在体制备大鼠全肾去细胞支架的程序性分析

目的通过在体灌注Triton X-100、SDS溶液法制备大鼠全肾去细胞生物支架,并对支架制备过程中的关键步骤进行程序性检测、分析,为制备科学合理的实验用大鼠全肾去细胞生物支架提供基础。方法 SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只。肝素化后直接切取肾脏作为对照组(control组);肝素PBS灌注组(H组);肝素PBS、Triton X-100灌注组(HT组);肝素PBS、Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)溶液灌注组(HTS组)。HE、Masson、PAS染色及透射电镜观察各组肾组织病理及超微结构改变,免疫荧光结合4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)观察各组胶原蛋白Ⅳ(collagenⅣ)、层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)、硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)、弹性蛋白(elastin)及细胞核的表达情况,总DNA测定各组DNA残留浓度。结果 Triton X-100、SDS灌注6h左右制备大鼠肾脏去细胞生物支架。在灌注过程中,肾内细胞和细胞碎片逐渐被清洗,最终变成半透明状。HE、Masson、PAS染色及透射电镜显示连续分布、形态排列类似肾小球、肾小管轮廓结构的网状结构,基膜连续完整。免疫荧光结合DAPI染色结果表明,去细胞过程中细胞外基质中的重要蛋白collagen IV、LN、FN、HSPG2、elastin都较好的得到了保存,细胞核在灌注过程中逐渐减少,直至完全消失;最终残留组织的DNA为4.90μg/g。结论通过合适浓度和灌注比例的Triton X-100、SDS制备大鼠肾脏去细胞生物支架,并对其进行程序性分析,发现能有效清除大鼠肾内所有细胞成分,较完整的保留网络状肾及肾血管细胞外基质结构和成分,是一种简单易行且较为理想的制备实验用全肾生物支架的方法。     

大鼠单叶肝去细胞生物支架的制备与鉴定

目的通过灌注法制备大鼠单叶肝去细胞生物支架,并对其进行鉴定。方法健康成年SD大鼠20只,随机分为去细胞组和正常对照组,每组10只。去细胞组经门静脉灌胃针插管,恒温37℃依次灌注肝素化PBS溶液,1%Triton X-100(p H 7.5~8.0)及PBS溶液。HE、Masson染色及扫描电子显微镜观察组织学及超微结构改变;免疫荧光结合4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)观察2组胶原蛋白Ⅳ和Ⅰ、层黏连蛋白和纤维连接蛋白观察细胞外基质的主要成分;DNA定性和定量分析组织中残留DNA浓度和片段长度;聚甲基丙烯酸甲酯铸型观察肝脏内血管分布情况。结果 Triton X-100灌注4h左右即可制备单叶肝脏去细胞生物支架。在灌注过程中,肝内细胞和细胞碎片逐渐被清洗,最终变成半透明状。HE、Masson、免疫荧光染色及扫描电子显微镜显示,去细胞组肝生物支架较完整地保留了细胞外支架的成分,未见明显细胞及细胞核成分残留;去细胞组支架DNA残留量较正常对照组下降了97.32%,琼脂糖凝胶电泳未见明显的DNA条带。血管铸型标本显示,去细胞组血管分布与正常对照组相仿,其分支完整、清晰。结论运用Triton X-100灌注法所制备的大鼠单叶肝生物支架去细胞彻底,较完整地保留细胞外基质和血管网络结构,是一种简单易行且较为理想的制备实验用单叶肝生物支架的方法。     

离体大鼠胰腺去细胞生物支架的制备与鉴定

目的 通过离体灌注加浸泡的方法制备大鼠胰腺去细胞生物支架(PDBC),为胰岛和胰腺的组织工程研究提供新型天然生物支架. 方法 健康成年大鼠20只,以物理冻融及灌注洗脱法(脱氧胆酸钠+ DNAase),采用胆管、胰管联合逆向在体灌流法获取胰腺去细胞生物支架.并通过基因组DNA定量定性分析,组织化学染色、免疫荧光组织化学染色、荧光积分吸光度分析、透射电镜观察等进一步测定细胞残留以及观察去细胞支架,如胶原IV、纤维连接蛋白和层黏连蛋白等成分的保留. 结果 DNA定性分析显示,实验组未见明显DNA条带,对照组DNA条带可达100bp,定量检测实验组DNA残留不足对照组的5％;组织化学染色和透射电镜观察均表明,去细胞支架无细胞残留,细胞外支架连续性完好,脉管支架保存完整;免疫荧光结果表明,胶原蛋白、弹性蛋白等细胞外支架成分保留较完整,未见明显细胞核成分残留. 结论 运用冻融加浸泡灌注制备的胰腺去细胞生物支架,细胞去除彻底,细胞外支架保留完好.     

去细胞全肾生物支架的制备与鉴定

目的 通过灌注加浸泡法制备全肾细胞外基质支架,并对该生物支架进行鉴定。方法 健康成年SD大鼠20只,取肾,行肾动脉留置针插管,灌注压3.6mmHg,恒温37℃依次浸泡灌注肝素化PBS溶液、0.05%胰蛋白酶溶液、1%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液、1% Trition X-100溶液以及含青、链霉素的PBS溶液。处理后,行DNA定量与定性分析,透射电镜、HE染色及免疫荧光观察残留细胞核成分,进一步丙烯腈-丁二烯-苯乙烯树脂(ABS)铸型观察肾内血管分布情况。结果 去细胞组DNA含量较对照组下降了97%,琼脂糖凝胶电泳未见明显DNA条带;透射电镜、HE染色及免疫荧光观察去细胞组保留了大量细胞外基质,未见明显细胞核成分残留;铸型标本显示去细胞组血管较稀疏,分支完整、清晰。结论 联合酶消化法与去垢剂洗涤法,经灌注加浸泡法处理的全肾,可有效清除肾内所有细胞成分,较好地保留细胞外基质支架和血管网络结构,是一种简单易行且较为理想的制备组织工程肾生物支架的方法。     

肾和肺的去细胞器官支架体外灌注制备方法的优化

研究采用体外灌注法制备肾和肺去细胞器官支架的最优方法。将10只成年SD雄鼠作为器官支架供体,进行去细胞器官支架制备,不同器官采用不同血液循环方法进行体外大气压灌注(基于大气压力往循环体系中注入)0.75% SDS、1% Triton X-100、0.1% H₂O₂制备器官去细胞支架,通过HE染色、DAPI荧光染色方法检测去细胞程度,通过扫描电镜观察其结构脉络网和去细胞程度,通过阿利新蓝过碘酸雪夫氏染法(AB-PAS)、Masson染色、免疫组化染色方法检测去细胞器官支架的成分保留。结果表明,采用体外大气压灌注法制备的去细胞器官支架能有效去除细胞,且糖原、胶原、纤连蛋白(Fibronectin)、弹性蛋白(Elastin)、层粘连蛋白(Laminin)、IV 型胶原(Collagen IV)等有效保留,同时支架能保持良好的结构脉络网。通过大气压注入去细胞化试剂,能有效保留良好的结构脉络网,同时达到有效的去细胞程度(去细胞程度大于99%),且营养成分能有效保留。     

脑去细胞生物支架的制备与鉴定

通过化学萃取加震荡法制备脑去细胞外基质,并对其进行形态学分析和成分鉴定。健康成年SD大鼠20只,分成正常对照组和去细胞组。去细胞组大鼠经心脏灌流后取脑,通过化学萃取加震荡法,依次用3%的TritionX-100、1%的SDS、4%的脱氧胆酸钠震荡萃取,无菌蒸馏水漂洗制备脑去细胞外基质(dBECM)。通过扫描电镜观察dBECM微观形态,用HE染色和荧光DAPI染色分析其去细胞化的效果,进一步通过Masson染色和免疫荧光染色进行成分的鉴定。通过HE染色及荧光DAPI染色可以发现,该方法去细胞化程度完全(去细胞程度大于99%),仅保留大量细胞外基质,未见明显的细胞及细胞核成分残留;Masson染色和免疫荧光染色发现,dBECM保留弹性蛋白(4.0%±1.1%)、层粘连蛋白(19.0%±1.6%)、纤维连接蛋白(9.0%±2.1%)、IV型胶原蛋白(16.0%±1.9%)等成分。化学萃取加震荡法可有效地去除大鼠脑组织内的细胞成分,制备得到的脑去细胞外基质较好地维持宏观和微观的三维结构,保留细胞外基质支架的蛋白成分,是一种简便且理想的脑去细胞外基质制备技术。     

大鼠子宫去细胞支架及其细胞外基质凝胶的制备

本研究采用化学提取法制备大鼠子宫去细胞支架,以探究大鼠子宫细胞外基质(ECM)凝胶制备的可行性。取大鼠子宫,经1%十二烷基磺酸钠(SDS)、3%曲拉通X-100(Triton X-100)、4%脱氧胆酸钠(SDC)溶液依次振摇,制得大鼠子宫去细胞支架。通过扫描电镜、组织化学染色、免疫组化等方法检测支架去细胞化情况。将成功制备的大鼠子宫去细胞支架经胃蛋白酶消化得ECM凝胶,特异性检测ECM凝胶中蛋白含量,测定其流变学性能。结果表明,化学提取法能有效去除细胞,完全保留支架中ECM蛋白成分;本研究制得的ECM凝胶中含有大量ECM蛋白,胶凝稳定,或可为体外子宫内膜构建提供合适的支架材料。     

低渗冻融联合生物酶法制备组织工程化静脉瓣脱细胞支架

目的:采用低渗冻融联合生物酶法制备组织工程化静脉瓣脱细胞支架,并与先前方法制备的静脉瓣脱细胞支架比较,以期获得一种性能较好的带瓣静脉脱细胞支架材料.方法:手术获得Beagle犬带瓣静脉分为4组,对照组、脱氧胆酸钠组、Triton组和冻融+生物酶组.处理后对各组标本行H-E染色,透射电镜观察,DAPI荧光染色,细胞相容性测试等观察.结果:3种脱细胞方法均能彻底去除细胞,DAPI荧光检测显示各组支架材料均无DNA成分残留;H-E染色及透射电镜显示,冻融+生物酶组胶原纤维排列整齐,未见明显的胶原纤维结构改变,其他2组可见胶原纤维断裂及结构紊乱现象;与其他2组脱细胞支架材料相比,冻融+生物酶组的组织细胞相容性好,可见内皮祖细胞在支架材料上生长良好.结论:结合渗透压改变的反复冻融加生物酶法,既可以较彻底除去带瓣膜静脉细胞成分,又保留了较完整的细胞外基质结构,具有良好的组织和细胞相容性,是较理想的带瓣膜静脉脱细胞支架制备方法.     

4种肺脏全器官脱细胞支架制备方法的比较

目的分别采用4种不同的方法灌注大鼠肺脏,采集灌注后肺组织大体形态;采取5种不同的染色方法比较脱细胞后肺组织的变化,筛选出较优的脱细胞方法。方法选择SD大鼠12只,雌雄不限,鼠龄8～9周,体质量200～300 g。随机分成4组[3-[(3-胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)组、乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-2Na)组、十二烷基硫酸钠(SDS)组、冻/融组],每组3只。取出整个大鼠肺,用设定的灌注系统采用0.9%氯化钠溶液(生理盐水)适当冲洗其上血液。采用下述脱细胞方法制备:CHAPS组用浓度8 mmol/L CHAPS灌注,EDTA-2Na组用浓度25 mmol/L EDTA-2Na灌注,SDS组用0.1%SDS灌注,冻/融组先冻融后再用0.1%SDS灌注,灌注完毕后均采用0.9%氯化钠溶液200 m L灌注冲洗,最后对脱细胞肺基质分别进行大体形态拍照、苏木精-伊红(HE)染色、弹性纤维(EVG)染色、masson染色、COL-Ⅰ免疫组织化学染色、COL-Ⅲ免疫组织化学染色。结果 CHAPS组肺组织大体形态最为透明;HE染色可见EDTA-2Na组仍残留较多细胞核成分,其余组未见明显的细胞核成分;各组脱细胞后,肺基质构成的肺泡、细支气管等支架结构基本完整。EVG染色可见SDS组和CHAPS组染色较淡,但是SDS组对微结构破坏较大,CHAPS组肺基质保留较完整;COL-Ⅰ免疫组织化学染色可见CHAPS组肺基质保留较其他组完好;COL-Ⅲ免疫组织化学染色可见:SDS组和冻/融组较CHAPS组染色较深,COL-Ⅲ保留较多,且SDS组同冻/融组深浅无明显差别。masson染色可见:CHAPS组和冻/融组肺胶原纤维保留较完整,SDS组肺胶原纤维破坏较大。结论浓度8 mmol/L CHAPS灌注方法是一种较好的制备肺脏脱细胞支架的方法。     

猪兔鼠肾生物支架制备及体外细胞共培养探究

目的　 灌注制备家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾去细胞生物支架,探究三种肾支架对共培养种子细胞HEK的影响。 方法　取健康成年家猪10头、新西兰白兔28只、SD大鼠28只,分别将取出的肾脏随机均等分为正常组和支架组,支架组由肾动脉依次灌入肝素、1% Triton X-100和1% SDS溶液完成去细胞化。两组肾分别作组织形态学鉴定并检测机械力学性质。去细胞支架作组织爬片与人胚肾上皮细胞共培养,观察细胞在支架爬片上的生长状况,免疫荧光检测人胚肾上皮细胞PCNA及DAPI表达量作灰度分析。 结果　家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏经灌注去细胞后HE核染色阴性, Masson染色显示胶原蛋白阳性,Collagen I和Collagen IV荧光染色阳性,电镜扫描可见去细胞支架内蜂窝状孔洞结构,并可见典型的肾小球龛样结构;支架组弹性模量与正常组肾弹性模量差异无显著性,支架组PCNA/DAPI值均高于空白对照组,而三种支架组之间PCNA/DAPI值无显著性差异。 结论　本研究灌注去细胞方法可去除家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾内的细胞及细胞核,保留细胞外基质,维持细胞外基质的三维空间结构和机械力学强度,是一种可靠有效的制备三者肾去细胞生物支架方法,灌注制备的去细胞支架均可提高异种共培养人胚肾上皮细胞HEK的增殖活性,且这种提高作用在家猪、新西兰白兔和SD大鼠之间并无物种差异性。     

慢性肾衰竭大鼠肾细胞外基质变化

目的:分析慢性肾衰竭大鼠肾去细胞组织结构特点,探讨慢肾衰大鼠肾细胞外基质的病理变化。方法:SD大鼠实验组腺嘌呤灌胃,行去细胞处理后,H-E、Masson染色及电镜观察慢肾衰大鼠肾形态学结构变化及去细胞支架的生物学特性,免疫荧光分析其细胞外基质成分的变化。结果:腺嘌呤灌胃造模组慢肾衰血尿素氮、血肌酐明显增高,肾大体显示透明度降低,且随灌胃时间延长,H-E染色整体支架更加粗大,同时细胞数目以及小管区结晶数目明显增多;Masson三色染色显示实验组肾支架可见大量蓝色的胶原纤维沉积;扫描电镜显示2组肾细胞外基质三维结构紊乱,细胞外胶原纤维更加致密且有不同程度的增生;进一步免疫荧光检测,显示实验组支架的层黏连蛋白、胶原蛋白Ⅰ及Ⅳ都有明显的绿色荧光表达。结论:慢性肾衰肾支架病理形态结构改变及细胞外基质增生,为进一步研究慢肾衰肾支架是否可作为复细胞支架提供依据。     

心脏脱细胞支架的制备及其生物相容性

目的:优化心脏脱细胞支架的制备方法,评价所制备的脱细胞支架的基本生物学特征。方法:联合应用十二烷基硫酸钠(SDS)和聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)对大鼠心行逆行主动脉灌流制备心脏脱细胞支架。同时,将间充质干细胞(MSCs)接种到支架上构建细胞支架复合体,采用H-E染色及扫描电镜分别对制备支架及复合体进行评价。结果:心脏脱细胞支架大体呈半透明囊状。组织学染色及扫描电镜观察示支架呈多孔网状或束状结构,未见细胞核残留。荧光显微镜观察示MSCs沿支架纤维黏附生长,未见明显坏死细胞。结论:本研究运用灌流法成功制备脱细胞彻底且细胞外基质保留较完整的心脏脱细胞支架,既拥有天然三维结构且具有良好的生物相容性。     

脊髓脱细胞支架对大鼠脊髓缺损修复的影响

目的 用振荡法制备脊髓脱细胞支架修复同种异体大鼠脊髓缺损,观察术后大鼠行为学及组织再生情况。为脊髓缺损后修复提供新的研究思路。方法 将30只SD大鼠脊髓分别用50 ml 3%聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）和2%脱氧胆酸钠溶液在摇床上做振荡处理,对比处理前后细胞残留情况及组织的空间结构,了解支架本身的组织构成。将90只SD大鼠随机分成空白对照组、单纯脊髓缺损组和支架移植组。切除单纯脊髓缺损组和支架移植组大鼠腰椎9～10节段,移植脱细胞支架至支架移植组大鼠。术后饲养12周,期间进行行为学评分观察,分别在4、8及12周时取大鼠损伤部位的脊髓进行HE染色及神经再生相关蛋白免疫荧光检测。结果 通过HE、Masson、甲苯胺蓝染色显示,脱细胞处理后的脊髓脱细胞支架上神经细胞及轴突彻底清除,保留了脊髓细胞外基质。扫描电子显微镜观察发现,支架保留一定多孔网状支架结构。脱细胞支架在体实验中,Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分显示,移植有脱细胞支架的大鼠后肢运动功能恢复优于单纯损伤组大鼠。组织学HE染色显示,脱细胞支架能够填补缺损的脊髓节段,加快损伤脊髓的修复过程。免疫荧光显示,支架移植组大鼠的损伤部位有一定轴突再生。结论 脊髓脱细胞支架保留了细胞外基质并具有一定空间结构,能够一定程度加快脊髓缺损修复,对神经再生具有一定的促进作用。     

甲状腺脱细胞生物支架的制备及鉴定

目的 采用十二烷基硫酸钠（SDS）浸泡联合平板振荡制备兔甲状腺脱细胞生物支架,并对脱细胞支架进行评估。方法 20只新西兰大白兔随机分为正常对照组和脱细胞组,每组10只,脱细胞组兔甲状腺组织浸泡于1%SDS溶液后放置于37.0 ℃恒温振荡器中振荡24 h,去离子水振荡清除支架内残留去细胞试剂及DNA成分。对支架进行HE染色、DNA含量检测、扫描电子显微镜检查以及免疫荧光染色进行鉴定。 结果 甲状腺脱细胞支架DNA含量显著低于正常甲状腺组织（P<0.01）,DNA清除率达90%以上;经检测甲状腺脱细胞支架内无DNA成分残留,同时较为完整地保存了支架3D空间结构及蛋白成分。 结论 浸泡法联合平板振荡法可有效清除甲状腺细胞成分,较为完整地保留支架空间结构及蛋白成分。     

去细胞化全肝生物支架循环灌注培养条件下体外细胞再植*

背景：通过去细胞化技术制备全肝生物支架成为缓解供体短缺的新技术,优化肝脏组织的去细胞化流程成为新的课题。 目的：通过去细胞化技术建立完整保留肝脏三维结构和脉管系统的全肝生物支架,利用自主设计的循环灌注培养装置实现生物支架体外细胞再植。 方法：通过门静脉路径循环灌注去垢剂Triton X-100,十二烷基硫酸钠,并用磷酸盐缓冲液洗脱残留去垢剂。通过动态循环灌注培养装置进行支架与HepG2细胞的共培养,观察植入细胞在全肝生物支架内的功能表达。 结果与结论：经去垢剂灌注后,支架呈现保持肝脏三维结构的透明结构,苏木精-伊红染色以及扫描电镜结果显示细胞成分被完全移除,Masson’s Trichrome染色可见大量胶原纤维,免疫组化结果证实纤维连接蛋白和层粘连蛋白保存完整。循环灌注培养下细胞白蛋白表达量及尿素合成量较平板培养明显提高。说明去细胞化肝脏生物支架可作为体外肝脏组织重建的基础材料,动态循环灌注方法可实现支架中细胞再植。      

两种方法制备脱细胞血管材料在动物体内免疫反应的比较

文题释义：去垢剂：又称表面活性剂，是一类既具有亲水基又具有疏水基的物质，一般具有乳化、分散和增溶作用，可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型，中性去垢剂在蛋白提取中应用较多。  巨噬细胞的极化：巨噬细胞可分化为包括M1、M2a、M2b、M2c在内的极化表型，其中的M2表型巨噬细胞在组织修复和伤口愈合中发挥了重要作用。M1型巨噬细胞可促进单核巨噬细胞的聚集，分泌大量促症因子包括白细胞介素12、白细胞介素6、肿瘤坏死因子等，然而M2型可以分泌大量抗炎症因子，诱导巨噬细胞清除凋亡细胞及组织修复的作用。背景：去垢剂作为目前较成熟的脱细胞方法，具有操作简便、破坏小、实验条件容易控制等优点，有研究将不同的去垢剂联合应用于脱细胞中取得了不错的效果。 目的：对比两种去垢剂联合方案脱细胞的效果，以及两种脱细胞血管材料植入动物皮下后的免疫反应。 方法：采用两种方案对猪颈动脉进行脱细胞处理，一组置于1%十二烷基硫酸钠与1%脱氧胆酸钠混合溶液内处理72 h(SDS+SDC组)，另一组置于1%十二烷基硫酸钠与1%Triton X-100混合溶液内处理72 h(SDS+Triton X-100组)，脱细胞后分别进行组织学分析、扫描电镜分析、力学分析与DNA含量检测。将两组脱细胞血管材料分别植入SD大鼠背部皮下，术后1，2，4，8周取出移植血管材料，进行苏木精-伊红染色与免疫荧光染色。实验已通过江南大学实验动物伦理委员会批准。 结果与结论：①组织学分析显示，SDS+SDC组方案有效去除了细胞成分，较完整的保留了细胞外基质结构，脱细胞效果优于SDS+Triton X-100组；②SDS+SDC组DNA含量明显低于SDS+Triton X-100组(P < 0.05)，两组爆裂强度与缝合耐受强度比较差异无显著性意义(P > 0.05)；③扫描电镜显示，SDS+Triton X-100组细胞外基质破坏程度大于较SDS+SDC组；④皮下植入实验中，术后1周时两组颈动脉材料周围均可见大量炎性细胞浸润，术后8周时SDS+SDC组脱细胞材料周围已无炎性细胞浸润，SDS+Triton X-100组脱细胞材料周围仍可见明显的淋巴细胞浸润；SDS+Triton X-100组脱细胞材料主要诱导巨噬细胞向M1型分化，SDS+SDC组脱细胞材料主要诱导巨噬细胞向M2型分化；⑤结果表明相对比1%十二烷基硫酸钠联合1%Triton X-100脱细胞处理方案，1%十二烷基硫酸钠联合1%脱氧胆酸钠脱是较有前景的脱细胞细胞处理方案。ORCID: 0000-0002-3120-0203(尹晶) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程     

大鼠胰腺去细胞天然支架生物相容性的鉴定

目的通过离体灌注化学去垢剂的方法制备大鼠胰腺去细胞天然生物支架,并对支架的完整性、生物相容性进行检验。方法健康成年SD大鼠30只,分别经胆管与血管两条途径灌注十二烷基硫酸钠和曲亚通X-100等药品洗脱,获取胰腺去细胞生物支架。通过HE染色、扫描电子显微镜和透射电子显微镜等观察细胞残留于去细胞支架的生物学特性,分光光度计法鉴定残留去垢剂量,酶联免疫吸附剂测定法测定残留支架蛋白含量及生长因子,并用腹壁与皮下包埋实验检验其炎症反应,MTT法测定支架细胞毒性,内皮细胞共培养测定支架生物相容性。结果 HE染色、扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察均表明去细胞支架无细胞残留,细胞外支架连续性完好,脉管支架保存完整;药物残留小于规定标准;细胞外支架生长因子及支架蛋白存留量等指标上血管组均优于胆管组;腹壁与皮下包埋实验显示,去细胞支架炎性反应较对照组明显减轻;MTT法显示无细胞毒性;内皮细胞共培养有黏附趋势。结论使用两种灌注法制备胰腺去细胞生物支架,均可将细胞去除彻底,支架生物相容性好。但就血管组细胞外支架保留完整性,生长因子保留更多,则血管灌注途径优于胆管灌注途径。     

去细胞异体神经的形态结构及移植后的组织相容性

目的:为面神经缺损寻找一种理想的异体神经移植物。方法:取Wistar大鼠胫神经,经Triton X-100和脱氧胆酸钠溶液进行化学去细胞处理。将处理后的神经行组织学染色和免疫组织化学染色;并行异体移植修复面神经缺损,观察其组织相容性。结果:去细胞神经为一中空的神经基质管,其中的细胞和髓鞘成分被有效清除,神经基底膜被保留;异体移植后无明显炎症反应,无排斥和吸收反应,能引导宿主轴突和Schwann细胞增殖。结论:去细胞异体神经移植物具有良好的仿生性和组织相容性,可能用于修复面神经缺损。     

构建组织工程瓣膜支架中3种去垢剂的比较

背景:目前,组织工程瓣膜去细胞支架的制备方法和效果各不相同,但总的来说,酶结合去垢剂法显示出一定的优势作用。目的:探讨脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通3种去垢剂结合酶消化法对于猪主动脉瓣膜脱细胞的效果以及去细胞后对支架的影响。方法:将新鲜猪主动脉瓣膜用抗生素溶液浸泡12h后,置于胰蛋白酶和EDTA溶液中12h,再分别用脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通进行处理,最后转入核酸酶溶液中浸泡12h,以达到去除内皮细胞和间质细胞的目的,常规苏木精-伊红染色观察内皮细胞是否除完全,Masson染色观察胶原纤维和弹力纤维损害程度,电子扫描显微镜观察纤维结构以评价效果。结果与结论:3种去垢剂结合酶消化法均能彻底去细胞,但脱氧胆酸钠对支架胶原纤维和弹力纤维的损害较轻微,十二烷基硫酸钠次之,曲拉通对支架的损害作用最大。提示脱氧胆酸钠结合酶消化法是一种较合理的组织工程瓣膜支架构建方法。     

骨膜去细胞生物支架的制备和鉴定

目的 制备兔骨膜去细胞生物支架,为骨缺损、骨不愈的组织工程研究提供天然的生物支架材料。 方法 取健康新西兰大白兔,游离双侧胫骨近端内侧骨膜,通过物理冻融（-80℃,24h）、去污剂洗脱（triton-X 100、SDS）和酶消化（DNA酶、RNA酶）获取骨膜去细胞生物支架。通过HE染色、DAPI染色、琼脂糖电泳和基因组DNA定量分析(n=5)测定细胞结构及DNA成分残留;Masson染色和羟脯氨酸测定法(n=6)定性定量检测骨膜细胞外基质的主要成分（胶原）的保留情况;扫描电子显微镜下观察骨膜去细胞生物支架的表面微结构;CCK8法检测支架浸提液毒性;皮下包埋实验(n=4)观察该支架的免疫排斥反应。 结果 HE染色和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色表明去细胞支架无残留细胞;琼脂糖电泳未见明显DNA条带;DNA定量检测显示组织去细胞率达95%以上;Masson染色及羟脯氨酸测定表明去细胞支架胶原成分被保留;扫描电子显微镜下细胞外基质呈现三维网状疏松结构;不同体积分数的浸提液对骨膜细胞的增殖与对照组（普通培养基）比较无明显抑制作用（P＞0.05）;异体皮下包埋实验显示,该去细胞支架免疫排斥反应不明显。 结论 运用物理冻融、去污剂洗脱和酶消化等方法所获取的骨膜去细胞生物支架细胞去除彻底,细胞外基质的结构及主要成分保留完好,生物相容性良好。