溶氧对重组毕赤酵母高密度发酵生产腺苷蛋氨酸的影响

目的考察发酵液中不同的溶氧浓度对重组毕赤酵母高密度发酵生产腺苷蛋氨酸的影响。方法通过改变通气量、搅拌转速和辅助通入纯氧的方式将发酵液中溶氧浓度控制到试验设定值。结果当控制发酵液中溶氧浓度在30%时,SAMe产量最高。结论通过控制发酵液中溶氧浓度有助于提高重组毕赤酵母高密度发酵高表达腺苷蛋氨酸。     

重组Pichia pastori高密度培养和表达过程的溶氧调控

在重组人血清白蛋白（recombinant human serum albumin，rHSA）Pichia pastori表达系统中，研究了高密度培养时细胞生长、改变碳源和诱导表达时溶氧的变化和调控规律，溶氧与细胞生长和重组蛋白表达密切相关。发酵前期的细胞生长阶段，细胞需氧降低表明碳源甘油的消耗，根据溶氧水平适时流加碳源甘油；改变碳源前，应停止流加甘油碳源，并以溶氧指标判断甘油是否消耗完全；重组蛋白诱导时流加甲醇的速度应缓慢增大，并保持细胞一定的需氧水平。高密度培养时通过流加底物速度、搅拌转速、通气量和富氧培养来关联控制发酵液溶氧水平。     

重组人胸腺肽α1工程菌的高密度发酵

为实现重组人胸腺肽α１工程菌Ｅ．ｃｏｌｉ Ｔｏｐ１０／ｐＴｈｉｏ Ｈｉｓ－Ｔα的高密度高表达发酵,首先进行了培养条件的摸索,确定了该工程菌的最佳培养条件、诱导剂ＩＰＴＧ的浓度、诱导起始和结束时间,然后用５Ｌ自控发酵罐进行分批补料培养,发酵中采用分阶段限制性流加氮、碳源,保持溶解氧在３５％左右,结果经３ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导５ｈ,３批重复发酵,最终菌体密度均达到６０Ａ６００以上（相当于干菌２５．６ｇ／Ｌ）,保持了并超过了该重组蛋白在试管和摇瓶中的表达量,融合蛋白Ｔｈｉｏ Ｈｉｓ－Ｔα的表达占菌体总蛋白的４２．４％左右,含量达到了５．７ｇ／Ｌ,相当于胸腺肽α１ ２．４ｇ／Ｌ,为胸腺肽α１的下游纯化和工业化生产奠定了基础。     

螺旋霉素和麦迪霉素发酵中溶氧参数研究

研究了螺旋霉素与麦迪霉素产生菌在发酵过程中通气与搅拌对溶氧的影响,并发现溶氧与发酵过程中的有机酸、ATP、菌丝量、还原糖以及生物效价,都有密切联系。适当调节溶氧能提高抗生素的发酵水平.     

卡那霉素发酵过程溶氧浓度模糊PID控制研究

根据卡那霉素发酵过程溶氧浓度的变化规律及优化控制的要求，建立了模糊控制规则，以ARMCE简化算法为基础，设计了三输入模糊PID控制器并构建了计算机控制系统，应用于工业发酵罐中供氧速率控制。该系统克服了常规PID在溶氧浓度控制上的不足之处，可初步实现对溶氧浓度的优化节能控制。     

重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ工程菌高密度发酵工艺优化

目的优化表达重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)工程菌的高密度发酵条件。方法考察培养基以及诱导时机、诱导剂量和诱导时间对蛋白表达的影响;用自控发酵罐进行分批补料培养实验,确定优化工艺条件。结果以2×YT+0.5%葡萄糖为发酵培养基,经0.8 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导5 h,通过pH-stat反馈补料方式实现工程菌高密度发酵与目的蛋白高效表达,每1 L发酵液收获干菌体50.1 g,IGF-Ⅰ含量达5.25 g/L。结论建立了IGF-Ⅰ工程菌优化的高密度发酵工艺,为IGF-Ⅰ的下游纯化和工业化生产奠定了基础。     

阿卡波糖发酵代谢阶段性溶氧控制的研究与应用

目的 研究摇瓶发酵不同阶段含氧量变化对阿卡波糖工业生产菌种犹他游动放线菌阿卡波糖合成的影响,以建立溶氧控制策略提高其阿卡波糖发酵水平。方法 通过调整摇瓶转速以及降低补料浓度和增加补料量调控溶氧水平,确定发酵过程中溶氧控制对犹他游动放线菌阿卡波糖发酵水平的影响。结果 建立了基于提高发酵后期摇床转速并同时降低补料浓度的溶氧控制策略,阿卡波糖效价达到8 307 μg·mL^-1,较对照组提升了11.98%。结论 通过溶氧控制可以明显提高犹他游动放线菌阿卡波糖发酵水平,结果为进一步提高阿卡波糖工业发酵水平和降低生产成本提供了基础。     

重组人白细胞介素-18工程菌的培养及高密度发酵

目的优化重组人白细胞介素-18的发酵工艺,以获得工程菌的高密度发酵和目的蛋白的高表达.方法在10L发酵罐中,研究重组人白细胞介素-18工程菌在不同的pH值、溶氧和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响.结果根据优化条件,连续三批重复发酵10L工程菌,最终菌体密度均达A600nm=28,菌体获得量均可达湿重50g?L-1以上.目的蛋白表达量均为40%以上.结论优化了重组人白细胞介素-18基因工程菌的发酵和表达条件,为规模化生产奠定了基础.     

溶氧浓度对产黄青霉稳态培养生物合成青霉素的影响

在产黄青霉稳态连续培养条件下，就溶氧浓度对青霉素生物合成的影响进行了研究，通过调节通气气体的组成使溶氧浓度在０．０１９－０．３４４ｍｍｏｌ／Ｌ间改变，溶氧浓度超过０．０６－０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ，保持约２２μｍｏｌ／Ｌ（ｇ．ｈ）的比生产速率溶氧浓度较低时，比生产速率下降，进一步将溶氧浓度降至０．０１９ｍｍｏｌ／Ｌ，导致青霉素生产能力丧失，当溶氧浓度重新调整至０．０８ｍｏｌ／Ｌ以上，青霉素产量立即恢复     

基因工程菌发酵表达rhG-CSF的条件优化

目的通过优化基因工程菌Escherichia coli BL21(DE3)Plys表达重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)蛋白的发酵工艺,提高蛋白产量。方法以100 L规模发酵为例,从不同的接种量(1%¹0%)、加入IPTG进行诱导时的不同OD600nm值,诱导表达后的不同溶氧可控制范围(20%10%)、加入IPTG进行诱导时的不同OD600nm值,诱导表达后的不同溶氧可控制范围(20%⁸0%)等方面进行优化。用SDS-PAGE对蛋白表达量进行检测。结果优化后的方案为:采用5%的接种量,在OD600nm达到1080%)等方面进行优化。用SDS-PAGE对蛋白表达量进行检测。结果优化后的方案为:采用5%的接种量,在OD600nm达到10¹5时加入诱导剂IPTG,诱导起始后前20 min控制溶氧在80%以下,20 min后通过补加氨水控制pH在7.0左右,补料调节控制溶氧在20%15时加入诱导剂IPTG,诱导起始后前20 min控制溶氧在80%以下,20 min后通过补加氨水控制pH在7.0左右,补料调节控制溶氧在20%⁴0%的范围内,诱导表达5 h后收集菌体。优化后的发酵方案极大提高了蛋白表达量。结论 rhG-CSF蛋白发酵方案的优化对大规模生产具有重要的指导意义。     

重组人白细胞介素15工程菌高密度发酵条件探讨

目的研究表达重组人白细胞介素15(rhIL-15)工程菌高密度发酵的条件。方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白质表达的因素进行优化。结果以甘油为碳源可明显抑制有害物质乙酸的积累,提高工程菌的表达量和收获率。高密度发酵明显提高了目的蛋白质的表达量和工程菌的产量。结论该发酵工艺大大提高了rhIL-15工程菌的产量和表达水平,为rhIL-15的规模化生产打下了基础。     

溶氧对地衣芽孢杆菌DW2合成杆菌肽的影响

本文研究了3L发酵罐中不同供氧水平对地衣芽孢杆菌发酵杆菌肽的影响。结果表明,地衣芽孢杆菌DW2发酵杆菌肽的总效价和A组分比例随发酵搅拌转速或通风比的提高而增加;通过比较发酵溶氧水平分别为20％和5％的杆菌肽发酵过程,初步探讨了溶氧对杆菌肽发酵的影响机制。控制发酵液溶氧20％以上,发酵液中的丙酮酸,柠檬酸和α-酮戊二酸等有机酸浓度都高于5％溶氧水平的,说明高溶氧强化了菌体EMP途径和TCA循环;分析发酵液中的Glu、Ash、His、Ile、Lys和Asp等杆菌肽组成性氨基酸浓度,都高于5％溶氧水平的,说明高溶氧还通过促进氨基酸代谢提高杆菌肽效价。     

不同溶氧量与残氧量对硫辛酸注射液质量的影响

目的 通过测定不同来源的硫辛酸注射液中的顶空残氧量和溶解氧量以及有关物质和主成分的含量,分析数据变化趋势,为硫辛酸注射液的质量控制提供技术参考。方法 以原研制剂、自研3批不同溶氧量与残氧量的样品以及市售不同厂家样品为试验对象,采用高效液相色谱法测定不同样品的有关物质[杂质A（6,8-上硫辛烷酸）、杂质B（氧化杂质）、杂质C（降解杂质）]、含量和聚合物,X-325i顶空残氧/溶氧分析仪测定溶氧量与残氧量,进行高温、光照、低温、冻融循环等影响因素试验,以及加速试验、长期试验考察稳定性。结果 较高溶氧残氧产品在高温条件下杂质B、C和杂质总量增长趋势明显;光照无外包装条件下,样品中溶氧量与残氧量均显著降低,杂质A和聚合物增长显著;光照带外包装条件下各样品均稳定;低温条件下各样品均稳定;冻融条件下低溶氧量样品不受影响,高溶氧量样品聚合物增加明显;加速条件下,所有自研制剂样品中杂质B和C增加趋势明显,所有样品中溶氧量呈下降趋势,残氧量基本无变化;长期条件下,高溶氧残氧样品杂质C和聚合物有增长趋势。结论 越低的氧含量越有利于质量控制,建议在中间产品中控制溶解氧<2 μg/mL,残氧量<2.0%,产品较稳定。     

rhG-CSF对大鼠局灶性脑缺血保护作用研究

目的 观察重组人粒细胞集落刺激刺激因子对大鼠局灶性脑缺血保护作用.方法 采用光化学法制作大鼠局灶性脑缺血模型,测定脑组织超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量,测量脑梗死体积.结果 脑缺血后SOD活性降低,rhG-CSF能提高SOD活性,随rhG-CSF浓度增高,SOD活性有增高趋势.脑缺血后MDA含量升高,rhG-CSF能降低MDA含量,随rhG-CSF浓度增高,MDA含量有降低趋势.脑缺血后形成局灶脑梗死,rhG-CSF能降低脑缺血后形成局灶脑梗死范围,随rhG-CSF浓度越高,局灶脑梗死范围有缩小趋势.结论 重组人粒细胞集落刺激刺激因子对大鼠局灶性脑缺血后神经元有保护作用.     

表达GST-NK4工程菌的发酵工艺研究

目的建立重组GST NK4融合基因工程菌的发酵工艺。方法采用摇瓶、发酵罐发酵,对影响工程菌生长和表达的条件如pH值、诱导时间及诱导剂浓度等进行优化。结果根据优化的条件,15L发酵罐发酵11h ,菌体收获量可达到湿重(2 4 .6±0 .98)g/L ,目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的5 0 %左右。结论确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺     

重组人血管生长素基因工程菌发酵条件的初步研究

目的研究表达重组人血管生长素 (rhANG)工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵 ,研究不同宿主菌对表达rhANG的影响 ,同时对培养基、诱导时期、诱导时间和初始pH等发酵条件以及质粒稳定性进行研究。结果选用E .coliCDH为宿主菌 ,在SOB培养基中培养至A6 0 0nm 为 0 .5～ 0 .6时 ,诱导表达 5h ,rhANG表达量最高达 30 %。重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性。结论此发酵条件可以较好地提高rhANG的表达量 ,为发酵规模的扩大奠定了基础     

重组人乙型肝炎病毒核糖核酸酶H基因工程菌发酵条件的初步研究

目的研究表达乙型肝炎病毒核糖核酸酶H1及H2 (HBV -RNaseH1及H2 )工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵,研究不同宿主菌表达HBV- RNaseH1及H2的效果,同时对培养基、诱导时期、诱导时间、初始pH值等发酵条件以及质粒稳定性进行研究。结果选用EcoliBL2 1为宿主菌,在LB培养基中培养至A60 0nm为0 .6时,诱导表达4 .5h ,HBV- RNaseH1及H2表达量最高达33.6 %和30 .8%。且重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性。结论此发酵条件可以较好地提高HBV- RNaseH1及H2的表达量,为发酵规模的扩大奠定基础