FISH检测宫颈脱落细胞中hTERC基因制片方法的研究

荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是用已知的标记单链核酸为探针，按碱基互补原则，与待检材料中未知单链核酸进行结合，形成荧光显微镜下可检测的荧光信号，目前多用于检测癌组织，包括乳腺癌、膀胱癌、肺癌、卵巢上皮性肿瘤和鼻咽癌等。近年人们运用此技术检测宫颈脱落细胞中3号染色体长臂端粒酶基因（human telomerase RNA component，位于3q26．3，hTERC）的扩增，     

FISH检测宫颈脱落细胞hTERC基因的表达及其临床意义

目的:探讨宫颈上皮内瘤变(CIN)患者人类染色体末端酶(hTERC)基因的表达和临床意义。方法:收集2006年10月至2007年6月北京大学人民医院妇科122例宫颈脱落细胞标本,其中CIN患者66例、宫颈鳞癌(SCC)患者20例、正常细胞学妇女36例,用荧光原位杂交(FISH)方法检测脱落细胞hTERC基因。结果:在CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ和SCC患者宫颈脱落细胞中hTERC基因的表达率分别是16.13%、48.57%和90%,CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ、SCC组与正常组比较,hTERC基因阳性率差异有显著统计学意义(P<0.001),其中,CINⅠ与CINⅡ/Ⅲ、CINⅠ与SCC比较,CINⅡ/Ⅲ与SCC比较差异有统计学意义(P<0.05)。随着病变程度增加,hTERC基因表达率增加。hTERC基因检测CINⅡ/Ⅲ的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别是48.57%、92.53%、77.27%和77.5%。CIN和SCC组hTERC基因拷贝数明显增加,其中CIN患者平均拷贝数为2.8,SCC组平均拷贝数为3.2,hTERC基因的表达水平与宫颈病变的程度关系密切。结论:hTERC基因在CIN和SCC中表达异常,且随病变程度增加阳性表达率增加,可作为宫颈癌前病变进展的生物遗传学监测指标。     

FISH技术检测宫颈组织TERC基因扩增

目的应用荧光原位杂交技术（FISH）检测子宫颈病变组织中人端粒酶RNA（TERC）基因异常扩增的临床意义。方法应用双色荧光原位杂交技术（FISH）检测195例宫颈组织TERC基因的异常扩增。结果①195例各类宫颈病变中,慢性宫颈炎33例,ClN134例,CIN2/3（包括原位癌）37例,宫颈鳞状细胞癌30例,宫颈腺癌61例,用FISH检测TERC基因的阳性表达率分别是3.03%（1/33）、29.41%（10/34）、72.97%（27/37）、100%（30/30）、91.80%（56/61）,子宫颈鳞癌与腺癌TERC基因的表达较宫颈上皮内瘤变各组差异有统计学意义（P〈0.05）。TERC基因的扩增阳性率随着宫颈病变程度增加呈逐渐上升趋势,且TERC扩增在子宫颈鳞癌与腺癌患者中无明显差异性;②TERC基因异常扩增与高危型HPV感染呈正相关。结论应用FISH技术检测TERC基因的异常扩增可以作为组织学诊断困难的病变确诊、病变预测及治疗后风险评估的手段。     

宫颈病变细胞中hTERC、c-myc基因的表达及临床意义

目的:检测各级别宫颈上皮内瘤变、宫颈癌患者端粒酶(hTERC)和c-myc基因的表达,探讨二者与宫颈癌发生发展的相关性。方法:采用FISH技术检测193例宫颈病变及52例宫颈癌患者中hTERC基因,c-myc基因的扩增情况,比较分析两种基因表达与CIN级别及宫颈癌临床病理特征的关系。结果:随宫颈病变级别加重,hTERC基因阳性扩增率呈逐渐增高趋势,组间有显著统计学差异(χ2=148.353,P=0.000)。c-myc基因随宫颈病变级别的加重,阳性率逐渐增高,组间有显著统计学差异(χ2=110.128,P=0.000)。c-myc基因阳性率随分化程度的加重而升高,G3阳性率明显高于G1/G2(χ2=6.054,P=0.014),hTERC基因则无显著差异。结论:hTERC基因,c-myc基因可作为鉴别宫颈低度癌前病变和高度癌前病变的重要辅助指标,c-myc基因可能是揭示宫颈癌进展,分化程度的重要指标。     

hTERC基因表达在宫颈病变中的临床意义

目的探讨应用荧光原位杂交(FISH)技术检测人类染色体端粒酶(hTERC)基因异常扩增在子宫颈病变中的临床意义。方法选择经过液基细胞学(TCT)检查的112例患者为研究对象,根据组织学结果分组,CIN73例、宫颈癌19例、正常20例,用FISH方法检测脱落细胞hTERC基因的表达情况,其中行HPV检查65人,阳性39例,阴性26例。结果在CIN1、CIN2/3和宫颈癌患者宫颈脱落细胞中hTERC基因的表达率分别是16.67%、51.16%和89.47%,CIN1、CIN2/3和宫颈癌与正常组比较,hTERC基因阳性率差异有统计学意义(P0.001),其中,各组间比较差异有统计学意义(P0.05)。在HPV感染的39例患者中,hTERC基因扩增比例58.97%(23/39),而26例HPV阴性的患者中,其扩增比例为23.08%(6/26),两组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 hTERC基因的阳性率随宫颈病变级别增高而增加,对宫颈早期病变进展有预测意义。hTERC基因的扩增与HPV感染及宫颈病变程度相关,其扩增可能是HPV感染致端粒酶活性增加的早期事件。     

hTERC基因表达在宫颈癌筛查中的意义

目的:探讨宫颈病变脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(hTERC)的表达及hTERC基因检测在宫颈癌筛查中的临床意义。方法:收集宫颈病变患者的宫颈脱落细胞标本129例,依据组织病理学结果分为3组:宫颈上皮内瘤变低度病变组(CINⅠ)、高度病变组(CINⅡ/Ⅲ)、宫颈癌组(SCC);同时选择健康妇女的宫颈脱落细胞标本20例作为对照组建立实验室阈值;应用荧光原位杂交技术(FISH)检测两组标本hTERC基因的扩增情况,最终以病理学诊断为金标准,比较FISH检测结果。结果:研究各组中CINⅠ,CINⅡ/Ⅲ,SCC的hTERC基因阳性表达率分别为7.31%,56.25%,75.00%,hTERC基因扩增比例随病变进展而增加;研究组与对照组hTERC基因阳性表达率差异有统计学意义(P0.05);研究各组两两比较,hTERC基因阳性表达率低度病变组与高度病变组、宫颈癌组差异有统计学意义(P0.05),而高度病变组与宫颈癌组的差异无统计学意义(P0.05)。结论:FISH方法检测hTERC基因可用于筛查宫颈高度病变及宫颈癌,其阳性扩增信号多倍体型可能是宫颈病变进展的预测性指标。     

人乳头瘤病毒感染的宫颈上皮内瘤变中的hTERC基因分析

目的探讨人乳头瘤病毒感染的宫颈上皮内瘤变细胞中3号染色体hTERC基因扩增情况。方法对57例病理诊断为CIN（CIN18例,CIN215例,CIN334例;其中包括HPV感染46例与无HPV感染11例）患者的液基细胞学检测剩余样本应用荧光原位杂交技术检测hTERC基因,同时以20例无HPV感染正常宫颈鳞状上皮作为对照,将结果与病理诊断进行比较。结果在正常宫颈鳞状上皮中,3号染色体hTERC基因主要表现为2个杂交荧光信号,宫颈病变与HPV感染的宫颈鳞状上皮中,出现了hTERC基因拷贝数增多,在CINI～CIN3中,HPV感染率分别为12．5％、86．7％、94．1％,hTERC基因扩增的阳性率分别为25．0％、60．0%、82．3％,46例HPV感染的CIN中,hTERC基因扩增的阳性率为80．4％,而11例HPV阴性的CIN患者中,其扩增阳性率为18．2％,两组间比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论3号染色体hTERC基因的扩增与HPV感染及宫颈病变程度相关,hTERC基因的扩增可能是HPV感染致端粒酶活性增加的早期事件。     

人端粒酶RNA基因扩增和高危型HPV感染检测对宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的预测意义

目的:研究人端粒酶RNA基因(hTERC)扩增及高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)脱落细胞的表达,以探讨其在早期宫颈病变和疾病发展的作用和临床意义.方法:分别采用荧光原位杂交技术(FISH)和第2代杂交捕获法(HCⅡ),检测26例宫颈良性病变/湿疣、27例CIN、41例浸润性宫颈癌(ICC)共94例患者的hTERC基因扩增杂交信号数及HR-HPV阳性感染,上述两种检测方法与宫颈病理组织学结果对照.结果:hTERC基因在ICC组阳性表达为85.37%,高于CIN Ⅱ～Ⅲ组(15.83%)、CIN Ⅰ组(7.14%)与良性病变组(6.67%,1/15),差异有高度统计学意义(P<0.01);HR-HPV阳性感染率在良性病变/湿疣、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ～Ⅲ、ICC分别为46.15%,71.43%,38.46%和19.51%;hTERC基因FISH检测对宫颈上皮病变的阳性预测值(PPV)和特异度(Sp)分别为92.68%、88.46%,明显高于HR-HPV-HC Ⅱ检测(65.71%、53.85%),P<0.01;敏感度(Se)55.88%,阴性预测值(NPV)43.40%,亦高于后者(33.82%、23.73%),P<0.05.结论:hTERC基因FISH检测与HR-HPV-HC Ⅱ检测比较能更可靠地辨别宫颈病变的程度;检测hTERC基因扩增对判断早期宫颈病变进展风险可能有一定的预测意义,有望作为宫颈癌早期筛查、病情判断和评估预后的辅助指标之一.     

液基细胞学、HPV检测及hTERC基因检测在宫颈癌筛查中的应用价值

目的:研究液基细胞学、人乳头瘤病毒(HPV)检测及人类染色体端粒酶(hTERC)基因检测在宫颈癌筛查中的应用价值.方法:选取2010年12月-2011年3月满足条件的河南省人民医院妇产科就诊者1000例,对其分别进行液基细胞学(TCT)检测、HPV-DNA检测(SPR法)、hTERC基因检测[荧光原位杂交(FISH)技...     

荧光原位杂交技术检测宫颈上皮内瘤变和宫颈癌细胞hTERC基因扩增的研究

目的探讨宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌细胞涂片内人类染色体端粒酶基因(hTERC)扩增情况及其临床意义。方法2007年12月至2008年12月收集济南军区总医院107例宫颈脱落上皮标本,包括对照组20例;研究组87例,其中27例CIN(Ⅰ级8例、Ⅱ~Ⅲ级19例)和45例宫颈鳞癌(原位癌7例、Ⅰ期14例、≥Ⅱ期24例),术后2年受访15例(宫颈电热圈环切术治疗后12例,宫颈癌术后3例)。应用双色间期荧光原位杂交(FISH)技术,检测上述标本的hTERC基因扩增情况,并与液基薄层细胞检测(TCT)和病理学对照。结果(1)由对照组得出正常值为≤6.0%,>6.0%即为阳性。(2)27例CIN:Ⅰ期出现hTERC基因扩增阳性细胞百分数为9.17±4.62,阳性率为50.0%(4/8);CINⅡ~Ⅲ期为16.00±14.44,阳性率为84.2%(16/19);原位癌为19.67±13.26,阳性率为85.7%(6/7)。CIN组、原位癌组和浸润型癌组hTERC基因扩增阳性细胞百分数均显著高于对照组(P<0.01);CINⅠ期组和Ⅱ~Ⅲ组、原位癌组、Ⅰ期宫颈浸润型鳞癌组和≥Ⅱ期组之间hTERC基因扩增阳性细胞百分率递次...     

Detection of chromosomal aberrations by fluorescence in situ hybridization in cervicovaginal biopsies from women exposed to diethylstilbestrol in utero

Epidemiologic studies have associated estrogens with human neoplasms such as those in the endometrium, cervix, vagina, breast, and liver. Perinatal exposure to natural (17beta-estradiol [17beta-E(2)]) and synthetic (diethylstilbestrol [DES]) estrogens induces neoplastic changes in humans and rodents. Previous studies demonstrated that neonatal 17beta-E(2) treatment of mice results in increased nuclear DNA content of cervicovaginal epithelium that precedes histologically evident neoplasia. In order to determine whether this effect was associated with chromosomal changes in humans, the frequencies of trisomy of chromosomes 1, 7, 11, and 17 were evaluated by the fluorescence in situ hybridization (FISH) technique in cervicovaginal tissue from 19 DES-exposed and 19 control women. The trisomic frequencies were significantly elevated in 4 of the 19 (21%) DES-exposed patients. One patient presented with trisomy of chromosomes 1, 7, and 11, while trisomy of chromosome 7 was observed in one patient. There were two patients with trisomy of chromosome 1. Trisomy of chromosomes 1, 7, 11, and 17 was not observed in the cervicovaginal tissue taken from control patients. These data suggest that DES-induced chromosomal trisomy may be an early event in the development of cervicovaginal neoplasia in humans.     

hTERC基因和P16蛋白在子宫颈组织的表达及其意义

目的探讨人类染色体末端酶RNA（hTERC）基因的扩增及P16蛋白的表达在宫颈癌发生发展中的作用及相互关系。方法应用荧光原位杂交（FISH）和免疫组织化学法分别检测12例宫颈癌,66例CIN,34例慢性宫颈炎患者宫颈组织中hTERC基因异常扩增及P16蛋白的表达情况。结果 hTERC基因在慢性宫颈炎、CIN1、CIN2、CIN3和宫颈癌中的扩增率分别为2.94%、16.67%、41.18%、78.38%和83.33%,各组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;P16蛋白在慢性宫颈炎、CIN1、CIN2、CIN3和宫颈癌中的表达率分别为8.82%、16.67%、41.18%、86.49%和91.67%,各组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。宫颈病变组织中hTERC基因和P16蛋白的表达呈正相关（r=0.637,P〈0.01）。结论 hTERC基因和P16蛋白与宫颈癌的发生发展有关,两者间有正相关性。     

miR-218下调与宫颈上皮内瘤变患者HPV病毒感染关系的研究

目的:探讨小分子RNA-218(miR-218)下调与宫颈上皮内瘤变(CIN)患者人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:选择78例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者,其中CINⅠ22例(28.2%),CINⅡ27例(34.6%),CINⅢ29例(37.2%),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-218的表达,GenoArray测试工具包检测组织标本中HPV的表达。结果:miR-218在高危型HPV感染患者中的含量低于低危型HPV感染者,CINⅡ、Ⅲ患者miR-218含量比CINⅠ患者低。结论:高危型HPV感染患者中miR-218表达降低,提示miR-218可能是宫颈癌发生的重要因素。     

表面等离子共振技术检测人乳头瘤病毒亚型在宫颈病变中的临床应用

目的 探讨表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)检测宫颈病变患者人乳头瘤病毒(HPV)亚型的临床应用价值。 方法 选择北京大学人民医院妇科门诊109例患者为研究对象,采集宫颈脱落细胞并分别采用杂交捕获2代( HC2)和SPR方法行高危型HPV检测,并将检测结果与克隆测序结果进行比对;应用FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因的表达。 结果 (1) 以克隆测序结果为金标准,SPR法检测高危型HPV的特异性显著高于HC2法(P<0.05),但敏感性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2) SPR检测鉴别CIN2及以上病变的敏感度和阴性预测值(NPV)均显著低于HC2(P均<0.05),但特异度、阳性预测值(PPV)比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。TERC基因检测鉴别CIN2及以上病变特异性显著高于HC2检测HPV(P<0.01),两者敏感度、PPV和NPV差异均无统计学意义(P>0.05) 结论 利用SPR技术检测HPV基因型特异度高于HC2法,敏感度与HC2相当,有重要的阴性预测价值;选择适当的病例应用SPR和TERC基因检测可辅助液基细胞学检查和HC2方法诊断高级别CIN,提高宫颈病变筛查的特异度,减少不必要的阴道镜检查。