肌细胞增强因子2A基因P279L变异对eNOS的影响

目的:探讨肌细胞增强因子2A基因P279L变异对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的影响。方法:选自西北地区385名汉族人,采用酚氯法提取全基因组DNA,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中eNOS。结果:在MEF2A-P279L的PP、PL、LL的3种基因型中,eNOS水平差异有统计学意,LL型eNOS水平明显低于LP型和PP型,PL型100.35±12.61pg/ml与PP型103.28±13.35pg/ml差异无统计学意义(P>0.05),但eNOS水平成上升趋势。结论:MEF2AP279L变异影响eNOS水平,L等位基因可能具有致动脉粥样硬化的作用。     

肌细胞增强因子2A基因P279L变异与冠心病的关系

目的:探讨肌细胞增强因子2A基因P279L变异是否与冠心病相关。方法:选择西北地区汉族人385例,采用酚氯法提取全基因组DNA,应用聚合酶链式反应、限制性内切酶反应体系结合测序的方法检测MEF2A基因多态性。结果:冠心病组L、P等位基因的频率分别为16.53%和83.47%;对照组L、P等位基因的频率分别为5.48%和94.52%,MEF2A-P279L基因型在冠心病组和对照组的分布存在显著性的差异(P<0.01),而且L等位基因的分布频率在冠心病组显著高于对照组(P<0.01)。结论:MEF2A-P279L基因型在冠心病组和对照组的分布有显著性差异,与冠状动脉病变的严重程度显著相关,L等位基因的携带者冠心病发病率显著高于非携带者,而且冠脉的病变更为严重。     

肌细胞增强因子-2A基因与冠心病研究进展

冠心病是由遗传因素和环境因素共同作用导致的[1]。近年来发现MFE2A基因的突变、缺失和表达异常与冠心病的发生密切相关[2]。本文就国内外关于MEF2A与冠心病的相关性最新研究做一综述。1 MEF2A基因的结构与功能肌细胞增强因子2家族成员包括MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D四种转录因子。MEF2A位于染色体的15q26,     

苦参素对肝纤维化大鼠肝脏肌细胞增强因子2信号通路的影响

目的:探讨苦参素(OMT)抗肝纤维化的作用效果及对肝脏肌细胞增强因子2(MEF2)信号通路的影响。方法:采用皮下注射50%CCl_4的方法制备肝纤维化模型大鼠并对模型大鼠灌胃40 mg/kg OMT治疗,采用HE、Masson和免疫组织化学染色法检测大鼠肝组织损伤和纤维化程度,应用荧光定量PCR技术检测大鼠肝组织MEF2信号通路相关基因MEF2A和MEF2C表达水平。结果:通过HE、Masson染色证实成功制备了肝纤维化大鼠模型;免疫组织化学表明在肝纤维化大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)高表达;荧光定量PCR结果显示在肝纤维化大鼠肝组织中MEF2A和MEF2C表达升高(P<0.05);同时,OMT可降低肝纤维化大鼠肝组织中MEF2A和MEF2C的表达水平(P<0.05)。结论:在肝纤维化模型大鼠中MEF2信号通路被激活,OMT抗肝纤维化作用可能部分是通过抑制MEF2信号通路的活化发挥作用的。     

HOXA5基因真核表达质粒的构建及在乳腺癌细胞中的功能研究

目的：构建HOXA5基因真核表达重组质粒,并转染乳腺癌细胞株观察其对细胞迁移能力的影响。方法：实时定量聚合酶链反应（RT-QPCR）检测MCF7、BT474及MDA-MB-231等3种乳腺癌细胞中HOXA5 mRNA的表达。采用全基因合成法合成HOXA5编码区序列,克隆入pcDNA3.1（＋）载体,构建重组质粒pcDNA3.1-HOXA5。重组质粒转染乳腺癌细胞,采用Western blot及RT-QPCR检测HOXA5的表达效率。观察细胞形态并通过细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。结果：3株乳腺癌细胞中,MDA-MB-231细胞中HOXA5 mRNA表达水平较低。其基因测序结果显示与预期片段大小一致,表明HOXA5重组质粒构建成功。将HOXA5重组质粒瞬时转染MDA-MB-231细胞后,检测到其mRNA和蛋白表达水平均明显上调,MDA-MB-231细胞的迁移能力降低,EMT相关转录因子Twist的表达显著下调。结论：成功构建HOXA5过表达重组质粒,在MDA-MB-231中过表达HOXA5抑制乳腺癌的迁移能力。     

大鼠Ngn2基因真核表达质粒的构建

目的：构建大鼠Neurogenin2（Ngn2）基因的真核表达质粒。方法：从大鼠海马组织提取海马总mRNA ,RT-PCR获得Ngn2基因cDNA,构建重组质粒pSecTag2／HygroB-Ngn2, XhoⅠ和HindⅢ双酶切、测序鉴定重组质粒。结果：RT-PCR获得片断与预期结果相符,酶切鉴定、测序鉴定证实pSecTag2／HygroB-Ngn2重组质粒构建成功。结论：成功构建了大鼠Ngn2基因的真核表达质粒,并对该基因的真核表达产物进行鉴定,为下一步Ngn2基因对神经损伤修复作用的研究奠定基础。     

5-Aza-CdR对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响

目的研究5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7细胞12~96h,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和流式细胞仪分别检测药物处理前后细胞的增殖活性和凋亡率;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各阶段RASSF2A mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR(MSP)观察该基因甲基化的改变。结果用1、5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理MCF-7细胞24、48、72和96h后,细胞生长均受到抑制,呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,3种药物浓度处理细胞72h后凋亡率增加,5和10μmol/L组凋亡率分别为(25.5±3.5)%和(58.2±3.2)%,与对照组(13.4±2.0)%相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测显示,不同浓度药物处理MCF-7细胞后,RASSF2A mRNA表达水平随着药物浓度的增加而逐步上调;进一步MSP检测发现这些癌细胞中RASSF2A甲基化状态得到了不同程度的逆转。结论 5-Aza-CdR可通过逆转RASSF2A基因异常甲基化导致该基因表达上调来抑制MCF-7细胞增殖,RASSF2A是一个乳腺癌相关抑癌基因。     

hIAP-2 siRNA表达质粒的构建及其对乳腺癌细胞MCF-7的作用

目的:构建人凋亡抑制蛋白2(hIAP-2)基因的小分子干扰RNA(siRNA)的表达质粒,并检测其对乳腺癌细胞MCF-7的作用.方法:利用含U6启动子的mU6pro载体构建hIAP-2 siRNA表达质粒,RT-PCR和Western印迹法检验其对MCF-7细胞的RNA干扰(RNAi)效果.用MTT法分析其对细胞增殖,流式细胞仪检测其对细胞周期,以及Hoechst染色法观察其对细胞形态的影响.同时,用胱天蛋白酶-3(caspase-3) Ac-DEVD-pNA底物法检测caspase-3活性的变化,Western印迹法检测一些相关蛋白质的表达变化.结果:hIAP-2 siRNA表达质粒高效而特异地剔降MCF-7细胞中hIAP-2的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.01),阻断MCF-7细胞在G1期.随着hIAP-2基因被沉默,MCF-7细胞变得多核化和巨核化,caspase-3酶原表达升高并被激活(P<0.01).此外,IκBα和p21waf1蛋白表达升高,NF-κB(p65)则降低,Cyt C维持不变.结论:RNA干扰hIAP-2对MCF-7细胞增殖和细胞周期调控有重要影响,细胞裂亡可能是导致其细胞死亡的主要原因,DNA受损后其细胞周期阻滞在G1期可能与上调p21waf1有关.     

NDY1shRNA真核表达质粒构建及其在卵巢癌A2780细胞中的稳定表达

目的：构建NDY1 shRNA真核表达载体,并获得稳定表达shNDY1质粒的卵巢癌A2780细胞。方法根据Gen‐Bank数据库提供的NDY1基因核苷酸序列,设计并合成靶向干扰NDY1基因的小发夹RNA（shRNA）序列,插入表达载体获得重组质粒pGPU6／GFP／Neo‐shNDY1。重组质粒测序鉴定正确后,脂质体介导转染A2780细胞,经G418筛选及有限稀释法获得稳定转染细胞,采用实时定量聚合酶链反应法（RT‐qPCR）和蛋白免疫印迹法分别检测A2780稳定转染细胞NDY1 mRNA及蛋白表达。结果重组质粒测序正确,转染shNDY1后,A2780细胞mRNA及蛋白表达水平分别下降（72．89±4．83）％及（55．85±4．84）％,与对照组相比差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论成功构建 pGPU6／GFP／Neo‐shNDY1真核表达质粒,并获得shNDY1稳定转染的卵巢癌A2780细胞,为细胞水平研究NDY1与卵巢癌的关系奠定实验基础。     

凝溶胶蛋白抑制乳腺癌细胞MCF7／Her2增殖及迁移侵袭的作用

目的研究凝溶胶蛋白（gelsolin,GSN）对雌激素受体α（ERα）阳性、人表皮生长因子受体2（Her2）过表达乳腺癌细胞MCF7／Her2生长的作用。方法构建GSN的真核表达载体,并稳定转染MCF7／Her2细胞,以RT-PCR及WesternBlot鉴定得到稳定过表达GSN的乳腺癌细胞系McF7／Her2／GsN。以空载体转染的稳定表达细胞MCF7／Her2／V作对照,比较其细胞形态、增殖和迁移能力的改变;WesternBlot及RT-PCR检测Her2、组织金属蛋白酶抑制剂-3（TIMP3）表达和细胞外调节蛋白激酶（ERK）的活化,探索深层次的作用机制。结果MCF7／Her2稳定过表达GSN后,细胞形态改变且增殖及迁移、侵袭能力明显低于对照细胞;发现Her2表达下降,TIMP3的表达上调,而雌激素导致的MCF7／Her2细胞ERK活化增强被逆转。结论凝溶胶蛋白能降低Her2的表达,并通过下调ERK的活化及上调TIMP3的表达,抑制乳腺癌细胞MCF7／Her2增殖及迁移侵袭作用。     

miR-19影响人乳腺癌MCF7细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的探讨miR—19对人乳腺痛MCF7细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法体外培养人乳腺癌MCF7细胞,分别转染pre—miR—19和miR—19抑制物,然后应川俞盼蓝法检测MCF7细胞活性和增殖情况．应用transwell小审法测定MCF7细胞迁移和侵袭能力改变。结果pre—miR—19转染组的MCF7细胞生长抑制率下降,细胞活性和增殖能力增强,细胞迁移侵袭能力增强;miR-19抑制物转染组的MCF7细胞生长抑制率增高,细胞活性和增殖能力F降,细胞迁移侵袭能力减弱。结论仵乳腺癌的发牛发展过程中,miR-19发扦原癌基因作用,促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

2-脱氧葡萄糖对乳腺癌MCF7/ErbB2细胞增殖 迁移和侵袭的影响

目的 探讨糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖（2-Deoxy-D-glucose,2-DG）对乳腺癌MCF7/ErbB2细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法 用不同浓度的2-DG（0, 05, 1, 2, 4, 8, 16, 32 mM）处理MCF7/ErbB2细胞48h后,用MTS试剂盒测定细胞的增殖;用Transwell实验检测不同浓度2-DG（0, 0.5, 1, 2 mM）对MCF7/ErbB2细胞的迁移和侵袭的影响;用不同浓度2 DG（0, 0.5, 1, 2 mM）处理MCF7/ErbB2细胞48h后,用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分别测定培养基中的葡萄糖浓度和乳酸浓度,并计算细胞对葡萄糖的摄取量和乳酸生成量;用1 mM 2 DG处理MCF7/ErbB2细胞0、4、8、12、24h后,用Western blot检测己糖激酶II（hexokinase II,HKII）蛋白表达水平。结果 与2-DG未处理组比较,2-DG（0.5~32 mM）能抑制MCF7/ ErbB2细胞的增殖;2-DG（0.5, 1, 2 mM）能显著抑制MCF7/ ErbB2细胞的迁移和侵袭（P＜0.001）,同时显著降低葡萄糖摄取量和乳酸生成量（P＜0.001）,而且上述抑制作用均表现出对2-DG剂量的依赖性;1 mM 2-DG 显著下调MCF7/ ErbB2细胞中HKII的蛋白水平。结论 2-DG通过下调HKII蛋白表达降低糖酵解水平,从而抑制乳腺癌MCF7/ ErbB2细胞的增殖、迁移和侵袭。     

RunX2的真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的：构建人 RunX2真核表达载体,观察 RunX2对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法运用逆转录 PCR （RT-PCR）扩增、酶切、连接等基因重组技术将人 RunX2基因插入 pcDNA3．1真核表达载体中;并经酶切、PCR、测序鉴定;将构建的 RunX2真核表达载体瞬时转染 MCF-7细胞,利用 Western blot 法检测 RunX2蛋白表达,用 MTT 实验和细胞划痕实验检测其对乳腺癌细胞的生物学影响。结果构建的 RunX2真核表达载体在 MCF-7细胞中高表达 RunX2蛋白;发现高表达 RunX2的 MCF-7细胞活力增加,移动能力增强。结论构建的 RunX2真核表达载体能促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。     

人碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达质粒的构建

目的：构建人碱性成纤维细胞生长因子（ｈｂＦＧＦ）基因真核表达质粒,为深入研究ｈｂＦＧＦ在组织修复中的分子调节机制及临床应用提供物质基础。方法：含ｈｂＦＧＦ ｃＤＮＡ的ｐＵＣ１８－ｈｂＦＧＦ质粒于大肠杆菌ＪＭ１０９内扩增;提取及纯化ｐＵＣ１８－ｈｂＦＧＦ质粒;经ＤＮＡ序列分析所含ｈｂＦＧＦ ｃＤＮＡ;限制性酶切ｈｂＦＧＦ ｃＤＮＡ片段,连接酶连接到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｎｅｏ内,克隆出真核表达质     

Construction of eukaryotic expression vector of human S100A13 gene and its effect on proliferation of human thyroid cancer cell line TT

Objective To investigate the effect of exogenous S100A13 gene overexpression on the proliferation of human thyroid cancer cell line TT.Methods The recombinant ORF of S100A13 tagged with six histidines ...