siRNA对VEGF蛋白表达的影响及对裸鼠移植肾癌的抑制作用

目的探讨siRNA沉默血管内皮生长因子（VEGF）基因对人肾癌裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达水平及生长抑制作用的影响。方法化学合成针对VEGF的siRNA序列,通过脂质体将VEGF-siRNA转染到ACHN细胞中,将转染VEGF-siRNA的ACHN细胞（A组）、转染空质粒的ACHN细胞（B组）及未转染的ACHN细胞（C组）分别接种于裸鼠背部皮下。在SPF环境中饲养裸鼠并观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,每隔5d测定移植瘤体积大小（肿瘤的长轴L,短轴W,肿瘤体积V=1/2LW2）,绘制肿瘤生长曲线,采用免疫组化及Western blot法测定裸鼠移植瘤组织切片中VEGF蛋白的表达水平。结果 A组小鼠移植瘤成瘤及生长明显缓慢,移植瘤的体积和质量均低于B、C组,差异有统计学意义（P〈0.05）;移植瘤组织切片免疫组化及Western blot法检测结果提示：与B、C组相比,A组中VEGF蛋白表达量降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;而B、C组间瘤体的体积重量及VEGF蛋白表达差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 VEGF在肾癌的发生、发展中起着重要作用,化学合成的VEGF-siRNA可特异性抑制肾癌细胞中VEGF的表达,抑制肿瘤的生长增殖。     

VEGF-ASODN抑制裸鼠胃癌移植瘤微血管生长

目的 研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸（VEGF-ASODN）对裸鼠荷人胃癌移植瘤微血管的生长抑制作用。方法 人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901, 实时荧光定量RT-PCR检测细胞RNA起始拷贝数, ELESA法检测VEGF 蛋白含量,MTT检测细胞生存力,细胞生长曲线检测细胞生长。建立裸鼠荷胃癌移植瘤模型。实验分为4组：（1）VEGF-ASODN组,（2）错义寡核苷酸组,（3）生理盐水组,（4）无荷瘤对照组。结果 VEGF-ASODN能降低胃癌细胞VEGFmRNA的水平,显著降低胃癌细胞及培养液VEGF 蛋白含量,降低细胞生存力、抑制细胞生长。VEGF-ASODN还能显著降低荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平、减小移植瘤的体积和重量、降低移植瘤微血管密度。结论 VEGF-ASODN抑制移植瘤微血管的生长。     

鞘磷脂合成酶2介导TGF-β/Smad通路对卵巢癌荷瘤裸鼠肿瘤生长和转移的影响

目的 探讨鞘磷脂合成酶2(SMS2)介导转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路对卵巢癌荷瘤裸鼠肿瘤生长和转移的影响。方法 将野生型卵巢癌荷瘤裸鼠分为对照组、SRI-01138组，SMS2基因过表达卵巢癌荷瘤裸鼠为SMS2过表达组，SMS2基因敲除卵巢癌荷瘤裸鼠分为SMS2敲低组、SMS2敲低+SRI-01138组，每组12只，给药1天1次，持续4周。采用流式细胞术、免疫组化、Westernblot等技术测量分离的卵巢癌组织的质量、体积、肿瘤细胞凋亡、荷瘤裸鼠腹膜转移肿瘤的结节数、质量、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9蛋白及SMS2、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达变化情况。结果 与对照组比较，SMS2过表达组卵巢癌组织中SMS2蛋白表达升高，SMS2敲低组卵巢癌组织中SMS2蛋白表达降低（P<0.05）；与对照组比较，SMS2过表达组、SRI-01138组肿瘤质量及体积、腹膜转移肿瘤结节平均数及转移肿瘤质量、MMP-2、MMP-9蛋白阳性表达、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达升高，细胞凋亡率降低（P<0.05）,SMS...     

VEGF反义RNA抑制裸鼠恶性黑色素瘤生长的研究

目的研究VEGF反义RNA基因转染对裸鼠体内恶性黑色素种植瘤生长的影响。方法裸鼠皮下接种A375细胞，1周后瘤块形成并进行转种和分组治疗，根据瘤体内注射物的不同分为PBS组，Ad—GFP组，Ad—aVEGF组。每周瘤内注射2次，共注射4次。进行大体观察和组织形态学观察VEGF反义RNA基因的表达，最后检测微血管密度（micro-vascular density，MVD）的改变。结果建立了荷瘤裸鼠模型；在抑制体内肿瘤的生长和减少组织坏死方面，Ad—aVEGF组中肿瘤体积和坏死面积均小于PBS组和Ad—GFP组（P〈0．01），PBS组和Ad—GFP组两组无差异（P〉0．05）。各组裸鼠的体重、皮毛、食欲、行为等情况均未见明显异常；Ad—aVEGF组A375细胞VEGF表达减弱，肿瘤内的MVD减少。结论通过反义VEGF165基因阻断人恶性黑色素瘤的生长是可行的。     

RNA干扰沉默IGFBP2基因表达抑制裸鼠移植瘤的生长

目的：应用RNAi技术沉默胰岛素生长因子结合蛋白2基因（IGFBP2）,探讨其对人胃癌移植瘤生长的影响。方法：合成靶向IGFBP siRNA的表达质粒,于雌裸鼠皮下种植SGC7901胃癌细胞,肿瘤长至一定大小时,随机分为重组质粒实验组（A）,阴性质粒对照组（B）及盐水对照组（C）,于肿瘤局部分别注射重组质粒、阴性重组质粒、生理盐水。每3d给药一次,共8次,3d测量一次肿瘤体积,22d后处死全部动物,取肿瘤,测其大小和瘤重,RT-PCR检测各组IGFBP-2的表达。结果：A组肿瘤瘤块的体积和重量明显小于B、C组（P〈0.05）,RT-PCR显示,A组IGFBP-2的表达明显低于B、C组（P〈0.05）,B、C组IGFBP-2的表达差异无显著性（P〉0.05）。结论：靶向IGFBP-2siRNA瘤内注射能显著地延缓胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,可能通过抑制IGFBP-2基因表达的机制抑制细胞增殖。     

黄芩苷对CA46细胞裸鼠异种移植瘤的作用及机制

目的: 研究黄芩苷抗CA46细胞裸鼠异种移植瘤的作用并探讨其机制。方法: 构建CA46细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为5组:阴性对照组、15 mg/kg黄芩苷组、30 mg/kg黄芩苷组、60 mg/kg黄芩苷组和4 mg/kg依托泊甙 (VP-16) 阳性对照组。采用腹腔注射方式给药,12 d后处死部分裸鼠,对剥取的瘤块称重计算抑瘤率,并进行透射电镜、病理学和Western blotting检测;观察各组未处死的裸鼠直至全部死亡,研究黄芩苷对荷瘤裸鼠生存时间的影响。结果: 黄芩苷明显抑制了CA46细胞裸鼠异种移植瘤的生长,引起肿瘤细胞的凋亡、坏死以及p-Akt、NF-κB、mTOR和p-mTOR蛋白表达的下调;随着黄芩苷剂量的增加,黄芩苷治疗组荷瘤裸鼠的生存时间明显延长。结论: 黄芩苷可抑制CA46细胞裸鼠异种移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞的凋亡,并延长荷瘤裸鼠的生存时间,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

IL-6和AG490对移植裸鼠的弥漫大B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤生长的影响

目的:观察STAT3通路对移植裸鼠弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)和伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)的作用。方法:建立OCI-LY8细胞(DLBCL)和Raji细胞(BL)裸鼠移植瘤模型,并分别将其分为对照组、IL-6组和AG490组,测量裸鼠体重和肿瘤体积;应用Western blot和免疫组织化学检测移植瘤组织中p-STAT3、survivin及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的水平;real-time PCR检测瘤组织中survivin和VEGF的mRNA表达。结果:2种细胞株总成瘤率为83.3%(25/30),其中OCI-LY8细胞成瘤率为66.7%(10/15),低于Raji细胞成瘤率100%(15/15)(P0.05)。DLBCL和BL荷瘤鼠IL-6组在第9和10天裸鼠体重和总瘤体积较对照组均增加,2种移植瘤的IL-6组中第1天与第10天瘤体积总差值均明显大于对照组(P0.05)。pSTAT3阳性信号定位于细胞核;survivin和VEGF以细胞浆表达为阳性。与对照组相比,DLBCL移植瘤IL-6组survivin和VEGF明显升高(P0.05),p-STAT3无显著变化;AG490组p-STAT3及VEGF明显降低(P0.05),survivin无显著变化;在BL移植瘤IL-6组,p-STAT3和VEGF蛋白与相应对照相比均显著升高(P0.05),在AG490处理组中3种蛋白均明显降低(P0.05)。IL-6组和AG490组中survivin和VEGF的mRNA表达与对照组相比差异无统计学显著性。结论:IL-6和AG490可能通过STAT3通路影响DLBCL和BL的生长,STAT3通路活化可能通过调控VEGF和survivin表达而影响肿瘤的发生发展。     

17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素对人胃癌裸鼠移植瘤血管内皮生长因子表达的抑制作用

目的:观察热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响,探讨17-DMAG对胃癌生长和血管生成的抑制作用。方法:用人胃癌细胞HGC-27接种于裸鼠皮下,建立裸鼠胃癌移植瘤模型;将荷瘤裸鼠随机分为3组,每组8只:17-DMAG组(腹腔注射17-DMAG 25 mg/kg)、5-氟尿嘧啶(5-FU)组(腹腔注射5-FU20 mg/kg)及对照组(腹腔注射生理盐水10mL/kg),4周后测量裸鼠移植瘤的体积及重量,HE染色观察形态学变化,同时采用免疫组化方法检测肿瘤组织中CD31(以阳性细胞数计算肿瘤微血管密度)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,采用Western blotting法检测VEGF的表达。结果:17-DMAG组移植瘤体积为(288.10±23.32)mm3,5-FU组移植瘤体积为(366.37±26.42)mm3,对照组移植瘤体积为(957.66±117.51)mm3,前二者与对照组比较,均差异显著(P0.05)。移植瘤重量与对照组比较,17-DMAG组(0.41±0.02)g明显低于对照组(1.12±0.08)g,P0.05;5-FU组(0.48±0.05)g也明显低于对照组(1.12±0.08)g,P0.05;17-DMAG组和5-FU组抑瘤率分别63%和57%,2组抑瘤率无明显差异。17-DMAG组微血管密度(21.72±1.24)比对照组(37.78±1.68)明显减少,P0.05;5-FU组(36.70±1.51)和对照组(37.78±1.68)之间没有显著差异;17-DMAG组肿瘤组织中VEGF的表达(15.39±4.37)明显低于对照组(36.45±7.45)和5-FU组(26.11±6.26)。结论:热休克蛋白90抑制剂17-DMAG可通过降低胃癌组织中血管内皮细胞生长因子的表达抑制肿瘤新生血管的生成,进而抑制裸鼠移植瘤的生长。     

补中益气汤调节肺腺癌裸鼠移植瘤GSK-3β活性表达干预顺铂耐药

目的 探讨补中益气汤调节A549/DDP荷瘤裸鼠移植瘤GSK-3β活性表达干预顺铂耐药的机制研究。方法 体外培养A549/DDP细胞,接种于BALB/c nu/nu裸鼠腋窝皮下,8 d后成瘤,隔天开始分别给予低剂量(1.46 g·kg^-1)、中剂量(2.91 g·kg^-1)、高剂量(5.82 g·kg^-1)补中益气汤治疗25d。30只裸鼠随机分为A549/DDP荷瘤对照组(A组)、A549/DDP荷瘤+顺铂组(B组)、A549/DDP荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组(C组)、A549/DDP荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组(D组)、A549/DDP荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组(E组),测量移植瘤质量并计算药物抑瘤率;蛋白质印迹法检测移植瘤组织中胞浆、胞核的GSK-3β、p-GSK-3β^{se r9}、p-GSK-3β^{tyr 216}蛋白表达。结果 顺铂联合补中益气汤可使移植瘤质量逐渐缩小,抑瘤率逐渐增加,呈现剂量依赖性。顺铂联合补中益气汤可显...     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制乳腺癌裸鼠移植瘤淋巴管生成

目的 探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤淋巴管生成的影响及其作用机制.方法 建立裸鼠皮下移植瘤模型30例,随机分成5组,即生理盐水组、5-氟脲嘧啶(5-FU)组、20mg/kg EGCG组、10mg/kg EGCG组、5mg/kg EGCG组,观察瘤组织血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达情况,淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE-1)标记淋巴管,检测淋巴管密度及面积;Western blotting检测移植瘤组织VEGF-C蛋白的表达情况.结果 免疫组织化学染色VEGF-C在20mg/kg EGCG处理组中的表达量明显低于生理盐水组和5-FU组,且VEGF-C的表达与EGCG成剂量依赖性;移植瘤周边淋巴管密度、面积在20mg/kg EGCG处理组中显著低于5-FU组和生理盐水组,差异有统计学意义;Western blotting结果显示,EGCG高剂量处理组VEGF-C蛋白明显低于生理盐水组.结论 EGCG可以抑制乳腺癌裸鼠移植瘤中VEGF-C的表达及淋巴管的生成.     

干扰表皮生长因子受体磷酸化过程对乳腺癌的抑制效应

目的 探讨干扰表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化过程对裸鼠乳腺癌移植瘤生长的影响及其作用机制.方法 建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,成型后随机分为Ad5-hSulf1组、Ad5-EGFP组和对照组,干预治疗后,测量计算移植瘤生长率,采用免疫组化法检测各组裸鼠移植瘤hSulf-1、EGFR和p-EGFR阳性表达,采用Western blot法检测各组裸鼠移植瘤hSulf-1、EGFR和p-EGFR蛋白表达.结果 Ad5-hSulf1组裸鼠注射治疗后第14天、21天和28天的肿瘤生长率[(165.9±23.8)％,(172.6±25.9)％,(377.3±30.5)％]明显小于同期的对照组,差异均具有统计学意义(t=12.153,21.247,14.587;P =0.000).Ad5-hSulf1组裸鼠移植瘤p-EGFR阳性表达率(46.7％)和蛋白表达[(52.7±7.4)％]明显低于Ad5-EGFR组和对照组,差异均有统计学意义(x2=8.146,t=7.384,7.587;P =0.004、0.000、0.000).结论 使用hSulf1基因抑制乳腺癌细胞的EGFR磷酸化过程,可产生明显的肿瘤抑制效应,对寻求肿瘤基因治疗的一个很有潜力的靶点具有很好的借鉴参考意义.     

反义VEGF165基因转染对人神经母细胞瘤生物学行为的影响

目的探讨反义VEGF165基因转染在抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长中的作用。方法构建正义和反义VEGF165真核表达载体,用脂质体转染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,G418筛选稳定表达细胞克隆。应用RT-PCR证实外源性反义VEGF mRNA的表达,免疫细胞化学和EUSA检测VEGF蛋白的表达水平,MTT法检测肿瘤细胞体外生长情况,并接种于裸鼠皮下,观察体内肿瘤增殖能力。结果RT-PCR证实转染反义VEGF的细胞中有外源性反义VEGF mRNA的表达,免疫细胞化学和EUSA显示VEGF蛋白表达明显降低,MTT实验显示转染前后细胞体外生长速度基本一致。而转染反义VEGF的肿瘤细胞裸鼠体内生长速度明显减慢。结论反义VEGF基因转染能够有效抑制SH-SY5Y细胞内源性VEGF蛋白的表达,抑制裸鼠体内肿瘤的生长。     

血管内皮生长因子反义基因转染对高转移人巨细胞肺癌细胞系生 …

目的 探讨反义血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因转染在抑制恶性肿瘤生长和转移的抗肿瘤血管基因治疗中的意义。方法 利用基因重组技术构建正义和反义ＶＥＧＦ１２１ ｃＤＮＡ真核表达载体,用脂质体法转染高转移性人巨细胞肺癌细胞（ＰＧ）,经Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹免疫化学检测ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平,并对转染前后细胞进行体外生长和裸鼠体内生长转移等多项生物学行为实验,结果 转染反义转     

碱性成纤维细胞生长因子与卵巢癌的关系

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)对卵巢癌细胞增殖、浸润和肿瘤血管生成的影响 ,及 b FGF单克隆抗体 (b FGF monoclonal antibody,b FGF- MAb)的治疗作用。　方法　将人卵巢癌细胞株 SKOV3接种于 2 4孔板 ,加入不同浓度的 b FGF,每日行结晶紫染色后测定光密度 (D4 90 )值 ,绘制细胞生长曲线 ;将 SKOV3细胞团接种于铺设有细胞外基质凝胶的 4孔板 ,每日测定癌细胞在凝胶中的浸润距离 ;建立 SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型 ,每周两次分别将 b FGF、b FGF-MAb和生理盐水注射于移植瘤周围 ,8周后测量肿瘤体积 ;对移植瘤组织切片行 因子的免疫组化染色、测定肿瘤内微血管密度 (microvessel density,MVD)。　结果　 b FGF能促进 SKOV3细胞增殖并呈浓度依赖 ,实验第 5天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞 D4 90 值是对照组的 1.0 9倍和 1.2 1倍 ;b FGF能促进 SKOV3细胞浸润并呈浓度依赖 (P<0 .0 5 ) ,第 7天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞浸润距离分别是对照组的 1.5 3倍和2 .4 5倍 ;b FGF组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 1.80倍和 1.4 6倍 (P<0 .0 5 ) ,b FGF- MAb组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 6 3.7%和 6 2 .8% (P<0 .0 5 )。　结论　b FGF能明显促进卵巢癌细胞的增殖、     

反义VEGF165基因转染抑制裸鼠体内人神经母细胞瘤的生长

目的研究反义VEGF165cDNA转染对裸鼠移植性人神经母细胞瘤血管生成及超微结构的影响。方法将稳定转染正义VEGF165cDNA、反义VEGF165cDNA及空载体的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;HE染色观察肿瘤组织病理变化;透射电镜观察肿瘤组织超微结构;免疫组化染色比较裸鼠移植瘤微血管密度(MVD)。结果与空载体组相比,反义组裸鼠肿瘤瘤块体积小(P<0.05),MVD显著减少(P<0.01),肿瘤组织内血管稀疏,核分裂相少见,内皮细胞变性、肿胀,血液淤滞,凋亡细胞多见。结论反义VEGF165cDNA转染能抑制裸鼠人神经母细胞瘤的生长,降低瘤块内微血管生成,促使肿瘤细胞凋亡。     

人鼻咽癌CNE－2Z细胞的不同转移潜能克隆株在严重联合免疫缺陷小鼠体内的检验和比较研究

将人类鼻咽癌不同克隆株的细胞悬液移植在严重联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠的颈背侧皮下，５６ｄ后处死全部动物进行观察。结果发现，在ＳＣＩＤ小鼠体内移植后ＣＮＥ２Ｌ２为高转移克隆株，其淋巴结转移率为１００％，肺转移率为７１％；而ＣＮＥ２Ｌ４为低转移克隆株，其肺转移率为１３％，淋巴结未见癌转移。这是从１个细胞母系中新筛选出的１个高转移和１个低转移的癌细胞克隆株。实验结果还显示，同ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠相比，ＳＣＩＤ小鼠的恶性表型的表达能力高。另外，皮下移植时肿瘤细胞的数量可能与转移表型的表达有相关性，移植的瘤细胞数越多，转移率越高，反之亦然。     

连翘苷对Lewis肺癌VEGF和内皮抑素表达的影响

 目的: 探讨连翘苷对Lewis肺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成抑制因子内皮抑制素(endostatin)蛋白表达的影响。方法: 免疫组化染色检测临床收集的正常肺部组织、癌旁组织和肺癌组织样本中VEGF和endostatin的蛋白表达。设空白对照组10只,同时于40只小鼠右肢腋窝皮下接种Lewis瘤细胞,随机分为模型组、连翘苷低剂量组、连翘苷中剂量组和连翘苷高剂量组,每组10只。模型组每天1次灌胃等体积无菌水;连翘苷低、中剂量组每天灌胃5、10 g/kg连翘苷1次;高剂量组每天灌胃10 g/kg连翘苷2次。给药20 d后取肺部组织进行HE染色和免疫组化染色检测肿瘤组织形态学与肺部组织中VEGF和endostatin的蛋白表达。 结果: 临床样本中,与正常组织和癌旁组织相比,肺癌组织中的VEGF呈高表达,endostatin呈低表达。连翘苷随剂量增加可显著减少Lewis肺癌小鼠肿瘤体积和瘤组织密度;给予不同剂量连翘苷后,VEGF在肺癌组织中表达显著低于模型对照组,而endostatin表达则明显高于模型对照组。结论: 连翘苷通过下调VEGF的表达、上调endostatin的表达而发挥抑制肺部肿瘤发展的作用。     

RNAi沉默Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的抑制

目的：研究Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的影响。方法:设计合成针对Cripto基因的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)，转染结肠癌LS-174T细胞。细胞分4组：空载对照组（对照组）和不同浓度（3.125、6.25和12.5 nmol/L）的siRNA组。分别于转染24、48、72 h后收集细胞，以实时定量PCR检测结肠癌细胞Cripto mRNA，分别采用Northern blotting和免疫荧光标记法检测癌细胞VEGF mRNA和蛋白表达。分别收集转染72 h的12.5 nmol/L组和对照组细胞，接种于裸鼠背部。30 d后处死裸鼠，收集裸鼠肿瘤组织，对组织VEGF进行免疫组化染色，计算染色平均强度。结果:实时定量PCR检测显示，转染组Cripto mRNA被有效地抑制，且呈浓度和时间依赖性。转染组细胞VEGF 蛋白和mRNA明显低于对照组。裸鼠肿瘤免疫组化分析显示，转染组VEGF平均染色强度明显低于对照组。结论:Cripto基因参与了结肠癌组织血管生成的调控。采用siRNA下调Cripto基因表达，可抑制结肠癌组织血管生成。     

在不同转移潜能人肺癌细胞移植瘤中血管性血友病因子的表达

目的探讨血管性血友病因子(vWF)在不同转移潜能人肺癌裸鼠移植瘤中的表达。方法体外培养低转移及高转移人肺癌细胞系A549和D95,Transwell小室法检测肿瘤细胞体外侵袭和迁移能力;10只Balb/c裸小鼠随机分为A549组和D95组(n=5)。0. 2 mL两种肿瘤细胞悬液(浓度约为1×10^7/mL)分别皮下注入A549组及D95组裸小鼠左上肢,构建人肺癌裸鼠移植瘤模型。观察vWF对裸小鼠移植瘤生长的影响;ELISA检测外周血vWF水平;免疫组化检测移植瘤vWF蛋白表达;免疫印记检测移植瘤、肺和肝vWF蛋白表达。结果 D95肺癌细胞体外侵袭和迁移细胞数多于A549肺癌细胞(P<0. 05);D95组裸小鼠于皮下接种后第5天全部出现瘤结节,A549组于第7天全部出现;与A549组相比,D95组裸小鼠移植瘤质量及肺转移瘤结节数显著增多(P<0. 05),D95组移植瘤、肺及肝组织vWF蛋白的表达显著高于A549组(P<0. 01)。结论 vWF与人肺癌细胞的转移潜能密切相关。     

NFATc1对裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤脉管生成的影响

 目的: 探讨胞浆活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells, cytplasmic 1, NFATc1)对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤生长和肿瘤脉管生成的影响及其可能机制。方法: NFATc1 siRNA转染人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3,免疫荧光及RT-PCR测量转染效率和基因抑制率,选取效率最高的序列建立裸鼠皮下移植瘤模型, 测量各组裸鼠肿瘤体积,观察NFATc1 siRNA的体内抗肿瘤作用。免疫组织化学检测各组肿瘤组织NFATc1的表达情况,并使用细胞角蛋白染色标记上皮性来源,CD34标记微血管,podoplanin标记微淋巴管。分别计算各组微血管及微淋巴管密度并进行统计学分析。应用RT-PCR及Western blot检测各组移植瘤组织NFATc1、CXC趋化因子受体2(CXCR2)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)及血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)的mRNA及蛋白表达水平。结果: 3条特异性序列均可显著降低NFATc1的表达水平,以siRNA-1169最佳。NFATc1在空白组及阴性对照组瘤组织高表达。干扰组抑瘤率为57.08%,且重量和体积均低于2个对照组。空白组和阴性对照组的微血管密度和微淋巴管密度明显高于干扰组。对照组比较,NFATc1 siRNA可以在mRNA水平上明显抑制NFATC1、CXCR2、FGF-2和PDGF-BB的转录。Western blot各组细胞在相应位置出现NFATc1、CXCR2、FGF-2和 PDGF-BB条带,空白组与阴性对照组的吸光度最强,与干扰组比较具有显著差异。结论: NFATc1 siRNA明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤脉管生成,下调CXCR2、FGF-2及PDGF-BB的表达可能为其途径之一。