维生素D_3对肺炎支原体感染小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α表达的影响

目的探讨维生素D3(VD3)对肺炎支原体感染小鼠肺组织髓系细胞触发受体-1 (TREM-1)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法 45只BALB/c小鼠随机分成对照组、MP感染组与维生素D3组。模型组与维生素D3组小鼠采用滴鼻法进行MP感染。模型制作7d后,处死小鼠,取肺组织,应用免疫组织化学方法和Western Blot方法检测各组小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α蛋白的表达,real time PCR方法检测各组小鼠肺组织TREM-1mRNA及HIF-1αmRNA的表达水平。结果 MP感染组BALB/c小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α蛋白与m RNA的表达水平显著高于对照组,P0.01;给予维生素D3处理后,感染MP的BALB/c小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α蛋白与m RNA的表达水平显著降低,P0.01。结论维生素D3能够降低肺炎支原体感染小鼠肺组织TREM-1及HIF-1α的表达。     

维生素D3对肺炎支原体感染小鼠肺组织NF-κB及MMP-9表达的影响

目的探讨维生素D3(VD3)对肺炎支原体感染小鼠肺组织核转录因子κB(NF-κB)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法 45只BALB/c小鼠随机分成对照组、MP感染组与VD3组。模型组与VD3组小鼠采用滴鼻法进行MP感染。取肺组织制作病理切片,HE染色观察组织病理学变化,Western blot方法与Real time PCR方法分别检测各组小鼠肺组织NF-κB及MMP-9蛋白与mRNA的表达水平。结果 MP感染BALB/c小鼠7 d后,肺组织有大量炎性细胞浸润,给予VD3处理后,炎性明显减轻。MP感染组BALB/c小鼠肺组织NF-κB及MMP-9蛋白与m RNA的表达水平显著高于对照组(P0.01);给予VD3处理后,感染MP的BALB/c小鼠肺组织NF-κB及MMP-9蛋白与mRNA的表达水平显著降低(P0.01)。结论 VD3能够降低感染肺炎支原体感染小鼠的肺内炎性反应,其作用机制可能与降低NF-κB及MMP-9表达有关。     

克拉霉素对小鼠肺炎支原体感染模型IL-4表达的影响

目的通过建立肺炎支原体(MP)感染BALB/c小鼠的模型,探讨克拉霉素对肺炎支原体感染小鼠IL-4表达的影响。方法 60只昆明小鼠随机分为对照组、MP感染组及克拉霉素治疗组,每组20只,建立小鼠肺炎支原体感染模型,克拉霉素治疗组用克拉霉素治疗5 d。HE染色观察病理组织学变化;Western blot方法检测各组小鼠肺组织IL-4的表达;RT-PCR方法检测各组小鼠肺组织IL-4 m RNA的表达水平。结果 MP感染后,小鼠肺组织呈间质性炎性改变,肺泡间隔增宽,大量淋巴细胞和巨噬细胞浸润在支气管、血管周围,肺泡内有渗出;Western blot方法和RT-PCR方法检测发现,MP感染组小鼠肺组织IL-4蛋白和m RNA表达较对照组明显升高(P0.01),但是明显低于克拉霉素治疗组(P0.01)。结论克拉霉素可显著降低肺炎支原体感染小鼠肺组织IL-4水平。     

克拉霉素对小鼠肺炎支原体感染模型IL-10表达的影响

目的通过建立肺炎支原体(MP)感染BALB/c小鼠的模型,探讨克拉霉素对肺炎支原体感染小鼠IL-10表达的影响。方法 60只昆明小鼠随机分为对照组、MP感染组及克拉霉素治疗组,每组20只,建立小鼠肺炎支原体感染模型,克拉霉素治疗组用克拉霉素治疗5 d。HE染色观察病理组织学变化;Western blot方法检测各组小鼠肺组织IL-10的表达;RT-PCR方法检测各组小鼠肺组织IL-10m RNA的表达水平。结果 MP感染后,小鼠肺组织呈间质性炎性改变,肺泡间隔增宽,大量淋巴细胞和巨噬细胞浸润在支气管、血管周围,肺泡内有渗出。相比于对照组,MP感染组小鼠肺组织IL-10蛋白和m RNA表达水平明显降低(0.01);与MP感染组相比,克拉霉素治疗组小鼠肺组织IL-10蛋白和m RNA表达水平明显升高(0.01)。结论克拉霉素可显著上调肺炎支原体感染小鼠肺组织IL-10水平。     

促红细胞生成素对哮喘小鼠肺组织VEGF及ICAM-1表达的影响

目的探讨促红细胞生成素对哮喘小鼠肺组织血管内皮生长因子(VEGF)及细胞间黏附分子(ICAM)-1的影响。方法 36只BALB/c小鼠,雌雄不限,随机分为对照组、哮喘组和促红细胞生成素组,卵蛋白致敏的方法制备哮喘小鼠模型。用乙酰甲胆碱行支气管激发试验,测定各组小鼠气道阻力的变化;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),进行细胞总数计数及嗜酸性粒细胞计数,免疫组织化学和Western blot方法检测各组小鼠肺组织VEGF与ICAM-1的表达。结果促红细胞生成素能够降低哮喘小鼠的气道阻力,降低BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞数(P0.01)。免疫组织化学和Western blot的光密度值分析结果显示,促红细胞生成素组小鼠肺组织VEGF与ICAM-1蛋白表达的平均光密度值显著低于哮喘组小鼠(P0.01)。结论促红细胞生成素可降低哮喘小鼠气道阻力及肺内炎症,与下调VEGF与ICAM-1的蛋白表达相关。     

犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染的小鼠肺组织及大鼠肺微血管内皮细胞ICAM-1和VCAM-1表达的影响

目的：研究中医经典合方犀角地黄汤合银翘散(XDY)对流感病毒性肺炎小鼠肺组织及对流感病毒感染的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVECs)中细胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达的影响,探讨其治疗病毒性肺炎的机制。方法：54只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组和XDY组,每组18只,后2组以流感病毒滴鼻感染,XDY组灌胃给予XDY;在感染后的2、4和6d分别取材,免疫组化法观察肺组织中ICAM-1和VCAM-1表达。从雄性Wistar大鼠中分离并原代培养RPMVECs,设置正常组、病毒组、病毒+XDY含药血清组、肿瘤坏死因子α（TNF-α）组和TNF-α+XDY含药血清组;刺激因素作用24h后,real-timePCR检测ICAM-1和VCAM-1mRNA水平,流式细胞术检测ICAM-1和VCAM-1蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组肺组织中ICAM-1和VCAM-1表达持续增多(P<0.01),而XDY组的表达均低于模型组(P<0.01);与正常组比较,流感病毒和TNF-α作用的RPMVECs中ICAM-1和VCAM-1mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01),XDY能下调ICAM-1和VCAM-1mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论：抑制流感病毒感染导致的RPMVECs黏附分子的表达从而抑制机体的炎症级联反应可能是XDY治疗流感病毒性肺炎的作用机制之一。     

ICAM-1反义寡核苷酸对小鼠肾小管上皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:探讨ICAM1反义寡核苷酸对小鼠肾小管上皮细胞表达ICAM1的影响,为利用ICAM1反义寡核苷酸类药物治疗肾小管间质病变奠定基础。方法:小鼠ICAM1反义寡核苷酸及其对照物参照文献合成并行全硫代磷酸化修饰。部分ICAM1反义寡核苷酸在其5′端作FITC荧光标记。将ICAM1反义寡核苷酸单独或脂质体转染试剂DOTAP混合后转染至培养的肾小管上皮细胞之中,转染成功后加入IL1β诱导细胞产生ICAM1。采用对照寡核苷酸及不含寡核苷酸的细胞转染液作为实验对照及空白对照。利用免疫组化染色的方法检测细胞ICAM1表达变化并提取细胞总RNA行逆转录PCR及Northern杂交观察ICAM1mRNA的表达的变化。结果:两个不同浓度的ICAM1反义寡核苷酸均可明显阻断IL1β诱导的肾小管上皮细胞ICAM1及ICAM1mRNA的表达;对照的寡核苷酸不能减少IL1β诱导的肾小管上皮细胞ICAM1及ICAM1mRNA的表达。结论:小鼠ICAM1反义寡核苷酸可明显抑制IL1β诱导的小鼠肾小管上皮细胞ICAM1及ICAM1mRNA的表达,提示ICAM1的反义寡核苷酸有可能应用于肾小管间质病变的实验治疗之中。     

肺炎衣原体对血管内皮细胞的感染及其对ICAM-1表达的影响

目的:观察肺炎衣原体对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的感染及其对细胞分泌和表达细胞间粘附分子1(ICAM-1)的影响,探讨C.pneumoniae感染在动脉粥样硬化形成中的作用及其可能机制。方法:用人喉表皮癌(HEP-2)细胞培养C.pneumoniae,以C.pneumoniae感染HUVE细胞,经透射电镜及PCR检测有无感染。用流式细胞仪检测感染前后HUVE细胞表面ICAM-1蛋白的表达的变化,用荧光定量RT-PCR检测ICAM-1mRNA的变化。结果:C.pneumoniae能感染体外培养的HUVE细胞;感染后12h,细胞表面ICAM-1蛋白的表达即增加,其峰值约在感染后24h;荧光定量RT-PCR结果显示其增加在mRNA水平。结论:C.pneumoniae能感染体外培养的人脐静脉内皮细胞并增加ICAM-1的表达,提示C.pneumoniae感染可能是动脉粥样硬化的始动因子之一,其致动脉粥样硬化机制可能与感染后血管内皮细胞粘附分子表达的增加有关。     

γ-促分泌酶抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-4表达的影响

目的探讨γ-促分泌酶抑制剂对哮喘模型小鼠肺组织白介素-4表达的影响。方法选取30只BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组和γ-促分泌酶抑制剂阻断组。免疫组织化学方法和ELISA方法检测各组小鼠肺组织内IL-4的表达。结果哮喘组小鼠肺组织IL-4的表达水平显著高于正常对照组(0.01),但是在应用γ-促分泌酶抑制剂处理后,哮喘组小鼠肺组织IL-4的表达水平显著下调(0.01)。结论静脉注射γ-促分泌酶抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-4的表达。     

Wortmannin对急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达的影响

目的研究Wortmannin对急性肺损伤模型小鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 30只昆明小鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组和Wortmannin处理组。采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型,对照组腹腔注射同体积的生理盐水,Wortmannin处理组则于造模前2 h腹腔注射Wortmannin(1.4 mg/kg)。LPS注射后6 h处死大鼠,计算肺组织湿/干重(W/D)比值,Western blot方法检测三组小鼠肺组织内IL-1β和TNF-α蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测三组小鼠肺组织内IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达变化。结果急性肺损伤组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著上升,显著高于正常对照组(0.05);相比于急性肺损伤组小鼠,Wortmannin处理组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著降低(0.05)。结论 Wortmannin能抑制急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达。     

Wortmannin对糖尿病大鼠肺组织IL-1与IL-6表达的影响

目的研究Wortmannin对糖尿病大鼠肺组织IL-1与IL-6表达的影响。方法 60只大鼠随机分为对照组(20)、糖尿病组(20)和Wortmannin处理组(20),通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型。糖尿病模型建立后,检测血糖、血脂及体重的改变;采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠肺组织中IL-1与IL-6表达的变化情况。结果糖尿病模型组大鼠血糖、血脂值比对照组明显增高(P0.01),而Wortmannin处理组比糖尿病模型组明显降低(P0.01)。免疫组织化学和Westernblot结果显示,糖尿病模型组大鼠肺组织Ⅱ-1与Ⅱ-6的表达量均显著高于对照组(P0.01),而Wortmannin处理组比糖尿病模型组则显著降低。结论 PI3K/Akt信号通路可能通过调节Ⅱ-1与IL-6的表达参与糖尿病肺组织病变的发生发展。     

维生素A对肺炎支原体诱导A549细胞分泌IFN-γ和IL-4的影响

肺炎支原体(Mp)的致病机制至今尚未完全清楚,近年来国内外学者的研究表明,Mp在感染过程中诱导宿主细胞产生的多种前炎性细胞因子在疾病的急性和慢性阶段均发挥了重要作用.因此,学者们多认为Mp感染所致的局部炎症反应与机体的免疫应答造成的免疫病理反应有关.近年有报道指出,维生素A(VA)能提高儿童的免疫功能,增强呼吸道的抗感染能力,尤其是通过维持黏膜的完整性及提高TH2介导的免疫应答而发挥抗感染作用,因而有人在临床上试用VA治疗支原体肺炎.本研究以人肺腺癌上皮细胞株A549细胞为靶细胞,通过检测Mp刺激后靶细胞中IFN-γ和IL-4的分泌水平变化来研究VA对机体的免疫调节作用.     

鱼腥草总黄酮对肺炎支原体感染小鼠Bcl-2 和Bax 表达的影响

目的:探讨鱼腥草总黄酮对肺炎支原体感染小鼠肺组织Bcl-2、Bax蛋白与mRNA表达水平及血清炎症因子的影响及作用机制。方法:50只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、鱼腥草总黄酮低、中和高剂量组(0.5、1.0、2.0 g/kg),滴鼻给予肺炎支原体。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法与RT-PCR法分别检测各组小鼠肺组织Bcl-2、Bax蛋白与mRNA表达水平,ELISA法检测各组小鼠血清炎症因子TNF-α、IFN-γ和IL-6水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠肺湿重指数明显升高(P0.05),肺组织出现炎症病变,肺泡璧增厚、肺泡间隔变宽、可见炎症细胞浸润,肺组织Bcl-2蛋白与mRNA表达水平明显降低(P0.05),Bax蛋白与mRNA表达水平明显升高(P0.05),Bcl-2/Bax值明显降低(P0.05),血清TNF-α、IFN-γ和IL-6水平明显升高(P0.05)。与模型组相比,鱼腥草总黄酮低、中和高剂量组小鼠肺湿重指数明显降低(P0.05),炎症细胞浸润情况改善,肺组织Bcl-2蛋白与mRNA表达水平明显升高(P0.05),Bax蛋白与mRNA表达水平明显降低(P0.05),Bcl-2/Bax值明显升高(P0.05),血清TNF-α、IFN-γ和IL-6水平明显降低(P0.05)。结论:鱼腥草总黄酮可上调Bcl-2蛋白与mRNA表达,下调Bax蛋白与mRNA表达,降低炎症因子水平,减少细胞凋亡,对肺炎支原体感染小鼠起抗感染作用。     

登革病毒感染对血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的探讨登革病毒2型（DV2）体外感染对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表达细胞间黏附分子（intercellular adhesion molecule，ICAM-1）的影响。方法原代分离培养HUVEC，用生长良好的2、3代细胞进行实验。用CCK-8法测定DV2感染前后的细胞活性。流式细胞仪测定DV2感染组和对照组细胞在不同实验时间点细胞表面ICAM-1蛋白表达的情况。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和图像定量分析技术分析DV2感染组和对照组在不同实验时间点HUVEC内ICAM-1 mRNA水平。结果病毒感染HUVEC对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义。DV2感染HUVEC促进ICAM-1 mRNA转录，DV2组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。其中，正常状态下HUVEC有一定水平ICAM-1 mRNA转录，但感染后显著增加（P〈0．05），24—72h维持于高水平，与其他时间表达差异有统计学意义（P〈0．05）。DV2感染HUVEC，细胞表达ICAM-1蛋白在12～72h显著升高，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DV2感染上调HUVEC的ICAM-1 mRNA水平和蛋白表达，从而诱发并加重血管内皮局部的损伤，破坏血管的屏障功能，促进血管渗漏的形成与发展。这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一。     

肺炎支原体感染在BALB/c小鼠肺组织不同时间炎症的变化

目的了解肺炎支原体感染的不同时期肺组织的病理变化、用PCR的方法检测肺炎支原体出现时间、阳性率的变化情况。方法建立肺炎支原体经呼吸道感染的BALB/c小鼠模型,对感染后3、7、14、21 d的小鼠的肺组织进行病理变化、肺湿重、PCR检测肺炎支原体出现时间的研究。结果肺炎支原体经呼吸道感染的BALB/c小鼠肺组织变大重量增加,肺指数同正常对照组相比,P﹤0.01,差异有统计学意义;呼吸道感染的BALB/c小鼠肺组织在3、7 d时,肺组织的病理变化最明显,14 d炎症减轻,21 d炎症基本消退;用PCR的方法检测支气管肺泡灌洗液肺炎支原体7 d时全部为阳性。结论肺炎肺炎支原体感染BALB/c小鼠模型制作成功,感染后7 d时肺部炎症最明显。     

肺炎支原体感染对BALB/c小鼠TLR4/NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨肺炎支原体(MP)感染对BALB/c小鼠TLR4/NF-κB信号通路表达的影响。方法BALB/c小鼠80只,随机分成肺炎支原体感染组和对照组,每组40只,分别于接种后3d、7d、14d、21d,,用ELISA试剂盒检测肺泡灌流液(BALF)IL-4和IL-6含量;HE染色观察肺脏病理组织学变化;用Western blot实验检测肺组织TLR4、Myd88与NF-κB表达变化。结果肺泡灌流液中IL-4和IL-6含量于感染后7 d时达到高峰,而后呈下降趋势;感染MP 3d后,BALB/c小鼠肺组织即出现间质性炎症改变,7d时炎症最明显,14d时炎症逐渐减轻;感染MP后,BALB/c小鼠肺组织TLR4、Myd88与NF-κB表达水平显著升高。结论肺炎支原体感染激活TLR4/NF-κB信号通路。     

IL-13对肾小球系膜细胞表达ICAM-1的影响

<正> 白细胞介素13(IL-13)是一种多效性Th2细胞因子,与IL-10有部分相似的生物学功能。有报道IL-10能抑制肾小球系膜细胞(MC)表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1),亦有报道IL-13抑制体外培养的MC表达一氧化氮合酶mRNA。IL-13对MC表达ICAM-1的影响未见报道,因此本实验拟观察IL-13对体外培养的MC表达ICAM-1的影响。1 材料与方法1.1 实验材料 雄性SD大鼠,体重120-150 g,2-3月     

母鼠维生素D缺乏对子代鼠肺发育及CyclinD1表达影响的研究

目的观察大鼠在孕期、哺乳期维生素D(Vitamin D)缺乏对子代鼠的肺组织结构发育及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达的影响。方法成年雌性SD大鼠完全随机分配为维生素D缺乏模型组(VDD组)及正常对照组(对照组),每组共6只,缺D组予完全避光、不含维生素D饲料喂养,正常组予正常光照、正常饲料喂养,2周后,与成年雄性SD大鼠以2:1比例合笼交配,建立Vit D孕鼠缺乏模型。利用竞争性酶联免疫吸附试验技术(ELISA)检测母鼠产后21天血清25-(OH)-D3的水平。分别取出生后第1、7、14、21天子代鼠肺组织,光镜下分别观察肺组织形态结构,免疫组化法分别检测肺组织中CyclinD1的表达。结果 VDD组雌鼠血清25-(OH)-D3水平显著低于对照组(P0.05);光镜下同日龄VDD组肺组织结构较对照组肺泡间隔增宽,肺泡组织少,肺泡小而不规则,终末细支气管及小支气管形态不规则;免疫组化法检测CyclinD1 VDD组及对照组均在支气管黏膜上皮细胞表达明显,对照组CyclinD1在生后第1天表达最强,第7、14、21天逐渐减弱,而VDD组CyclinD1在生后第7天表达最强,高于对照组(P0.05),第1天表达低于对照组(P0.05),第14、21天逐渐减弱,均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论母鼠孕期、哺乳期维生素D缺乏延缓子代鼠的肺发育过程,CyclinD1参与肺组织细胞的增殖,CyclinD1表达延迟可能是母鼠Vit D缺乏抑制子代鼠肺发育的可能机制之一。     

糖皮质激素对肺炎支原体肺炎大鼠肺组织的病理观察

目的观察地塞米松对肺炎支原体肺炎（MPP）大鼠肺组织病理学的影响,为临床合理应用糖皮质激素治疗MPP提供理论依据。方法 95只SD大鼠随机分为4组：阿奇霉素组（n=25）、地塞米松组（n=25）、阿奇霉素＋地塞米松组（n=25）和对照组（n=20）。各组大鼠均予肺炎支原体（MP）菌液（1×106CFU.mL-1）缓慢滴入大鼠鼻腔,100μL.d-1,共4 d。各组均在MP最后1次接种后第2天开始给予干预,阿奇霉素组皮下注射阿奇霉素10 mg.kg-1.d-1,地塞米松组腹腔注射地塞米松磷酸钠0.5 mg.kg-1.d-1,阿奇霉素＋地塞米松组给予阿奇霉素10 mg.kg-1.d-1和地塞米松磷酸钠0.5 mg.kg-1.d-1,对照组给予相同体积生理盐水。治疗后第1、3、5、8和10天后处死大鼠取肺组织行病理学检查,并对肺组织炎症浸润程度进行评分。结果①治疗后第1天,各组均可见不同程度的肺实质及血管周围淋巴细胞浸润。第5天,对照组和地塞米松组仍可见细支气管及血管周围较多淋巴细胞浸润;阿奇霉素组和阿奇霉素＋地塞米松组支气管周围淋巴细胞浸润减轻。第10天,对照组和地塞米松组可见肺组织及血管周围较多淋巴细胞浸润;阿奇霉素组和阿奇霉素＋地塞米松组可见终末支气管周围少许淋巴细胞浸润。②各组肺组织病理学评分显示,对照组治疗后不同时点,肺组织病理学评分均维持在较高水平,显著高于阿奇霉素组和阿奇霉素＋地塞米松组;地塞米松组治疗后不同时点,肺组织病理学评分呈显著增高趋势,提示炎症浸润程度的加重;阿奇霉素组和阿奇霉素＋地塞米松组在治疗后第5、8和10天均呈下降趋势,其中阿奇霉素＋地塞米松组低于阿奇霉素组。结论在阿奇霉素基础上加用地塞米松可明显减轻MPP大鼠肺组织炎症。