用随机扩增多态DNA(RAPD)技术研究不同地理株埃及伊蚊的分化

目的 用RAPD技术对实验室饲养的广东、海南、台湾和印尼Baro等4个不同地理株的8只雌蚊进行随机扩增多态DNA分析。方法 随机扩增多态性DNA(RAPD)技术。结果 选用20个随机引物进行扩增，有8个引物表现清晰的RAPD谱带并呈显著多态性。UPGMA法构建的分子系统树表明埃及伊蚊4个地理株之间存在着一定程度的遗传分化。结论 用RAPD方法可以区分不同地理株埃及伊蚊。     

我国不同地理株白纹伊蚊对登革病毒的易感性

本文用棉球病毒悬液法感染白纹伊蚊,比较了我国9个不同地理株白纹伊蚊对经口感染登革病毒Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ型的易感性。实验结果表明,我国不同地理株白纹伊蚊对经口感染登革病毒的易感性有差别。海口株对三个血清型登革病毒均较易感,北京株和成都株分别对登革病毒Ⅰ型和Ⅱ型较易感,各地理株白纹伊蚊对登革病毒Ⅱ型的易感性普遍较高。本文还用蚊胸内病毒接种技术,比较了我国9个不同地理株白纹伊蚊对胸内接种感染登革病毒Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ型的易感性,结果胸内接种各型登革病毒的易感性未见明显差异,提示经口感染易感性的差别是中肠屏障的作用。本文所采用的蚊脑涂片间接免疫荧光技术检测蚊脑内登革病毒抗原的方法,蚊脑组织在玻片上分布较均匀,可避免蚊头外骨骼对脑组织的遮盖,似比蚊头压片法易于观察结果,有利于提高检出率。     

用随机扩增多态DNA(RAPD)区分不同地株微小按蚊

目的：对来自泰国、广西临沧３个地区的３０只雌蚊进行随机扩增多态ＤＮＡ分析。方法：ＲＡＰＤ法。结果：ＵＰＧＭＡ法构建的分子系统树表明,３０只微小按蚊可归并为显著不同的３个组,证明各群体间存在着明显不同的基因组多态性基因流,不同群体存在着显著的遗传分化。结论：用ＲＡＰＤ可以区分不同地理群体的微小按蚊 。     

用随机扩增多态DNA(RAPD)区分青海血蜱与日本血蜱

目的用随机扩增多态DNA(RAPD)技术确定青海血蜱与日本血蜱的分类地位。方法分别提取青海血蜱与日本血蜱的DNA，确定聚合酶链反应(PCR)总体积、反应条件。选取8条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物，进行RAPD—PCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱，比较青海血蜱与日本血蜱基因组DNA多态性，从DNA水平鉴定这2种蜱。结果2种蜱仅有少部分DNA条带相同，大部分条带不同。结论RAPD技术可准确地鉴别青海血蜱与日本血蜱这2种形态特征十分相似的蜱种。     

肠炎沙门菌随机扩增多态性DNA分子分型

目的对不同来源的12株肠炎沙门菌分离株进行分子分型。方法分别提取不同菌株基因组DNA,建立和优化随机扩增多态性DNA（RAPD）反应体系,试用22条随机引物对不同菌株进行RAPD扩增,筛选清晰稳定的扩增条带做统计分析。结果筛选到OPG-03、OPG-06、OPG-07和OPG-13共4条随机引物具有鉴别作用,每一菌株均可扩增出4~10条DNA片段,大多数片段在100~2000bp之间,共扩增出42条RAPD条带,其中共有条带7条,多态性条带35条,多态性为83.3%。不同来源的肠炎沙门菌分离株之间的遗传相似系数在42.6%~100%之间,在0.850的相似性水平上可将12株肠炎沙门菌分离株分为5个不同的亚型。结论应用RAPD技术在分子水平上对肠炎沙门菌进行鉴别和分型具有简便、快速和辨别能力高的优势,对肠炎沙门菌的分子流行病学研究具有较好的应用前景。     

中国不同地理株白纹伊蚊细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因序列比较

目的：比较中国不同地理株白纹伊蚊细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列，从分子水平探讨不同地理株对登革病毒(DV)易感性的差异。方法：用聚合酶链反应从蚊虫基因组DNA扩增出COⅠ基因片段并进行克隆测序；用邻接法进行分子系统发育分析。结果：各地理株白纹伊蚊COⅠ基因片段序列长度均为415bp，所测各株序列均无缺失。云南思茅株的碱基转换率为1．93％，颠换率为0．24％。贵州麻尾株和广西南宁株的转换率为0．48％。各地理株中思茅株与麻尾株关系较近，麻尾株与南宁株关系较近，其余11个地理株均为同型株。结论：蚊虫对DV的易感性与多种因素有关，包括遗传及生态学方面(如季节气候、地理环境、人类活动等)的因素。在中国大多数白纹伊蚊为同型基因，其对DV的易感性尚无直接对应关系。     

随机扩增多态性DNA技术及其在蚊虫研究中的应用

经典的蚊虫研究主要依据蚊虫的各种外部形态特征和生理特征 ,而这些特征易受各种环境因素的影响。以蚊虫分类为例 ,经典的分类方法是以形态学为依据〔1〕,如触角、触须、翅、生殖器等。这些分类依据在大的分类单位内 ,能清晰地反映一个物种的分类地位 ;而在小的分类单位 ,如属、族、种、团内 ,则很难从形态学上确定蚊虫的分类地位 ,对于种群、生态型的研究更是无能为力。寻找更精细的分类特征则容易将一些非遗传稳定的性状当作分类特征 ,而且随着蚊虫生态学、行为学等的研究进展 ,在同一形态种内有可能发现多个行为种、近缘种。这些问题是形…     

用PCR—SSCP方法分析白纹伊蚊线粒体DNA突变

应用PCR—SSCP(Polymerase Chain Reaction Single Strand Conformational Polymorphism，即聚合酶链反应产物单链构象多态性)分析技术，对湖南省的白纹伊蚊线粒体DNA进行分析。由于PCR—SSCP受DNA的结构(碱基组成和排列顺序)、胶的成分和电泳条件等诸多因素的影响，在具体操作时要得到清晰一致的结果，需要对各种条件进行控制。本文对影响PCR—SSCP实验室操作的因素进行了分析。并结合作者的经验给出了较长(350～400bp)DNA片段进行SSCP分析的操作条件。以期对该方法的选用提供参考。     

阴沟肠杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立阴沟肠杆菌(ECL)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱.方法以优化的随机引物和反应体系对临床分离的159株ECL进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱.结果 159株临床分离ECL共得121种RAPD指纹图谱.结论 RAPD技术可将临床分离ECL分型121种.     

随机引物扩增多态性DNA聚合酶链反应技术用于蚊细胞的鉴定

本文应用随机引物扩增多态性DNA聚合酶链反应技术筛选出引物Pm,用此引物对淡色库蚊细胞系(CPP-512)、中华按蚊卵巢细胞系(Anso-242)、嗜人按蚊细胞系(Ana-104)、白纹伊蚊细胞株(C6/36)4种蚊细胞基因组DNA进行扩增,得出4个相异的多态性DNA扩增产物图谱,各自的DNA扩增条带的分子量(kb)为CPP-512:0.5、0.7、0.8、0.88、1.02、1.22;Anso-242: 0.5、0.88、1.02、1.13、1.22、1.5、2.1、2.4、2.5;Ana-104:0.64、0.98、1.2、1.28、1.4、1.53、1.8、2.3、2.6、3.3;C6/36:0.66、0.8、0.94、1.4、1.42、1.5、1.52、2.9。实验结果表明,随机引物扩增多态性DNA聚合酶链反应技术是一种简便易行、结果重复性好的先进生物学分类技术,引物Pm能满足同时鉴别3属蚊虫的4种蚊细胞的需要。     

白纹伊蚊及埃及伊蚊两种蚊卵的扫描电镜观察

本文对普通光学显微镜难以区分和鉴别的白蚊伊蚊和埃及伊蚊卵,以扫描电子显微镜进行了形态观察。结果表明,两种蚊卵的表面形态结构,在卵外形、卵外壳、壳外膜及气孔上均有较大差异。     

TaqMan MGB探针实时聚合酶链反应检测白纹伊蚊体内登革病毒

目的初步研究TaqMan MGB探针实时聚合酶链反应（TaqMan MGB Real-time PCR）检测白纹伊蚊登革病毒的敏感性，建立一种敏感、特异、重复性好的登革病毒（Dengue virus，DV）鉴定方法。方法在实验室使雌性白纹伊蚊人工感染Den-2型病毒，设不同的感染蚊虫浓度（只／500μl或只／1000μ1）和不同的分组方法（不加未染毒的蚊虫、分别用未染毒的实验室饲养的雌性白纹伊蚊补加到每份标本10、25、50只／组），利用一步法和二步法TaqMan MGB PCR检测，根据荧光信号判断结果。结果二步法TaqMan MGB PCR可检测到标本中感染蚊虫的最低浓度为2只／500μl和3只／1000μl，一步法TaqMan MGB PCR可检测到标本中感染蚊虫的最低浓度为5只／500μl，蚊自身的RNA对登革病毒RNA的检测敏感性并无明显的影响。结论TaqMan MGB探针检测白纹伊蚊体内的DV敏感度高，特异性好，是白纹伊蚊携带登革病毒指数较理想的监测方法，标本较好的处理方法为500μl标本处理液研磨20～30只／组，TaqMan MGB Real-time PCR最好采用二步法。     

茴香醛对蚊虫嗅觉行为的影响研究

目的 探讨茴香醛对蚊虫嗅觉行为的影响.方法 在风洞系统内测试茴香醛不同剂量诱导的白纹伊蚊行为反应及对宿主定向行为的影响;在密闭空间中,分别以0.013～0.250 μg/cm3剂量的茴香醛处理白纹伊蚊24～96 h后测定其感受、定向寄主的能力.结果 在风洞系统内,茴香醛单一化合物其剂量3.1％～99.0％对白纹伊蚊均有一定的引诱作用,而与宿主气味并存时,只有高剂量(99.0％)对宿主定向行为有较高的抑制率(85.4％).白纹伊蚊在0.050～0.250 μg/cm3剂量茴香醛气味空间处理24～96 h后对其正常感受宿主气味的能力有显著的抑制作用,随处理时间延长、剂量升高抑制效果增强,但低于此剂量则没有抑制作用.结论 茴香醛单一化合物对蚊虫具有引诱性,但与宿主气味并存时,对蚊虫正常感受宿主气味的能力具有一定的抑制作用.     

随机扩增多态性DNA反应体系优化设计方案的研究

目的 筛选出反应体系的最佳优化方案用于金黄色葡萄球菌的随机扩增多态性DNA分析(RAPD). 方法 应用反应曲面设计(RSD)进行RAPD反应体系的优化. 结果 RSD得出稳定性良好的优化反应体系(关键成分浓度)为镁离子为2.0 mmol/L,引物为2.0μmol/ml,模板为6μl. 结论 优化RAPD反应体系,RSD方案比单因素设计更简易、科学、合理.     

金黄色葡萄球菌所致食源性疾病分离株的多态性分析

目的对一起食源性疾病的病原学进行检测和分析。方法按照相关卫生检验标准对食源性疾病患者肛拭、呕吐物、剩余食品等26份检材进行致病菌检测,并对所分离的菌株进行随机扩增DNA多态性分析。结果从2名患者肛拭子、吃剩的相关食品中分离到8株产A型肠毒素的金黄色葡萄球菌,其中两份食品直接检出A型肠毒素,RAPD图谱显示8株金黄色葡萄球菌可分成2个基因型。结论结合流行病学调查资料、临床资料、病原学鉴定及随机扩增DNA多态性分析结果,证实该起食源性疾病是由于进食金黄色葡萄球菌污染的食品所致。     

随机引物PCR方法用于霍乱分子流行病学研究

研究建立了随机引物PCR方法用于霍乱分子流行病学研究,其中两组引物针对霍乱弧菌重复插入序列设计,一组引物为任意序列.对2株霍乱弧菌O1群古典型(CVC)、81株埃尔托型(EVC)和10株O139群进行了分析,上述菌株经PCR鉴定,均携带霍乱肠毒素(ctx)基因和毒力协同调节菌毛(tcp)基因.2株CVC分为2个类型,81株EVC分为14个类型,10株O139群分为3个类型.其中10株EVC分离于一次霍乱暴发,分为2个类型,提示该次暴发可能存在多个传染源.随机引物PCR方法简便、快速、分辨力高,在霍乱分子流行病学研究中有较大的应用前景.     

Effectiveness of a multiple intervention strategy for the control of the tiger mosquito (Aedes albopictus) in Spain

This study was undertaken to evaluate the effectiveness of four complementary and combined strategies to minimize the presence of the invasive mosquito Aedes albopictus, firmly established in Sant Cugat del Vallès, Catalonia, Spain. A quasi-experimental design including six neighbourhoods was performed in 2008-2009. The abundance of mosquitoes was monitored through ovitraps. The multiple intervention strategy consisted of four actions: source reduction; larvicide treatments (Bacillus thuringiensis israelensis and diflubenzuron); adulticide treatments (alfacipermetrin); and cleaning up uncontrolled landfills. The results showed the number of eggs significantly reduced in the areas with intervention. In 2008, the accumulate median of eggs was 175 and 272 in the intervention and control areas, respectively. In 2009, these medians were 884 and 1668 eggs. In total, 3104 households were visited and 683 people were interviewed. During inspections inside the houses, the cooperation of citizens in 2009 was 16% higher than that in 2008 (95% CI 13-19%). These findings suggest that the strategy was effective in reducing the number of eggs. Citizen cooperation, an essential factor for success, was observed through a high level of collaboration by the home owners, who allowed entry into their private dwellings. This study could be a model for controlling the populations of Ae. albopictus in the Mediterranean region.