12种香豆素类化合物抑制鼻咽癌活性的筛选

目的探讨12种香豆素类化合物体外抑制鼻咽癌细胞的活性。方法利用CCK-8法测定不同浓度的12种香豆素类化合物对鼻咽癌细胞CNE-2和HONE-1体外抑制生长的活性,利用两点法求算对应的半数抑制浓度（Half maximal inhibitory concentration,IC50）。随后选定1、10、100μmol/L浓度的蛇床子素及秦皮乙素分别处理两鼻咽癌细胞,利用CCK-8法绘制5 d的生长曲线,并观察其对克隆形成能力的影响。结果在CNE-2细胞中,蛇床子素、秦皮乙素和佛手柑内酯的IC50分别是（44.8±5.2）μmol/L、（129.6±8.9）μmol/L及（143.7±9.7）μmol/L;在HONE-1细胞中的IC50分别是（38.6±6.3）μmol/L、（62.7±7.0）μmol/L及（73.4±7.2）μmol/L。蛇床子素和秦皮乙素在选定的浓度下均对鼻咽癌细胞的生长曲线产生持续抑制的效果,并能显著抑制鼻咽癌细胞的克隆形成能力（P〈0.01）。结论蛇床子素、秦皮乙素和佛手柑内酯具有具有较为显著的体外抑制鼻咽癌细胞活性。     

重组人血管内皮抑素心脏毒性作用的靶标及作用机制研究

目的探讨重组人血管内皮抑素（恩度）心脏毒性作用的靶标及作用机制。方法以H9c2心肌细胞为观察对象,进行以下实验：（1）将H9c2细胞分为对照组（不给予药物干预）和恩度100、200、400μ/ml组（加入相应浓度药物培养24、48h）,用流式细胞术检测各组各时点细胞凋亡率;（2）将H9c2细胞分为对照组和恩度400μg/ml干预24h实验组,用透射电镜观察细胞超微结构改变;（3）将H9c2细胞分为对照组和恩度100、200、400μ/ml组（加入相应浓度药物培养18h）,应用JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位;（4）将H9c2细胞分为对照组和恩度400μg／ml干预24h实验组,用细胞免疫化学方法观察细胞色素C（Cyt-C）释放情况;（5）将H9c2细胞分为对照组和恩度100、200、400μml组（加入相应浓度药物培养24h）,用化学发光法检测各组细胞的ADP／ATP比值。结果（1）恩度200μg／ml组在药物干预24h、恩度400斗g／ml组在药物干预24、48h后,细胞凋亡率均明显高于对照组[24h：（16．34±3．72）％、（27．03±3．91）％比（6．99±1．72）％;48h：（24．89-4-4．77）％比（6．44±1．81）％,均P〈0．01];恩度200μg／ml组药物干预24h后的细胞凋亡率高于药物干预48h[（16．34＋3．72％）比（11．34±3．09）％,P〈0．01]。（2）对照组细胞超微结构正常;恩度400μg/ml干预24h实验组细胞核固缩碎裂、染色质块聚,细胞内空泡增多,内质网扩张,线粒体肿胀,出现凋亡小体。（3）与对照组相比,不同剂量恩度干预组细胞线粒体跨膜电位去极化程度随恩度浓度增加而下降。（4）对照组细胞Cyt-C主要分布于线粒体,恩度400μg/ml干预24h实验组细胞Cyt-C从线粒体释放至胞质。（5）恩度200、400μg/ml组细胞的ADP／ATP比值明显高于对照组（1．14±0．11、1．31±0．18比0．98±0．09,均P〈0．01）。结论心肌细胞线粒体可能是恩度心脏毒性作用的靶标,经线粒体依赖性途径诱导的心肌细胞凋亡是恩度致心肌损伤的机制之一。     

山竹酮抑制人下咽癌FaDu细胞株的增殖作用及其机制研究

目的探讨山竹酮对人下咽癌细胞株FaDu的细胞周期、细胞增殖的影响。方法采用0～50μM浓度的山竹酮分别作用于人下咽癌FaDu细胞48h和72h,MTT比色法观察山竹酮对细胞生长的抑制效应;采用0～20μM浓度的山竹酮分别作用于FaDu细胞48h后,应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）、蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（Western blotting,WB）分析山竹酮对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果山竹酮能够明显抑制人下咽癌细胞株的增殖,并且增殖抑制作用存在剂量和时间依赖关系,山竹酮处理细胞48h后的半抑制浓度（IC50）是11．92μM,72h的IC50是4．42μM,差异有统计学意义（P〈0．05）;FCM结果显示浓度为15、20μM的山竹酮处理组细胞48h,细胞周期阻滞在G0／G1期的比率分别为（54．096±0．0061）％、（63．736±0．0241）％,与对照组（41．779±0．0752）％比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;Western Blotting结果显示,山竹酮诱导凋亡促进基因Bax的表达和抑制突变型P53基因表达。结论在一定的条件下,山竹酮通过使肿瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,同时诱导细胞凋亡促进基因的表达和抑制突变型P53的表达等机制,来抑制人下叫癌细胞FaDu的增殖。     

聚维酮对人膀胱癌T24细胞的抑制作用研究

目的 探讨聚维酮(PVP)对人膀胱癌T24细胞的抑制作用。 方法 采用MTT法检测PVP对T24细胞生长的抑制作用，流式细胞仪检测PVP对T24细胞周期的影响和黏附作用。结果 2.5%PVP作用24和72 h，对人膀胱癌T24细胞生长抑制率分别为（15.11±2.36）%和（49.57±7.07）%；浓度为7.5%时24和72 h抑制率分别（35.42±5.55）%和（79.66±19.92）%。5.0%PVP作用24和72 h时，细胞G0/G1期所占比例分别为（74.17±0.91）%和（46.69±3.76）%；G2/M期细胞所占比例分别为（14.63±0.47）%和（41.88±1.50）%。PVP能提高抗鼠IgG1对T24细胞的黏附作用。结论 PVP能通过诱导人膀胱癌T24细胞周期阻滞于G2/M期和作为化疗药的黏附性载体而抑制癌细胞的生长增殖。     

甲异靛对K562原代细胞凋亡作用研究

目的探讨甲异靛诱导慢性髓系细胞白血病K562细胞株凋亡的作用。方法K562细胞经20μm／L甲异靛处理12h、24h、48h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果K562未经甲异靛作用时凋亡率[（1．0±0．36）％]与人体正常细胞系NIH3T3凋亡率[（2．6±0．39）％]相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;K562细胞空白组凋亡率为（1．0±0．36）％,12h组为（12．5±0．69）％,24h组为（19．4±1．07）％,48h组为（42．5±3．22）％,与NIH3T3细胞组同时间比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;k562组12h、24h、48h与空白组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。甲异靛能使K562细胞阻滞于G2／M期,G2／M期细胞比例增加,G0／G1期和S期细胞减少。结论甲异靛对体外K562细胞有诱导凋亡作用,其作用与时间成正相关关系。甲异靛可使K562细胞阻滞于G2／M期。     

洛匹那韦逆转LLC/cMOAT细胞多药耐药的作用

目的研究洛匹那韦对LLC/cMOAT细胞株多药耐药的逆转作用及其可能机制。方法采用四甲基偶氮唑盐方法（MTT）检测洛匹那韦对细胞株LLC/CMV和LLC/cMOAT细胞生存的影响,并检测阿霉素（ADM）、长春新碱（VCR）、环磷酰胺（CTX）、顺铂（DDP）对上述细胞株的半数抑制浓度（IC50）。应用流式细胞术检测洛匹那韦处理后细胞内化疗药物阿霉素相关的荧光强度变化。结果 LLC/cMOAT细胞对ADM、VCR、DDP有不同程度的耐药,对CTX未产生耐药;洛匹那韦在浓度小于10.0μmol·L^-1,对LLC/cMOAT细胞无明显细胞毒性作用;用2.5μmol·L^-1洛匹那韦处理后,LLC/cMOAT细胞对VCR和DDP的敏感性增高,浓度提高至5.0μmol·L^-1,敏感性明显提高;用洛匹那韦处理后LLC/cMOAT细胞内ADM的蓄积增加,并表现为浓度依赖;细胞周期检测分析显示,使用洛匹那韦处理0、4、8、16 h后,G1期细胞百分比由（42.65±3.75）%分别增至（56.77±2.37）%、（68.13±4.30）%、（70.25±5.12）%,与0 h G1期细胞数比较差异显著（P〈0.05）;使用洛匹那韦处理细胞48 h后,凋亡率增高且呈时间和浓度依赖性。结论洛匹那韦可以部分逆转LLC-cMOAT的多药耐药,这种逆转可能与增加细胞内化疗药物蓄积,诱导细胞G1期阻滞,增强细胞凋亡有关。     

去甲斑蝥素作用早期对人肝癌细胞活性氧及NF-E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路的激活

目的探究去甲斑螯素(NCTD)诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡及G2/M期阻滞的早期事件,分析NCTD作用早期Hep G2细胞内活性氧自由基(ROS)的变化规律及NCTD对NF-E2相关因子/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路的影响。方法 NCTD30,60和120μmol·L~(-1)分别作用于体外培养的人肝癌Hep G2细胞3,6,12,24,48和72 h,MTT法检测NCTD对细胞存活的影响;流式细胞术检测NCTD60μmol·L~(-1)作用细胞12,24和48 h对细胞周期和细胞凋亡的影响;DCFH-DA探针结合流式细胞术检测NCTD 30,60和120μmol·L~(-1)作用于3,6和12 h对Hep G2细胞内ROS的影响;荧光素酶法测定NCTD同时转染ARE和荧光素酶报告基因的Hep G2C8细胞的荧光强度;实时荧光定量PCR检测对血红素氧合酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶-1(NQO1)m RNA表达的影响。结果 NCTD 30,60和120μmol·L~(-1)作用3和6 h对Hep G2细胞存活无明显影响,而作用24,48和72 h对Hep G2细胞有明显生长抑制作用(P<0.01);NCTD 60μmol·L~(-1)作用12 h后可诱导Hep G2细胞发生凋亡及G2/M期阻滞,12,24和48 h凋亡细胞比例分别由12 h细胞对照组(4.00±1.98)%增加到(12.10±1.70)%,24 h对照组(4.05±0.21)%增加到(31.80±6.50)%,48 h对照组(3.90±0.85)%增加到(33.30±1.41)%;12,24和48 h G2/M期细胞比例分别由12 h对照组的(16.51±1.58)%增加到(40.89±0.18)%,24 h对照组的(16.99±1.32)%增加到(55.29±3.99)%,48 h对照组的(14.45±0.59)%增加到(50.66±5.88)%,相应各时相NCTD处理组G1期细胞比例明显下降(P<0.01);NCTD 30,60和120μmol·L~(-1)作用Hep G2细胞3,6和12 h,ROS无明显变化,作用Hep G2C8细胞6和12 h可明显激活Nrf2/ARE信号通路,下游基因HO-1和NQO1 m RNA表达显著上调(P<0.05)。结论NCTD作用Hep G2细胞早期可明显激活Nrf2/ARE信号通路;ROS激活可能不是NCTD诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡及G2/M期阻滞的主要原因。     

硝酸镓对卵巢癌细胞增殖与凋亡的作用

目的：探讨硝酸镓对卵巢癌HO-8910细胞诱导凋亡、抑制增殖的影响。方法通过对卵巢癌HO-8910细胞培养及干预（硝酸镓不同浓度及时间作用）,采用流式细胞仪技术对凋亡细胞进行测定;MTT技术对肿瘤细胞增殖进行测定。结果 MTT及流式细胞仪检测结果显示,增殖抑制率（80μg/ml）24 h为57.1%、48 h为59.4%、72 h为68.1%;凋亡率5μg/ml为（9.92±1.04）%、10μg/ml为（28.31±1.22）%、20μg/ml为（38.59±1.21）%、40μg/ml为（45.48±1.43）%、80μg/ml为（52.25±2.18）%,硝酸镓对HO-8910细胞作用呈剂量-时间±赖效应。结论硝酸镓对卵巢癌细胞作用明显,为肿瘤治疗及制备抗肿瘤药物提供新的途径。     

菊苣酸通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路抑制口腔癌KB细胞增殖、侵袭与黏附的研究

目的 探讨菊苣酸对口腔癌KB细胞增殖、侵袭与黏附的影响及机制。方法 将KB细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组,分别用0,5,10和20μmol·L^-1菊苣酸干预24 h。比较4组细胞的穿膜细胞数、细胞黏附率,以及磷脂酰肌醇3激酶p85亚单位（PI3Kp85）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达情况。结果 低、高剂量实验组和对照组的穿膜细胞数百分比分别为（79.37±8.04）%,（64.66±7.61）%和（100.00±0）%,细胞黏附率分别为（84.06±3.27）%,（64.64±7.22）%和（100.00±0）%,PI3Kp85相对表达量分别为0.70±0.10,0.08±0.02和0.78±0.05,p-Akt相对表达量分别为0.50±0.06,0.27±0.05和0.81±0.07,低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 菊苣酸能够抑制口腔癌KB细胞的增殖、侵袭与黏附,该作用与抑制PI3K/Akt信号通路的活化有关。     

熊果酸诱导慢性粒细胞白血病细胞凋亡过程中活性氧的生物学功能探讨

目的研究熊果酸对慢性粒细胞白血病细胞株K562的凋亡及其过程中活性氧自由基的作用。方法不同浓度UA处理后用显微镜观察K562细胞的形态学变化;用Annexin V/PI双染色法检测凋亡;用DCFH-DA法检测活性氧自由基的水平。结果 20μmol/L浓度组可见细胞变形、坏死,40μmol/L浓度组可见细胞变形、核固缩、核碎裂和胞膜突起等现象。10、20、40μmol/L作用48h后K562细胞凋亡呈剂量依赖关系,凋亡率分别为21.66%、40.55%、70.21%,随着UA浓度的增高细胞凋亡率也增高,差异具有统计学意义(P0.01)。熊果酸能显著增高K562细胞内的活性氧水平,且活性氧水平随着熊果酸的浓度增加而升高。平均荧光强度由48.96升至78.23,差异具有统计学意义(P0.01)。结论熊果酸可诱导慢性粒细胞白血病凋亡,且活性氧自由基的水平在凋亡诱导过程中起了重要作用。     

熊果酸抑制P-糖蛋白外排功能

目的研究女贞子中的熊果酸对P-糖蛋白（P-gp）功能的影响。方法用环孢素A作为P-糖蛋白功能抑制的阳性对照,用流式细胞术分析熊果酸对P-糖蛋白底物——罗丹明123在Caco-2细胞中外排的影响。结果当熊果酸浓度在0.01μmol.L-1时,实验组细胞内荧光与阴性对照组间无显著性差异（P〉0.05）;当熊果酸浓度在0.1～1μmol.L-1时,实验组细胞内荧光强度显著强于阴性对照组（P〈0.05）,并随熊果酸浓度的增高而增强;当熊果酸浓度为10μmol.L-1时,实验组细胞内荧光强度却表现为减弱,并且显著弱于阴性对照组（P〈0.05）,其原因有待后续实验探讨。结论在低浓度时（0.01μmol.L-1）,熊果酸对P-gp的功能没有影响;当熊果酸浓度在0.1～1μmol.L-1时,熊果酸对P-gp的功能有抑制作用。     

大黄素体外抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖的实验研究

目的探讨大黄素对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法采用倒置显微镜观察细胞生长,DAPI染色观察凋亡细胞;CCK-8法检测不同浓度的大黄素作用不同时间对BIU-87细胞增殖的抑制作用;JC-1检测线粒体跨膜电位并衡量线粒体去极化的比例以及caspase-9活性检测探讨大黄素抑制BIU-87细胞增殖的作用机制。结果不同浓度(10,20,40,60,80μmol·L-1)的大黄素均可抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖,且抑制率呈浓度依赖和时间依赖关系;大黄素作用BIU-87细胞24、48、72小时后半数抑制浓度(IC50)分别为:(46.27±2.32)μmol·L-1、(34.79±1.75)μmol·L-1、(25.58±1.24)μmol·L-1。随大黄素作用时间以及剂量的增加,BIU-87细胞凋亡率增加,线粒体跨膜电位逐渐下降,作用12小时后caspase-9活性随药物浓度增加而增加。结论大黄素能有效地抑制人膀胱癌BIU-87细胞的增殖,其可能机制为通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

冬凌草甲素抑制体内外卵巢癌生长的作用

目的:探讨冬凌草甲素对体内外卵巢癌生长的影响及其作用机制。方法:冬凌草甲素作用人卵巢癌细胞株HO-8910PM后,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Westernblot检测卵巢癌细胞中核因子(NF)-κB和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达;建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察冬凌草甲素对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67、NF-κB和XIAP的阳性表达。结果:HO-8910PM细胞经不同浓度冬凌草甲素(10、20、40μmol·L-1)作用24h后,细胞存活率分别为(80.14±9.84)%、(71.68±6.51)%和(64.58±5.24)%,均低于对照组(96.12±4.23)%,差异有统计学意义(P<0.05)。冬凌草甲素(40μmol·L-1)作用HO-8910PM细胞24h后,诱导(15.9±3.4)%的HO-8910PM细胞发生早期凋亡,高于对照组的(1.7±0.3)%,差异有统计学意义。3种浓度(10、20、40μmol·L-1)的冬凌草甲素作用24h,均可抑制HO-8910PM细胞中NF-κB的表达;而低浓度(10μmol·L-1)冬凌草甲素对HO-8910PM细胞中XIAP蛋白无明显抑制作用,高浓度冬凌草甲素(20和40μmol·L-1)明显抑制XIAP蛋白的表达。冬凌草甲素可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,实验组中Ki-67、NF-κB和XIAP的表达强度均低于对照组(P<0.01)。结论:冬凌草甲素可显著抑制体内外卵巢癌的生长,该作用机制可能是冬凌草甲素通过抑制NF-κB及其调控蛋白XIAP的表达来抑制卵巢癌的生长。     

梓醇对乳胞素诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的探讨梓醇对蛋白酶体抑制剂乳胞素诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法梓醇10μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞1 h后,加入乳胞素10μmol·L-1继续处理24 h。倒置显微镜下观察细胞形态的变化,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化,酶联免疫吸附检测细胞内20S蛋白酶体含量。结果与正常对照组相比,梓醇10μmol·L-1对细胞存活率、形态和凋亡及20S蛋白酶体含量无显著差异;乳胞素10μmol·L-1组细胞存活率为(72.0±1.8)%,明显降低(P<0.05),细胞凋亡率为(64.7±2.6)%,明显增高(P<0.05)。Hoechst33258染色发现梓醇细胞核形态改变,出现凋亡小体;细胞内20S蛋白酶体含量降低60%,差异具有统计学意义(P<0.05)。与乳胞素10μmol·L-1组相比,梓醇10μmol·L-1预处理组细胞存活率(87.9±2.2)%明显增高(P<0.05),细胞凋亡率为(51.4±1.5)%,明显降低(P<0.05)。Hoechst33258染色发现,梓醇细胞核形态明显改善;细胞内20S蛋白酶体含量升高了1.9倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论梓醇对乳胞素诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与梓醇提高SH-SY5Y细胞内20S蛋白酶体含量有关。     

双苯氟嗪对豚鼠心室肌细胞膜钠电流的影响(英文)

目的观察双苯氟嗪对豚鼠心室肌细胞膜钠电流的影响。方法用酶解方法分离豚鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录钠电流。结果将细胞钳制在-80mV,给(-80～+50)mV,50ms和步阶10mV的去极化脉冲,记录到的电流被河豚毒素10μmol·L-1完全抑制。在该刺激条件下,该电流最大激活电压在-20mV左右,翻转电压在+30mV左右,提示该电流为钠电流。双苯氟嗪可以浓度依赖性地抑制钠电流。双苯氟嗪对钠电流的抑制作用在冲洗后可部分恢复,表明其对钠通道的抑制作用具有可逆性。双苯氟嗪可使钠电流I-V曲线上移,但对钠电流的电压依赖性特征、最大激活电压和翻转电压无明显影响。在双苯氟嗪40μmol·L-1存在下,最大激活电压下的峰值电流下降约46%;双苯氟嗪可明显使钠电流稳态失活曲线左移,但不影响曲线的斜率因子。双苯氟嗪40μmol·L-1可使钠电流半数失活电压从(-73.0±4.6)mV减少到(-82.8±7.2)mV。但双苯氟嗪对钠电流稳态激活无明显影响,在双苯氟嗪40μmol·L-1存在下,半数激活电压(-33.7±3.6)mV和斜率因子(5.6±2.4)mV与对照组激活电压(-34.9±5.1)mV和斜率因子(6.0±4.8)mV相比无显著性差异。双苯氟嗪可以使钠电流从失活状态下恢复明显减慢,双苯氟嗪40μmo·lL-1可使恢复时间常数延长(79±28)vs(36±11)ms。结论双苯氟嗪可以浓度依赖性、使用依赖性和频率依赖性地抑制心肌钠电流,并且主要作用于钠电流的失活状态。     

异甘草酸镁单剂量与多剂量静脉滴注的药动学(英文)

目的:研究10名健康志愿者按单剂量和多剂量静脉滴注异甘草酸镁100mg后的药动学特性。方法:多剂量给药方案为每日1次,连续9d。采用高效液相色谱法测定异甘草酸镁的血药浓度。色谱条件包括:HypersilODS2色谱柱(5μm,300mm×4.6mm),流动相为0.23mol·L-1磷酸盐 缓冲液(pH=7.4)∶乙腈=79∶21,柱温40°C,流速 为1.0mL·min-1,紫外检测波长为250nm。数据 用3P87软件处理,按二室模型拟合并求算药动学参 数。结果:单剂量给药后的药动学参数分别为:cmax=(29±3)mg·L-1;t12α=(1.72±0.27)h; t12β=(23±3)h;AUC0～72(以梯形法计算)=(448±75)mg·L-1·h-1。多剂量给药达稳态后的药动 参数分别为:cssmin=(13±3)mg·L-1;cssmax=(43± 6)mg·L-1;cav=(21±4)mg·L-1;t12α=(1.6± 0.4)h;t12β(24±4)h;AUCss0～τ=(513± 108)mg·L-1·h-1。结论:该药在人体内的分布和 消除速度不随连续给药而变化。     

新藤黄酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡以及对p-p38和p-ERK1/2蛋白的影响

目的探讨新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的作用以及对磷酸化p38、p-ERK1/2蛋白的影响。方法倒置显微镜观察新藤黄酸不同时间和不同浓度处理CNE-1细胞形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度新藤黄酸(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μmol.L-1)处理24 h、48 h和72 h对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用;新藤黄酸作用CNE-1细胞24 h后的IC50为2.34μmol.L-1,再结合倒置显微镜观察的结果故选用2.0μmol.L-1作为药物作用浓度。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,并应用透射电子显微镜检测细胞凋亡形态改变及线粒体损伤;Western blot检测p-p38、p38、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白和线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达。结果新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1生长和增殖有抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加或作用时间的延长细胞活力明显下降。通过电镜可见2.0μmol.L-1新藤黄酸作用CNE-1细胞后细胞体积皱缩变圆,细胞核发生典型核染色质固缩等细胞凋亡形态学的变化;与control组相比包括对线粒体的损伤。Western blot表明p-p38蛋白表达有所上调,特别是在短时间(120 min)内,p-ERK1/2蛋白表达呈现时间依赖性下降;而p38和ERK1/2表达则基本不变。Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达也呈现时间依赖性增加。结论新藤黄酸能诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡,增强Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达,同时对p-p38和p-ERK1/2蛋白也有影响。     

生姜醇提取物对人肺腺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响

目的:研究生姜醇提取物对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用浓度为10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物分别处理A549细胞24h,以未经生姜醇提取物处理的A549细胞为对照。MTT比色法检测A549细胞增殖能力;光镜观察细胞的生长情况、形态学改变;原位末端TdT酶标记技术(TUNNEL)检测细胞凋亡的情况。结果:MTT比色法结果表明,10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物抑制率分别为14.87%、24.72%、38.21%,与对照组(0.04%)比较抑制率显著增加(P<0.01),并随生姜醇提取物浓度增高而显著增加;光镜观察对照组细胞生长正常,凋亡细胞少见,而生姜醇提取物处理的A549细胞生长疏散,凋亡细胞的比例增加,程度随生姜醇提取物浓度增高而加重,尤以40μmol·L-1作用24h最显著;TUNNEL检测的10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物下的A549细胞凋亡细胞指数分别为(9.36±0.82)%、(13.74±1.15)%、(19.17±1.40)%,与对照组(4.81±0.36%)比较均有显著差异(P<0.01),并随生姜醇提取物浓度增高而显著增加。结论:生姜醇提取物能抑制人肺腺癌细胞的增殖,其作用呈明显剂量依赖性,即随剂量的增加而抑制率增加。     

间充质干细胞治疗造影剂肾病的作用及机制研究

目的研究间充质干细胞(MSCs)对造影剂肾病(CIN)的预防作用及可能的机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组(CIN组)和MSCs组。2组大鼠均皮下注射环氧化酶抑制剂吲哚美辛(10 mg·kg-1)和一氧化氮合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,10 mg·kg-1),15 min后注射碘必乐(3 g碘·kg-1)诱导CIN。随后将大鼠麻醉,开腹,将MSCs用纤维蛋白胶混合后涂布到肾包膜上(200μL,5×106个细胞)。CIN组同样开腹,但只将纤维蛋白胶涂布到肾包膜上。每日取血测量肌酐水平。最后1日处死动物,取肾脏做HE染色和测定肾组织丙二醛(MDA)水平、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)活性和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。肌酐水平及各项氧化应激指标采用完全随机设计的单因素方差分析,多个样本均数间的两两比较采用t检验。结果 CIN组第24、48、72 h的肌酐水平分别为(171.00±10.15)μmol·L-1、(148.40±14.98)μmol·L-1和(98.20±8.04)μmol·L-1,而MSCs组第24、48、72 h的肌酐水平分别为(111.80±8.76)μmol·L-1、(71.01±9.27)μmol·L-1和(46.69±5.81)μmol·L-1,明显低于CIN组,该组有效抑制肾功能下降。HE染色可以看到CIN组的肾组织出现明显的空泡。而MSCs组空泡不明显。各项氧化应激指标MSCs组优于CIN组。结论 MSCs对造影剂引起的急性肾衰竭有很好的预防作用。