钙激活氯通道ANO1在小鼠心肌细胞的表达及其功能鉴定

目的:探讨钙激活氯通道蛋白anoctamin 1(ANO1)在小鼠原代培养心肌细胞中的表达及其功能特性。方法:采用胰酶与胶原酶共同消化,联合2次差速贴壁法获得C57BL/6小鼠原代心肌细胞;并用免疫荧光染色法检测α-横纹肌肌动蛋白,以鉴定心肌细胞纯度;应用RT-PCR检测小鼠心肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO1蛋白在小鼠心肌细胞的表达情况;应用荧光淬灭动力学实验检测ANO1钙激活氯通道的功能特性。结果:RT-PCR结果表明原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1 mRNA。免疫印迹实验结果显示原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1蛋白。荧光淬灭动力学实验证实表达于小鼠心肌细胞的ANO1具有钙激活氯通道典型的阴离子转运功能特性。结论:ANO1在小鼠心肌细胞中有明确表达,并具有钙激活氯离子通道特性,提示ANO1是钙激活氯通道的分子基础。     

ANO1在口腔鳞癌中的表达及临床分析

 目的 探讨ANO1基因及蛋白在口腔鳞癌中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化SP法及Northern blot检测81例口腔鳞癌组织及相应正常组织的ANO1基因及蛋白的表达进行检测,并结合临床病理资料和基因蛋白表达特征对比作差异显著性检验及相关分析。利用western blot检测ANO1在多株鳞癌细胞株的表达。结果 ANO1在口腔鳞癌组织中的阳性表达明显高于正常组织,有显著性差异( P <0.05);有淋巴结转移的口腔鳞癌组织ANO1阳性表达高于无转移的口腔鳞癌组织。有显著性差异( P <0.05);随着口腔鳞癌临床分期的升高,ANO1的阳性表达率升高(P＜0.05);而ANO1的阳性表达率与病理分级,年龄和性别暂无关(P＞0.05)。Hep-2的内源性ANO1表达最低, 而SCC-25细胞株的内源性ANO1表达最高。 结论 ANO1可能在口腔鳞癌的发生和进展过程中起到重要作用。     

氯离子通道蛋白1在心肌纤维化进程中的表达特征

目的 探讨氯离子通道蛋白1（ANO1）在心肌纤维化进程中的表达特征,为抑制心肌纤维化寻找新的靶点。 方法 采用冠状动脉结扎法制作大鼠心肌梗死模型,1周后取心肌梗死组和假手术组大鼠左心室组织,采用免疫组织化学染色、免疫荧光双标记检测梗死区和正常组织ANO1表达的变化;体外分离培养心肌成纤维细胞,采用免疫荧光标记、Real-time PCR和Western blotting检测心肌成纤维细胞中ANO1表达情况。 结果 制造模型1周后心肌梗死区ANO1表达明显增强,并与α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）共表达;ANO1蛋白明显表达于心肌成纤维细胞的核膜和胞质中,且表达强度和α-SMA具有相同的趋势;与刚分离贴壁心肌纤维细胞相比,ANO1在培养和48 h后的心肌成纤维细胞中表达量明显增强。 结论 ANO1在心肌成纤维细胞转化为成肌纤维细胞过程中表达量增加,提示ANO1可能在心肌纤维化进程中发挥重要调控作用。     

基于钙激活氯离子通道检测胞质内第二信使Ca2+

目的 建立一种基于钙激活氯离子通道（CaCC）可敏感检测胞质内第二信使Ca²⁺的细胞模型。 方法 构建氯离子通道蛋白1（ANO1）和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察其表达情况,流式细胞仪检测细胞纯度;应用膜片钳技术研究CaCC生理特性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CaCC调节剂;荧光探针法检测加入CaCC激活剂后胞质内的Ca²⁺浓度。 结果 倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上,YFP-H148Q/I152 L表达于胞质中;该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性;成功构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞模型;该模型可筛选CaCC调节剂,荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系;荧光变化斜率值可反映胞质内Ca²⁺浓度,该模型可敏感检测胞质内Ca²⁺浓度。 结论 此细胞模型可以高效敏感检测胞质内第二信使Ca²⁺浓度,为Ca²⁺信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。     

斯钙素-1与肿瘤的研究进展

斯钙素-1(STC1)作为一种参与调节血钙磷代谢平衡的糖蛋白激素,在肿瘤中也具有促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡、促进侵袭和转移、促进血管形成以及适应低氧微环境等重要作用。STC1有希望成为一个新的肿瘤标志物应用于恶性肿瘤的临床诊断、治疗和预后评估等。     

低分子肝素钙与阿司匹林预防四肢骨折血栓形成及对血清可溶性血管细胞黏附分子1、高迁移率蛋白1的影响

分析低分子肝素钙与阿司匹林抗凝预防四肢骨折血栓形成及对血清可溶性血管细胞黏附分子1（sVCAM-1）、高迁移率蛋白1（HMGB1）的影响。研究发现低分子肝素钙与阿司匹林均能较好的预防四肢骨折患者血栓形成,降低血清sVCAM-1、HMGB1水平而促进患者康复,低分子肝素钙效果优于阿司匹林。低分子肝素钙能降低微血管通透性血...     

新型双相钙磷陶瓷复合骨形态发生蛋白及碱性成纤维细胞生长因子修复兔骨缺损

背景:细胞因子能启动、促进并维持软骨和骨生成,但需要合适的载体才能发挥其生物学活性。目的:验证复合骨形态发生蛋白及碱性成纤维细胞生长因子的新型双相钙磷陶瓷(1∶1)促进骨缺损修复的作用。方法:27只兔,造成兔两侧股骨中下段4mm×4mm×12mm的缺损,随机分为3组:骨形态发生蛋白+碱性成纤维细胞生长因子+双相钙磷陶瓷组、骨形态发生蛋白+双相钙磷陶瓷组、双相钙磷陶瓷组。于4,8,12周取材,通过苏木精-伊红染色,X射线以及计算机图像分析,比较各组缺损的修复情况。结果与结论:骨形态发生蛋白+碱性成纤维细胞生长因子+双相钙磷陶瓷组及骨形态发生蛋白+双相钙磷陶瓷组在软骨诱导、小梁骨的形成数量、骨缺损修复等方面均明显优于双相钙磷陶瓷组。骨形态发生蛋白+碱性成纤维细胞生长因子+双相钙磷陶瓷组又优于骨形态发生蛋白+双相钙磷陶瓷组,在8周时编织骨小梁逐渐改建为成熟的板层骨及髓腔结构,骨缺损基本修复。12周时完全修复。结果提示:①双相钙磷陶瓷复合骨形态发生蛋白及碱性成纤维细胞生长因子在体内有较强的成骨活性,可以促进骨缺损的修复。②碱性成纤维细胞生长因子与骨形态发生蛋白合用可以加快新骨的形成。③新型双相钙磷陶瓷是一个吸附细胞因子的良好缓释载体,它的降解吸收和新骨的形成是一个相互促进过程。     

层粘连蛋白反义RNA对TGFβ1调节五种细胞内信号分子表达的影响

目的　明确转化生长因子 (transforming growth factorβ1 ,TGFβ1 )对大肠癌细胞 E-钙粘着蛋白、α-、β-、γ-连环蛋白及粘着斑激酶 (focal adhesion kinase,FAK)的影响 ,明确层粘连蛋白 (laminin,L M)反义 RNA对上述表达的调节作用。方法　采用免疫印迹技术检测各蛋白的表达水平 ,采用增强的化学发光技术显示结果。结果　 TGFβ1 可促进α-和γ-连环蛋白表达。该表达不受 L M反义 RNA的影响 ;TGFβ1可促进 E-钙粘着蛋白表达 ,但 L M反义 RNA既可抑制 E-钙粘着蛋白表达 ,又能抑制 TGFβ1 对该蛋白的调节作用 ;TGFβ1 只有在 L M反义 RNA存在下才具有抑制 FAK表达的作用。结论　 TGFβ1 对肿瘤恶性表型的抑制作用可能与 E-钙粘着蛋白、α-、γ-连环蛋白表达增加有关 ,E-钙粘着蛋白和 FAK表达的改变可能是 TGFβ1 通过影响 L M的表达间接作用所致。 TGFβ1 对肿瘤细胞表型的影响是多种蛋白综合作用的结果。     

维生素D与系统性红斑狼疮

维生素D(Vit D)除了可调节钙、磷代谢,促进肠道内钙吸收和钙动员外,在细胞增殖与分化以及免疫调节等方面也有着重要作用。类风湿关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)、1型糖尿病等自身免疫性疾病等均显示出与Vit D相关,且Vit D可通过作用于T调节细胞、树突状细胞及巨噬细胞等参与自身免疫性疾病的发生发展。近来,Vit D与系统性红斑狼疮疾病活动性的关系被广泛研究,其补充剂量亦未达成共识。本文主要介绍Vit D与系统性红斑狼疮的关系及其可能机制,并对Vit D的补充剂量给出意见。     

Pim-1在组织中的表达及作用

Pim-1为原癌基因,表达丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于钙-钙调蛋白调节激酶。它表达的激酶广泛存在于各组织细胞中,如胸腺、骨髓、结肠、睾丸、前列腺、心血管、大脑皮质、海马和视网膜等,并磷酸化特异性底物,参与细胞增殖、分化、存活等,如参与血管平滑肌及心脏祖细胞的增殖和存活,调节神经元兴奋性及可塑性,促进神经发育、受损心肌及神经元修复,保护呼吸道上皮,介导白细胞存活及炎症反应等,在组织发育、损伤和再生中起关键作用。