初级纤毛在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞中的作用

目的:研究初级纤毛在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞(MSCs)分化为神经元样细胞中的作用.方法:全骨髓贴壁法分离、培养、纯化MSCs.含15 μmol/L白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCs分化.倒置显微镜下观察细胞形态,免疫印迹检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达.免疫荧光法检测MSCs增殖情况.扫描电子显微镜检测MSCs表面初级纤毛,免疫荧光法检测初级纤毛蛋白(Ac-Tu)的表达.结果:白藜芦醇诱导后60％的细胞胞体收缩,立体感增强,类似神经元.免疫印迹显示MSCs及对照组细胞有NSE蛋白的轻度表达,诱导后NSE、MAP-2蛋白表达阳性,随着诱导时间延长,NSE、MAP-2的表达渐增强.经过24 h饥饿后,90％的MSCs处于生长静止状态.扫描电子显微镜及免疫荧光显示,处于生长静止期的MSCs具有初级纤毛,且白藜芦醇可诱导具有初级纤毛的MSCs分化为神经元样细胞.对照组则无明显变化.结论:白藜芦醇能诱导MSCs分化为神经元样细胞.在此过程中,初级纤毛可能发挥着重要作用.     

抑制Hedgehog信号通路对前列腺癌DU125细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对前列腺癌Dul45细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养DU145细胞,以10、50、100μmol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对DU145细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对DU145细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对DU145细胞Gli-1 m RNA表达的变化,Westernblot检测环王巴明对DU145细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.01±2.61)%、50μmol/L环王巴明组(76.71±3.13)%和100μmol/L环王巴明组(69.10±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.12±0.21)%、50μmol/L环王巴明组(24.97±0.24)%和100μmol/L环王巴明组(31.26±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.56±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%和100μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%Gli-1m RNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.79±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.59±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.41±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)%降低(P0.05)。结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制DU145细胞增殖、诱导DU145细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

抑制Hedgehog信号通路对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养U87细胞,以10、50、100μmol/L的环王巴明作用24h,MTT法检测环王巴明对U87细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对U87细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对U87细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对U87细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.11±2.61)%、50μmol/L环王巴明组(76.81±3.13)%和100μmol/L环王巴明组(69.20±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.87±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.22±0.21)%、50μmol/L环王巴明组(24.87±0.24)%和100μmol/L环王巴明组(31.36±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.66±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.68±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.48±0.06)%和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.06)%Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.78±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.58±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.40±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)%降低(P0.05)。结论Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

抑制Hedgehog信号通路对食管癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养食管癌EC9706细胞,以10、50、100μmol/Lol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对EC9706细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对EC9706细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(86.11±2.61)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(77.81±3.13)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(70.20±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(16.22±0.21)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(25.87±0.24)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(32.36±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.76±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(0.78±0.06)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(0.58±0.06)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(0.40±0.06)%Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.93±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(0.68±0.06)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(0.48±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.75±0.11)%降低(P0.05)。结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制食管癌EC9706细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

黄连素对人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激-自噬途径的调节作用

目的:观察黄连素对人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激-自噬途径的调节作用。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,分别加入12.5、25、50、100、200和400μmol/L黄连素,作用12 h、24 h和48 h后,MTT法检测黄连素对SKOV3细胞活力的影响;将细胞分为对照组、黄连素(50μmol/L)组、黄连素(100μmol/L)组和黄连素(200μmol/L)组,处理SKOV3细胞24 h后,倒置相差显微镜观察黄连素对SKOV3细胞形态的影响;间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和泛素结合蛋白p62的表达;采用Western blot法检测beclin-1、LC3、p62、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白的表达。结果:MTT结果显示,黄连素(12.5、25、50、100、200和400μmol/L)作用SKOV3细胞12 h、24 h和48 h,SKOV3细胞活力明显降低,12 h、24 h和48 h的IC_(50)分别为(764.7±0.3)μmol/L、(231.6±0.1)μmol/L和(96.2±0.1)μmol/L。激光共聚焦显微镜检测发现,LC3和p62蛋白散在分布,且荧光强度增加的同时呈现点状聚集,黄连素(200μmol/L)组可见明显增强,且有明显的共定位现象。Western blot检测结果表明,与空白对照组相比,黄连素(200μmol/L)组内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP及自噬相关蛋白beclin-1、LC3和p62表达显著上升(P0.05)。结论:黄连素可能通过调节细胞自噬促进SKOV3细胞内质网应激。     

白藜芦醇通过Sirt3-SOD2-ROS途径诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

目的:观察白藜芦醇是否通过Sirt3-SOD2-ROS途径诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡。方法:体外培养SKOV3细胞,分别加入2.5、5、10、20、40和80 mg/L白藜芦醇,作用24 h后,MTT法检测白藜芦醇对SKOV3细胞活力的影响。将SKOV3细胞随机分为空白对照组、白藜芦醇(10 mg/L)组、白藜芦醇(20 mg/L)组和白藜芦醇(40 mg/L)组,分别处理24 h后,用Hoechst 33342染色,应用激光共聚焦显微镜观察细胞核变化;用荧光探针标记细胞内活性氧(ROS),应用激光共聚焦显微镜观察细胞内ROS变化;采用Western blot检测沉默交配型信息调节因子2同源蛋白3(Sirt3)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达。结果:MTT结果显示,白藜芦醇(2.5、5、10、20、40和80 mg/L)作用SKOV3细胞24 h,SKOV3细胞活力显著降低,IC 50为(47.6±0.1)mg/L。应用激光共聚焦显微镜观察,与空白对照组相比,白藜芦醇各浓度组SKOV3细胞核内出现明显固缩,且着色增强现象。ROS荧光标记显示,与空白对照组相比,白藜芦醇各浓度组中ROS红色荧光数量显著减少。Western blot检测结果表明,与空白对照组相比,白藜芦醇各浓度组Sirt3、SOD2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇可以通过调控Sirt3-SOD2-ROS途径诱导SKOV3细胞凋亡。     

白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤后小胶质细胞系N9活化的影响

目的 探讨白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤（OGD/R）后小胶质细胞系N9活化的影响。 方法 体外培养的N9小胶质细胞行氧糖剥夺150 min,复氧培养24 h。实验分为正常组（Nor）、对照组(Ctrl)和白藜芦醇预处理组(Res)。细胞计数盒-8（CCK-8）法测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫荧光法检测Iba1蛋白表达,Western blotting检测钙离子接头蛋白1（Iba1）、CD11b、Caspase-3、Bax、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-1β蛋白表达,ELISA法检测培养细胞上清液中IL-10、TNF-α和IL-1β蛋白含量。 结果 CCK-8 法检测结果显示,OGD/R损伤后对照组、1、5、20、40和80 μmol/L白藜芦醇组细胞活力均较正常组降低（P＜0.05,n=3）,但5、20和 40 μmol/L白藜芦醇组细胞活力较对照组显著增强（P＜0.05,n=3）,以20 μmol/L组最强。流式细胞术、免疫荧光、Western blotting和ELISA法显示,对照组和白藜芦醇组CD11b、Iba1、Caspase-3、Bax、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达或含量或凋亡细胞百分比均显著高于正常组（P＜0.05,n=3）,但白藜芦醇组除IL-10蛋白表达或含量较对照组增高外,其余均 低于对照组（P＜0.05,n=3）。结论 白藜芦醇预处理可抑制OGD/R后小胶质细胞的活化及凋亡,减轻炎症反应。     

硫化氢抑制小鼠胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞系抵抗素的分泌

目的观察硫化氢(H2S)是否通过AMPK信号通路影响小鼠胰岛素抵抗3 T3-L1脂肪细胞系抵抗素的分泌。方法将细胞分为对照组、胰岛素抵抗3T3-L1组和50μmol/L Na HS组,利用ELISA法检测抵抗素(resistin)的分泌,Western blot检测AMP激活的蛋白激酶(AMPK)及乙酰辅酶A羧化酶(ACC)磷酸化蛋白的表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测resistin及AMPK mRNA表达。结果与对照组比较,给予Na HS后抵抗素分泌明显降低(P0.05)。正常和胰岛素抵抗细胞中AMPK和ACC磷酸化蛋白表达显著增加(P0.05)。AMPK通路特异性阻断剂compound C可减弱Na HS对AMPK及ACC蛋白磷酸化的作用,且降低正常和胰岛素抵抗细胞抵抗素的分泌。结论 H2S可能通过激活AMPK通路来抑制小鼠正常和胰岛素抵抗3 T3-L1脂肪细胞的抵抗素分泌。     

白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1116细胞的影响及机制研究

目的 观察白藜芦醇作用前后γδT细胞对结肠癌SW-1116细胞杀伤活性的变化,并探讨其发生的机制。方法 异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的白藜芦醇作用于γδT细胞和结肠癌SW-1116细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对γδT细胞及结肠癌细胞的生长的影响;流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇作用前后γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达;乳酸脱氢酶( LDH)释放法检测白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1l16细胞活性的影响。Western blot检测药物作用前后γδT细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的活性的变化。结果 白藜芦醇在0.39 ～3.125μmol/L时对γδT细胞的生长具有促进作用,对结肠癌SW-1116细胞作用不明显;经白藜芦醇诱导后γδT细胞的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达显著高于对照组(P＜0.05);对结肠癌SW-1116细胞的杀伤活性也显著高于未诱导组(P＜0.05);经浓度为0.1～10 μmol/L白藜芦醇作用的γδT细胞的p-ERK1/2表达较对照组增加(P＜0.05)。结论 白藜芦醇能够促进γδT细胞的增殖,并增强其对结肠癌SW-1116细胞的杀伤能力,其机制可能与上调γδT细胞表面的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达及活化细胞外信号调节激酶等有关。     

白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2表达的影响。方法不同浓度白藜芦醇处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测白藜芦醇对细胞增殖抑制率,流失细胞技术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1和Caspase-3的表达。结果白藜芦醇25、50、100、200μmol/L处理细胞,增殖抑制率分别为(24.22±1.66)%、(30.79±1.60)%、(45.72±1.25)%和(53.31±1.94)%。白藜芦醇0、50、100、200μmol/L处理细胞,凋亡率分别为(3.53±0.25)%、(28.80±1.34)%、(38.78±1.19)%和(58.96±1.26)%。Western blot结果显示,白藜芦醇处理细胞后,Caspase-3蛋白裂解片段表达增加,凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达减低。结论白藜芦醇能诱导MDA-MB-231细胞凋亡增加,这可能与白藜芦醇激活Caspase-3蛋白同时抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达有关。     

外周血维生素D3在原发性干燥综合征患者中的表达及与病情程度的关系

目的：探讨25（OH）D3在原发性干燥综合征患者中的表达及与病情程度的关系。方法：收集2015年3月至2016年3月于我院就诊的98例原发性干燥综合征患者。按照SSDAI积分分为pSS稳定期组（n=49例）和pSS活动期组（n=49例）,同期选择98例在我院体检的健康志愿者作为对照组。采集所有实验者的B淋巴细胞指标（CD27^high浆细胞、CD27⁺记忆性B细胞）和T淋巴细胞指标肿瘤坏死因子（TNF-α）、IL-6、IL-10、IL-17,检测并分析。采用ELISA法检测维生素D3的水平。观察pSS组和对照组B淋巴细胞指标、T淋巴细胞指标对比,pSS活动期组和pSS稳定期组B淋巴细胞指标、T淋巴细胞指标对比。结果：在B淋巴细胞中,pSS组CD27^high浆细胞、CD27+记忆性B细胞显著低于对照组［（0.87±0.23）vs（1.80±0.20）,（21.75±4.32）vs（33.92±3.19）］（P＜0.05）,在T淋巴细胞指标中,pSS组TNF-α、IL-6、IL-17水平显著高于对照组［（135.89±15.83）μg/L vs（69.03±11.07）μg/L,（98.52±20.17）μg/L vs（40.02±9.42）μg/L,（89.36±16.26）μg/L vs（45.92±9.01）μg/L］（P＜0.05）,IL-10水平显著低于对照组［（46.16±17.05）μg/L vs（9689±10.37）μg/L］（P＜0.05）;在B淋巴细胞中,pSS活动期组CD27high浆细胞、CD27+记忆性B细胞显著低于pSS稳定期组［（0.70±0.10）vs（1.23±0.30）,（17.04±1.90）vs（25.10±2.80）］（P＜0.05）,在T淋巴细胞指标中,pSS活动期组TNF-α、IL-6、IL-17水平显著高于pSS稳定期组［（205.86±28.98）μg/L vs（124.57±16.04）,（114.02±20.73）μg/L vs（81.98±7.40）μg/L,（101.86±15.97）μg/L vs（76.39±4.53）］μg/L（P＜0.05）,IL-10水平显著低于pSS稳定期组［（31.92±8.09）μg/L vs（60.86±6.18）μg/L］（P＜0.05）,pSS活动组为(22.45±3.27)pg/ml,pSS稳定组为(39.03±3.21)pg/ml,对照组为(41.64±5.59）pg/ml。活动组25(OH)D3 水平低于稳定组和对照组(P＜0.05),但稳定组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：原发性干燥综合征患者25（OH）D3水平显著低于正常人,25(OH)D3的不足可使T淋巴细胞和B淋巴细胞浸润及活化,造成腺体功能损伤,与原发性干燥综合征的病情程度以及免疫功能之间存在密切的关系。     

白藜芦醇预处理对大鼠皮质神经元氧糖剥夺/再复氧损伤后神经元突起生长的影响

目的探讨白藜芦醇预处理对大鼠皮质神经元氧糖剥夺/再复氧损伤后神经元突起生长的影响。方法体外皮质神经元氧糖剥夺150min,复氧培养24 h。实验分为正常组、对照组和5μmol/L白藜芦醇预处理组。免疫荧光法鉴定神经元,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光法和Western blotting检测微管相关蛋白2(MAP-2)和生长相关蛋白43(GAP-43)的表达,并计数神经元突起的长度和数目。结果培养细胞均高表达神经元特异性标记物MAP-2。白藜芦醇组细胞活力较对照组明显增加(0.551±0.009比0.436±0.013,P0.01),而凋亡则明显降低(18.3%±1.3%比35.3%±1.9%,P0.01),上调MAP-2(0.790±0.102比0.462±0.063,P0.01)和GAP-43(0.768±0.084比0.424±0.065,P0.01)蛋白的表达,增加神经元突起的长度(89.510±6.939比61.538±9.14,P0.01)和数目(6.347±1.002比3.040±0.608,P0.01)。结论白藜芦醇预处理能减轻氧糖剥夺/再复氧对神经元的损伤,促进神经元突起的生长。     

原发性高血压患者颈动脉斑块及动脉僵硬度与血清尿酸水平的关系*

 目的：研究原发性高血压（essential hypertension,EH）患者颈动脉斑块性质及动脉僵硬度与血清尿酸（uric acid,UA）水平的关系。方法：选择EH患者92例,健康对照组30例;对所有研究对象行相关血液生化检查,检测颈总动脉内中膜厚度（IMT）、颈动脉斑块和颈股动脉脉搏波传导速度（CFPWV）。结果：EH组的血清UA明显高于对照组［（361.51±83.81)μmol/L vs (317.03±62.22) μmol/L,P<0.05］;EH组IMT及异常检出率较对照组明显升高［(0.69±0.14) mm vs (0.60±0.12) mm,42.39% vs 10.00%,P<0.05］;45例EH患者检出颈动脉斑块,随着颈动脉斑块严重程度增高,血清UA水平依次增高［（285.25±78.41) μmol/L、(341.19±63.99) μmol/L和(401.33±88.49) μmol/L,P<0.05］;软斑块组（n=11）的血清UA水平较硬斑块组（n=34）显著增高［（389.00±69.45) μmol/L vs (323.03±72.71) μmol/L,P<0.05］。多元线性逐步回归分析显示CFPWV与年龄（r=0.414）、收缩压（r=0.224）、脉压（r=0.270）和血清UA（r=0.219）呈显著正相关（P<0.05）。结论：血清UA水平增高是EH发病的危险因素之一,血清UA水平可反映颈动脉斑块的严重程度及稳定性,EH患者随着血清UA水平增高大动脉弹性减退。     

Enhanced expression of hedgehog signaling molecules in squamous cell carcinoma of uterine cervix and its precursor lesions.

The hedgehog (Hh)-signaling pathway plays an essential role in normal development. Deregulation of this pathway is responsible for several types of cancers. The aim of this study was to determine the expression pattern and the extent of Hh-signaling molecules in squamous cell carcinoma of uterine cervix and its precursor lesions. A total of 106 uterine cervical cancers and related lesions (37 squamous cell carcinomas, 23 cervical intraepithelial neoplasia (CIN) III, 10 CIN II, four CIN I, 32 normal cervical epithelia) were immunohistochemically analyzed with anti-Shh, Indian Hh (Ihh), Patched (PTCH), Smoothened (Smo), Gli-1, Gli-2, Gli-3 antibodies on paraffin blocks. The results showed that the expression of all the Hh-signaling molecules was greatly enhanced in uterine cervical tumors, including carcinoma and its precursor lesions. The staining pattern was mainly cytoplasmic except for Gli-1/2, whose expression was observed in both cytoplasm and nucleus. In case of Ihh, PTCH, Smo and Gli-1, their expression in normal epithelium was completely absent or rare. The expression of all the seven Hh-signaling molecules mentioned above was significantly increased in CIN II/III and carcinoma, compared with that in normal epithelium (P < 0.05). The expression of Shh was increased by double; the first increase occurred in normal epithelium-CIN transition, and the second, during the progression of CIN to carcinoma. These results strongly suggest that the Hh-signaling pathways were extensively activated in carcinoma and CIN of uterine cervix. In conclusion, the Hh-signaling pathways may be involved in carcinogenesis of squamous cell carcinoma of uterine cervix and can be considered as a potential therapeutic target.     

马钱子碱通过抑制IL-6/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:探讨马钱子碱(brucine)在体外对人结肠癌SW480细胞生长和凋亡的影响及可能的分子机制。方法:实验以人结肠癌细胞系SW480细胞为研究对象,分为空白对照组、brucine(1μmol/L)处理组、IL-6(100μg/L)处理组和brucine(1μmol/L)与IL-6(100μg/L)联用组,用CCK-8法检测细胞活力抑制率;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。细胞免疫荧光检测相关蛋白表达定位和强度。结果:Brucine处理组和brucine与IL-6联用组都能抑制结肠癌细胞的活力,brucine浓度相同时,联用组抑制率小于brucine处理组(P0.05)。与空白对照组相比,单用brucine处理组凋亡细胞明显增多(P0.05)。与单用brucine相比,brucine与IL-6联用组凋亡细胞明显减少(P0.05)。与对照组相比,brucine能降低p-STAT3蛋白水平。与空白对照组相比,单用brucine组p-STAT3的蛋白减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax和执行凋亡的cleaved PARP明显增多;与空白对照组相比,单用IL-6处理组的p-STAT3明显增多(P0.05);而与单用brucine相比,brucine与IL-6联合应用组的p-STAT3蛋白增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达增多,促凋亡蛋白Bax和执行凋亡的cleaved PARP均相对减少(P0.05)。结论:体外细胞实验中brucine可能通过调节IL-6/STAT3通路,抑制结肠癌SW480细胞中STAT3的磷酸化激活,从而发挥抗肿瘤作用。     

尼古丁对中性粒细胞活化及细胞间粘附分子基因表达的影响

目的:观察尼古丁对中性粒细胞(PMNs)的活化,PMNs与内皮细胞的粘附及内皮细胞表达ICAM-1mRNA,有助于阐明尼古丁在慢性阻塞性肺疾患(COPD)炎症发病中的作用。方法:测定β-葡萄糖醛酸苷酶及溶菌酶活性,以反映PMNs的活化;培养人脐静脉内皮细胞,观察PMNs与内皮细胞的粘附;制备探针,提取总RNA,Northern杂交测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA。结果:尼古丁可活化PMNs,增加PMNs－内皮细胞粘附;增强ICAM-1mRNA表达,764-3可明显抑制尼古丁的上述作用。结论:尼古丁通过活化PMNs,促进PMNs－内皮细胞粘附,在COPD慢性炎症发病中起重要作用。而这种粘附作用的增加与粘附分子表达增强有关;抑制尼古丁的上述作用可能是764-3抗炎作用的部分机理。     

大鼠脑缺血不同时期躯体感觉诱发电位的研究

脑电信号（EEG）具有较高的时间分辨率、可观测脑内活动的动态变化、完全无损检测等优点,常用于对神经系统疾病的诊断,本研究探讨脑缺血后躯体感觉诱发电位（SEP）变化及大脑皮层的功能恢复。利用线栓法建模成功的25只SD雄性大鼠分为5组,分别为正常对照组和左侧中动脉缺血术后4、24、 48 h和1周4个实验组。采用SEP记录法,在术后不同时间段电刺激大鼠的右前爪正中神经支配区,记录对照组和实验组左侧皮层脑电信号,提取SEP,并对安静状态下的脑电进行频谱分析,定量评价左侧中动脉缺血后初级体感皮层SEP及功率谱变化过程。实验结果显示,术后4 h,SD大鼠左侧大脑皮层测得的SEP潜伏期较正常状态显著增大（（16.0±1.1）ms vs（33.7±1.3）ms,P<0.01）,波幅变小（（197.2±13.0）μV vs（25.1±2.0）μV,P<0.01）,θ波、α波、β波、γ波的能量明显变小。θ波：（139 367.86±178.66）μV^2vs（2.22±0.40）μV²,P <0.01;α波:（5389.33±25.55）μV² vs（0.23±0.01）μV²,P<0.01;β波：（7911±416）μV² vs（0.01±0.01）μV²,p<0.01; γ波：（0.30±0.12）μV² vs（0.00±0.00）μV²,P<0.01。随着术后时间的延长,上述特征与对照组的差距逐渐缩小,但还不能达到正常状态的水平。研究提示,SEP可在一定程度上反映脑缺血大鼠大脑皮层功能的变化。     

自身免疫性脑病患儿外周血中γδT细胞检测的临床意义

目的 探讨检测自身免疫性脑病（AE）患儿外周血中γδT细胞的临床意义.方法 应用流式细胞仪对36例AE患儿和23例健康儿童外周血中γδT细胞、CD3＋淋巴细胞以及CD4＋/CD8＋比值进行检测;同时分析AE患儿治疗前后的上述细胞变化情况.结果 AE患儿外周血γδT细胞和CD3＋淋巴细胞分别为17.54％±2.65％、66.57％±5.01％,显著高于健康对照组（6.47％±2.39％,P＜0.01,61.49％±3.87％,P＜0.05）;而CD4＋/CD8＋比值为1.05±0.27,显著低于健康对照组（1.43±0.28,P＜0.05）.AE患儿治疗后γδT细胞为9.12％±3.24％,较治疗前17.54％±2.65％明显降低,差异有统计学意义（t=10.467,P＜0.01）.结论 AE患儿外周血γδT细胞比例变化与病情有关,γδT细胞检测可作为AE治疗的一项监测指标.