c-Jun氨基末端激酶介导的细胞凋亡和自噬参与调控磷酸三钙磨损颗粒诱导的小鼠颅骨假体周围骨细胞死亡

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）介导的细胞凋亡和自噬是否参与调控磷酸三钙（TCP）磨损颗粒诱导假体周围骨细胞死亡。 方法 取雄性ICR小鼠36只,随机分为3组：正常对照组（control,n=12）、TCP磨损颗粒组（模型组,n=12）和SP6000125组（n=12）。采用TCP磨损颗粒30 mg置于颅骨顶后缝合皮肤构建小鼠颅骨溶解模型,SP6000125组小鼠于术后第2天颅顶注射JNK通路特异性抑制剂SP600125（1.0 mg/kg）,每3日1次。持续干预2周后处死小鼠取颅骨。Calcein-AM探针标记和HE染色观察各组假体周围骨细胞形态和活性变化;通过酶消化法获取假体周围骨细胞,应用流式细胞术检测假体周围骨细胞凋亡情况;Western blotting法检测假体周围骨细胞中Bcl-2、Bax、磷酸化JNK（p-JNK）、Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3（LC-3）等蛋白的表达变化。 结果 与control组比较,TCP组假体周围骨细胞活性明显降低,空骨陷窝比例显著增加,骨细胞凋亡明显（P<0.05）,JNK通路被活化,p-JNK蛋白表达明显上调（P<0.05）;自噬相关蛋白Beclin-1和LC-3表达显著上调,且LC-3I向LC-3II转换明显增加（P<0.05）;与TCP组比较,SP600125组假体周围骨细胞凋亡显著减少、自噬被明显抑制（P<0.05）。 结论 JNK介导的细胞凋亡和自噬参与调控TCP磨损颗粒诱导的假体周围骨细胞死亡,促进假体周围骨溶解。     

唑来膦酸调控NLRP3信号通路抑制脂多糖诱导的破骨细胞分化

背景：唑来膦酸可抑制骨吸收,但其是否能抑制炎症性骨疾病及其相关机制尚不完全清楚。目的：分析唑来膦酸对脂多糖诱导破骨细胞增殖、分化的影响。方法：利用脂多糖将RAW264.7细胞诱导为破骨细胞,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色鉴定诱导结果。将RAW264.7细胞分5组培养：空白对照组不进行任何干预,对照组加入脂多糖处理,其余3组在加入脂多糖的基础上分别加入0.1,1,5μmol/L的唑来膦酸处理,培养6 h后,采用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子α水平,Western Blot检测NLRP3、caspase-1、白细胞介素1β、cleaved-caspase-1及肿瘤坏死因子α的蛋白表达。培养第5天,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形成情况,F-actin染色观察破骨细胞肌动蛋白环。结果与结论：(1)抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色显示,脂多糖可诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞;(2)对照组肿瘤坏死因子α水平高于空白对照组(P <0.05),0.1,5μmol/L唑来膦酸组肿瘤坏死因子α水平低于对照组(P <0.05);抗酒石酸酸性磷酸酶染色...     

骨形态发生蛋白2/Osterix信号通路调控的前成骨细胞分化

BACKGROUND: Bone formation and development are reported to be regulated by bone morphogenetic protein 2 (BMP2)-induced Osterix expression. OBJECTIVE: To investigate the regulatory effect of BMP2/Osterix signaling pathway on differentiation of preosteoblasts in mice. METHODS:mRNA and protein expression of Osterix was determined by real-time RT-PCR and western blot assay, respectively at various time points after mouse preosteoblasts were treated with BMP2. pcDNA3.1/myc-Osterix eukaryotic expression vector was constructed and transducted into preosteoblasts, and then mRNA expression of alkaline phosphatase, bone sialoprotein, and matrix extracellular phosphoglycoprotein was detected by real-time RT-PCR after transduction and BMP2 treatment. RESULTS AND CONCLUSION: Osterix mRNA expression was up-regulated when treated with BMP2 in mouse preosteoblasts, and reached the peak at 24 hours. In addition, the protein expression of Osterix was increased after BMP2 treatment. Alkaline phosphatase, bone sialoprotein, and matrix extracellular phosphoglycoprotein mRNA expression was up-regulated after transfection of mouse preosteoblasts with pcDNA3.1/myc-Osterix eukaryotic expression vector and BMP2 treatment. Our results indicate that BMP2 regulates the synthesis of genetic markers of osteogenesis, such as alkaline phosphatase, matrix extracellular phosphoglycoprotein via up-regulating Osterix expression in mouse preosteoblasts, suggesting BMP2/Osterix signaling pathway plays a critical role in bone development. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

Wnt7a/β-连环蛋白/自身免疫调节因子信号通路参与1型糖尿病的发生

目的 探讨NOD/Ltj小鼠自发1型糖尿病（T1D）过程中,胸腺内Wnt信号通路、自身免疫调节因子(AIRE)及T1D组织特异性抗原（TSAs）胰岛素2（Ins2）、谷氨酸脱羧酶67（GAD67）表达与T1D发生的关系。 方法 60只雌性 NOD/Ltj 小鼠分3组：3周组、16周未发病组及16周发病组,每组20只;非空腹血糖值连续2次≥ 11.1 mmol/L 视为发生T1D。胰腺HE染色观察胰岛炎发生情况,抗Ins、CD45免疫组织化学染色显示胰岛β细胞或浸润炎性细胞;Western blotting和Real-time PCR检测胸腺Wnt7a、β-catenin、AIRE、Ins、GAD67蛋白水平和mRNA表达;流式细胞术分析胸腺T细胞比例。 结果 1. 随着T1D发生,胰岛组织结构破坏,大量淋巴细胞浸润,残存胰岛细胞减少;Ins+胰岛β细胞周围见大量CD45+细胞聚集。2. 随年龄的增加,胸腺Wnt7a、β-连环蛋白（catenin)、AIRE、Ins和GAD67蛋白水平和mRNA表达降低;同周龄发病组小鼠与未发病组小鼠相比,胸腺Ins表达下降。3. 与3周组相比,16周未发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例降低;16周发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例升高,CD4、CD8双阳性T细胞比例降低。 结论 Wnt7a/β-catenin信号通路可能通过调控AIRE表达,下调T1D相关TSAs表达,参与T1D发生发展。