利用小鼠模型研究子宫内膜异位症者在位内膜种植能力

目的:探讨子宫内膜异位症(EMs)在位内膜异位种的植能力。方法:EMs组及非内异症(NEMs,宫颈原位癌)组患者各20例,分别取分泌晚期子宫内膜,再分别以0.2g、0.4g、0.6g种植量腹腔注射方法建成EMs小鼠模型,5d后处死,测量病灶大小,进行HE染色检测异位种植率及免疫组化法检测芳香化酶表达。结果:EMs组病灶数(3.9±0.3)高于NEMs组病灶数(3.2±0.1),P<0.05;0.2gEMs组种植率(60%)高于NEMs组(15%),P<0.01;0.4g的EMs组与NEMs组比较(100%vs85%)及0.6gEMs组与NEMs组比较(100%vs100%)无统计学差异,P>0.05。病灶体积:EMs组0.2g(2.3±0.7mm3)、0.4g(11.4±2.1mm3)、0.6g(21.6±3.4mm3)分别大于相应的NEMs组(0.4±0.2mm3、5.8±0.7mm3、12.0±2.5mm3),P<0.05。组内不同内膜种植量种植率比较0.2gvs0.4g,P<0.05;0.4gvs0.6g,P>0.05。光镜下未观察到EMs组与NEMs组人在位内膜有明显的形态学差异,鼠内异位病灶EMs组腺体结构较完整,NEMs组仅见少量残存的腺体细胞。芳香化酶表达EMs组在位内膜(2.10±1.12)及异位病灶(7.71±3.08)均高于NEMs组在位内膜(0)及异位病灶(5.80±3.01),P<0.05。结论:EMs在位内膜种植能力强于正常子宫内膜,芳香化酶能增强在位内膜的种植能力。     

芳香化酶与子宫内膜异位症相关研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是一种雌激素依赖性疾病,芳香化酶是雌激素合成过程中的关键酶.已证明EMs患者的在位和异位内膜有芳香化酶表达,而正常子宫内膜无该酶的表达,其表达受到类固醇合成因子(SF-1)、小鸡卵白蛋白上游启动转录因子(COUP-TF)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素6(IL-6)和IL-11等多种因素调控.近年来,芳香化酶作为EMs临床诊断的研究增多,将芳香化酶抑制剂用于临床EMs的治疗,证明异位病灶内芳香化酶表达紊乱对EMs的发生发展至关重要.     

芳香化酶与子宫内膜异位症相关研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是一种雌激素依赖性疾病,芳香化酶是雌激素合成过程中的关键酶。已证明EMs患者的在位和异位内膜有芳香化酶表达,而正常子宫内膜无该酶的表达,其表达受到类固醇合成因子(SF-1)、小鸡卵白蛋白上游启动转录因子(COUP-TF)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素6(IL-6)和IL-11等多种因素调控。近年来,芳香化酶作为EMs临床诊断的研究增多,将芳香化酶抑制剂用于临床EMs的治疗,证明异位病灶内芳香化酶表达紊乱对EMs的发生发展至关重要。     

蛋白基因产物9.5在子宫内膜异位症患者在位及异位内膜中的表达情况

目的：探讨蛋白基因产物9.5（PGP 9.5）在子宫内膜异位症（EMs）患者的在位内膜以及异位内膜中的表达情况,并观察其表达量与EMs疼痛程度的关系。方法：应用免疫组化Envision二步法检测44例EMs患者（疼痛组28例,不痛组16例）的在位内膜、异位内膜及20例子宫肌瘤且不伴随疼痛的患者（对照组）子宫内膜中PGP 9.5的表达,探讨其与EMs患者痛经程度的相关性。结果：EMs患者在位内膜PGP 9.5的阳性表达率为72.9%,对照组在位内膜中PGP 9.5的阳性表达率为25.0%,差异有统计学意义（P＜0.05）。EMs患者异位内膜中PGP 9.5的阳性表达率为81.8%;其中疼痛组患者的阳性表达率为92.9%,不痛组的阳性表达率为62.5%,两者相比差异有统计学意义（P＜0.05）。EMs组在位内膜和异位内膜神经纤维密度均高于对照组（均P＜0.01）。PGP 9.5的表达与EMs的分期以及发生部位无关（均P＞0.05）;EMs患者疼痛与病灶发生部位无关（P＞0.05）,且与神经纤维密度无关（P＞0.05）。结论：PGP 9.5在EMs患者在位以及异位内膜中阳性率显著增高,同时其表达量增高,与患者痛经程度有一定相关性。     

子宫内膜异位症异位及在位内膜EG-VEGF基因表达及意义

目的 探讨内分泌腺特异性血管内皮生长因子(EG-VEGF)在子宫内膜异位症（内异症）组织及异位病灶旁组织的表达及意义。方法 采用免疫组化法检测2013年8月至2014年8月在中国医科大学附属盛京医院住院的32例内异症患者在位内膜、异位内膜、异位病灶旁卵巢及32例正常子宫内膜（对照组1）、15例正常卵巢（对照组2）中EG-VEGF的表达。结果 异位内膜EG-VEGF表达量及阳性表达率[1.99±0.26(84.3%)],均高于在位内膜[1.65±0.34(65.6%）],P<0.05及P<0.01;在位内膜EG-VEGF表达量及阳性表达率[1.65±0.34 (65.6%)],均高于对照组内膜[0.85±0.29(21.9%)],P<0.05。异位内膜EG-VEGF表达量及阳性表达率[1.99±0.26(84.3%)],均高于异位病灶旁卵巢组织[1.45±0.28(56.2%)],P<0.05;异位病灶旁卵巢EG-VEGF表达量及阳性表达率[1.45±0.28(56.2%)]均高于对照组卵巢[0.89±0.31(40.0%)],P<0.01及P<0.05。组间比较,差异均有统计学意义。结论 子宫内膜异位症患者在位内膜、异位内膜及异位病灶旁组织中EG-VEGF表达的异常升高与内异症的发生及发展相关。     

VEGF及其受体KDR在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:通过检测血管内皮生长因子(VEGF)、激酶插入区受体(KDR)在子宫内膜异位症(EMs)患者异位内膜、在位内膜及血清和腹腔液中的表达,探讨VEGF及KDR在EMs发病机制中的作用。方法:应用免疫组化SP法检测并比较EMs异位内膜、在位内膜及对照组子宫内膜组织中VEGF及KDR的表达水平。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测并比较EMs组及对照组血清和腹腔液中VEGF及KDR的含量。结果:VEGF和KDR在EMs组异位内膜的表达明显高于在位内膜和正常内膜组(P<0.05),VEGF和KDR在在位内膜的表达明显高于正常对照组(P<0.05),且两者在EMs异位内膜的表达呈正相关(r=0.971,P<0.05)。EMs患者血清和腹腔液中VEGF及KDR含量明显高于对照组(P<0.01),临床分期较早(Ⅰ～Ⅱ)的EMs患者的血清和腹腔液中VEGF及KDR水平明显高于临床分期较晚(Ⅲ～Ⅳ)的患者(P<0.05)。EMs组腹腔液中VEGF及KDR浓度显著高于其血清中浓度(P<0.05)。结论:VEGF及KDR可能在EMs发生、发展过程中发挥了重要的作用,检测血清VEGF及KDR水平为EMs的早期诊断提供了一种新的可能方法,也为通过VEGF-VEGFR双靶向阻断血管来治疗EMs奠定了理论基础。     

TWEAK在子宫内膜异位症在位和异位内膜上的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)在子宫内膜异位症(EMs)发病的关系。方法:采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)和免疫组化、Western Blot方法检测EMs患者在位内膜、异位病灶中TWEAK mRNA和蛋白的表达,并与正常对照子宫内膜比较。结果:TWEAK蛋白表达于子宫内膜的腺上皮细胞和间质细胞的胞浆内。与正常对照组内膜和在位组内膜相比,TWEAK mRNA和蛋白在异位内膜上表达量下调(P<0.05),且无论是EMs在位内膜还是对照组内膜,其增生期TWEAK mRNA表达明显低于分泌期(P<0.05)。结论:TWEAK在子宫内膜中表达,表达量在分泌期明显升高。EMs患者异位子宫内膜TWEAK表达降低,可能导致子宫内膜细胞的凋亡水平下降,参与EMs的发生发展过程。     

半乳糖凝集素-1在子宫内膜异位症大鼠模型异位及在位内膜中的表达

目的:研究半乳糖凝集素-1(gal-1)在大鼠子宫内膜异位症(EMs)模型异位及在位组织中的表达。方法:选取12只性成熟雌性未孕Wistar大鼠,取一侧宫角子宫内膜,采用自体移植法建立EMs大鼠模型。术后28天再次开腹,将建模成功的大鼠作为自身对照,取其异位病灶与在位子宫内膜,苏木精-伊红(HE)染色鉴定组织学特征。免疫组织化学(IHC)法、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测异位病灶与在位内膜中gal-1表达。结果:肉眼观异位病灶呈椭圆形囊泡状,内含清亮或咖啡色液体,表面及周围有新生血管。组织学证实为异位内膜。造模成功率为83.33%。IHC显示,gal-1表达于异位及在位子宫内膜基质;QRT-PCR定量分析表明,异位内膜gal-1 mRNA表达量高于在位内膜(P0.05);Western blot结果示,异位内膜gal-1蛋白水平升高(P0.05)。结论:大鼠EMs异位内膜中gal-1表达高于在位内膜,为该靶点参与EMs的机制及治疗的研究打下基础。     

类固醇合成因子1在子宫内膜异位症发病机制中的作用

子宫内膜异位症(EMs)是一种雌激素依赖性疾病,局部雌激素的大量形成在EMs的发生与发展中发挥重要的作用。芳香化酶是雌激素合成过程中的关键酶。近年来研究已经证实,EMs患者的在位和异位内膜均有芳香化酶的异常高表达,而正常子宫内膜却无该酶的表达,且已有不少芳香化酶抑制剂治疗EMs成功的病例报道。然而最近的研究发现,类固醇合成因子1(SF-1)在正常子宫内膜基质细胞中不表达,而在异位内膜基质细胞中异常表达,SF-1是异位子宫内膜组织芳香化酶合成的主要调控者,EMs患者的异位和在位内膜中芳香化酶表达量直接受SF-1表达的影响,而SF-1表达的异常主要是由于表达该蛋白的基因启动子区的过甲基化。综述SF-1在EMs发病机制中作用的研究进展。     

抑癌基因PTEN、p27与子宫内膜异位症发病的关系

目的:探讨抑癌基因PTEN、p27在子宫内膜异位症(EMs)发生、发展中的作用。方法:采用免疫组化SP法检测32例EMs患者(EMs组)在位及异位子宫内膜PTEN和p27的表达,并与20例正常内膜对照组在位内膜进行比较。结果:PTEN、p27在EMs组异位和在位内膜的表达无显著差异(P>0.05),但二者均低于对照组水平(P<0.05);PTEN、p27在EMsⅠ-Ⅱ期的表达显著高于Ⅲ-Ⅳ期(P<0.05),并与EMsr-AFS分期呈负相关(P<0.05)。各组内膜PTEN和p27的表达均呈正相关(P<0.05)。对照组PTEN、p27分泌期的表达均高于增生期(P<0.05),而EMs组在位内膜的表达均无周期性改变(P>0.05),但其分泌期的表达显著低于对照组同期水平(P<0.05)。结论:抑癌基因PTEN、p27在EMs在位和异位内膜的低表达及二者的协同作用,可能与EMs的发生发展有密切关系。     

人子宫内膜异位症在位子宫内膜干细胞的分离和鉴定

目的:从子宫内膜异位症患者在位子宫内膜中分离、培养子宫内膜干细胞,并鉴定其生物学特性,探索一种简便、高效的分离人子宫内膜异位症子宫内膜干细胞的方法。方法:诊刮获取2012—2014年于天津中医药大学第二附属医院妇产科住院治疗的14例子宫内膜异位症患者的功能层子宫内膜,从中分离出子宫内膜间质细胞,克隆形成法从该细胞中分离出具有强克隆形成能力的克隆形成细胞,对比非克隆形成细胞以噻唑蓝(MTT)比色法测定生长曲线检测两种细胞的增殖能力,连续克隆形成实验检测其克隆形成能力,微球体形成实验检测其微球体形成能力,诱导分化实验检测克隆形成细胞定向分化能力,裸鼠异位病灶形成实验检测其异位病灶形成能力。结果:相较于非克隆形成细胞,生长曲线测定显示克隆形成细胞增殖速度更快,差异有统计学意义(P<0.05)。连续克隆形成实验显示克隆形成细胞5代以内克隆形成率稳定,分别为(12.30±3.75)%、(13.11±3.23)%、(11.86±2.21)%、(12.08±3.01)%、(11.01±3.98)%,非克隆形成细胞随传代次数增加克隆形成率逐渐降低,至第5代已无克隆形成,分别为(5.57±2.13)%、(4.21±2.12)%、(2.23±1.02)%、(0.12±0.07)%、0%,2组细胞对应代数克隆形成率比较差异有统计学意义(P<0.05)。微球体形成实验显示克隆形成细胞3代以内每代成球细胞数量分别为(0.82±0.37)×10~4、(1.45±0.64)×10~4、(3.06±1.73)×10~4,非克隆形成细胞分别为(0.48±0.27)×10~4、(0.37±0.15)×10~4、0,2组对应代数细胞数量比较差异有统计学意义(P<0.05)。诱导分化实验显示克隆形成细胞具有定向分化能力。裸鼠异位病灶形成实验显示克隆形成细胞接种2周后可形成肉眼可见异位病灶,其异位病灶形成率为100%,相较于非克隆形成细胞异位病灶形成率40.62%,差异有统计学意义(χ~2=27.022,P<0.05);克隆形成细胞异位病灶体积为(30.95±12.13)mm^3,对比非克隆形成细胞异位病灶体积(19.12±10.98)mm^3,差异有统计学意义(t=3.065,P<0.05);HE染色显示:克隆形成细胞及非克隆形成细胞均有间质和腺体样异位病灶形成;进一步行免疫组化染色显示异位病灶组织中,间质样细胞Vimentin表达阳性,腺体样细胞CK-19表达阳性。结论:子宫内膜异位症在位子宫内膜功能层中具有强克隆形成能力的子宫内膜干细胞,应用克隆形成法可以有效收集子宫内膜干细胞,经该法收集的子宫内膜干细胞可以冻存及传代培养,且具有干细胞无限增殖、自我更新、定向分化及异位病灶形成能力。     

细胞色素芳香化酶P-450在正常、子宫内膜异位症子宫内膜的表达及意义

目的 :探讨细胞色素芳香化酶P - 45 0在子宫内膜异位症 (内异症 )发病中的作用 ,检测子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达用于诊断内异症的可行性。方法 :应用免疫组化方法检测正常子宫内膜和内异症的在位及异位内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达。结果 :细胞色素芳香化酶P - 45 0在正常子宫内膜无表达 ,在内异症的在位和异位内膜均有强表达 ,增殖期与分泌期无差别。检测子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达 ,用于诊断内异症的敏感度为 91 5 % ,特异度为 10 0 % ,阳性预测值为 10 0 %。内异症子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达与AFS分期无相关性。结论 :子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0分泌增加促进内异症的发生 ;内异症子宫内膜细胞色素芳香化酶P -45 0的强表达对内异症的诊断有重要意义     

Gene expression of adhesion molecules and matrix metalloproteinases in endometriosis.

Various types of cell adhesion molecules and matrix metalloproteinases (MMPs) seem to play an important role in the invasion process of endometriosis; however, limited investigation has focused on their gene expression in human peritoneal endometriotic lesions. A total of 63 endometriotic tissues were surgically obtained from 35 women with endometriosis, which included 43 pigmented and 20 non-pigmented lesions. Gene expression levels of E-cadherin, alpha- and beta-catenin, MMP-2, MMP-9 and membrane-type 1 (MT1)-MMP in these endometriotic lesions were compared with those in normal eutopic endometrium obtained from 12 women without endometriosis. MMP-2, MMP-9 and MT1-MMP mRNA expression in pigmented lesions was significantly higher than that in normal endometrium (p < 0.05), whereas E-cadherin, alpha- and beta-catenin mRNA expression was not suppressed in endometriotic lesions. There was a close correlation between MMP-2 or MT1-MMP and E-cadherin, alpha- or beta-catenin gene expression in 63 endometriotic tissues examined (p < 0.01). Immunohistochemical expression of E-cadherin, alpha- and beta-catenin in glandular epithelial cells was positive not only for all of seven cases with normal eutopic endometrium but also for 9 of 11 with ovarian endometriosis. MMP expression in ectopic endometrium was much greater than that in eutopic endometrium. These results suggest that endometriotic tissues expressing MMPs might be invasive and simultaneously possess cell-to-cell adhesion property in pelvic peritoneal foci.     

Gene expression of adhesion molecules and matrix metalloproteinases in endometriosis

Various types of cell adhesion molecules and matrix metalloproteinases (MMPs) seem to play an important role in the invasion process of endometriosis; however, limited investigation has focused on their gene expression in human peritoneal endometriotic lesions. A total of 63 endometriotic tissues were surgically obtained from 35 women with endometriosis, which included 43 pigmented and 20 non-pigmented lesions. Gene expression levels of E-cadherin, α- and β-catenin, MMP-2, MMP-9 and membrane-type 1 (MT1)-MMP in these endometriotic lesions were compared with those in normal eutopic endometrium obtained from 12 women without endometriosis. MMP-2, MMP-9 and MT1-MMP mRNA expression in pigmented lesions was significantly higher than that in normal endometrium (p < 0.05), whereas E-cadherin, α- and β-catenin mRNA expression was not suppressed in endometriotic lesions. There was a close correlation between MMP-2 or MT1-MMP and E-cadherin, α- or β-catenin gene expression in 63 endometriotic tissues examined (p < 0.01). Immunohistochemical expression of E-cadherin, α- and β-catenin in glandular epithelial cells was positive not only for all of seven cases with normal eutopic endometrium but also for 9 of 11 with ovarian endometriosis. MMP expression in ectopic endometrium was much greater than that in eutopic endometrium. These results suggest that endometriotic tissues expressing MMPs might be invasive and simultaneously possess cell-to-cell adhesion property in pelvic peritoneal foci.     

VEGF在子宫内膜异位症发病机制中的作用

目的:探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)组织中的表达及其在EMs发生发展中的作用。方法:采用ELISA法检测30例EMs患者(研究组)和16例子宫肌瘤患者(对照组)血清和腹腔液中的VEGF水平,免疫组化和RT-PCR检测并比较VEGF蛋白、VEGF mRNA在EMs异位内膜、在位内膜和对照组正常内膜的表达及其相关性。结果:EMs患者腹腔液、异位内膜、在位内膜VEGF蛋白及mRNA均明显高于对照组(P<0.05),但与EMs临床分期无关。EMs患者血清VEGF与对照组相比无明显的差异(P>0.05)。EMs患者异位内膜和在位内膜的微血管密度(MVD)明显高于对照组内膜(P<0.05)。结论:VEGF在EMs患者的高表达,说明其通过促血管生成在该病发生发展中起着重要作用。