粉防己碱对人增殖性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：探讨粉防己碱对人增殖性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：取手术切除的人增生性瘢痕组织标本,分离培养成纤维细胞,加入不同浓度粉防己碱进行干预,MTT比色法检测各组瘢痕成纤维细胞增殖效应。结果：粉防己碱药物浓度由5μg／ml升至80μg／ml时,瘢痕成纤维细胞增殖活性逐渐降低,呈明显剂量依赖性。结论：粉防己碱对人增殖性瘢痕成纤维细胞增殖具有明显抑制作用。     

粉防己碱抑制瘢痕形成机理的研究

目的：探讨粉防己碱对瘢痕形成的抑制作用及其机理。方法：采用瘢痕成纤维细胞体外培养和兔实验性瘢痕模型,观察粉防己碱对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。结果：体外实验粉防己碱组^3H－TdR掺入率和^3H－脯氨酸掺入率均较对照组明显降低,呈剂量依赖关系;动物实验粉防己碱能明显减少瘢痕组织中成纤维细胞的数量,降低胶原面密度,减轻瘢痕纤维化程度。结论：粉防己碱对瘢痕成纤维细胞过度增殖和胶原沉积具有抑制作用,可能是其抗瘢痕纤维化的主要机制之一。     

粉防己碱对转化生长因子β促瘢痕胶原基质收缩效应的阻断作用

目的 :研究粉防己碱对转化生长因子 β促瘢痕胶原基质收缩效应的作用。 方法 :将瘢痕成纤维细胞、胶原基质和转化生长因子 β共同构成体外瘢痕实验模型 ,观察粉防己碱对其收缩指数的影响。结果 :粉防己碱对转化生长因子β促瘢痕胶原基质收缩具有阻断作用 ,并呈剂量依赖关系。结论 :这一效应可能是粉防己碱抗瘢痕纤维化的机制之一。     

粉防己碱对转化生长因子β促瘢痕胶原基质收缩效应的阻断作用

目的 :研究粉防己碱对转化生长因子 β促瘢痕胶原基质收缩效应的作用。 方法 :将瘢痕成纤维细胞、胶原基质和转化生长因子 β共同构成体外瘢痕实验模型 ,观察粉防己碱对其收缩指数的影响。结果 :粉防己碱对转化生长因子β促瘢痕胶原基质收缩具有阻断作用 ,并呈剂量依赖关系。结论 :这一效应可能是粉防己碱抗瘢痕纤维化的机制之一。     

高良姜素抗增生性瘢痕作用机制研究

目的:研究高良姜素抗增生性瘢痕作用及其可能机制。方法:收集人皮肤增生性瘢痕标本,原代培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞,高良姜素0、15、30、45μmol/L干预24 h,MTT法检测高良姜素对瘢痕成纤维细胞增殖抑制作用,Western blot法检测TGF-β1、smad2、smad3及I型前胶原的蛋白表达。结果:高良姜素三个浓度均可抑制成纤维细胞增殖,并剂量依赖性降低TGF-β1、smad2、smad3及I型前胶原蛋白表达。结论:高良姜素能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,作用机制是通过抑制TGFβ1/smad信号通路抑制I型前胶原蛋白合成而起到抗增生性瘢痕的作用。     

粉防己碱抑制瘢痕成纤维细胞诱导胶原基质的收缩

采用成纤维细胞三维培养方法观察了粉防己碱对人瘢痕成纤维细胞诱导胶原基质收缩的影响，结果表明粉防己碱１μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ能有效地抑制体外瘢痕成纤维细胞与胶原基质网的收缩，呈剂量效应关系     

水蛭素抑制体外模拟增生性瘢痕模型的实验研究

目的:研究水蛭素对体外人增生性瘢痕模型的收缩能力,成纤维细胞的增殖、胶原分泌等功能的影响。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB),建立含增生性瘢痕成纤维细胞的胶原网架系统(FPCL),用1、10、50U/ml的水蛭素溶液干预该模型,测定凝胶块收缩指数,利用MTT染色计数活细胞,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达。结果:浓度为10U/ml和50U/ml水蛭素溶液能够抑制HSFB的活力,使FPCL收缩指数降低,抑制FPCL中HSFBⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达(P<0.05)。结论:水蛭素溶液可抑制体外人增生性瘢痕三维模型的收缩功能和成纤维细胞增殖、分泌胶原功能。     

桂皮醛对小鼠成纤维细胞瘤NIH3T3细胞碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子β1表达的影响

目的 研究桂皮醛刺激小鼠成纤维细胞瘤NIH3T3细胞后碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白在不同时相点表达的规律,探讨桂皮醛促进成纤维细胞增殖及胶原合成的机制.方法 采用MTT法观察不同质量浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响;利用羟脯氨酸(Hyp)测试法测定细胞上清中胶原水平;利用免疫细胞化学技术检测桂皮醛对NIH3T3细胞bFGF、TGF-β1蛋白表达的影响.结果 桂皮醛作用NIH3T3细胞48 h后,细胞增殖速度和细胞上清中的胶原量均较对照组明显增加.桂皮醛刺激后,bFGF和TGF-β1蛋白表达增加,其中bFGF蛋白表达高峰在18 h,TGF-β1蛋白在刺激后12 h达到峰值.结论 桂皮醛可以上调内源性生长因子bFGF、TGF-β1蛋白的表达,这可能是桂皮醛体外促进NIH3T3细胞增殖及胶原合成,以及在创伤愈合、组织修复方面发挥作用的分子生物学机制.     

塔斯品碱对大鼠皮肤创伤和对成纤维细胞增殖及分泌的影响

目的:观察塔斯品碱(TA)对大鼠皮肤创伤愈合的作用及对成纤维细胞增殖和分泌生长因子的影响,探讨其促愈合作用机制.方法:建立大鼠皮肤损伤模型,采用组织学的方法评价愈合质量;体外培养L929成纤维细胞,MTT法观察TA对成纤维细胞增殖的影响,ELISA法测定TA对成纤维细胞分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)及表皮生长因子(EGF)的影响.结果:TA 3.0和1.5 mg/ml溶液外涂对实验性大鼠皮肤损伤有加速修复作用;体外实验表明,0.05～0.4μg/ml TA可明显增加成纤维细胞对TGF-β1和EGF的分泌,其作用呈剂量依赖性,而对成纤维细胞的增殖无明显影响.结论:TA具有促伤口愈合作用,其作用可能与促进成纤维细胞分泌TGF-β1和EGF有关.     

水杉总黄酮对IGF1诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨水杉总黄酮(TFM)对胰岛素样生长因子1(IGF1)诱导的体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞DNA和RNA合成以及胶原合成的影响。方法:IGF1诱发培养乳鼠心肌成纤维细胞肥大,采用DNA、RNA定量检测及3H-脯氨酸掺入量的检测,对成纤维细胞在分子水平进行实验观察。结果:IGF1可诱导心肌成纤维细胞DNA和RNA含量及胶原合成率明显增多,与正常组比较均有显著性差异(P<0.05),而TFM可使IGF1诱导的上述指标的变化均明显下降(P<0.05)。结论:水杉总黄酮可抑制IGF1诱导的乳鼠心肌成纤维细胞的增生和胶质合成。     

当归红芪超滤物对辐射后心肌成纤维细胞的增殖和胶原分泌的影响

目的:研究当归红芪超滤物对辐射后心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响。方法:采用差速贴壁法原代分离培养大鼠心肌成纤维细胞;当归红芪超滤物干预或射线辐射心肌成纤维细胞后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞分泌Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)的含量;心肌成纤维细胞通过2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色在流式细胞仪下检测活性氧(ROS)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测心肌成纤维细胞中COL-Ⅰ和转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白的表达。结果:低剂量射线(0.5 Gy)辐射心肌成纤维细胞后,细胞内ROS的升高促进细胞增殖和胶原分泌的作用;当归红芪超滤物可以促进细胞中转录因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白的核转位来清除ROS,最终抑制辐射诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原分泌;并且当归红芪超滤物明显抑制心肌成纤维细胞中COL-Ⅰ和TGF-βmRNA表达。结论:当归红芪超滤物可以抑制低剂量辐射诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌。     

当归多糖对表皮细胞促创面愈合的调控作用

目的:考察当归多糖通过对人表皮角质形成细胞(HKC)相关细胞因子和真皮成纤维细胞中胶原分泌的调控作用,研究当归在皮肤创面愈合中的作用。方法:采用含10%胎牛血清DMEM培养基,37℃,5%CO2细胞培养箱中培养人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞,加入当归多糖处理后,采用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性;免疫组化方法检测角质形成细胞分泌的转化生长因子-β(TGF-β)及白介素-lα(IL-lα)的表达情况,观测对成纤维细胞的增殖及Ⅲ型胶原分泌的作用。结果:当归多糖作用后,HKC促FC增殖作用增强;随着当归多糖浓度增高,HKC促增殖作用渐增强,在0.2 g.L-1时达高峰。当归多糖调控角质形成细胞TGF-β及IL-lα的分泌呈剂量依赖性,且能促进成纤维细胞增殖,增加胶原合成。结论:当归多糖通过对角质形成细胞TGF-β及IL-lα的表达具有显著的调节作用,影响真皮成纤维细胞Ⅲ型胶原的分泌,从而促进成纤维细胞增殖,提示角质形成细胞和真皮成纤维细胞参与了皮肤创面愈合过程,当归多糖可能在皮肤创面愈合中起重要作用。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1 PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达变化。结果:病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升为3倍、TGF-β1下降为1/3,清肺口服液含药血清组可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5、升高TGF-β1至RSV感染细胞的2倍。利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1,PDGF-BB表达有一定的影响。结论:(1)RSV感染可使HELF细胞PDGF-BBmRNA表达水平显著升高,TGF-β1mRNA表达水平显著下降;(2)清肺口服液可调节TGF-β1、PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一。     

脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响

目的采用体外高糖培养心肌成纤维细胞(CFs)的方法,观察脱氢紫堇碱(DHC)对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响。方法采用体外高糖诱导心肌成纤维细胞增殖模型,western blot法检测β-catenin,GSK-3β以及P-GSK-3β的蛋白表达水平;ELISA法观察细胞分泌TGF-β1蛋白的能力。结果脱氢紫堇碱可以抑制β-catenin的表达(P0.01),上调P-GSK-3β的表达(P0.05),减少TGF-β1的合成(P0.01)。结论脱氢紫堇碱能抑制Wnt信号通路的异常表达,具有潜在的抗心肌纤维化作用。     

橙皮苷对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞活化的影响

目的:探讨橙皮苷对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞合成细胞外基质的影响。方法:12.5~200μmol·L~(-1)的橙皮苷作用于MRC-5细胞,得出不影响细胞增殖的剂量用于后续实验。5 ng·m L~(-1)的TGF-β1作用于MRC-5细胞,诱导细胞大量合成或分泌细胞外基质成分,同时用橙皮苷干预。结果:12.5~50μmol·L~(-1)橙皮苷未发现显著影响MRC-5细胞的增殖(P0.05)。受到TGF-β1刺激后,MRC-5细胞的Col-I分泌量和α-SMA及FN的合成量均显著增加(P0.05)。12.5~50μmol·L~(-1)橙皮苷显著减少上述分子的分泌量或合成量(P0.05)。结论:橙皮苷抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞合成或分泌细胞外基质成分。     

小檗碱对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及Akt激活的影响

目的:探讨小檗碱对高糖诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及Akt激活影响。方法:分离新生乳鼠心肌成纤维细胞,MTT法检测不同浓度小檗碱(10⁴0μM)对高糖(25 mM)诱导心肌成纤维细胞增殖的影响。采用qPCR法检测大鼠心肌成纤维细胞纤连蛋白(FN)的表达。采用Western blot法检测大鼠心肌成纤维细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Akt的表达。结果:25 mM高糖刺激48 h后心肌成纤维细胞的细胞增殖显著增加,FN、PCNA、p-Akt表达升高,小檗碱以剂量依赖性方式抑制高糖诱导上述指标的改变。结论:小檗碱可以通过抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制Akt有关。     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β受体的影响

目的探讨姜黄素对经转化生长因子β(TGF-β)诱导后人胚肺成纤维细胞TGF-βⅠ、Ⅱ型受体(TGF-βRⅠ、RⅡ)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响,及其与特发性肺纤维化的关系。方法细胞分为正常组、姜黄素组、模型组、治疗组,采用RT-PCR、Western blotting法检测TGF-βRⅠ、RⅡ在人胚肺成纤维细胞的变化。结果模型组TGF-βRⅠ与RⅡ表达增强,治疗组与正常组、模型组相比,TGF-βRⅠ与RⅡ表达明显减弱。结论姜黄素可抑制人胚肺成纤维细胞的胶原沉积,在延缓肺纤维化形成中起一定作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-βRⅠ与RⅡ的表达而实现的。     

20(R)-人参皂苷Rg3抗角膜瘢痕机制研究

目的:研究不同浓度的20(R)-人参皂苷Rg3(GRg3)对兔角膜成纤维细胞增殖和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨GRg3抑制角膜瘢痕增生的机制。方法:直接选用大白兔获取兔角膜成纤维细胞后进行原代培养,采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法观察不同浓度(10 mg·L~(-1),20 mg·L~(-1),50 mg·L~(-1),100 mg·L~(-1),150 mg·L~(-1),200 mg·L~(-1))GRg3对兔角膜成纤维细胞增殖作用的影响。应用反转录-PCR(RT-PCR)技术研究不同浓度GRg3对培养的兔角膜成纤维细胞TGF-β1m RNA表达的影响。结果:MTT法检测结果:与对照组比较,当GRg3浓度达到20 mg·L~(-1)及以上时,兔角膜成纤维细胞增殖均显著受抑制。当GRg 3浓度达到50 mg·L~(-1)及以上时,GRg3对兔角膜成纤维细胞TGF-β1 mRNA表达具有抑制作用。结论:GRg3具有抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞增殖的作用,并随着GRg3浓度的增加,其抑制作用增强。随培养时间的延长,GRg3抑制作用增强。GRg3对兔角膜成纤维细胞TGF-β1mRNA表达具有抑制作用。     

三七总皂苷对人肾成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原及转化生长因子-β1的影响

目的 探讨三七总皂苷(PNS)对人肾成纤维细胞(KFB)分泌Ⅰ型胶原及转化生长因子-β1的影响.方法 体外培养人肾成纤维细胞(KFB).传代培养后选取第3～4代细胞,分为对照组(不合PNS)和PNS1组(含PNS400μg/mL)、PNS2组(含PNS 600 μg/mL)和PNS3组(含PNS 800μg/mL),分别于作用24h、48h后采取ELISA法测定各组培养液中Ⅰ型胶原及人转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量,对检测数据进行对比分析.结果 作用24h后,对照组Ⅰ型胶原分泌量与PNS各组相比均无显著性差异(P＞0.05),但对照组TGF-β1分泌量与PNS2组和PNS3组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).作用48h后,对照组Ⅰ型胶原分泌量与PNS2组和PNS3组相比差异具有统计学意义(P＜0.05),对照组TGF-β1分泌量与PNS1组、PNS2组和PNS3组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PNS可明显抑制人肾成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原及转化生长因子-β1,且此种抑制效应存在剂量-效应关系,显示PNS可能对肾间质纤维化具有一定的抑制作用.     

复方苦参碱可防治增生性瘢痕

中国人民解放军总医院等单位研究人员针对增生性瘢痕的现代细胞生物学和分子生物学研究发现，成纤维细胞的大量增殖与凋亡抑制及细胞外基质中胶原合成与降解失衡、部分细胞因子的大量产生构成了HS的生物学基础，并且其发生具有一定的血管依赖性。他们在体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞，加入不同含量的复方苦参碱，24h后观察细胞形态学，以乳酸脱氢酶（LDH）为指标观察细胞毒性，用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖活性。结果发现。不同含量的复方苦参碱均能改变成纤维细胞形态，抑制成纤维细胞增殖，且作用呈剂量依赖性，含量在300μg／mL以下的复方苦参碱无明显的细胞毒作用。