结直肠锯齿状病变h-MLH1基因甲基化状态和蛋白表达意义研究

目的：通过研究结直肠锯齿状病变组织中h-MLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白表达,探讨h-MI．H1启动子甲基化状态与蛋白表达相关性及在锯齿状癌变通路中的作用,并分析hMLH1基因在不同年龄层段甲基化程度。方法：收集北京军区总医院病理科2007-0101-201212-31诊断为锯齿状病变标本225例,其中包括96例增生性息肉（hyperplasticpolyp,HP）、61例广基（无蒂）锯齿状腺瘤/息肉（sessileserratedadenoma／polyp,SSA／P）和68例传统锯齿状腺瘤（traditionalserratedadenoma,TSA）;同时收集同院同期的54例管状腺瘤（tubularadenoma,TA）、69例结直肠癌（colorectaIcancer,CRC）和42例正常结直肠黏膜组织作为对照。应用Taqman探针qPCR（MethyLight）方法检测各组织中h-MLH1基因CpG岛甲基化状态,同时采用免疫组织化学方法检测其蛋白表达水平,其中随机抽取锯齿状病变116例（HP52例、SSA／P41例、TSA23例）、TA20例、CRC24例和正常结直肠黏膜组织24例,并将其甲基化状态与相应的蛋白表达水平及临床病理学资料进行统计学分析。结果：正常、TA、HP、SSA／P、TSA和CRC组织中,MLH1基因启动子CpG岛甲基化阳性表达率分别为9．24％（4／42）、40．74％（22／54）、22．92％（22／96）、45．90％（28／61）、61．76％（42／68）和52．17％（36／69）。HP组与正常、SSA／P、TSA及CRC组之间比较,正常组与SSA／P及TSA组之间比较,差异均有统计学意义,P〈0．05;其余各组之间比较,差异均无统计学意义,P〉0．05。正常、TA、HP、SSA／P、TSA和CRC组织中,h-MLH1蛋白阳性表达率分别为100％（24／24）、80．00％（16／20）、98．08％（51／52）、75．61％（31／41）、69．57％（16／23）和70．83％（17／24）。正常组与HP、SSA／P、TSA、TA、CRC组之间比较,差异均有统计学意义,P％0．05;其余各组之间比较,差异均无统计学意义,P〉0．05。TA、SSA／P和TSA组中,hMLH1基因甲基化与其蛋白表达差异均有统计学意义（P〈o．05）,且呈负相关,相关系数．y分别为-0．553、-0．497、和-0．473。TA、HP、SSA／P和TSA组中,h-MLH1基因甲基化与年龄差异均有统计学意义（P〈0．05）,且呈正相关,相关系数7分别为0．475、0．289、0．450和0．575。结论：结直肠锯齿状病变组织中h-MLH1基因甲基化可能导致其蛋白表达下调,与锯齿状病变的发生和发展密切相关,同时,h-MLH1基因甲基化又可能与年龄相关,随年龄增长,甲基化程度越高。     

结直肠癌相关基因甲基化研究现状和进展

目的：回顾和总结国内外对结直肠癌相关基因甲基化异常改变的研究及其进展。方法：应用Medline及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“结直肠癌、甲基化以及结直肠癌相关基因（如K-ras、p53、c-myc、APC、p16、RASSF1A、hMLH1和ERβ）”等为关键词,检索197901～2008—01结直肠癌相关基因甲基化研究的相关文献。纳入标准：1）结直肠癌与甲基化异常改变;2）结直肠癌相关基因。最后纳入35篇文献。结果：在结直肠癌组织中,K-ras和p53基因的异常改变以点突变为主;c-myc基因局部低甲基化是结直肠癌发生中的早期事件,与细胞增殖密切;APC基因除了杂合性丢失（LOH）致失活外,启动子异常高甲基化致失活也很常见;结直肠癌组织呈现一个不定的甲基化分布密度（所有CpG岛中甲基化CV-G占的比例）则可能是p16基因启动子甲基化模式在体内的特征;RASSF1A基因主要因启动子甲基化而失活;hMLH1失活引起MSI（＋）表型可能与右侧散发性结肠癌的分期有密切的关系;ERβ甲基化模式的分析对判断肿瘤预后有价值。结论：因不同基因而异,除了DNA点突变、缺失、插入和重排等遗传学改变外,甲基化等表观遗传学改变在结直肠癌发生中也占重要地位;甲基化研究对结直肠癌的防治将起到积极的探索意义。     

钟基因hClock、hBmal1在结直肠肿瘤中的 表达

 目的 探讨人类生物钟基因hClock及hBmal1在不同Dukes分期结直肠肿瘤中的表达,研究它们的表达与结直肠肿瘤侵袭及转移的关系。方法 采用原位杂交法检测结直肠肿瘤与相应瘤旁组织中hClock及hBmal1基因mRNA的表达,并采用免疫组织化学检测相应标本中hClock基因蛋白产物（CLOCK蛋白）的表达。结果 32例结直肠肿瘤中hClock mRNA阳性表达率93.75%（30／32）,中或强阳性表达率78.13%（25／32）;hBmal1 mRNA阳性表达率71.88%（23／32）,中或强阳性表达率40.63%（13／32）。两者的中或强阳性率与Dukes分期相关（P<0.05）。阳性表达的肿瘤组织对应肿瘤旁组织hClock及hBmal1基因mRNA的弱阳性表达。CLOCK蛋白中或强阳性表达率87.50%（28／32）,瘤旁组织中CLOCK蛋白弱阳性率93.75%（30／32）（P<0.01）。结论 hClock、hBmal1基因与结直肠肿瘤的发生、发展及侵袭、转移有一定的相关性。     

GATA4基因甲基化在早期结直肠癌诊断中的作用

[目的]检测早期结直肠癌(colorectalcancer,CRC)患者粪便中GATA4基因甲基化水平,探讨其临床价值,为CRC早期无创诊断探索新的途径.[方法]60例早期(Ⅰ+Ⅱ期)CRC患者、30例正常对照者粪便中提取DNA,采用巢式甲基化特异性PCR(nMSP)技术分析其GA TA4基因甲基化状态.同时检测60例早期(Ⅰ+Ⅱ期)CRC患者血清CEA和粪便潜血.[结果] CRC患者术前粪便标本中GATA4基因甲基化检测率显著高于正常对照组GA TA4基因甲基化检测率和CRC患者粪便潜血检测率以及CEA检测率(76.7％vs 6.7％,P=0.000;vs 48.3％,P=0.001;vs 35.0％,P=0.000),而GATA4基因甲基化检出率与患者性别、年龄和肿瘤部位无明显相关(P＞0.05).[结论] CRC早期患者粪便标本中GATA4基因甲基化检测率较高,优于粪便潜血实验和血清CEA,可作为早期无创筛查诊断结直肠癌的重要线索.     

分泌型卷曲相关蛋白基因甲基化与大肠癌的研究进展

 随着表观遗传学的发展,越来越多的研究证实DNA甲基化与肿瘤的发生关系密切。分泌型卷曲相关蛋白（sFRP）基因甲基化可导致该基因表达的沉默,使得对 Wnt 信号通路的抑制作用减弱,促进肿瘤特别是大肠癌的发生与发展。当重新恢复sFRP 的功能后,Wnt 通路活性受到抑制,进而抑制了肿瘤的形成与进展并促进肿瘤细胞凋亡的发生。因此sFRP基因家族甲基化与大肠癌的发生、发展关系密切。所以通过检测sFRP 基因的甲基化对大肠癌进行早期筛查有望成为诊断大肠癌的一种新途径。     

结直肠癌MTAP基因的表达及启动子去甲基化的研究

背景与目的：研究报道甲硫腺苷磷酸化酶（5’-methylthioadenosine phosphorylase,MTAP）在多种肿瘤组织中出现异常表达。本研究检测MTAP基因在结直肠腺癌、结直肠腺瘤和正常结直肠粘膜组织中的表达以及MTAP启动子甲基化的改变,探讨结直肠癌MTAP基因表达的变化与启动子去甲基化的关系。方法：定量PCR检测50例结直肠癌及癌周正常组织中MTAP mRNA的表达量;免疫组织化学的方法检测MTAP在结直肠癌中的表达;甲基化特异多聚酶链反应（Methylation—specified PCR,MSP）检测正常肠粘膜和结直肠癌组织中MTAP基因启动子发生甲基化的情况。结果：定量PCR结果显示：正常结直肠组织中MTAP mRNA的相对水平显著低于结直肠癌组织（P〈0．01）：免疫组织化学结果显示MTAP在结直肠腺癌中的表达高于结直肠腺瘤及正常结直肠粘膜（98．00％vs．85．00％和12．50％,P〈0．05）,结直肠腺瘤与正常结直肠粘膜差异亦具有统计学意义（P〈0．01）;MSP检测16例正常结直肠组织,20例结直肠腺瘤,50例结直肠癌组织启动子甲基化频率分别是93．75％,75．00％,32．00％。结直肠癌中甲基化率较腺瘤和正常组织均显著降低（P〈0．01）。结论：MTAP在结直肠腺癌组织中的表达高于腺瘤和正常组织,MTAP在结直肠腺癌组织中高表达可能与MTAP启动子去甲基化有关。     

结直肠肿瘤TIMPs表达定量研究

 目的　探讨组织金属蛋白酶抑制物(TIMPs)表达与结、直肠癌转移的关系。方法　用免疫组织化学的方法回顾性检测60例结、直肠肿瘤石蜡标本中TIMP-1,TIMP-2的表达。应用图像分析的方法定量分析TIMP-1、TIMP-2在肿瘤组织及间质中的表达,并进一步探讨与肿瘤转移潜能之间的关系。结果　TIMP-1在肿瘤细胞中表达高于间质(P<0.01),同时肿瘤细胞TIMP-1表达高于TIMP-2(P<0.01)。无血管转移组TIMP-2表达高于有血管转移组(P<0.01)。腺瘤组织TIMP-1、2表达均高于癌组织(P<0.01)。结论　TIMPs在结直肠癌中的表达与抑制肿瘤转移相关。     

FHIT基因5＇CpG岛甲基化及其与结直肠癌的关系

[目的]探讨结直肠癌FHIT基因甲基化及去甲基化试剂5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对HCT1116细胞生长的影响。[方法]用甲基化特异性PCR（MSP）检测4个结肠癌细胞株、30例结直肠癌患者的原来肿瘤组织及其对应的正常组织的FHIT基因甲基化状态，用流式细胞术、HE染色及免疫细胞化学检测5-Aza-CdR对HCT1116细胞生长的影响。[结果]4个结肠癌细胞株中有3个细胞株（75%）存在FHIT基因5＇CpG岛的甲基化，30例原发肿瘤组织有14例（46.7%）检出FHIT基因5＇CpG岛的甲基化；用5-Aza-CdR处理HCT1116细胞后，其凋亡率由用药前的1.49%增加到32.6%。[结论]FHIT基因的5＇CpG岛甲基化与结直肠癌的发生发展可能密切相关，5-Aza-CdR可能通过诱导细胞凋亡而抑制HCT1116细胞生长。     

FHIT基因5''''CpG岛甲基化及其与结直肠癌的关系

[目的]探讨结直肠癌FHIT基因甲基化及去甲基化试剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对HCT1116细胞生长的影响.[方法]用甲基化特异性PCR(MSP)检测4个结肠癌细胞株、30例结直肠癌患者的原发肿瘤组织及其对应的正常组织的FHIT基因甲基化状态,用流式细胞术、HE染色及免疫细胞化学检测5-Aza-CdR对HCT1116细胞生长的影响.[结果]4个结肠癌细胞株中有3个细胞株(75%)存在FHIT基因5'CpG岛的甲基化,30例原发肿瘤组织有14例(46.7%)检出FHIT基因5'CpG岛的甲基化;用5-Aza-CdR处理HCT1116细胞后,其凋亡率由用药前的1.49%增加到32.6%.[结论]FHIT基因的5'CpG岛甲基化与结直肠癌的发生发展可能密切相关,5-Aza-CdR可能通过诱导细胞凋亡而抑制HCT1116细胞生长.     

结直肠肿瘤中TEIF基因的表达及其与中心体改变的关系

背景与目的:TEIF基因是本室新近发现的一种调节端粒酶hTERT基因表达的转录因子,在多种肿瘤组织中均有表达。本研究观察TEIF基因在结直肠肿瘤组织中的表达及其与中心体改变的关系。方法:通过原核表达TEIF蛋白免疫制备多克隆抗体,经免疫印迹鉴定后,对10例结直肠黏膜正常组织、30例结直肠癌和54例结直肠腺瘤(Ⅰ级18例,Ⅱ级17例,Ⅲ级19例)标本行TEIF蛋白免疫组化检测及γ-tubulin免疫荧光染色检测。结果:免疫组化结果显示正常组中TEIF蛋白的表达率(10.0%)与肿瘤各组之间(恶性肿瘤组表达率100%,良性肿瘤组98.1%)的差异有统计学意义(P<0.01),恶性肿瘤组与良性肿瘤组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。癌组织组中TEIF强阳性率(≥++)(100%)均显著高于腺瘤组(61.1%)及正常组(0%)(均为P<0.001);腺瘤Ⅰ级(11.1%)与腺瘤Ⅱ级(76.5%)及Ⅲ级(94.7%)组织中TEIF强阳性率之间的差异有统计学意义(P<0.05),而腺瘤Ⅲ级与腺瘤Ⅱ级间的差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光结果显示结直肠癌组中心体扩增阳性率(100%)显著高于正常组(0)及腺瘤...     

High levels of secreted frizzled-related protein 1 correlate with poor prognosis and promote tumourigenesis in gastric cancer

BackgroundSecreted frizzled-related protein 1 (sFRP1), Wnt signalling regulator, can positively or negatively regulate tumourigenesis and progression. We sought to determine the clinical relevance and the role of sFRP1 in gastric cancer development and progression.MethodsWe investigated the sFRP1 protein expression levels and its clinicopathological correlations using 85 cases of human gastric samples with survival information (JWCI cohort). mRNA levels of sFRP1 and coexpressed genes were analysed using 131-sample cDNA microarray data (Ruijin cohort). The effects of sFRP1 alteration were investigated using cell proliferation, colony formation, migration, and invasion and xenograft models.ResultsWe show that sFRP1 is overexpressed in some human cancers and is significantly associated with lymph node metastasis and decreased overall survival in gastric cancer patients. Using gastric cancer cell models, we demonstrate that sFRP1 overexpression is correlated with the activation of TGFβ (transforming growth factor-beta) signalling pathway and thereby induces cell proliferation, epithelial–mesenchymal transition (EMT), and invasion. Conversely, sFRP1 knockdown shows the opposite effects. Furthermore, sFRP1 overexpression promotes tumourigenesis and metastasis in a xenograft model.ConclusionOur studies demonstrate that sFRP1 is a biomarker for aggressive subgroups of human gastric cancer and a prognostic biomarker for patients with poor survival. Our data provide insight into a crosstalk between Wnt and TGFβ pathways which underlies gastric cancer development and progression.     

MiR-339 and especially miR-766 reactivate the expression of tumor suppressor genes in colorectal cancer cell lines through DNA methyltransferase 3B gene inhibition

It is observed that upregulation of DNMT3B enzyme in some cancers, including colon cancer, could lead to silencing of tumor suppressor genes. MiR-339 and miR-766 have been predicted to target 3′UTR of DNMT3B gene. Luciferase reporter assay validated that individual and co-transfection of miR-766 and miR-339 into the HEK293T cell reduced luciferase activity to 26% ± 0.41%, 43% ± 0.42 and 64% ± 0.52%, respectively, compared to the control (P < 0.05). Furthermore, transduction of miR-339 and miR-766 expressing viruses into colon cancer cell lines (SW480 and HCT116) decreased DNMT3B expression (1.5, 3-fold) and (3, 4-fold), respectively. In addition, DNA methylation of some tumor suppressor genes decreased. Expression of these genes such as SFRP1 (2 and 1.6-fold), SFRP2 (0.07 and 4-fold), WIF1 (0.05 and 4-fold), and DKK2 (2 and 4-fold) increased in SW-339 and SW-766 cell lines; besides, expression increments for these genes in HCT-339 and HCT-766 cell lines were (2.8, 4-fold), (0.005, 1.5-fold), (1.7 and 3-fold) and (0.04, 1.7-fold), respectively. Also, while in SW-766, cell proliferation reduced to 2.8% and 21.7% after 24 and 48 hours, respectively, SW-339 showed no reduced proliferation. Meanwhile, HCT-766 and HCT-339 showed (3.5%, 12.8%) and (18.8%, 33.9%) reduced proliferation after 24 and 48 hours, respectively. Finally, targeting DNMT3B by these miRs, decreased methylation of tumor suppressor genes such as SFRP1, SFRP2, WIF1 and DKK2 in the mentioned cell lines, and returned the expression of these tumor suppressor genes which can contribute to lethal effect on colon cancer cells and reducing tumorigenicity of these cells.     

结直肠癌发生的分子病理学基础

结直肠癌发生是遗传学和表观遗传学改变累积的结果.基因组不稳定导致基因突变和DNA甲基化模式改变是结直肠癌发生的主要分子事件.鉴定不同患者中导致结直肠癌发生的关键基因突变及甲基化表型,对结直肠癌进行分子病理分型和诊断,是进行个体化治疗和靶向治疗的前提.     

Genetic variants in frizzled-related protein (FRZB) and the risk of colorectal neoplasia

Objective  The Wnt/APC/β-catenin signaling pathway, which includes frizzled-related protein (FRZB), plays a critical role in the development of colorectal cancer, and recent evidence suggests that the functional polymorphism, FRZB Arg324Gly, may be associated with risk for this disease. To determine if this finding could be replicated, we investigated the association between two FRZB polymorphisms (Arg324Gly and Arg200Trp) and the risk of colorectal adenoma and cancer in nested case–control studies. Methods  Participants consisted of 1,709 adenoma cases, 620 cancer cases, and 1,849 controls within the Prostate, Lung, Colorectal, and Ovarian (PLCO) Cancer Screening Trial. Logistic regression was used to estimate odds ratios (ORs) and 95% confidence intervals (95% CI) for the associations with colorectal neoplasia. Results  No association was observed for either polymorphism or any haplotypes with colorectal adenoma or colorectal cancer (p > 0.05 for all). Conclusion  Our study does not support the previously observed association between the FRZB 324Gly variant and colorectal cancer risk. However, further study of additional genetic variants within this pathway is still warranted, given the important role of the Wnt signaling pathway in colorectal carcinogenesis. Electronic supplementary material  The online version of this article (doi:) contains supplementary material, which is available to authorized users.     

抑癌基因高甲基化与鼻咽癌

抑癌基因启动子高度甲基化被认为是除突变和缺失以外的抑癌基因功能失活的关键机制.某些抑癌基因高甲基化与鼻咽癌(NPC)发生密切相关.抑癌基因的甲基化状态检测具有重要的临床意义,有望为肿瘤的早期诊断提供新的思路,而逆转抑癌基因的甲基化则可能成为肿瘤治疗的新方向.     

初查结肠镜阴性人群结直肠肿瘤发生风险研究

目的 调查初查结肠镜结果阴性人群再次进行结肠镜检查情况,探讨不同性别、年龄、风险等级人群在不同时间间隔结直肠肿瘤的发生风险.方法 采用双向性队列研究设计,利用自制调查表对1995年1月1日至2005年12月31日在长海医院初查结肠镜结果阴性无症状平均风险人群进行电话随访.调查内容包括初次结肠镜检查以后所有结肠镜检查情况、结直肠癌危险分层相关因素（年龄、性别、吸烟情况、糖尿病病史、绿色蔬菜摄人情况、腌制食品摄人情况、油炸熏制食品摄人情况、白肉摄人情况）等.采用寿命表生存分析法研究不同性别、年龄、风险等级人群发生结直肠肿瘤的累积风险.结果 共纳入455例研究对象,有91例发生息肉病变,24例发生腺瘤病变,9例发生进展期肿瘤病变,初查结肠镜阴性人群5年后结直肠息肉、腺瘤、进展期肿瘤的累积发生率分别为11.9％、4.2％和2.0％.12年进展期肿瘤的累积发生率为3.9％.男性发生息肉病变的风险高于女性（x2=8.142,P=0.004）;年龄≥60岁人群发生息肉病变的风险高于年龄＜60岁人群（x2=6.321,P=0.012）;高风险组人群发生息肉病变的风险高于低风险组人群（x2=4.082,P=0.043）.结论 对于初查结肠镜结果阴性人群,结直肠息肉、腺瘤、进展期肿瘤5年的累积发生率均较低,12年内发生进展期肿瘤的风险也较低.     

分泌型卷曲相关蛋白家族在肿瘤中的研究进展

分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)可通过卷曲蛋白抑制Wnt信号通路的表达,SFRP基因启动子甲基化沉默与多种肿瘤的发生和转移相关,如结肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌等.多项研究发现SFRP具有潜在的临床价值,有望成为癌症基因诊断与治疗的新靶点.     

食管癌和Barrett食管中RASSF2启动子甲基化的研究

 目的　研究食管癌和Barrett食管组织的甲基化情况,探讨其发生的表观遗传学分子机制的异同。方法　采用甲基化特异性PCR,对27例手术后食管癌、癌旁正常组织以及18例胃镜活组织检查Barrett食管组织中RASSF2基因的甲基化情况进行检测。结果　RASSF2在食管癌组织中甲基化率（66.7 %,18／27）高于相应癌旁正常组织（22.2 %,6／27）及Barrett食管组织的甲基化率（33.3 %,6／18）（均P＜0.05）。而Barrett食管和癌旁组织之间的甲基化率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　RASSF2高甲基化状态可能是引起食管癌的分子机制,在Barrett食管中需进一步验证。     

结直肠癌患者癌结节的研究现状

癌结节的形成与淋巴结转移、神经侵犯和脉管侵犯有关。癌结节是结直肠癌患者的一个不利预后因素,增加结直肠癌患者复发转移的概率。纳入淋巴结转移计数后评估预后的价值大于七版癌结节分期方法,可为结直肠癌患者的临床治疗提供更精准的依据。