野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理.方法 20只SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,电镜观察细胞形态改变,Western blotting分析大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白的表达变化,annexinV荧光染色检测caspase-3特异性阻断剂对大鼠滑膜细胞凋亡的抑制作用. 结果 TFC能诱导大鼠滑膜细胞凋亡,电镜规察到典型的凋亡细胞核.大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白表达随TFC浓度增加而明显升高,caspase-3特异性阻断剂可以明显减轻AA大鼠滑膜细胞凋亡. 结论 TFC可促进大鼠滑膜细胞凋亡而达到治疗AA作用,其机制与TFC诱导滑膜细胞凋亡及提高caspase-3的活化有关.     

佐剂性关节炎大鼠免疫功能的实验研究

目的：阐明佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠模型免疫病理特征及发病机理。方法：应用费氏完全佐剂诱发大鼠产生裸关节佐剂性关节炎,研究其免疫功能变化。结果：ＡＡ大鼠致敏侧及时对侧后肢裸关节均发生明显炎性肿胀,其脾细胞对ＳＲＢＣ诱导的抗体生成反应明显增强,但其脾细胞对ＰＷＭ诱导的ＩｇＣ的产生及血清类风湿因子（ＲＦ）水平与对照组相比并无升高。ＡＡ大鼠对ＣｏｎＡ诱导的脾细胞增殖反应较对照组显著降低,脾细胞抑制活性降低     

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞超微结构及分泌功能的影响

目的:从关节滑膜超微结构和分泌功能的角度,探讨野菊花总黄酮(TF℃)对佐剂性关节炎(AA)大鼠治疗作用的机制.方法:SD大鼠复制AA模型;大鼠免疫后12 d开始分别灌胃TFC 84、168、336 mg/kg和对照药雷公藤多件片100mg/kg.组织块培养法分离培养大鼠滑膜细胞,透射电镜分析滑膜细胞内具分泌功能细胞器的形态学改变;放射免疫测定法检测滑膜细胞分泌IL-1β、TNF-α水平;RT-PCR检测滑膜组织IL-1β、TNF-α mRNA表达.结果:TFC 168、336 mg/kg可恢复A、B型滑膜细胞的细胞器分泌功能;纠正AA大鼠滑膜细胞分泌过高的IL-1β、TNF-α功能;RT-PCR也表明TFC可剂量依赖性的抑制IL-1β、TNF-α mRNA表达.结论:TFC可恢复AA大鼠滑膜细胞具分泌功能细胞器的形态,降低滑膜细胞分泌炎性介质的功能是其治疗AA的途径之一.     

Cyclopamine在佐剂性关节炎大鼠肾脏损伤中的保护作用及机制研究

目的：观察佐剂性关节炎(AA) 大鼠Hedgehog信号通路活化,并探讨Cyclopamine对大鼠关节炎症及肾脏损伤的影响。方法：将40只大鼠随机分为空白组、Cyclopamine组、AA+Cyclopamine组、AA模型组。采用弗氏完全佐剂建立AA大鼠模型,使用Cyclopamine腹腔注射,并通过测量足爪肿胀、全身炎症反应及关节炎症评分的方法进行半定量评价。HE染色检测各组大鼠肾脏病理改变,Western blot检测各组大鼠肾脏Gli1蛋白表达水平,免疫组织化学法染色检测各组大鼠肾脏TNF-α、IFN-γ、IL-6表达。结果：使用Cyclopamine后,能够明显降低AA大鼠足爪肿胀度和改善AA大鼠的关节炎指。与对照组相比,AA模型组大鼠Cr、BUN和脏器系数出现明显升高改变,差异有统计学意义,同时肾脏电镜病理检测发现AA模型组大鼠出现明显的病理改变,AA大鼠使用抑制剂Cyclopamine后能够明显降低肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）和脏器系数改变。Western blot检测各组肾脏组织中Gli1的蛋白表达,发现对照组与Cyclopamine组相比Gli1蛋白表达无明显差异,AA模型组及AA+Cyclopamine组Gli1蛋白表达量明显高于对照组,差异有统计学意义,AA+Cyclopamine组与AA模型组相比,Gli1蛋白表达水平明显有下降趋势,差异有统计学意义;免疫组化法检测肾脏组织中促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL-6表达改变情况并进行半定量评分,与空白组相比,AA模型组及AA+Cyclopamine组肾脏TN-α、IFN-γ表达明显升高,且使用Cyclopamine后,AA大鼠肾脏TNF-α、IFN-γ表达显著降低,AA模型组肾脏IL-6表达较对照组明显升高。结论：Cyclopamine能够明显改善AA大鼠的关节炎症和肾脏损伤程度,在此过程中Hh通路处于活化状态,并诱导炎性因子表达改变。     

野菊花总黄酮诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡

目的 研究野菊花有效成分总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗作用的机理.方法 SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,用MTT法检测TFC对滑膜细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色,观察滑膜细胞核是否出现凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片.结果 MTT法显示TFC抑制滑膜细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势,药物作用24h的IC50为112mg/L;TFC能诱导滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核,电泳呈现出阶梯状条带,Hoechst 33258染色观察到细胞核出现凋亡小体.结论 TFC可能会通过抑制AA大鼠滑膜细胞的增生,促进滑膜细胞的凋亡而达到治疗类风湿性关节炎的作用.     

Hedgehog信号通路阻断剂环巴胺体外对佐剂性关节炎大鼠的关节软骨细胞增殖的影响

目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路抑制剂环巴胺体外对佐剂性关节炎大鼠(AA)模型的关节软骨细胞增殖的影响和部分机制。方法弗氏完全佐剂诱导AA大鼠,测量关节炎指数和继发性足肿胀度,HE染色观察两组软骨组织生长情况;取AA大鼠踝关节软骨组织,采用胰蛋白酶-胶原酶法分离、培养、鉴定,环巴胺(0、0.05、0.5、5、20μmol/L)体外给药,MTT法检测AA大鼠踝关节软骨细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染检测AA大鼠踝关节软骨细胞凋亡,Western blotting检测AA大鼠踝关节软骨细胞Shh、Ptch1、Gli1的蛋白表达。结果弗氏完全佐剂诱导后,与正常大鼠相比,AA大鼠关节炎指数和继发性足肿胀度明显升高,HE染色显示,AA大鼠踝关节软骨组织有破坏;甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原鉴定体外成功培养AA大鼠踝关节软骨细胞;体外给药环巴胺(0.05、0.5、5、20μmol/L)可升高AA模型关节软骨细胞增殖,流式细胞检测结果显示,环巴胺能降低AA模型软骨细胞凋亡率;与未用环巴胺组相比,环巴胺(0.5、5、20μmol/L)给药对AA软骨细胞中Hh信号通路相关蛋白(Shh、Ptch1、Gli1)表达显著下降。结论弗氏完全佐剂诱导建立AA大鼠模型成立,体外给药环巴胺可抑制AA大鼠软骨细胞的增殖,抑制软骨细胞的凋亡,该作用与抑制AA大鼠软骨细胞Hh信号有关。     

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠滑膜OPG和RANKL蛋白表达的影响

目的:通过观察姜黄素对佐剂性关节炎(Adjuvant arthritis,AA)模型大鼠滑膜病理、滑膜骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)可能作用机制。方法:雄性SD大鼠以弗氏完全佐剂造模,分为模型组与姜黄素组,另有正常组,d 28处死所有大鼠行滑膜常规病理HE染色,并用Western blot法来检测滑膜RANKL、OPG蛋白的表达。结果:模型组大鼠滑膜炎性细胞浸润、纤维细胞及滑膜细胞的增生较正常组均明显增加(P<0.01),而姜黄素组的大鼠滑膜组织病理较模型组显著改善(P<0.01);姜黄素组大鼠的滑膜RANKL表达显著低于模型组,滑膜OPG表达显著高于模型组,RANKL/OPG比值显著低于模型组(P<0.01)。结论:姜黄素不仅改善AA大鼠关节滑膜病理学损伤,还可调节滑膜RANKL/OPG的比值。因此姜黄素可能通过调节OPG/RANKL系统来发挥对AA大鼠的治疗作用。     

清络通痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠炎症细胞因子的影响

目的观察清络通痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠细胞因子含量的影响.方法采用弗氏完全佐剂性制备大鼠佐剂性关节炎模型,观察清络通痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠IL-1、TNF-α的影响.结果清络通痹颗粒[7.2,14.4 g/(kg*d).ig]能明显降低佐剂性关节炎大鼠IL-1、TNF-α水平.结论清络通痹颗粒具有抑制佐剂性关节炎大鼠细胞因子异常产生的作用.     

电针足三里和昆仑对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用

目的：建立佐剂性类风湿关节炎大鼠模型,研究电针刺激＂足三里＂和＂昆仑＂穴对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用,为针灸治疗风湿性关节炎提供理论依据。方法：在大鼠右后足掌面由掌腱膜向踝关节处皮下注入0.1 mL弗氏完全佐剂,诱发佐剂性关节炎大鼠模型。并用0.25 mm×40 mm针灸针刺入大鼠一侧＂足三里＂和＂昆仑＂穴,深度为5 mm,并连接HANS电针仪进行电针治疗,调节电针仪频率2 Hz,强度2 mA,每天1次,每次30min,连续针灸28d后,观察不同组大鼠关节炎指数和一般状态并测量足趾肿胀度和踝关节病理形态学变化。结果：大鼠注射弗氏完全佐剂后,足跖肿胀度比空白组明显增加,说明已成功建立佐剂性类风湿关节类大鼠模型。电针治疗14d以内,治疗组和模型组大鼠足跖肿胀度无显著差异,但治疗28d后,治疗组大鼠足跖肿胀度和关节症状评分降低,足爪组织炎症情况有所减轻。此外,大鼠注射弗氏完全佐剂及电针治疗不会影响大鼠正常发育。结论：电针刺激＂足三里＂和＂昆仑＂穴对佐剂性关节炎具有较好的疗效。     

长春西汀减轻脑出血大鼠脑组织的炎症损伤

目的:探讨长春西汀对脑出血大鼠的干预作用以及对炎症损伤的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、脑出血组以及长春西汀低剂量组、中剂量组和高剂量组。除假手术组外,其余大鼠均通过注射VII型胶原酶的方法建立脑出血模型,长春西汀低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予腹腔注射0.5、1.0和1.5 mg/kg长春西汀,每天1次,共给药7 d。给药完成后,对各组大鼠进行神经功能缺损评分,称重法计算脑组织的含水量,检测脑组织中髓过氧化物酶(MPO)活性,Western blot法检测脑组织中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)与血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的蛋白表达。结果:与脑出血组相比,给予长春西汀干预的大鼠神经功能缺损评分显著下降(P0.05),脑组织含水量明显下降(P0.05),MPO活性显著降低(P0.05),脑组织中TLR4、NF-κB、ICAM-1与VCAM-1的蛋白表达显著下降(P0.05)。结论:长春西汀对脑出血大鼠脑组织具有保护作用,可能是通过抑制TLR4诱导的NF-κB信号通路以及ICAM-1与VCAM-1的表达来抑制炎症反应。     

索拉非尼对大鼠佐剂性关节炎的抑制作用

目的探讨索拉非尼对大鼠佐剂性关节炎(AA)的抑制作用。方法 36只雄性SD大鼠均分为6组,除正常组外,其余各组大鼠均制备AA模型。足容积法检测AA大鼠继发侧足爪容积;流式细胞术检测外周血CD4~+及CD8~+T细胞亚群的变化;免疫组织化学链霉卵白素-过氧化物酶法(SP)检测滑膜组织微血管密度(MVD)的改变。结果与模型组相比,索拉非尼组大鼠足爪容积下降,滑膜组织MVD减小,其中索拉非尼(20、40mg/kg)组可使外周血CD4~+T细胞比例降低,CD8~+T细胞比例增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论索拉非尼具有抑制大鼠AA效应,该作用可能与索拉非尼引起AA大鼠外周血CD4~+,CD8~+T细胞亚群的偏移以及降低滑膜组织MVD有关。     

佐剂关节炎大鼠肺功能与Treg、Notch信号通路的关系

目的:观察佐剂关节炎(Adjuvant arthritis,AA)大鼠肺功能、外周血调节性T细胞(Treg)及肺组织Notch通路变化。方法:将20只SD大鼠随机分为正常对照组(NC)和模型对照组(MC),每组10只;向MC组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml致炎,复制成AA模型;致炎18天后,观察两组大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、肺功能、肺组织形态学变化,采用流式细胞术检测外周血Treg,PT-PCR法检测肺组织Notch受体及配体表达。结果:AA大鼠E、AI、1秒内平均呼气流量(FEV1/FVC%)、肺组织Notch3、Notch4及Delta1的表达明显升高;75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、用力最大呼气流量(PEF)、肺动态顺应性(Cldyn)降低,外周血CD4+CD25+Treg、肺组织Notch1、Jagged1、Jagged2的表达水平显著降低(P<0.01或P<0.05)。相关分析显示,肺功能参数FVC、FEF75与CD4+CD25+Treg呈正相关,FEF50、MMF与Jagged1、Notch1呈正相关;FEF25、FEF50、PEF与Delta1、Notch3、Notch4呈负相关(P<0.01或P<0.05)。结论:AA大鼠发生关节炎症同时,出现肺功能、Treg降低及Notch通路的变化;肺功能与Treg、Notch受体/配体呈高度相关性,提示Treg和Notch通路可能参与肺功能降低的过程。     

黄芪总皂苷对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞的抗炎机制

目的:探讨黄芪总皂苷(TAS)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎症损伤的抗炎作用机制.方法:用CCK-8法筛选出对细胞活力无抑制的药物浓度;用浓度为1 mg/L的LPS刺激BV2细胞24 h,建立细胞炎症模型;实验分为正常组、LPS组、高剂量(75 mg/L)TAS组和低剂量(50 mg/L)TAS组;应用流式...     

MiR-9-5p调控瞬时受体电位M7对心肌缺血/再灌注大鼠的保护作用

目的 探讨miR-9-5p调控瞬时受体电位M7(TRPM7)对心肌缺血/再灌注(MIR)大鼠的作用.方法 将32只SD大鼠分为假手术组、模型组、miR-9-5p过表达组及空载体对照组,通过左冠状动脉结扎法建立MIR模型,假手术组不结扎,miR-9-5p过表达组和空载体对照组于模型建立前24 h分别尾静脉注入miR-9-...     

Effect of μ-opioids morphine and buprenorphine on the development of adjuvant arthritis in rats

Objective and Design: On the basis that endogenous opioids play a role in the physiological response to inflammation, this study tests the antiarthritic effects of a μ-opioid agonist, morphine and the partial μ-agonist, buprenorphine. Material: Male Lewis rats were used. Treatment: Rats were innoculated subcutaneously with 0.05 ml of Freund's complete adjuvant (5 mg/ml) into the right hind paw to produce adjuvant arthritis. Morphine (either 10 to 60 mg/kg/day s.c. bolus or 60 mg/kg/day s.c. infusion) and buprenorphine (0.65±0.06 mg/kg/day, orally), respectively, were administered for 3 days during the primary inflammatory phase of adjuvant arthritis. Methods: The progression of adjuvant arthritis was monitored every three days by body weight change and hind limb oedema (ipsilateral and contralateral). On day 21 the animals were sacrificed and histology and radiography of the contralateral limb were performed. In rats receiving Freund's adjuvant and no drug treatment, the incidence of arthritis was 89%. Effect was expressed as the pooled severity index (PSI) derived from the arithmetic average of the volume, histology and radiography scores in the contralateral hind limb. Results: Buprenorphine had no effect on experimental arthritis (PSI control vs treated: 242±28 vs 253±28%). In contrast, morphine by subcutaneous injection twice daily (10 to 60 mg/kg/day) but not by subcutaneous infusion (60 mg/kg/day) was found to attenuate the progression of adjuvant arthritis in a dose-dependent manner. This indicates that the anti-arthritic effects of morphine are opioid receptor mediated (ED₅₀, 58±9 mg/kg) and suggests that the local concentration reached effective levels only after subcutaneous injection. It is also possible that the high doses of morphine were anti-inflammatory through effects at the kappa receptor. However, these high doses of morphine produced death in one third of the rats, the calculated lethal dose (LD₅₀, 63±2 mg/kg) being close to the effective dose. Conclusion: Anti-arthritic effects of morphine are opioid receptor mediated but morphine use for this indication is restricted by its adverse effects. accepted by M. J. Parnham     

何首乌饮延缓大鼠睾丸间质细胞衰老与调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1信号通路的关系#br#

目的 探讨何首乌饮延缓大鼠睾丸间质（Leydig）细胞衰老与调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1（IGF-1）信号通路的关系。方法 采用氧化损伤的方法建立大鼠Leydig细胞衰老模型。用流式细胞术检测各组细胞周期的变化。应用Real-time PCR、免疫荧光和Western blotting技术检测Leydig细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因的表达水平,并运用胰岛素受体/IGF受体特异性抑制剂BMS-754807处理细胞,用流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果 与正常组相比,衰老组β-半乳糖苷酶阳性细胞率可达60%（P＜0.05）,G1 期所占比重明显增加, S期所占比重明显减少（P＜0.05）。胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因表达变化：衰老组胰岛素受体（INSR）,胰岛素受体底物（IRS1）、IRS2、IGF1表达水平明显低于正常组（P＜0.05）,胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP3）的 mRNA表达明显高于正常组（P＜0.05）,何首乌饮可逆转上述现象。用 BMS-754807处理衰老的Leydig细胞后,Bcl-2 mRNA表达水平低于衰老组（P＜0.05）,用何首乌饮和BMS-754807同时处理衰老的Leydig细胞,细胞凋亡率高于何首乌饮组（P＜0.05）。结论 何首乌饮通过调控胰岛素/IGF-1信号传导通路延缓Leydig细胞衰老。     

大鼠成纤维细胞生长因子对心肌成纤维细胞增殖和转分化的作用机制

目的 探讨成纤维细胞生长因子（FGF）对心肌成纤维细胞(CFs)在增殖和转分化为肌成纤维细胞（MFs）中的作用。 方法 分离、培养大鼠CFs,利用FGF对其进行诱导培养,CCK-8技术检测细胞活性和增殖状况,免疫荧光和Western blotting技术测定α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达量。 结果 随大鼠CFs培养代数的增加,其α-SMA、ColⅠ的表达和活化为MFs的数量增加。加入FGF诱导培养的大鼠CFs数量没有明显增加;加入FGF1、FGF2诱导的CFs表达α-SMA减少,活化为MFs 数量减少。 结论 FGF家族对大鼠CFs没有促增殖作用,但FGF1和FGF2可以抑制CFs活化,减少其向MFs的分化。