子显微镜测量胶束的粒径和表面形貌;考察稀释对胶束粒径的影响及水中胶束粒径随时间的变化情况;采用芘荧光探针技术测定共聚物的临界胶束质量浓度;用β-胡萝卜素作为模型药物对胶束载药量进行研究。结果与结论：成功制备了星形聚合物StarPCL-FA胶束,胶束的粒径为纳米级,临界胶束质量浓度值较低,胶束对稀释较为稳定,且能在37 ℃的水中较长时间稳定存在,但随着时间延长,出现粒径轻微增大现象,说明胶束在水中能够稳定存在且对稀释的稳定性较好,这对于其在注入人体时避免药物的暴释具有重要意义。另外用β-胡萝卜素作为模型药物对胶束载药量研究表明其载药量为3.0%~4.0%。说明胶束对β-胡萝卜素有包载能力,但其载药能力还有待提高。关键词：星形聚己内酯;叶酸;胶束;β-胡萝卜素;控制释放载体材料doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.12.015     

布洛芬磁性固体脂质纳米粒的制备

背景：布洛芬因溶解度和溶血问题,目前仍无注射给药剂型上市。 目的：将自制的磁流体载入固体脂质纳米粒中,制备布洛芬磁性固体脂质纳米粒。 方法：以包封率为指标,用正交设计确定布洛芬固体脂质纳米粒的最优处方。以共沉淀法制备Fe3O4磁流体作为磁性材料,采用乳化分散-超声法,按照最优处方制备布洛芬磁性固体脂质纳米粒。观察其表面形态、粒径大小、分布和Zeta电位、饱和磁化强度、包封率及体外释放特征。 结果与结论：通过正交实验得最优处方为布洛芬0.05 g、F-68 0.2 g、吐温80 0.05 g、卵磷脂0.1 g、单硬脂酸甘油酯0.05 g、磁流体2.5 mL。用该工艺和处方制备的布洛芬磁性固体脂质纳米粒粒子呈均匀球形;平均粒径、zeta电位为(122±16) nm和(-13.3±6.94) mV;药物包封率和Fe3O4铁包封率分别为84.15%和83.19%;布洛芬在给定介质中36 h释放较完全,符合制剂学性质要求。     

Improvement of cognitive functions after cobalamin/folate supplementation in elderly patients with dementia and elevated plasma homocysteine.

OBJECTIVES: To investigate the effect of cobalamin/folate supplementation on cognitive function in elderly patients with dementia. METHOD: The cobalamin/folate status of the patients was evaluated by measuring plasma homocysteine, serum methylmalonic acid, serum cobalamin and blood folate. Thirty-three patients were studied and repeatedly assessed with the Mini-Mental State Examination (MMSE) and 'A short cognitive performance test for assessing memory and attention' (SKT) during vitamin substitution. RESULTS: Patients with mild-moderate dementia and elevated plasma homocysteine levels improved clinically with increased test scores after vitamin substitution, while severely demented patients and patients with normal plasma homocysteine levels did not improve clinically. CONCLUSIONS: Plasma homocysteine may be the best marker for detecting treatable cobalamin/folate deficiency in patients with dementia.     

Markers for the functional availability of cobalamin/folate and their association with neuropsychiatric symptoms in the elderly

Cobalamin/folate deficiency is common in elderly subjects and may lead to psychiatric symptoms, but even more often it increases the severity of other organic and non-organic mental diseases. This paper reviews the literature relevant for markers of cobalamin/folate status and their relation to neuropsychiatric symptoms in the elderly. Plasma homocysteine, a marker of cobalamin/folate status, is frequently increased in psychogeriatric patients. Among markers of cobalamin/folate status, plasma homocysteine shows the best association with neuropsychiatric dysfunction.     

Optimal use of markers for cobalamin and folate status in a psychogeriatric population

BACKGROUND: Cobalamin/folate deficiency is common in elderly subjects and may lead to psychiatric symptoms, but even more often it increases the severity of other organic and non-organic mental diseases. It is therefore of importance to evaluate the optimal use of different markers of cobalamin/folate status in a psychogeriatric population. METHODS: We measured serum cobalamin, blood folate, plasma homocysteine (tHcy) and serum methylmalonic acid (MMA) in 475 well-defined psychogeriatric patients. RESULTS: The findings in the present study showed that many (41%) of the patients with normal levels of serum MMA (< 0.41 micromol/l) had pathological values of at least one of the other markers for cobalamin/folate status, whereas only 17% of patients with normal plasma tHcy (< 19.9 micromol/l) had pathological levels of other markers. If patients with decreased levels of serum cobalamin and/or blood folate were also excluded from these patients, only nine patients with slightly elevated levels of serum MMA remained. In the present study different upper reference limits were also tested for both serum MMA and plasma tHcy. However, the use of these limits did not cause any diagnostic improvement in the evaluation of cobalamin-folate status. Plasma tHcy was increased in almost all diagnosis groups of the psychogeriatric patients, whereas serum MMA was increased in only some groups. The distribution of the two common polymorphisms of the methylenetetrahydrofolate reductase gene (C677T and A1298C) was similar in patients with elevated and normal plasma tHcy. CONCLUSIONS: The findings in the present study suggest the use of plasma tHcy, serum cobalamin and blood folate to evaluate cobalamin-folate status in psychogeriatric patients and to omit the use of serum MMA.     

密闭性敷料支架的制备及其性能

背景：近年来创伤敷料的研究发展较快,但很少有中药联合高分子材料制备的复合密闭敷料,且现有的创伤敷料作用较局限,不能适用于任何创伤伤口。 目的：制备适用于中药载入的密闭敷料支架,并测定其性能。 方法：将壳聚糖、明胶、聚乙烯醇,壳聚糖、明胶、聚乙烯醇和海藻酸钠分别在一定条件下共混,预冻,冷冻干燥得到支架,考察两支架的吸水性、含水量、相对保湿性、透气性、孔隙率、支架的外形。 结果与结论：壳聚糖、明胶、聚乙烯醇所制成支架的吸水性、含水量、相对保湿性、孔隙率优于壳聚糖、明胶、聚乙烯醇和海藻酸钠所制成的支架,两组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。说明壳聚糖、明胶、聚乙烯醇适宜作为密闭敷料支架材料。 关键词：敷料支架;壳聚糖;明胶;海藻酸钠;聚乙烯醇 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.29.002     

胶质瘤分子导向毒素的制备及其生物学效应

目的 制备高特异性杀伤活性的新型抗胶质瘤分子导向毒素,为临床应用提供参考依据。方法 将抗胶质瘤单链抗体基因分别与细胞因子、细菌毒素功能肽基因融合,构建融合蛋白表达载体,于大肠杆菌高效表达,并测定其抗肿瘤生物学活性。结果 融合蛋白在大肠杆菌的表达水平达到30％左右,包涵体蛋白经纯化后,Western blot证实融合蛋白可与胶质瘤膜相关抗原特异性结合,并具有细胞因子、毒素的抑瘤活性。结论 完成了融合基因的构建表达及活性测定,可进一步用于胶质瘤分子导向治疗。     

药物缓释载体材料在医药领域中的研究及应用

背景：药物缓释就是将小分子药物与高分子载体以物理或化学方法结合,在体内通过扩散、渗透等控制方式,将小分子药物以适当的浓度持续地释放出来,从而达到充分发挥药物功效的目的。 目的：总结药物缓释载体材料特征及其在医药领域中的应用。 方法：以“药物缓释、载体材料、生物降解、壳聚糖、聚乳酸、海藻酸钠”为中文关键词,以“Drug delivery,carrier material,biodegradable,chitosan,polylactic acid, sodium alginate”为英文关键词,采用计算机检索中国期刊全文数据库、PubMed数据库(1993-01/2010-11)相关文章。纳入高分子生物材料-药物缓释载体等相关的文章,排除重复研究或Meta分析类文章,共入选31篇文章进入结果分析。 结果与结论：壳聚糖和聚乳酸是当前在药物缓释体系中应用较多的材料,它是将小分子药物与高分子载体以物理或化学方法结合, 以适当的浓度持续地释放出来,从而达到充分发挥药物功效的目的,较单一生物材料具有显著优越性,具有更好的生物相容性和生物可降解性。目前很多研究仍处于实验阶段,还有一些问题有待于解决,如制剂质量方法不成熟,剂量较难控制,成本较高等。     

Anatomical and fMRI-network comparison of multiple DLPFC targeting strategies for repetitive transcranial magnetic stimulation treatment of depression

BackgroundThe efficacy of repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS) for depression may vary depending on the subregion stimulated within the dorsolateral prefrontal cortex (DLPFC). Clinical TMS typically uses scalp-based landmarks for DLPFC targeting, rather than individualized MRI guidance.ObjectiveIn rTMS patients, determine the brain systems targeted by multiple DLPFC stimulation rules by computing several surrogate measures: underlying brain targets labeled with connectivity-based atlases, subgenual cingulate anticorrelation strength, and functionally connected networks.MethodsForty-nine patients in a randomized controlled trial of rTMS therapy for treatment resistant major depression underwent structural and functional MRI. DLPFC rules were applied virtually using MR-image guidance. Underlying cortical regions were labeled, and connectivity with the subgenual cingulate and whole-brain computed.ResultsScalp-targeting rules applied post hoc to these MRIs that adjusted for head size, including Beam F3, were comparably precise, successful in directly targeting classical DLPFC and frontal networks, and anticorrelated with the subgenual cingulate. In contrast, all rules involving fixed distances introduced variability in regions and networks targeted. The 5 cm rule targeted a transitional DLPFC region with a different connectivity profile from the adjusted rules. Seed-based connectivity analyses identified multiple regions, such as posterior cingulate and inferior parietal lobe, that warrant further study in order to understand their potential contribution to clinical response.ConclusionEEG-based rules consistently targeted DLPFC brain regions with resting-state fMRI features known to be associated with depression response. These results provide a bridge from lab to clinic by enabling clinicians to relate scalp-targeting rules to functionally connected brain systems.     

载荷角质细胞生长因子聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米缓释微球在组织工程皮肤构建中的应用

背景：聚乳酸-羟基乙酸共聚物具有良好的生物相容性和可降解性性。 目的：制备载荷角质细胞生长因子聚乳酸-羟基乙酸共聚物控释载药系统用于组织工程皮肤。 方法：采用乳化-溶剂挥发法、冷冻干燥法制备载有角质细胞生长因子的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微球,并构建组织工程皮肤。扫描电镜、倒置显微镜、纳米粒度分析仪、紫外分光及ELISA法对微球评价其特性。 结果与结论：纳米微球载药量为(14.05±0.56)%,包封率为(59.86±2.38)%,角质细胞生长因子活性保留率(78.26±5.63)%,体外释放30 d的累积释药率达75%以上,微球形态规则圆润。微球形态规整,在脱细胞真皮表面分布均匀,与其联接良好。毛囊干细胞群在荷载聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微囊脱细胞真皮上生长活跃,细胞形态良好,并呈克隆团生长。说明实验用组织工程材料制备工艺合理,材料相容性好,可用于构建新型组织工程皮肤。