贫血患者外周血CD55+和CD59+细胞检测及临床意义

目的检测贫血患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜糖基磷脂酰肌醇（GPI）连接的补体调节蛋白CD55和CD59表达情况，探讨其临床意义。方法用流式细胞仪，采用直接荧光素标记的CD55和CD59单克隆抗体，测定50例健康人、18例阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）、9例再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿综合症（AA-PNH综合征）、27例再生障碍性贫血（AA）、11例巨幼细胞性贫血、8例缺铁性贫血患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜CD55^＋和CD59^＋表达的百分率。结果外周血中红细胞和中性粒细胞膜CD55^＋和CD59^＋的百分率健康人均〉95%，PNH患者在25％～94．8％之间。巨幼细胞性贫血、缺铁性贫血患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜CD55^＋和CD59^＋可为正常或有程度不同的CD55^＋和CD59^＋细胞缺失。结论红细胞和中性粒细胞GPI锚相关蛋白CD55^＋和CD59^＋的缺陷与PNH密切相关，利用流式细胞术同时检测外周血中红细胞和中性粒细胞膜CD55^＋和CD59^＋是目前诊断PNH最可靠、最敏感的方法，是临床鉴别诊断PNH和其它贫血性疾病的较好方法。     

贫血患者外周血CD55^＋和CD59^＋细胞检测结果及其临床意义

目的检测贫血患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜糖基磷脂酰肌醇（GPI）连接的补体调节蛋白CD55和CD59表达情况,探讨其临床意义。方法应用流式细胞仪测定40例健康人、6例阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）、20例再生障碍性贫血（AA）、35例缺铁性贫血、15例巨幼细胞性贫血、8例自身免疫溶血性贫血及8例造血系统肿瘤伴有贫血患者的外周血中红细胞和中性粒细胞膜CD55^＋和CD59^＋表达的百分率。结果健康人外周血中红细胞和中性粒细胞膜上CD55^＋和CD59^＋均大于95%;PNH患者在31.20%～72.34%;部分再障、溶贫患者小于95%,但均大于80%;其他均大于95%。结论利用流式细胞仪检测外周血中红细胞和中性粒细胞膜CD55＋和CD59＋是目前诊断PNH最可靠和最敏感的方法。     

核仁素表达下调对C2C12细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响。方法：采用反义寡核苷酸技术以抑制C2C12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24 h,核仁素的表达受到明显抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力亦明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机核酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。结论：核仁素表达下调能抑制C2C12细胞增殖并能触发C2C12细胞凋亡。     

激动剂Flagellin对中性粒细胞凋亡和Bax蛋白表达的影响

目的：研究TLR激动剂flagellin影响中性粒细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bax的表达。方法：分离培养正常人的外周血中性粒细胞,分为实验组（flagellin刺激组）、凋亡抑制组（LPS刺激组）和自然凋亡组。用流式细胞术检测不同组中性粒细胞的凋亡发生率,通过Western blotting技术检测各组中性粒细胞Bax蛋白的表达。结果：flagellin使中性粒细胞自发性凋亡的发生率增高,与凋亡抑制组和自然凋亡组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;接受flagellin刺激的中性粒细胞表达Bax蛋白高于凋亡抑制组与自然凋亡组（P〈0.01）。结论：在TLR激动剂诱发的中性粒细胞生存效应中,flagellin可能通过上调中性粒细胞胞内Bax蛋白的表达来缩短中性粒细胞的生命期限。     

ICAM-1及VCAM-1等在HIE新生兔的表达

目的：探索慢性宫内缺氧对新生兔中性粒细胞与细胞粘附分子表达的影响。方法：取孕中晚期新西兰兔15只,随机分为对照组、缺氧组以及中药干预缺氧组;对比3组新生兔中性粒细胞细胞粘附分子CD11b／CD18、脑组织细胞间粘附分子1（Intercellular adhesion moleacule-1,ICAM-1）以及血管内皮细胞粘附分子1（Vascular cell adhension moleules1,VCAM-1）等的表达与变化。结果：与对照组比较,缺氧组和中药干预缺氧组的CD11b／CD18、ICAM-1以及VCAM-1表达均显著增强;虽然缺氧组和中药干预缺氧组的表达存在差异,但无统计学意义。结论：提示缺氧缺血后中性粒细胞趋化作用增强并且脑血管内皮细胞粘附增加而导致的脑组织细胞的损伤,参与HIE的病理生理过程。     

CD11b在肺纤维化患者的表达及红霉素对其影响

目的探讨CD11b在肺纤维化患者外周血中性粒细胞上的表达及红霉素对它的影响.方法肺纤维化患者(A组,n=13)13例经红霉素治疗3个月,收集治疗前后及健康对照组(B组,n=13)13例的外周血中性粒细胞涂片,用桥联酶免疫法测定CD11b表达阳性的中性粒细胞百分率.结果A组治疗前后,患者外周血中性粒细胞CD11b的表达阳性率均显著高于健康对照组(P＜0.01);A组治疗前,患者外周血中性粒细胞CD11b的表达阳性率显著高于治疗后(P＜0.01).结论肺纤维化患者外周血中性粒细胞CD11b的表达阳性率显著高于健康对照组;红霉素能抑制肺纤维化患者外用血中性粒细胞CD11b的表达.     

流式细胞术检测贫血患者血细胞CD55和CD59的表达及临床意义

目的检测贫血患者外周血中红细胞和中性粒细胞膜表面抗原CD55和CD59的表达情况并探讨其临床意义。方法应用流式细胞术检测贫血患者及健康对照组外周血红细胞和粒细胞的表面抗原CD55、CD59的表达水平。结果正常人CD55-、CD59-红细胞和中性粒细胞的百分率均〈5%。阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者均〉20%;部分再生障碍性贫血患者〉5%,但均〈15%;部分缺铁性贫血患者CD55-、CD59-红细胞〉5%,但均〈15%,而中性粒细胞的结果全部正常;少部分巨幼细胞性贫血患者CD55-、CD59-血细胞〉5%,但均〈10%;自身免疫溶血性贫血患者的CD55-、CD59-红细胞和中性粒细胞百分比均正常。结论利用流式细胞术同时检测外周血中红细胞和中性粒细胞CD55和CD59的表达是目前诊断和鉴别诊断PNH的最可靠、最敏感的方法,也可作为判断疗效的手段。     

北五味子多糖对脂多糖诱导中性粒细胞炎症的抑制作用

目的：探讨满药北五味子多糖（NSCP）对脂多糖（LPS）激活的离体培养人中性粒细胞的影响,阐明其抗炎作用机制。方法：利用LPS处理人中性粒细胞建立炎症细胞模型,实验分为对照组、LPS组（1.0 mg·L^-1）及NSCP组（1.25、2.50和5.00 g·L^-1）,NSCP组先加入LPS刺激60 min,再加入不同浓度NSCP。应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测中性粒细胞中肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,采用流式细胞术检测中性粒细胞凋亡率。结果：与对照组比较,LPS组TNF-α水平升高（P < 0.05）;与LPS组比较,NSCP组TNF-α水平降低（P < 0.05）。LPS组中性粒细胞凋亡百分率较对照组降低（P < 0.05）;NSCP组中性粒细胞凋亡百分率随时间及剂量增加而升高,其中5.00 g·L^-1NSCP作用16 h促进其凋亡作用最佳,与LPS组比较凋亡百分率明显升高（P < 0.05）。结论：NSCP可通过抑制LPS诱导TNF-α分泌及中性粒细胞凋亡延迟而发挥抗炎作用。     

原发性肝细胞癌组织中CD40的表达及意义

目的：CD40是肿瘤坏死因子受体家族的一员，它对B细胞的存活，增殖和分化起重要作用。然而除B细胞外，CD40的表达情况还没有很好的研究。因此我们检测原发性肝细胞癌组织中CD40的表达情况。方法：用SABC免疫组化法检测原发性肝细胞癌组织(50例)和非肝癌组织(27例)CD40的表达。结果：40％的原发性肝细胞癌组织检测到CD40抗原；而非肝癌组织未能检测到CD40抗原。结论：原发性肝细胞癌组织中有CD40的表达，为进一步研究肝肿瘤生物学，尤其是抑制FAS和TNFR介导的细胞凋亡与基因治疗原发性肝细胞癌打下基础。     

雌激素和异黄酮类药物对中性粒细胞粘附分子表达的影响

目的　研究雌激素和异黄酮类药物对中性粒细胞粘附分子表达的影响。方法　利用肿瘤坏死因子 ( TNFα)处理健康人和缺血性中风患者的中性粒细胞 ,加用不同浓度的异黄酮 ( WZ1 、WZ2 )和雌激素 ( WZ3 、WZ4)进行干预 ,采用流式细胞仪定量测定细胞表面的粘附分子表达。结果　 110 ng/ml TNFα对健康人中性粒细胞有明显的激活作用 ,可使 CD18表达上调 10 % ,CD6 2 L平均荧光强度下降 15 % ,阳性细胞百分数下降 30 %。 2异黄酮类药物 WZ1 、WZ2 对中性粒细胞表面的 CD18和 CD6 2 L表达基本上没有影响。 3用雌激素类药物 WZ3 、WZ4预处理中性粒细胞后再加 TNFα激活 ,可以使中性粒细胞表面粘附分子 CD18的平均荧光强度下降 8% ,CD6 2 L的平均荧光强度增加 15 % ,CD6 2 L 的阳性细胞百分率增加 2 0 % ;如果先用 TNFα激活中性粒细胞然后再用 WZ3 、WZ4处理 ,中性粒细胞粘附分子的表达与单纯 TNFα组之间无显著性差别。 4TNFα处理缺血性中风患者中性粒细胞后 ,CD18表达增加 2 0 % ,CD6 2 L 的平均荧光强度和阳性细胞百分数均下降 30 % ,与健康对照组相比有统计学差异 ;雌激素预处理后可以抑制中性粒细胞的激活。结论　 1TNFα是中性粒细胞强有力的激活剂 ,在中风的发生、发展过程发挥了重要作用。 2异黄酮类药     

组织蛋白酶D对CD11b＋髓系来源细胞体外增殖、迁徙和侵袭的影响及侵袭机制

目的：探讨组织蛋白酶D（cathepsin D）对CD11b＋髓系来源细胞（BMDCs）体外增殖、迁徙和侵袭的影响,并初步探索侵袭机制。方法：建立预转移期内胰腺癌原位瘤裸鼠模型L3．6pl组或Colo357组和无瘤荷裸鼠模型,流式细胞术检测骨髓和肝脏中CD11b＋髓系来源细胞的比例,MTT检测细胞增殖能力,Tran-swell侵袭小室实验检测细胞的侵袭及迁徙能力,蛋白质印迹法检测分泌蛋白组织蛋白酶D的表达和CD11b＋髓系来源细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达。结果：预转移期内胰腺癌原位瘤L3．6 pl组骨髓和肝脏中CD11b＋细胞比例明显高于Colo357组（P〈0．05）。组织蛋白酶D可以促进CD11b＋髓系来源细胞的增殖、迁徙和侵袭,而阻断组织蛋白酶D之后,细胞增殖、迁徙和侵袭则明显地受到抑制。组织蛋白酶D增强CD11b＋髓系来源细胞中MMP-2的表达。结论：组织蛋白酶D在诱导CD11b＋髓系来源细胞的增殖和迁徙中发挥重要作用,并通过对MMP-2的调控来增强CD11b＋髓系来源细胞的体外侵袭能力。     

低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡和坏死的影响

 目的 探讨低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、凋亡和坏死的影响及其可能机制。方法 采用全骨髓细胞贴壁法分离培养BMSCs,通过细胞成脂、成骨分化诱导及流式细胞仪检测其表面标志物(CD29、CD90、CD45)鉴定BMSCs;运用siRNA干扰技术沉默低氧诱导因子 1α(hypoxia inducible factor,HIF 1α)基因。将细胞分成6组:正常培养组、正常培养+转染阴性对照组、正常培养+HIF 1α RNA干扰组、低氧预处理组、低氧培养+转染阴性对照组及低氧培养+HIF 1α RNA干扰组,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪和乳酸脱氢酶(lactic acid dehydrogenase,LDH)活力测定等方法,检测各组BMSCs的增殖、凋亡和坏死情况;Western blot和real time PCR 检测各组BMSCs中HIF 1α、葡萄糖转运子 1(glucose transporter,GLUT 1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA和蛋白的表达。 结果 培养的BMSCs具有成脂、成骨等多向分化潜能;流式检测呈现CD29和CD90高表达,CD45低表达;低氧预处理可促进BMSCs增殖,减轻坏死,对细胞凋亡无明显影响;低氧预处理组HIF 1α、GLUT 1及VEGF的蛋白及mRNA表达明显高于常氧培养组(P<0.05);给予低氧预处理组siRNA HIF 1α后其HIF 1α、GLUT 1及VEGF的蛋白及mRNA表达均明显低于未干扰前(P<0.05),且细胞增殖受抑制,细胞凋亡和坏死加重(与未干扰前相比,P<0.05)。 结论 低氧预处理可促进BMSCs的体外增殖,减轻坏死,其机制可能与低氧预处理后HIF 1α表达增加及上调其下游基因GLUT 1和VEGF表达有关。     

人羊膜间充质干细胞的分离与鉴定

目的：探讨从人胎盘组织中分离羊膜间充质干细胞（hAMSCs）。方法：收集剖宫产足月胎儿胎盘,采用组织块贴壁法分离出羊膜问充质干细胞并传代培养,对P1-P3代细胞进行细胞形态的观察,用流式细胞仪检测细胞膜表面阳性分子CD73．APC、CD90-FITC、CIM4．PE、CDl05．Cy5．5和阴性分子CDllb-PE、CDl9．PE、CD34-PE、CD45-PE、HLA-DR-PE,并采用六孔板法检测细胞增殖情况。结果：hAMSCs的细胞形态呈成纤维状,hAMSCs在培养3-d达到对数增长期,通过流式检测,发现细胞可表达CD73、CD90、CD44和CDl05,未表达CDllb、CDl9、CD34,CD45、HLA-DR。结论：从体外成功分离培养出人羊膜间充质干细胞。     

丙戊酸钠抑制NB4细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对NB4细胞的作用.方法:台盼蓝细胞计数检测不同浓度VPA对NB4细胞增殖的抑制作用,应用流式细胞术检测VPA作用后NB4细胞CD11b的表达,用DNA梯形片段电泳分析细胞凋亡.结果:VPA能显著抑制NB4细胞的增殖(P＜0.01),VPA处理NB4细胞72h时的半数抑制浓度(IC50)为1.17mmol/L;VPA组NB4细胞髓系分化抗原CD11b表达水平明显高于对照组(P＜0.05);NB4细胞经不同浓度VPA处理48h后,出现典型的凋亡细胞所具有的梯形DNA条带.结论:VPA能抑制NB4细胞增殖,诱导细胞分化和凋亡.     

过表达miR-29b可抑制胆管癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡

目的研究miR-29b在胆管癌中的表达情况,及其对胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响。方法Real-time PCR检测 miR-29b在胆管癌细胞QBC939与良性胆管细胞株H-69中的表达;及胆管癌组织与正常胆管组织中的表达。将对数生长期的 QBC939细胞分为3组,空白对照组,阴性对照组,miR-29b过表达组。MTT和细胞克隆形成实验分别检测过表达miR-29b对细 胞增殖和克隆形成率的影响;流式细胞术检测过表达miR-29b对细胞周期和凋亡的影响。结果miR-29b在胆管癌细胞及胆管 癌组织中表达较正常胆管细胞和组织中均显著降低（P<0.01）。miR-29b过表达组QBC939细胞的miR-29b较阴性对照组表达 明显升高（P<0.01）。在QBC939细胞中,过表达miR-29b可以显著抑制细胞的增殖和克隆形成（P<0.01和P<0.05）;过表达miR- 29b可阻滞细胞在S期（P<0.05）,并且导致细胞凋亡明显增加（P<0.01）。结论miR-29b作为一种抑癌microRNA,在胆管癌中 低表达,过表达miR-29b可以抑制胆管癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

辛伐他汀联合全反式维甲酸诱导NB4细胞分化凋亡过程中apoM基因表达的变化

目的探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的抑制剂辛伐他汀(SV)联合全反式维甲酸(ATRA)对NB4细胞增殖、分化与凋亡的影响,以及载脂蛋白M(apo M)基因的表达变化。方法以不同浓度辛伐他汀联合ATRA处理NB4细胞,取对数生长期各组细胞分别进行细胞形态观察;MTT法观察细胞增殖能力;流式细胞测定NB4细胞分化指标CD11b和细胞凋亡指标AnnexinⅤ/propidium iodide变化;Real-time RT-PCR测定apoM基因表达。结果重复三次实验结果显示:15μmol/L SV,10μmol/L SV和5μmol/L SV单独处理NB4细胞,随着培养时间延长,细胞抑制率增加(F=7.15,P=0.000),CD11b的表达水平逐渐升高(F=3.41,P=0.014),AnnexinV表达水平逐渐增高(F=43.38,P=0.000),apo M基因表达水平逐渐增高(F=50.31,P=0.000),其中以15μmol/L SV组NB4细胞变化最明显。辛伐他汀和ATRA两药合用CD11b表达协同升高,具有明显交互作用(F=4.09,P=0.025)。ATRA处理NB4细胞后其apo M基因表达水平逐渐下降(F=46.05,P=0.000),而辛伐他汀联合ATRA处理NB4细胞后培养不同时间,apo M基因表达水平不如辛伐他汀和ATRA单药处理变化明显,15μmol/L SV联合ATRA处理NB4细胞72hapo M基因表达水平(32.87±3.60)较24h(24.73±1.78)升高(P<0.05),提示ATRA可以拮抗辛伐他汀引起NB4细胞apo M基因表达水平代偿性升高。结论辛伐他汀以剂量依赖方式体外抑制NB4细胞生长,诱导NB4细胞的分化,促进凋亡,升高apo M基因表达,而ATRA可以拮抗辛伐他汀引起apo M代偿性升高,两药具有协同治疗急性早幼粒细胞白血病的潜能。     

Dichloroacetate与肺动脉平滑肌细胞增殖及凋亡关系的研究

目的探讨Dichloroacetate（DCA）对低氧导致的肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖和凋亡的影响及其机制。方法原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞并传代纯化，实验用第3～8代细胞，实验共分3组：①对照组：不加特殊试剂，不作低氧处理；②低氧组：低氧处理24 h，不加特殊试剂；③低氧＋DCA组：低氧处理24 h，在进行低氧处理之前加入终浓度为0.1 mol/L的DCA。每组各6孔细胞。用免疫组化的方法检测并比较3组细胞的增殖和凋亡情况。结果低氧组增殖细胞核抗原（PCNA）的平均光度值是对照组的2.7倍，而低氧＋DCA组仅是对照组的1.7倍，Caspase-3在低氧组的表达最低，是对照组的1/4，低氧＋DCA组Caspase-3表达较对照组减低，但较低氧组明显增加，是低氧组的2倍。TUNEL法同样提示凋亡在低氧组最低，对照组最高，低氧＋DCA组居中。结论DCA可抑制PASMC增殖并促进其凋亡，可能对阻止肺动脉高压血管重构起一定作用。     

自杀基因修饰内皮祖细胞对肝细胞癌体外作用的效应

目的：研究自杀基因胞嘧啶脱氨酶（CD）基因转染的小鼠骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）联合酶前体药物5-氟胞嘧啶（5-FC）对小鼠肝癌细胞株H22的体外抗增殖作用。方法：分离普通小鼠骨髓源性EPCs,培养鉴定,Polybrene技术转染含CD基因的慢病毒载体重组体plenti6．3-EGFP-CD至EPCs,Western blotting检测目的蛋白的表达。利用Transwell小室共培养体系,用转染CD基因的EPCs处理H22细胞。 CCK-8法检测H22细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果：成功转染CD基因至EPCs;CCK-8法检测显示随着5-FC浓度增加,细胞增殖逐渐下降,5-FC浓度达100 mg· L-1时,肿瘤细胞增殖抑制率达到（54．74±5．38）％（P＜0．05）,细胞平均凋亡率为（48．71±4．62）％（P＜0．05）。结论：CD基因修饰的EPCs 联合5-FC体外可明显抑制肝癌H22细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。     

TNF及其受体在退变椎间盘组织中的表达及意义

目的探讨TNF、TNFR、sTNFRS在退变椎间盘组织中的变化规律与坐骨神经疼痛的相关性以及与退变的关系。资料与方法对实验组与对照组椎间盘标本应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测TNF-α、TNF-β以及sTNFR1,sTNFR2的浓度;用逆转录一聚合酶链式方法（RT-PCR）法检测靶细胞膜表面TNFR1/R2mRNA的表达。结果实验组与对照组中测定的TNF-α/β及sTNFR1/R2两者存在明显的差异;病人临床的评分结果与实验组标本表达成正相关性;实验组中肿瘤坏死因子受体的表达率明显高于对照组;实验组中TNF-α/β及sTNFRl/R2和TNFRl/R2mRNA三者之间存在一定的相关性。结论退变的椎间盘组织中的TNF、TNFR、sTNFRS的含量高于正常的椎间盘组织、说明他们参与了椎间盘的退变;同时,也说明TNF、TNFR、sTNFRS三者之间存在相关性。