沉默Smo基因对人宫颈癌HeLa细胞活力及凋亡的影响

目的:使用RNA干扰技术沉默Smoothened(Smo)基因,探讨其对宫颈癌He La细胞活力和凋亡的影响。方法:采用Smo shRNA转染宫颈癌He La细胞;采用RT-PCR和Western blot技术检测各组He La细胞Smo和转录因子Gli1的mRNA和蛋白表达;采用MTT比色法测定沉默Smo后细胞生长的情况;流式细胞术检测Smo shRNA对细胞周期和凋亡的影响。结果:与对照组比较,Smo shRNA转染细胞72 h后,Smo和Gli1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。Smo基因沉默后,He La细胞的活力明显降低,细胞明显阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高。结论:沉默Smo基因可有效抑制人宫颈癌He La细胞生长,并诱导其凋亡。     

RNAi沉默HMGA1基因对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:筛选HMGA1基因沉默稳定转染肝癌细胞株,检测沉默后肿瘤细胞凋亡、周期和增殖的变化。方法:靶向HMGA1的RNAi载体转染肝癌细胞,G418筛选得到稳定转染细胞株并鉴定;MTT法和FACS检测细胞增殖、凋亡及细胞周期。结果:成功建立基因沉默HMGA1稳定细胞株;HMGA1基因沉默后,细胞凋亡百分率(29.46±3.04%)明显高于质粒对照组和空白对照组(1.96±0.76%和2.04±0.70%,P<0.01);G0-G1期细胞百分率(75.21±2.35%)明显高于质粒对照组和空白对照组(37.98±3.02%和39.23±3.63%,P<0.01),G2-S期(24.79±2.35%)显著低于质粒对照组和空白对照组(62.03±3.01%和60.77±3.63%,P<0.01);MTT检测显示,HMGA1沉默细胞增殖与质粒对照组和空白对照组相比显著降低(P<0.01或0.05)。结论:基因沉默HMGA1可促进肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

沉默c-myc基因对Jiyoye细胞增殖与凋亡的影响

目的 运用RNA干扰（RNAi）技术,探讨经慢病毒载体介导的小干扰RNA（siRNA）转染Jiyoye细胞对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响,以期为靶向c-myc基因的白血病和恶性淋巴瘤基因治疗提供体外实验依据。方法 设计、合成一对针对c-myc基因的c-myc-3寡聚核苷酸链和一对阴性对照c-myc- neg寡聚核苷酸链。退火,然后连接到pLVX干扰载体上,包装,慢病毒介导转染人Jiyoye细胞株。转染后培养72 h,流式细胞术检测各组细胞转染率,pLVX-c-myc-3转染Jiyoye细胞,MTT法检测细胞增殖;Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化吡啶（FITC/PI）双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果 ①转染72 h后,流式细胞术鉴定阳性细胞比例,c-myc-neg组与c-myc-3组比较,差异无统计学意义（P 〉 0.05）[（54.3 ± 4.2） % vs（52.8 ± 2.9） %];两组细胞平均荧光强度差异、细胞转染率差异无统计学意义。②转染168 h生长曲线显示,转染pLVX-c-myc实验组细胞生长缓慢,与阴性对照组和空白对照组比较,差异有统计学意义（P 〈 0.05）。转染pLVX-c-myc 72 h后,实验组细胞抑制率为（46.40 ± 1.41） %,阴性对照组细胞抑制率为（17.03 ± 1.32） %,差异均有统计学意义（P 〈 0.05）。③转染pLVX-c-myc 72 h后,实验组早期凋亡细胞比例（25.6 ± 4.2） %,阴性对照组早期凋亡细胞（15.1 ± 4.2） %,空白对照组早期凋亡细胞为（12.7 ± 1.8） %,差异有统计学意义（P 〈 0.05）。实验组晚期凋亡细胞比例（11.5 ± 4.7） %,阴性对照组为（9.3 ± 4.7） %,空白对照组为（8.14 ± 2.8） %,差异有统计学意义（P 〈 0.05）。结论 设计合成构建的干扰序列pLVX-c-myc-3,可沉默c-myc基因,抑制Jiyoye细胞增殖,诱导细胞凋亡,为进一步探讨沉默c-myc基因在白血病和淋巴瘤靶向治疗中的作用提供了实验依据。     

基因沉默ILK对胰腺癌细胞Panc-1细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的探讨基因沉默整合素连接激酶(ILK)对胰腺癌细胞(Panc-1)细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法培养胰腺癌Panc-1细胞,构建ILK-specific shRNA慢病毒载体后对Panc-1细胞进行转染,qPCR与Western Blot方法验证干扰基因片段的有效性,MTT实验检测转染后胰腺癌细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测转染后胰腺癌细胞周期的变化,Transwell实验检测转染后胰腺癌细胞侵袭能力的改变。结果成功构建siRNA-ILK慢病毒载体,转染组细胞的ILK mRNA及蛋白表达明显低于空病毒组及阴性对照组。基因沉默ILK的胰腺癌Panc-1细胞增殖能力显著降低,停滞在G0/G1的细胞数显著增多,G2/M期细胞数明显减少,侵袭能力显著降低(P0.01)。结论基因沉默ILK能抑制胰腺癌细胞Panc-增殖与侵袭能力,并促进凋亡。     

沉默JAG1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

 目的:探究沉默Jagged 1 (JAG1)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其分子生物学机制。方法:
用已构建的pRS-JAG1重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞, 采用Western blotting方法检测重组质粒对JAG1蛋白表达的影响;MTT比色法测定沉默JAG1对细胞生长的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白印记分析细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21CIP1/WAF1、p27KIP1、p-Rb、Bcl-2、Bax、Bcl-xL和cleaved caspase-3蛋白水平的变化。结果:Western blotting结果证实重组质粒可在72h内有效抑制JAG1蛋白表达;人乳腺癌MDA-MB-231细胞JAG1被沉默后,细胞的生长速度明显减慢,细胞明显阻滞于G 0/G 1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),cyclin D1、p-Rb、Bcl-2和Bcl-xL蛋白水平被下调(P<0.05),而p21CIP1/WAF1、p27KIP1、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默JAG1可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。本研究为以JAG1为分子靶点的三阴乳腺癌治疗提供实验依据。     

沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖及凋亡的影响

背景：研究报道敲低MKRN1可以抑制肿瘤细胞的生长,但MKRN1是否作为肿瘤相关蛋白在机体发挥作用还需进一步研究。由于siRNA介导的基因沉默是瞬时表达,持续时间短且常规慢病毒技术存在脱靶效应,利用四环素调控(Tet-on)慢病毒系统构建稳定沉默MKRN1基因的细胞系有着可逆的优势,且可规避上述缺点,对于深入研究MKRN1的生物学功能有重要的意义。目的：构建Tet-on慢病毒系统介导的MKRN1基因沉默载体,研究沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖、凋亡的影响。方法：采用RNAi技术,针对MKRN1基因设计3条shRNA(命名为sh1,sh2,sh3),将3条shRNA序列连入四环素诱导表达载体pTripz中验证连入序列;通过三质粒系统转染HEK-293T细胞,并用含有1 mg/L强力霉素的完全培养基培养,进行慢病毒包装,收取48 h及72 h病毒液,将其浓缩后感染HEK-293T细胞,感染48 h后用荧光显微镜观察病毒感染效率。通过实时荧光定量PCR、Western blot检测MKRN1的敲减效率;Western blot检测四环素诱导表达系统是否构建成功;通过...     

RNAi沉默WT1基因对人肝癌细胞HepG2的影响

目的:探讨利用RNA干扰沉默WT1基因对人肝癌细胞HepG2细胞生长,凋亡的影响,为肝癌的基因治疗提供理论依据。方法:利用脂质体将siRNA真核表达载体转入HepG2细胞中,并检测转染效率;利用免疫细胞化学染色方法检测HepG2细胞中WT1蛋白水平的表达,测定基因沉默效果;用MTT法测定HepG2细胞生长曲线;电镜下观察细胞凋亡形态,流式细胞仪检测凋亡率。结果:利用脂质体为载体将siRNA真核表达载体转染HepG2细胞,转染率达70%以上,转染后细胞中WT1蛋白表达水平下降;RNA干扰沉默WT1基因可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。结论:靶向WT1的序列特异性siRNA可显著抑制WT1基因的表达;下调HepG2细胞WT1基因表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

沉默TRIM23基因抑制骨肉瘤细胞的增殖

目的 探讨TRIM23基因对骨肉瘤细胞增殖能力的影响.方法 应用Western blot实验检测TRIM23基因在骨肉瘤细胞中的表达;应用shRNA质粒转染骨肉瘤细胞系U2OS,通过MTT与平板克隆形成实验评估细胞增殖能力;应用Westernblot实验检测U2OS细胞Akt/P53/P21通路的表达改变.结果 TRI...     

FAK基因沉默诱导白血病细胞凋亡

目的:本研究靶向黏着斑激酶(FAK)基因,构建FAK-shRNA慢病毒载体,并研究FAK基因沉默对白血病细胞生长的影响。方法:化学合成人FAK基因的shRNA序列,应用分子生物学方法将该FAK shRNA序列插入含荧光素GFP慢病毒质粒。该FAK shRNA慢病毒载体在体外包装、浓缩,然后转染至人白血病细胞株。应用逆转录聚合酶链反应及蛋白质印迹方法检测FAK基因表达水平,予Annexin V标记检测细胞凋亡的情况。结果:经核苷酸序列分析提示FAK shRNA正确插入慢病毒质粒,该病毒载体在白血病细胞株的转染率为10%-25%。与对照组相比(无FAK shRNA的慢病毒载体),FAK shRNA慢病毒载体在细胞FAK mRNA及蛋白水平的抑制率分别为40%和70%。凋亡实验表明,对照组与FAK shRNA慢病毒载体组的Annexin V阳性率分别为(4.19±0.36)%和(8.48±0.58)%,两者差异明显(P0.05)。结论:我们成功构建FAK shRNA慢病毒载体,该载体能抑制FAK基因表达并诱导白血病细胞凋亡。     

ABCE1基因沉默对人宫颈癌XB1702细胞生物学特性的影响

背景：随着基因工程以及肿瘤生物分子学等新兴学科的发展壮大,基因治疗肿瘤成为一种新的治疗模式。 目的：探讨ABCE1基因沉默对人宫颈癌XB1702细胞的生长、增殖及迁移等方面的影响。 方法：设计及合成ABCE1的siRNA序列,LipofectamineTM 2000转染XB1702细胞。以转染NC siRNA载体细胞为对照组,未转染的宫颈癌XB1702细胞为空白组。通过RT-PCR、Western blot检测RNA干扰后ABCE1 mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期,并通过CCK-8增殖实验、划痕愈合实验、细胞侵袭实验评价沉默ABCE1基因对人宫颈癌XB1702细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。 结果与结论：实验组ABCE1 mRNA和蛋白表达明显低于对照组和空白组(P < 0.05)。实验组细胞的生长速度明显减慢,细胞被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少。与对照组和空白组相比,实验组XB1702细胞的增殖受到明显抑制、迁移能力和侵袭能力显著下降(P < 0.05)。结果表明特异性干扰ABCE1基因表达可抑制人宫颈癌XB1702细胞的迁移能力,并抑制肿瘤细胞增殖,因此,ABCE1的siRNA序列可能成为治疗宫颈癌的有效靶点。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

沉默长链非编码RNA CCAT2对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨靶向沉默长链非编码RNA肠癌相关转录子2(lncRNA CCAT2)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测骨肉瘤MG63细胞与人成骨hFOB1.19细胞中lncRNA CCAT2表达水平;转染小干扰RNA沉默MG63细胞中lncRNA CCAT2的表达,qPCR方法验证沉默效率。沉默MG63细胞中lncRNA CCAT2表达后,MTT方法检测MG63细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MG63细胞的凋亡率,Western blot方法检测MG63细胞p53及Bcl-2蛋白的表达变化。结果lncRNA CCAT2在骨肉瘤MG63细胞中的表达显著高于人成骨hFOB1.19细胞(P<0.01);转染小干扰RNA能够显著降低MG63细胞中lncRNA CCAT2的表达水平(P<0.01)。沉默lncRNA CCAT2后,MG63细胞的增殖能力显著降低,凋亡率显著上升,Bcl-2蛋白表达显著降低p53蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论靶向沉默lncRNA CCAT2能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖并诱导凋亡。     

人参皂苷Rh2对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的影响,并初步探讨可能的分子机制。方法:采用流式细胞术Annexin V-PI双染法和MTT法检测MG-63细胞的凋亡变化;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、Cyt C和激活型caspase-3的蛋白水平。结果:流式细胞术和MTT法结果显示人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG-63细胞的凋亡。免疫印迹法结果表明,与空白对照组相比,给药组细胞Bax的蛋白表达显著增加,Bcl-2的蛋白表达显著减少,Bcl-2/Bax比值减少;线粒体中Cyt C蛋白表达显著减少,而胞浆中表达显著增加;激活型caspase-3蛋白水平显著增加(P0.05)。结论:人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG-63细胞的凋亡,其凋亡过程可能与调控线粒体凋亡通路相关蛋白有关。     

白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响及可能机制。方法采用不同浓度白杨素(0,2.5,5,10,20,40 mg/L)作用于MG-63细胞后,MTT法和流式细胞仪分别检测白杨素对细胞增殖与凋亡的影响。蛋白免疫印迹检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin蛋白表达的影响。Real-time PCR方法检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA、Survivin mRNA表达水平的影响。结果白杨素抑制MG-63细胞增殖、促进MG-63细胞凋亡,并呈浓度依赖性。经20 mg/L白杨素处理后,MG-63细胞Bax与Caspase-3蛋白与mRNA表达水平显著升高,而Bcl-2与Survivin蛋白与mRNA表达水平显著降低。结论白杨素在体外抑制MG-63细胞增殖,促进MG-63细胞凋亡,与调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达相关。     

褪黑素诱导人骨肉瘤MG63细胞凋亡

目的:观察褪黑素对人骨肉瘤细胞系MG63增殖和凋亡的影响及其对细胞周期和Fas基因表达的调控.方法:体外培养MG63细胞,CCK8法检测不同浓度褪黑素对MG63细胞增殖的影响,通过Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期改变,实时荧光定量PCR及免疫印迹检测MG63细胞Fas基因表达情况.结果:CCK8法检测显示,褪黑素可抑制MG63细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性;Hoechst 33258染色可见凋亡小体;流式细胞术检测显示褪黑素可使凋亡的MG63细胞明显增加,并使细胞周期阻滞在G2/M期;实时荧光定量PCR及免疫印迹分析显示经褪黑素作用后MG63细胞表达Fas蛋白明显增强.结论:褪黑素对MG63细胞的增殖有抑制作用,并诱导其发生凋亡,其机制可能与细胞周期阻滞在G2/M期及上调Fas蛋白表达有关.     

Wip1基因沉默对结肠癌细胞化疗敏感性的影响

目的:观察靶向Wip1基因的特异性siRNA序列对结肠癌细胞Wip1基因的抑制效应,探讨Wip1基因沉默对结肠癌细胞化疗敏感性的影响。方法:将Wip1-811 siRNA转染入Wip1高表达的RKO结肠癌细胞株,采用real-time PCR法检测Wip1 mRNA的表达,采用Western blotting方法检测Wip1蛋白表达,采用MTS方法检测结肠癌细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果:Wip1-811 siRNA明显抑制Wip1的表达。抑制Wip1基因表达后,转染组RKO结肠癌细胞对抗肿瘤药物的敏感性增加,5-氟尿嘧啶处理组RKO结肠癌细胞活力由(89.4±6.6)%降至(74.7±3.9)%(P0.05),奥沙利铂处理组细胞活力由(77.9±2.4)%降至(66.7±2.9)%(P0.05)。转染Wip1-811 siRNA后,5-氟尿嘧啶处理组细胞凋亡比例由(7.7±0.5)%升至(12.3±3.2)%(P0.05);奥沙利铂处理组细胞凋亡比例由(14.7±2.1)%升至(34.0±2.1)%(P0.05)。结论:沉默Wip1基因表达能增强结肠癌细胞的化疗敏感性。     

外源性EGR1瞬时表达对骨肉瘤细胞细胞周期和凋亡的影响

目的: 获得人早期生长反应1(EGR1)基因,并在人骨肉瘤细胞中瞬时表达,研究该基因在人骨肉瘤细胞中的作用,并探讨其可能的作用机制。方法: 以人胎盘组织为模板,巢式PCR(nest PCR)扩增获得EGR1全长基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),酶切、PCR鉴定并测序正确后,命名为pcDNA-EGR1。脂质体法将重组载体转染人骨肉瘤细胞U2OS,实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹检测目的基因的表达; MTT法检测细胞生长和增殖情况;流式细胞仪和DAPI染色检测细胞的周期变化和凋亡情况;qPCR检测细胞中与细胞周期、凋亡相关基因的表达变化情况;短发夹RNA(shRNA)干扰EGR1后,检测细胞的变化情况。结果: 成功获得了人EGR1基因并构建了其重组表达载体pcDNA-EGR1。EGR1可有效地在U2OS中瞬时表达;可显著抑制细胞增殖(P<0.05),并呈一定的剂量依赖。EGR1可引起细胞周期停滞于G₀/G₁期,并促进凋亡率增加(P<0.05)。EGR1可引起细胞核出现明显的固缩和凋亡表型。EGR1可引起周期相关基因表达下调,凋亡相关基因表达则显著上调。shRNA干扰EGR1后,细胞凋亡表型和EGR1所调控的相关基因表达水平与对照组一致。结论: EGR1具有抑制骨肉瘤细胞增殖作用,能调节骨肉瘤细胞周期和凋亡相关基因的表达,从而促进细胞周期停滞和凋亡率的增加。     

siRNA沉默SCD1基因对MCF-7细胞增殖、凋亡及脂质代谢的影响

目的:通过小干扰RNA (siRNA)干扰技术研究SCD1基因沉默对MCF-7细胞增殖、凋亡和脂质代谢的影响.方法:以脂质体lipofectamine2000包裹siRNA的方法沉默SCD1基因,RT-PCR检测SCD1 mRNA相对表达量;Western blot法检测SCD1蛋白表达量;MTT法检测转染MCF-7细...