女性生殖道感染治疗前后解脲支原体荧光定量PCR检测的假阳性分析

目的探讨荧光定量PCR（FQ—PCR）检测解脲支原体的假阳性率，为客观分析其结果提供依据。方法采用FQ—PCR及培养法同时检查了70例无症状妇女及163例生殖道感染患者治疗前后宫颈分泌物中解脲支原体。结果无症人群FQ—PCR检测阳性率（42．9％），明显高于培养阳性率（11．4％）（P＜0．01）；生殖道感染患者FQ—PCR检测阳性率（66．9％），高于培养阳性率（45．4％）（P＜0．05）；治疗10天后FQ—PCR检测阳性率（40％），高于培养阳性率（10．8％）（P＜0．01）。结论FQ—PCR检测女性生殖道解脲支原体有一定的假阳性，应用时应客观分析其结果。     

解脲脲原体培养法与荧光定量PCR检测结果对比研究

目的：对解脲脲原体液体培养法与荧光定量PCR进行方法学评估。方法：322例病人标本进行液体微量培养与荧光定量PCR平等检测，采用UU－荧光定量PCR试剂盒，以PE5700全自动分析仪进行检测和分析。结果：UU－荧光定量PCR法与液体培养法的一致性系数Kappa=0.6825, χ^2=3.843,p＜0．05。液体培养法敏感性为0．874，特异性为0．815，准确性为0．841。结论：以荧光定量PCR检测解脲脲原体其敏感性、特异性、准确性均优于液体培养法。采用培养法应考虑恰当标本处理，选择优质的商品培养基以减少假阳性和假阴性的机会。     

解脲脲原体培养法与荧光定量PCR检测结果对比研究

目的对解脲脲原体液体培养法与荧光定量PCR进行方法学评估. 方法 322例病人标本进行液体微量培养与荧光定量PCR平行检测,采用UU-荧光定量PCR试剂盒,以PE 5700全自动分析仪进行检测和分析. 结果 UU-荧光定量PCR法与液体培养法的一致性系数Kappa=0.6825,χ2=3.843,p<0.05.液体培养法敏感性为0.874,特异性为0.815,准确性为0.841. 结论以荧光定量PCR检测解脲脲原体其敏感性、特异性、准确性均优于液体培养法.采用培养法应考虑恰当标本处理,选择优质的商品培养基以减少假阳性和假阴性的机会.     

实时荧光定量PCR检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体

目的应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SAT）检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体（UU）,并评价其敏感性和特异性。方法对140例疑似泌尿生殖道感染患者的拭子和尿液样本,分别采用培养法、SAT进行解脲脲原体检测,检测结果有差异的标本用实时荧光定量PCR法对拭子进行复测,根据实验结果评估SAT检测尿液UU的敏感性和特异性。结果 140例疑似患者试子培养和尿液SAT检测阳性率均为60%,两者比较差异无统计学意义（P〉0.05）,其中16例培养结果与SAT检测结果不一致,8例培养法阳性、SAT阴性的拭子PCR结果复测阳性;8例培养法阴性、SAT阳性的拭子标本PCR结果 4例阴性、4例阳性,结合培养法结果和PCR结果作为＂扩大金标准＂,得出SAT对尿液检测的敏感性为95.5%、特异性为100%。结论 SAT检测泌尿生殖道患者尿液UU具有取样方便,检测快速、准确等优点,适用于临床实验室泌尿生殖道UU的检测。     

IST支原体培养与PCR解脲支原体检测方法的比较

目的：比较分析ＰＣＲ解脲支原体检测法与ＩＳＴ支原体培养法的结果及两种方法的优缺点。方法：同时采集８８例临床上诊断为非淋菌性尿道炎（ＮＧＵ）、阴道炎患者分泌物标本两份,分别用ＩＳＴ支原体培养法和ＰＣＲ解脲支原体（Ｕｕ）检测法进行对照实验和分析。结果：ＩＳＴ支原体培养法Ｕｕ阳性２５例（２８．９４％）,人型支原体（Ｍｈ）１例（１．１４％）,Ｕｕ＋Ｍｈ５例（５．６８％）。ＰＣＲ检测Ｕｕ阳性３０例（３４．０４％）,其中男性５例ＰＣＲ检测Ｕｕ为阳性,而ＩＳＴ支原体培养法为阴性;女性３例ＰＣＲ检测Ｕｕ阴性,培养法为阳性。两种方法的Ｕｕ阳性率经统计学ｘ２检验（Ｐ＞０．０５）无显著性差别。结论：ＩＳＴ支原体培养法与ＰＣＲ检测Ｕｕ法均能适用于临床Ｕｕ的检测。ＩＳＴ支原体培养法操作简便,不需要特殊仪器;能进行支原体的种类鉴别;有参考病理阈值并可同时做药敏实验,特别适合基层医院的支原体检测工作。     

基于LAMP技术建立解脲支原体基因试纸条检测方法

目的 建立一种灵敏度高、特异性强、检测速度快的方法检测解脲支原体.方法 基于环介导恒温扩增技术(LAMP),根据解脲支原体序列特征设计3对引物进行解脲支原体DNA切口酶核酸恒温扩增,扩增过程在一对引物中标记生物素,随着扩增的进行生物素直接引入扩增片段中,扩增结束后产物在密闭装置中进行免疫试纸条显色反应,根据显色卡的颜色判定结果的阴阳性.结果 该技术检测解脲支原体较实时荧光PCR技术灵敏度要高10倍以上,其它病原体检测均阴性该方法特异性与实时荧光PCR技术相当.结论 恒温扩增联合试纸条技术检测解脲支原体具有较高的敏感性和特异性,检测速度快,适合各医院开展.     

荧光定量PCR检测沙眼衣原体及临床应用

目的：用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）检测沙眼衣原体的含量,探讨FQ－PCR在衣原体性尿道炎诊断中的价值。方法：应用荧光探针标记引物的荧光定量聚合酶链反应对172例疑为沙眼衣原体感染患者标本进行检测,并与常规PCR（电泳－EB染色）进行比较。结果：FQ－PCR阳性率为19．8％,常规PCR法为20．9％,两法符合率为63．9％。女性宫颈分泌物标本FQ－PCR阳性为29．2％,常规PCR法为16．7％;男性分泌物FQ－PCR阳性率为16．9％,常规PCR法为13．8％。FQ－PCR特异性较常规PCR法高。结论;FQ－PCR在扩增中实时在线检测,并选择理想的标准曲线做出较精确的临值分析,具有较高的特异性和敏感性,对病原体的诊断有一定的临床意义。     

FQ-PCR技术结合支原体培养及药敏对诊治阴道解脲脲原体感染的回顾性分析

目的 通过阴道解脲脲原体感染的病例进行回顾性分析,为诊治阴道解脲脲原体感染提供科学依据.方法 对妇科门诊就诊的怀疑阴道解脲脲原体感染的病例首先采用荧光定量PCR测定解脲脲原体,根据UU-DNA拷贝敷给予经验用药,用药两周停药1周后复查支原体培养及药敏,培养阳性者按药敏结果给药2周,停药2周后再复查UU-DNA.结果 经验用药1疗程后52.6%的患者支原体培养转阴性,47.4%的阳性患者按药敏结果给药1疗程再复查UU-DNA,78.2%转阴性.     

解脲支原体感染与精子形态改变相关性探讨

目的探讨解脲支原体感染与精子畸形相关性探讨。方法对420例男性不育患者采用精子形态检测系统下人工修正方法分析精子形态,PCR—DNA荧光定量方法检测精液中解脲支原体。结果解脲支原体阴性组的精子畸形率明显低于解脲支原体阳性组,两组差异显著（P〈0．05）。结论解脲支原体感染可影响精子形态,导致男性不育。     

间接免疫荧光法检测解脲支原体

目的;探讨间接免疫荧光法(IIF)检测临床标本中解脲支原体的敏感性及特异性.方法用IIF检测了临床培养分离的50例样本,并分别用IIF及培养法对71例临床标本进行检测并比较了两种方法.结果IIF对50例临床分离标本的检出率为100%,而对临床标本的特异性是92.3%,敏感性为75%,但IIF与培养法检测比较没有统计学差异(P>0.10).结论可以用间接免疫荧光法代替培养法检测解脲支原体.     

荧光定量聚合酶链反应检测解脲支原体感染的临床意义

目的　采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)技术 ,准确定量检测待检标本中解脲支原体 (UU)的感染状况。方法　采用FQ -PCR技术 ,检测男女生殖道标本 76 5份 ,并同时用常规PCR技术 ,对比检测了 85例。结果　FQ -PCR检测76 5份标本 ,UU -DNA阳性 2 79份 ,阳性率 36 .5 % ,其DNA平均拷贝数为 2 .4× 10 4。 38例阳性患者治疗两周内复查 ,转阴率仅为 4 4 .7% ,治疗 3w后复查 ,转阴率达 76 % (P <0 .0 0 5 )。常规PCR结果重复检测时 ,2 5例阳性中 2例变为阴性 ,而 6 0例阴性中 4例变为阳性。FQ -PCR结果重复时完全吻合。结论　FQ -PCR检测UU ,具有快速、特异性高、定量准确等优点 ,并可为临床评价疗效提供依据。     

膜芯片技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和3种支原体的方法学研究

目的建立和评价一个新的多重PCR．反向线点杂交技术（RIJB）快速同时检测泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct）、淋病奈瑟菌（坛）和3种支原体感染的方法。方法分别选择Ct隐蔽质粒和Ng16SrRNA基因设计两对特异性引物，以支原体内转录间隔序列（ITS）设计一对支原体属通用引物，生物素标记下游引物。构建三重PCR同时扩增Ct、Ng、解脲脲原体（仇）、微小脲原体（跏）、人型支原体（Mh）等菌DNA，然后与固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷酸探针杂交。并对142份经荧光定量PCR（FQ-PCR）检测0和坛的性病高危人群标本，以及45份经支原体液体培养法鉴定的标本进行检测。结果多重PCR可同时扩增Ct、Ng、Uu、Up和Mh标准菌株DNA，其PCR产物的片段长度为208～408bp。97份FQ-PCRCt阳性标本中有93份经多重PCR-RLB检测为Ct阳性，45份FQ-PCRCt阴性标本中35份多重PCR-RLB阴性。41份FQ-PCRNg阳性标本中34份多重PCR-RLBNg阳性，101份FQ-PCRNg阴性标本中98份多重PCR-RLB阴性。其中36份经多重PCR-RLB检测为混合感染。32份支原体液体培养阳性标本中28份多重PCR-RLB阳性，13份支原体培养阴性标本经多重PCR-RLB检测均为阴性。结论多重PCR-RLB可快速同时检测Ct、Ng、Uu、Up和Mh，为性传播疾病的临床诊断提供了一种可靠的方法。     

实时荧光PCR直接检测样本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌应用研究

目的 探讨实时荧光PCR直接检测病人样本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的应用价值.方法 对80例经VITEK2COMPACT药敏鉴定系统鉴定为有金黄色葡萄球菌生长(其中MRSA40例,MSSA40例)及20例未检出金黄色葡萄球菌的患者样本进行实时荧光PCR扩增,检测样本中金黄色葡萄球菌特异性核酸片段(耐热核酸酶基因nuc)及耐药基因(mecA)并与药敏鉴定比较,判断实时荧光PCR法检测MRSA的敏感性及特异性;对于两种方法检测结果不一致的18例样本重新接种培养,收集金黄色葡萄球菌菌株进行实时荧光PCR扩增,检测nuc基因及mecA基因,以期发现两种方法检测结果差异原因.结果 100例临床样本两种方法检测结果一致共82例,其中MRSA一致40例,MSSA一致22例,非金葡20例;两种方法检测结果不一致18例,均为PCR基因检测为MRSA而药敏鉴定为MSSA.MRSA检测药敏鉴定阳性40例,检出率为40％,PCR基因检测阳性58例检出率为58％;PCR基因检出率明显高于药敏鉴定,二者结果差异有显著性(P＜0.05);以药敏鉴定为标准,PCR基因检测MRSA的敏感性为100％,特异性为70％;18例金黄色葡萄球菌菌株实时荧光PCR检测MRSA结果与药敏鉴定一致.结论 实时荧光PCR直接检测患者样本中MSSA具有高度敏感性及特异性,但检测MRSA会受到样本中其他含有mecA基因菌的干扰,对于临床结果解释需慎重.即便如此,该方法对于MRSA检测在院感防控方面仍有重要意义.     

泌尿生殖道支原体液体显色培养法与固体培养法的比较

目的以固体培养法为标准，探讨液体显色培养法培养支原体的敏感性、特异性和一致性。方法采用培养鉴定药敏一体化液体显色培养基和固体A7琼脂培养基平行检测155例泌尿生殖道标本的支原体。结果液体显色培养法培养的敏感性为96．5％，特异性为79．7％，一致性Kappa=0．7737，U=11．4767，P〈0．001，两种方法具有好的一致性。男性标本与女性标本比较，敏感性差异无统计学意义（Х^2=0．1298，P〉0．05），特异性差异有统计学意义（Х^2=5．4197，P〈0．025）。结论液体显色培养法可用于支原体培养初筛，结合固体培养法可以提高支原体培养的准确性。     

466例成年女性宫颈支原体感染现状及药敏分析

目的：为了解本地区成年女性子宫颈解脲支原体（Uu）及人型支原体（Mh）的分布及抗生素的药敏现状,为临床诊断和合理用药提供依据。方法：应用支原体培养、鉴定、药敏一体化试剂盒,对919例疑为支原体感染患者的宫颈分泌物进行培养、鉴定与分型,并测定其对10种常用抗生素的敏感性。结果：919例可疑病例中支原体培养阳性466例（50．70%）,其中单纯解脲支原体（Uu）阳性395例（43．0％）,单纯人型支原体（Mh）阳性20倒（2．2%）,Uu＋Mh阳性混合感染51例（5．5％）;药敏结果显示,支原体对10种抗生素敏感率排名：交沙霉素96,78％、克拉霉素93．13％、阿奇霉素92．92％。耐药率排名：司帕沙星51．29％、氧氟沙星40．99必、左氧氟沙星36．91％。结论：本地区成年妇女生殖道临床感染支原体主要为解脲支原体（Uu）．交沙霉素等新一代大环内醅类抗生素为首选药物,喹诺酮类抗生素耐药率高。     

聚合酶链式反应诊断方法在梅毒母婴阻断中的应用

目的探讨妊娠期孕妇梅毒筛查及确诊的方法学,以提高阳性率;选择母婴阻断是否成功的最佳方法,尽早确诊梅毒的产妇产后婴儿先天梅毒的发生。方法将4863例孕妇采用Trust法,ELISA法进行梅毒检测梅毒孕妇产后婴儿采用PCR法以及TP-Ig M-ELISA检测对照组采用Trust法,ELISA法PCR法进行测定。结果围产期梅毒检测Trust法敏感性为71.2%,特异性为90.0%。ELISA法敏感性为96.2%特异性为98.0%。PCR法敏感性特异性近于100%。先天梅毒确诊试验血液标本Ig M-ELISA法敏感性为66.7%,特异性为98.0%,PCR法敏感性为40.0%,特异性为100.0%.胎盘组织PCR法敏感性特异性近于100%。结论围产期筛查的孕妇选择用ELISA法进行检测筛查,结合PCR确认。先天梅毒出生时的确诊选择胎盘组织处理后进行FQ—PCR技术     

男性生殖系感染者精液解脲支原体感染的检测研究

目的：探讨男性生殖系感染者精液解脲支原体（ＩＵＩ）感染的检测研究。方法：取精液标本检测，以源于解脲支原体尿素酶基因序列为引物，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对解脲支原体ＤＮＡ进行扩增。结果：所试几种非解脲支原体培养物均阴性。解脲支原体阳性出现１条４１８ｂｐ的ＤＮＡ扩增带。３８２４例男性生殖道感染者，ＵＵ阳性检出率２９．１％。其中急性淋菌性生死道炎感染率为４８．１％，淋菌后生殖道炎感染率为３０．２％     

解脲支原体实验方法的探讨

本文选择了180例门诊泌尿生殖系感染患者,同时用PCR和培养法检测角脲支原体。其阳性率分别为31.1%,20.0%。培养法阳性率下降可能与临床用药有关,表明检测解脲支原体,PCR方法更占有优势,如为首诊病人,PCR结合培养更能提高解脲支原体感染的检测水平。     

光纤间接免疫荧光法检测肺炎支原体抗体

目的和方法:首次采用自行设计、研制的光纤荧光光度计对肺炎支原体抗体进行了检测,并将该法与临床上现行ELISA法及荧光显微镜法进行比较测定.结果:此法标准曲线的相关系数r=0.9930,测定的相对荧光强度(△F)大于2.0为阳性,小于2.0为阴性,且稳定性好.检测35人次临床血清标本,18例阳性标本中,本法有19例为阳性,与ELISA法及荧光显微镜法符合率(特异性)为94.4%;17例阴性标本中,本法有16例为阴性,符合率为94%结论:表明本光纤法具有特异性好、敏感性高,还具有可定量,操作简便快速,所需样本量微,所用仪器新颖、价廉、易普及等优点.     

实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体的研究

目的采用TaqMan探针建立检测沙眼衣原体的实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法。方法根据沙眼衣原体外膜蛋白A的基因（ompA）序列设计引物和探针,以克隆的ompA部分基因片段作DNA模板,建立实时荧光定量检测方法。结果建立的荧光定量PCR检测方法的最低检出限为5 copies/反应,检测线性范围100～107线性关系良好（r2=0.997）,比巢式PCR敏感100倍;且与鹦鹉热衣原体、淋球菌、解脲脲原体、大肠杆菌等病原菌DNA以及人基因组DNA均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。以巢式PCR作参比,建立的荧光定量PCR法检测沙眼衣原体的阳性符合率为100.00%,阴性符合率为95.09%,总符合率为96.81%。结论建立的检测沙眼衣原体实时荧光定量PCR具有特异性强和敏感性高的特点,可快速检测样本中微量沙眼衣原体DNA,适用于对沙眼衣原体进行大规模筛选。