中药联合树突状细胞激发T细胞杀伤力的实验观察

目的观察研究体外培养诱导树突状细胞(DC)激发正常人及患者自体T细胞后T细胞对K562细胞的杀伤作用。方法用清毒饮、养正片灌胃动物(新西兰兔)制备中药含药血清备用。在签署知情同意书后,取急性髓系白血病缓解期患者骨髓,经抗凝后,应用羊红细胞玫瑰花结程序从骨髓中分离出T细胞的骨髓单个核细胞(TD-BMNC),以中药含药血清与细胞因子联合培养,诱导含药血清对TD-BMNC来源的DC分化成熟,用此法诱导分化的DC与纯化的正常人或缓解期患者外周血T细胞共同培养,观察对T细胞增殖能力的影响。用激发的T细胞与K562细胞共同培育,以MTT法测定该T细胞对K562细胞的杀伤活性。结果各中药组与对照组相比,自体及异体T细胞清毒饮合养正片低剂量组均高于单纯细胞因子组,有统计学意义。结论清毒饮合养正片联合细胞因子诱导的DC可以激发T细胞产生更强的杀伤力。     

清毒饮和养正片诱导L7212小鼠白血病细胞凋亡及其对Bcl-2、P53基因表达的影响

目的:探讨清毒饮和养正片抗白血病的作用机理。方法;采用L7212白血病小鼠模型,用原位末端标记法（TUNEL）观察清毒饮、养正片和化疗对其白血病细胞凋亡的影响。结果:清毒饮、养正片、化疗各组都可见较多白血病细胞凋亡。其中清毒饮组优于养正片组,合用化疗则更明显,凋亡指数均大于模型对照组（P<0.01）,证明清毒饮、养正片能诱导L7212白血病细胞凋亡,且以清毒饮较明显,并可提高化疗的促凋亡作用。用免疫组化法检测模型小鼠骨髓有核细胞中Bcl-2、P53基因的表达,其Bcl-2表达明显增高,予清毒饮、养正片处理后,Bcl-2有所下降,以清毒饮组较养正片组明显,合用化疗后下降更明显（P<0.05）;P53表达在L7212白血病细胞稍减低,经清毒饮、养正片、化疗处理后,表达阳性率及其强度均有所升高,但统计学处理差异无显著性意义（P>0.05）。结论:清毒饮、养正片确能下调Bcl-2表达,而对P53作用不够明显。     

复方维甲酸注射液诱导K562分化及凋亡作用

目的:比较复方维甲酸注射液及其拆方制剂青蒿油注射液、维甲酸注射液在体外对人红白血病细胞株K562的增殖、分化和凋亡的影响。方法:用MTT法了解三种注射液对人红白血病细胞株K562增值的抑制作用,用形态学观察、NBT还原实验以及流式细胞术检测表面抗原CD14、CD33观察三种注射液对K562细胞的诱导分化作用;通过流式细胞术观察药物对细胞凋亡和周期的影响。结果:MTT结果显示复方维甲酸注射液对K562细胞增殖有抑制作用,且效果优于其拆方制剂,IC50为11.98±0.06μg/m l;形态学观察、NBT还原实验以及流式检测CD14、CD33均提示复方维甲酸注射液有较好的诱导细胞分化成熟能力;流式检测提示复方维甲酸注射液可将细胞周期阻滞在G2/M期,对K562细胞有诱导早期凋亡的作用,且效果最优。结论:复方维甲酸注射液对人红白血病细胞K562有抑制增殖、诱导分化和凋亡的作用,且效果优于其拆方制剂。     

当归多糖诱导K562白血病细胞凋亡的实验研究

目的从细胞凋亡的角度探讨当归多糖(APS)抑制白血病细胞增殖的机制。方法体外培养白血病细胞株K562,培养时添加25 mg/L、250 mg/L、2 500 mg/L当归多糖,分别于第2,4,6天,取细胞用台盘蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术分析细胞周期分布;免疫组织化学检测bcl-2抗凋亡基因的表达。结果细胞生长曲线显示25~2 500 mg/L的当归多糖对白血病细胞株K562有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示250 mg/L作用后S,G2+M期K562细胞数减少,G0/G1期细胞增多。APS诱导细胞后bcl-2明显降低(P<0.05)。结论APS对白血病细胞株K562细胞的增殖具有显著抑制作用,APS通过阻止K562细胞进入S期而抑制其DNA合成,bcl-2表达降低可能是APS诱导白血病细胞凋亡重要途径之一。     

去甲斑蝥素诱导K562细胞凋亡的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人白血病细胞株K562细胞增殖的抑制作用。方法:用流式细胞仪测定NCTD对K562细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:NCTD对K562细胞有较强的增殖抑制作用;在作用24小时后达到凋亡高峰;24小时各浓度NCTD作用后,G_1期细胞百分数均减少,S期与G_2+M期细胞百分数均增加,呈现G_2+M期阻滞现象。结论:NCTD可诱导K562细胞凋亡,抑制瘤细胞分裂增殖,且有明显的时间和剂量效应。     

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞生物学行为的影响

目的 观察硒化壳聚糖对体外培养慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/ADM细胞生物学行为的影响.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞12～24 h,应用流式细胞法检测细胞凋亡,软件拟合计算细胞周期;应用免疫印迹法检测P-gp的表达;应用RT-PCR法检测mdr-1 mRNA水平.结果 硒化壳聚糖能够明显增强ADM对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,阻滞细胞周期于G1期(P＜0.05,P＜0.01),下调P-gp表达和mdr-1mRNA水平(P ＜0.05,P＜0.01),硒化壳聚糖浓度越高,作用效果越明显.结论 硒化壳聚糖能够通过下调mdr-1基因和P-gp蛋白表达,阻滞细胞于G1期诱导凋亡来对体外培养的K562/ADM细胞耐药生物学行为产生影响.     

辣椒素诱导白血病和肝癌细胞凋亡的比较研究

目的:比较合成辣椒素(N-Vanillylnonanamide)诱导白血病细胞K562及其多药耐药K562/ADM、肝癌HepG2细胞凋亡的作用.方法:以K562细胞、K562/ADM细胞和HepG2细胞为靶细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,流式细胞法测定细胞周期和Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡.结果:MTT示合成辣椒素可抑制白血病细胞和HepG2细胞的增殖,根据同时期半数抑制浓度(IC50)示HepG2细胞最敏感,K562细胞较K562/ADM细胞敏感.合成辣椒素可阻滞细胞周期.合成辣椒素诱导24小时后Annexin V/PI双染色显示白血病细胞和肝癌细胞凋亡率升高;白血病敏感细胞株和耐药细胞株的对舍成辣椒素敏感性相似.结论:合成辣椒素可抑制白血病和肝癌细胞的增殖并诱导其凋亡;辣椒素对药物敏感和耐受的白血病细胞的作用相似.     

注射砒霜大鼠的血清对白血病细胞膜流动性及细胞周期的影响

目的：探讨砒霜治疗白血病的作用机理。方法：用血清药理学方法研究砒霜对人白血病细胞株K562细胞的作用。通过荧光光度测定法、流式细胞术检测细胞膜流动性、细胞周期。结果：砒霜能使K562细胞膜流动性增高，G0-G1期细胞百分数减少，S期细胞百分数增加，并具有诱导K562细胞凋亡的作用。     

小檗碱对K562细胞分化及凋亡的影响

目的:研究小檗碱对K562细胞是否具有抑制增殖、促进分化、诱导凋亡的作用,为临床应用黄连治疗慢性粒细胞白血病提供理论依据.方法:MTT比色法、克隆形成实验检测小檗碱对K562细胞增殖的影响;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞凋亡的形态改变;DNA琼脂糖凝胶电泳检测晚期细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期分布,细胞表面分化抗原表型检测分析细胞分化.结果:小檗碱对K562细胞的生长有抑制作用;小檗碱与Ara-C联用存在一定的协同效应;小檗碱处理K562细胞48 h后能明显促进其向红系、粒系、巨核系分化,随着作用时间的延长小檗碱诱导K562细胞发生凋亡的百分比逐渐增加.结论:小檗碱能有效地抑制K562细胞的增殖,其作用可能是通过诱导K562细胞发生G0/G1期和(或)G2期阻滞并进一步诱导其凋亡和分化实现的.     

藤黄酸对K562细胞hERG 钾通道蛋白的调控作用

目的 探讨藤黄酸对白血病细胞系K562增殖、凋亡、细胞周期的影响.并观察藤黄酸对hERG钾通道蛋白的调控作用.方法 K562细胞以不同浓度藤黄酸(0.125～8.0 μmol/L)处理0～72 h后,MTT法观察藤黄酸对K562细胞生长抑制的情况,Annexin-Ⅴ/PI双标法及透射电镜检测细胞凋亡,PI 单染法检测细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR法分别检测藤黄酸对K562细胞内hERG通道的调控作用.结果 藤黄酸能明显抑制K562细胞增殖,具有时间-剂量依赖性,其24 h的IC50 为(2.637±0.208)μmol/L.此外,藤黄酸以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,并伴随明显的凋亡细胞形态学改变.而藤黄酸的凋亡诱导效应可能与其诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期有关.hERG钾通道蛋白在人白血病K562细胞中表达量较高,藤黄酸对hERG钾通道蛋白及其表达水平均有不同程度的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系(P＜0.01).结论 藤黄酸可通过下调hERG钾通道蛋白的表达发挥较强的抗白血病效应,hERG钾通道有望成为白血病诊治的新靶标.     

加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞的影响

目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Annexin V/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡形态;免疫印迹法(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果:加味四君子汤含药血清呈浓度依赖性抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期。hoechst33342染色后,随着含药血清浓度的增加,Hep-G2细胞核显著呈碎块状致密浓染。同时,加味四君子汤含药血清能够抑制Hep-G2细胞Akt,m TOR,核糖体S6蛋白激酶(S6),真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的磷酸化,从而上调Bcl-2相关X蛋白(Bax)和下调细胞周期蛋白(Cyclin D1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达。加味四君子汤含药血清与300 nmol·L-1的PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584联合使用具有协同作用,含药血清能增强PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584对Hep-G2细胞中PI3K/Akt/m TOR信号通路靶点Akt和m TOR磷酸化的抑制作用。结论:加味四君子汤含药血清能抑制Hep-G2细胞的增殖,诱导其凋亡,阻滞其于G0/G1期,其机制可能通过阻断PI3K/Akt/m TOR信号通路而实现。     

小檗胺对多药耐药K562/Adr细胞作用的研究

目的研究小檗胺诱导人白血病K562／Adr细胞凋亡及逆转多药耐药的作用及机理。方法采用MTT法测IC50值,流式细胞仪Annexin V FITC-PI法检测细胞凋亡发生率,PI染色法检测凋亡峰及细胞周期,同时以FCM检测Caspase-3、P-GP蛋白表达及细胞内药物积聚能力,RT-PCR法检测mdr-1基因表达。结果小檗胺能抑制人白血病K562／Adr细胞生长且呈剂量依赖关系,并能诱导细胞凋亡,使Caspase-3蛋白表达及细胞药物外排能力增加,同时降低mdr-1基因mRNA和蛋白表达水平。结论小檗胺能激活Caspase-3以诱导人白血病K562／Adr细胞凋亡,同时能通过降低mdr-1表达逆转多药耐药。     

黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化.结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC5o分别为98.63,130.32 mg·L-1;TFA在100 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8％,毛蕊异黄酮在130 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8％;药物对K562细胞持续作用24h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少;经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低.结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用;将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制.     

归脾汤含药血清对雷公藤醇提物致骨髓细胞凋亡的保护作用

目的:观察归脾汤含药血清对雷公藤醇提物致大鼠骨髓细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养大鼠股骨骨髓细胞,经8mg?L-1的雷公藤醇提物作用后,加入5％,10％,15％,20％的归脾汤含药血清,采用MTT比色法检测对骨髓细胞增殖的影响;采用流式细胞仪PI单标法检测对骨髓细胞周期的影响;采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双标法检测对骨髓细胞凋亡率的影响.结果:与同等浓度的雷公藤醇提物组比较,15％,20％的归脾汤含药血清能显著升高骨髓细胞的存活率和增殖指数(P ＜0.05或P＜0.01),10％,15％,20％的归脾汤含药血清显著降低骨髓细胞凋亡指数(P＜0.05).结论:归脾汤含药血清能显著增加雷公藤醇提物作用后骨髓细胞的存活率,诱导骨髓细胞由相对静止期进入增殖活跃期,并减少细胞凋亡.     

芒果甙对K562细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的:研究芒果甙对白血病K562细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响。方法:采用端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)PCR-ELISA方法检测K562细胞经芒果甙作用前后端粒酶活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布。结果:经芒果甙作用后,K562细胞端粒酶活性下降,随药物浓度增加和作用时间的延长,其抑制作用增强;芒果甙作用24小时后,K562细胞G2/M期细胞增多,S期细胞减少,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性。结论:芒果甙能抑制K562细胞的端粒酶活性,其机制可能与其细胞周期阻滞作用有关。     

人参皂苷Rg1诱导人白血病K562细胞株衰老的实验研究

目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞株衰老的作用及其机制。方法:MTT比色法检测Rg1对K562细胞增殖的影响,筛选最佳作用浓度及时间(20μmol.L-1,48 h)。流式细胞术检测Rg1对细胞周期的影响;SA-β-Gal染色检测细胞阳性染色百分率;RT-PCR法检测衰老相关基因p16,p53,p21,Rb的表达;电镜观察细胞衰老超微形态学改变。结果:Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,使细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著增高(P<0.05);细胞衰老相关基因的表达上调(P<0.05);超微结构观察显示细胞增大,异染色质凝集、碎裂,线粒体体积增大,溶酶体体积增大、数目增多等衰老形态学变化。结论:Rg1能诱导K562细胞衰老,p53-p21-Rb,p16-Rb信号转导通路在其衰老调控中起重要作用。     

红芪多糖HPS-3体外诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的研究

目的:研究红芪多糖均一组分HPS-3体外对人胃腺癌MGC-803细胞增殖及凋亡的作用。方法:应用MTT法、显微荧光术和流式细胞术测定HPS-3对MGC-803细胞的增殖、细胞周期和诱导凋亡的影响,应用流式细胞术测定对Bc1-2和Bax蛋白表达的影响。结果:HPS-3对MGC-803细胞具有抑制增殖、G2/M期阻滞和诱导凋亡作用;HPS-3降低bcl-2蛋白表达,对Bax蛋白表达无明显作用。结论:HPS-3可通过抑制人胃腺癌MGC-803细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,降低bcl-2蛋白等作用机制发挥肿瘤作用。     

红芪多糖HPS-3体外诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡研究

目的:研究红芪多糖均一组分HPS-3体外对人胃腺癌MGC-803细胞增殖及凋亡的作用。方法:应用MTT法、显微荧光术和流式细胞术测定HPS-3对MGC-803细胞的增殖、细胞周期和诱导凋亡的影响,应用流式细胞术测定对Bc1-2和Bax蛋白表达的影响。结果:HPS-3对MGC-803细胞具有抑制增殖、G2/M期阻滞和诱导凋亡作用;HPS-3降低bcl-2蛋白表达,对Bax蛋白表达无明显作用。结论:HPS-3可通过抑制人胃腺癌MGC-803细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,降低bcl-2蛋白等作用机制发挥肿瘤作用。     

丹参酮ⅡA诱导白血病细胞凋亡过程中端粒酶活性的改变

目的观察丹参酮Ⅱ_A(TanⅡ_A)对HL60,K562细胞端粒酶活性的抑制作用和对凋亡相关基因的影响,探讨丹参酮Ⅱ_A对造血细胞的作用机理。方法以HL60,K562为靶细胞,应用细胞培养技术,流式细胞术,透射电镜观察TanⅡ_A对HL60,K562细胞的作用,利用PCRTRAP方法检测TanⅡ_A处理前后HL60,K562细胞端粒酶活性的改变。结果经05μg·mL^-1TanⅡ_A作用6d后,HL60,K562细胞生长明显受到抑制,生长抑制率分别为756%和563%。经丹参酮诱导后,HL60,K562细胞发生凋亡,出现亚二倍体峰;同时显著下调HL60及K562细胞的cmyc,bcl2基因表达,上调cfos基因表达。HL60,K562细胞在TanⅡ_A作用后,端粒酶活性受到抑制,端粒酶活性抑制率分别为308%,508%。结论TanⅡ_A可明显抑制HL60和K562细胞的增殖和细胞端粒酶活性,并诱导细胞凋亡。