TFF3基因沉默对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨三叶因子3(TFF3)基因沉默对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响。方法人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组、研究组,研究组将TFF3-shRNA重组慢病毒质粒转染至TPC-1细胞,阴性对照组将NC-shRNA重组慢病毒质粒转染至TPC-1细胞,空白对照组不转染任何序列。采用qRTPCR检测各组TPC-1细胞中TFF3 mRNA表达量,采用CCK8法检测各组TPC-1细胞增殖能力,通过Transwell小室侵袭实验检测各组TPC-1细胞侵袭能力。结果研究组TPC-1细胞中TFF3 mRNA表达量明显低于空白对照组、阴性对照组(P0.05);6 h、12 h、24 h、36 h、48 h时,研究组TPC-1细胞生长抑制率明显高于空白对照组、阴性对照组(P0.05);研究组穿过小室膜的TPC-1细胞数明显低于空白对照组、阴性对照组(P0.05);空白对照组、阴性对照组TPC-1细胞TFF3 mRNA表达量、增殖能力、侵袭能力差异无统计学意义(P0.05)。结论沉默TFF3基因表达能够抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖及侵袭,TFF3可能是甲状腺乳头状癌潜在的治疗靶点。     

三叶因子3对甲状腺乳头状癌细胞周期的影响及机制

目的 探讨三叶因子3 (TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1和BCPAP细胞增殖及细胞周期的影响及相关分子机制。 方法 包装TFF3 shRNA 慢病毒载体,病毒感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验检测沉默TFF3后细胞增殖状况;流式细胞术检测TFF3基因对TPC-1和BCPAP细胞周期的影响;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测P27、P21和cyclin D1、周期蛋白依赖性激酶（CDK）4 mRNA的表达情况;免疫印迹法(Western blotting)、免疫细胞化学染色检测周期相关蛋白P27、P21、cyclin D1、CDK4和蛋白激酶B（Akt）、pAkt的蛋白表达水平。 结果 成功包装TFF3 shRNA 慢病毒载体,病毒液感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验结果显示,沉默TFF3后,细胞增殖能力减弱;流式细胞术结果显示,与对照组相比,TFF3基因沉默组G₁期的细胞比例明显增高(*P<0.05),S和G2期的细胞比例明显下降（*P<0.05);TFF3沉默组TPC-1和BCPAP细胞中的P27、P21 mRNA和蛋白明显上调（*P<0.05),而cyclin D1,CDK4 mRNA和蛋白表达降低（*P<0.05);4株细胞Akt蛋白含量无明显差异,但沉默TFF3组磷酸化蛋白激酶B（pAkt）表达减弱;免疫细胞化学染色显示,cyclinD1阳性蛋白位于癌细胞胞核,P27、P21蛋白表达于胞质和胞核,且沉默TFF3后在细胞核中阳性信号增强,细胞质中阳性表达降低。 结论 沉默TFF3可明显延长甲状腺癌细胞周期,抑制细胞的增殖,可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路相关蛋白的表达有关。     

高尔基体基质蛋白130通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移

目的　探究高尔基体基质蛋白130（Golgi Matrix Protein 130,GM130）对甲状腺乳头状癌细胞侵袭和迁移能力的作用及机制。 方法　RT-PCR检测人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1及甲状腺乳头状癌细胞BCPAP、K1、TPC-1中的GM130 mRNA水平。将细胞分为Control、scramble siRNA（si-scramble）、GM130 siRNA（si-GM130）3组。CCK8检测各组细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western Blot检测GM130、Ki67、增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、基质金属蛋白酶-4（Matrix metalloproteinase-4,MMP-4）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、钙依赖性粘附蛋白E（Calcium-dependent adhesion protein E,E-cadherin）、Snail、钙依赖性粘附蛋白N（N-cadherin）及波形蛋白Vinmentin的表达,同时利用免疫荧光检测Vimentin的表达。 结果　GM130在TPC-1细胞中的mRNA水平最高,故利用TPC-1细胞进行后续实验。与Control组比较,si-GM130组中GM130表达显著下调,细胞增殖速率及Ki67、PCNA表达显著降低,细胞划痕闭合率显著下降,侵袭细胞数及MMP-4、MMP-9表达显著减少。此外,与Control组比较,si-GM130组中E-cadherin表达显著升高,Snail、N-cadherin及Vimentin表达显著降低。同时Vimentin荧光值在si-GM130组中显著降低。 结论　GM130可通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移。     

三叶因子3/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/核因子-κB在人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖和凋亡中的作用

目的 探讨三叶因子3（TFF3）对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 构建TFF3基因过表达和敲低表达的慢病毒表达载体,包装293T细胞,产生慢病毒颗粒,病毒液转染TPC-1细胞,构建稳定增强TFF3表达的TFF3-TPC-1细胞系以及增强对照组细胞系ConTFF3-TPC-1;构建抑制TFF3表达的shRNA-TFF3-TPC-1细胞系以及沉默对照组细胞系shCon-TPC-1;利用Western blotting实验与Real-time PCR验证TFF3过表达和沉默效率;生长曲线和集落形成实验检测4组细胞增殖状况;流式细胞术检测4组细胞凋亡情况;Western blotting和免疫细胞化学染色检测凋亡相关蛋白和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）、核因子-κB (NF-κB)通路蛋白表达水平。结果 1. 成功构建TFF3过表达和抑制表达稳转细胞系TFF3-TPC-1及细胞系shRNA-TFF3-TPC-1;2. TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显高于ConTFF3-TPC-1组（P＜0.05或P＜0.01）,shRNA-TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显低于shCon-TPC-1组（P＜0.01）;3. TFF3-TPC-1细胞凋亡率低于ConTFF3-TPC-1（0.75%±0.08% vs 5.62%±0.3%,P＜0.01）,shRNA-TFF3-TPC-1凋亡率高于shCon TPC-1（22.2%±1.2 % vs 5.34%±0.4%,P＜0.01）; 4. 沉默TFF3基因后,Bax、细胞色素C（Cyt-C）、cleaved-Caspase-9、cleaved-Caspase-3表达升高,Bcl-2、通路蛋白Akt、p-Akt、NF-κB-P65表达降低（P＜0.05或 P＜0.01）。结论 TFF3可能通过影响PI3K/Akt/NF-κB信号通路调节TPC-1细胞的增殖和凋亡。     

三叶因子3在甲状腺乳头状癌TPC 1细胞株黏附中的作用机制

目的:探讨沉默三叶因子3(TFF3)表达对甲状腺乳头状癌(PTC)TPC-1细胞黏附作用的影响。方法:稳定敲低TFF3表达的TPC-1细胞株(shRNA-TFF3组)、转染空载体的TPC-1细胞株(shRNAC组)、TPC-1细胞(TPC-1组)分别进行同质黏附实验、异质黏附实验;qPCR检测TFF3mRNA及WNT/β-catenin信号通路关键分子β-catenin mRNA水平,免疫印迹和免疫细胞化学检测β-catenin、E-cadherin、ALCAM、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平。结果:细胞同质黏附实验显示shRNA-TFF3组黏附细胞数显著高于shRNAC组和TPC-1组。细胞异质实验显示shRNA-TFF3组黏附细胞数显著低于shRNAC组和TPC-1组,shRNAC组和TPC-1组同质和异质黏附数差异无统计学意义。qPCR结果显示shRNA-TFF3组TFF3mRNA、β-catenin mRNA水平显著低于shRNAC组和TPC-1组,shRNAC组和TPC-1组TFF3 mRNA、β-catenin mRNA水平差异无统计学意义。免疫细胞化学与免疫印迹结果显示沉默TFF3后ALCAM、MMP-9、MMP-2、β-catenin蛋白表达水平显著降低;E-cadherin蛋白表达水平显著升高,shRNAC组和TPC-1组差异无统计学意义。结论:敲低TFF3可能通过WNT/β-catenin信号通路影响PTC细胞TPC-1的黏附能力。     

敲低长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制TPC-1甲状腺乳头状癌细胞上皮间质转化及其侵袭和迁移

目的 检测甲状腺乳头状癌组织长链非编码RNA (lncRNA)肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(AFAP1-AS1)的表达,敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,研究其对TPC-1细胞上皮间质转化(EMT)的影响及相关分子机制.方法 采用实时定量PCR检测60例甲状腺乳头状癌组织lncRNA AFAP1-...     

三叶因子3在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的 探讨甲状腺乳头状癌（PTC）患者血清与组织中三叶因子3(TFF3)的表达水平及意义。方法 收集甲状腺肿瘤患者153例,其中乳头状癌组66例、腺瘤组51例、乳头状增生组36例,正常组153例（来源于每例标本的正常甲状腺组织）。16例正常人血清标本作为ELISA检测的
正常组。采用免疫组织化学SP法和原位杂交技术检测甲状腺手术标本中TFF3蛋白和mRNA的表达;ELISA检测血清TFF3浓度。结果 1. TFF3蛋白和mRNA均表达于细胞质,呈棕黄色颗粒。66例乳头状癌TFF3表达阳性率92.42％;36例乳头状增生阳性率47.22%;51例腺瘤阳性率31.37％;正
常组阳性率25.40%;各组TFF3 mRNA阳性率略低于其蛋白,且与蛋白表达呈正相关（P.<0.0001）;甲状腺癌组积分吸光度显著高于其他3组（P<0.01）; 2. 甲状腺乳头状癌中TFF3及mRNA高表达率与TNM分期和淋巴结转移有关（P<0.01）; 3. 甲状腺癌组血清TFF3浓度明显高于乳头
状增生组、腺瘤组和健康对照组（P<0.001）。血清TFF3浓度在甲状腺癌组织阳性组明显高于阴性组（P<0.05）。结论 甲状腺乳头状癌高表达 TFF3蛋白及mRNA,检测血清TFF3浓度可能成为诊断甲状腺乳头状癌的筛选指标。     

IL-6通过诱导lncTCF7表达促进甲状腺乳头状癌TPC-1细胞上皮-间充质转化、迁移和侵袭

目的:探讨白细胞介素6(IL-6)通过诱导长链非编码RNA lnc TCF7表达对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞上皮-间充质转化(EMT)、迁移和侵袭能力的影响。方法:以0、5、10、20和50μg/L的IL-6作用于TPC-1细胞24 h或以50μg/L的IL-6作用于TPC-1细胞0、6、12和24 h后,RT-qPCR检测IL-6对TPC-1细胞中lnc TCF7表达的影响。以50μg/L的IL-6处理TPC-1细胞24 h后,Western blot检测IL-6对TPC-1细胞中E-cadherin和vim-entin蛋白表达的影响。建立lnc TCF7过表达的TPC-1细胞株,Western blot和Transwell小室实验检测过表达lnc TCF7对TPC-1细胞EMT、迁移和侵袭能力的影响。敲减lnc TCF7的表达并给予50μg/L的IL-6处理后,观察lnc TCF7对IL-6处理后的TPC-1细胞EMT、迁移和侵袭能力的影响。结果:IL-6可呈剂量和时间依赖性地诱导TPC-1细胞中lnc TCF7的表达(P 0.05)。过表达lnc TCF7可下调TPC-1细胞中E-cadherin表达,上调vimentin表达,增强细胞的迁移和侵袭能力(P 0.05)。IL-6可使TPC-1细胞中E-cadherin表达降低,vimentin、Snail和Slug表达升高,同时,增强细胞的迁移和侵袭能力,增大细胞间隙;敲减lnc TCF7表达能够明显抑制IL-6引起的上述变化。结论:IL-6可通过诱导lnc TCF7表达促进甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的EMT、迁移和侵袭。     

LncRNA(HOTAIR)/miR-206/TAGLN2信号轴调控甲状腺乳头状癌细胞的侵袭

目的 探讨lncRNA(HOTAIR)/miR-206/TAGLN2信号轴调控人甲状腺乳头状癌(PTC)细胞系TPC-1侵袭的分子机制。方法 收集兰州大学第一医院甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织,用RT-qPCR和Western blot检测PTC组织和癌旁组织中HOTAIR、miR-206和TAGLN2的表达;构建miR-206过表达和HOTAIR低表达的TPC-1细胞。RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达,Transwell小室法实验检测TPC-1细胞系的侵袭能力。结果 与癌旁组织相比PTC组织中HOTAIR表达量增加2.48倍,miR-206-5p表达量降低至0.6,TAGLN2及其蛋白表达量增加(P<0.05);过表达miR-206后,TPC-1细胞中TAGLN2的蛋白表达量减少(P<0.05),且TPC-1细胞的侵袭能力受到了抑制。敲低HOTAIR后,TPC-1细胞中miR-206表达增加,TAGLN2表达降低,同时TPC-1细胞的侵袭能力也明显降低(P<0.05)。结论 在甲状腺乳头状癌中,降低HOTAIR的表达水平,可促成miR-...     

lncRNA GAS5 通过抑制MAPK / ERK 信号通路阻断乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程

目的:探讨lncRNA GAS5对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及相关机制。方法:采用qPCR检测lncRNA GAS5在乳腺癌组织中和细胞系中的表达差异;Transwell实验和划痕实验分别检测lncRNA GAS5对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响;Western blot检测lncRNA GAS5对EMT的影响以及潜在作用机制;裸鼠成瘤实验验证lncRNA GAS5对动物体内成瘤的影响。结果:与癌旁正常组织相比,lncRNA GAS5在乳腺癌组织中呈低表达,而且在MDA-MB-231细胞中的表达最低;lncRNA GAS5的上调显著减低了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;lncRNA GAS5的过表达使MDA-MB-231细胞中的E-cadherin蛋白显著升高,而N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达显著降低,而使用MAPK/ERK信号通路的抑制剂U0126能抵消lncRNA GAS5对MDA-MB-231细胞EMT的影响;结论:lncRNA GAS5能通过抑制MAPK/ERK信号通路阻断乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程。     

miR-135b-3p调控XAF1表达影响甲状腺癌细胞的迁移、侵袭和放射增敏性

目的探讨miR-135b-3p对甲状腺癌细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响以及其可能的调控机制。方法培养正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1、甲状腺癌细胞K1和TPC-1,RT-qPCR检测细胞中miR-135b-3p表达,Western blot检测细胞中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)表达。转染anti-miR-135b-3p至TPC-1细胞抑制miR-135b-3p表达,Transwell、Western blot及克隆形成实验分别检测抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移和侵袭、E-cadherin和MMP-2蛋白表达及对TPC-1细胞放射敏感性的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-135b-3p与XAF1之间的靶向调控关系。结果与Nthy-ori 3-1细胞相比,K1和TPC-1细胞中miR-135b-3p表达水平显著升高(P<0.05),XAF1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。抑制miR-135b-3p表达可抑制TPC-1细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),促进TPC-1细胞E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MMP-2蛋白表达(P<0.05),增强TPC-1细胞的放射敏感性(P<0.05)。miR-135b-3p靶向负调控XAF1表达。抑制XAF1表达可降低抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移、侵袭及放射敏感性的影响。结论miR-135b-3p通过下调XAF1表达促进甲状腺癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低其放射增敏性,是甲状腺癌的潜在治疗靶点。     

地高辛对缺氧诱导的乳腺癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

 目的:本研究旨在探究地高辛对缺氧诱导乳腺癌细胞上皮间质转化、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,采用CoCl₂模拟化学缺氧条件,采用细胞划痕实验测量细胞迁移率,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力,采用Western blot方法检测人乳腺癌MCF-7细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Snail、E-cadherin和vimentin蛋白表达的变化。结果:缺氧使MCF-7细胞从多角形上皮形态转变成梭形间质细胞形态,细胞间隙增大,而在地高辛作用下缺氧的MCF-7细胞未发生明显的上皮间质转化。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,经CoCl₂处理的MCF-7细胞的迁移和侵袭能力均显著增强(P<0.01),地高辛可抑制CoCl₂诱导的细胞迁移和侵袭(P<0.01)。与control组相比,CoCl₂组细胞的HIF-1α、Snail和vimentin蛋白表达水平显著升高(P<0.01),E-cadherin的蛋白表达水平显著降低(P<0.01);CoCl₂+digoxin组细胞的HIF-1α、E-cadherin和vimentin蛋白表达水平与control组相比差异均无统计学显著性,Snail蛋白表达水平虽略高于control组(P<0.05),但与CoCl₂组细胞相比显著降低(P<0.01)。结论:地高辛可通过下调HIF-1α和Snail蛋白表达抑制缺氧诱导的MCF-7细胞上皮间质转化和侵袭。     

EphA2调控结直肠癌细胞耐药的初步研究

目的:探究Eph受体A2(Eph A2)在结直肠癌细胞化疗耐药中的作用及相关机制。方法:Western blot及real-time PCR检测人结肠癌细胞株Lo Vo及结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU中Eph A2的表达情况。转染Eph A2 siRNA干扰结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU中Eph A2的表达,CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力的变化,Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)及相关信号通路分子的蛋白水平。结果:耐药细胞株Lo Vo/5-FU中Eph A2的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株(P0.05);并且在亲本细胞株Lo Vo中,Eph A2的蛋白表达水平随着5-FU浓度的增加有升高趋势。沉默Eph A2可降低结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU的细胞活力,增加其对化疗药物的敏感性,并抑制细胞的侵袭迁移;同时上调细胞中上皮细胞标志物E-cadherin和β-catenin的表达并下调间充质细胞标志物N-cadherin和vimentin的表达,可抑制结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU的EMT进程。此外,干扰Eph A2的表达之后,Notch和Snail的表达也明显降低。结论:沉默Eph A2可部分恢复结肠癌耐药细胞株Lo Vo/5-FU对化疗药物的敏感性,其机制可能与抑制细胞侵袭和迁移、同时通过Notch/Snail信号通路影响细胞的EMT进程有关。     

Snail在卵巢癌细胞侵袭转移潜能方面研究

目的研究Snail与卵巢癌侵袭转移问的关系,并探讨其分子机制。方法分别构建正义全长Snail真核表达载体和小分子干扰RNA,分别转染卵巢癌细胞系A2780、C13＊。采用Western印迹方法分析相关蛋白表达,Transwell试验检测细胞侵袭转移能力。结果①成功构建Snail正义全长真核表达载体,并合成Snail小分子RNA干扰片段;②在转染PEGFPCI／Snail的卵巢癌细胞株A2780、C13＊中E-eadhefin表达明显下调,Snail和Vimentin则表达上调;而在转染Snail／SiRNA的卵巢癌细胞株A2780、C13‘中E—cadherin表达明显上调,Snail和Vimentin则表达下调;③Snail过表达可显著促进卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能;封闭Snail表达水平可一定水平抑制卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能。结论snail可通过促进卵巢癌上皮细胞间质化转变（epithelial—mesenchymaltransition,EMT）而提高其侵袭转移能力;封闭Snail表达可一定程度逆转卵巢癌上皮细胞间质化转变（EMT）而抑制其侵袭转移能力。     

miR-26-p 在甲状腺癌中的表达及其功能研究

目的:探讨微小分子核糖核酸(miR)-126-3p 在甲状腺癌中的表达,探讨其生物学功能。方法:RT-PCR 检测35 例甲状腺癌、癌旁组织以及三种甲状腺癌细胞系(TPC-1、FTC-133、8505C)中miR-126-3p 表达量;将甲状腺癌细胞分为类似物组(mimic)和对照组(NC),分别转染miR-126-3p mimic 及阴性对照质粒。两组细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA 法和流式细胞术检测, Transwell 小室法检测两组细胞迁移和侵袭。结果:35 例癌组织中miR-126-3p 相对表达量显著低于癌旁组织(0.384±0.28 vs 0.981±0.039,t =10.291,P<0.05);在三种甲状腺癌细胞中,TPC-1 细胞中miR-126-3p 相对表达量最低;与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 增殖受到显著的抑制,第3 天两组间开始表现出统计学差异(P<0.05);与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 凋亡显著增加[(15.32±3.20)% vs (8.12±1.17)%,t = 4.623,P<0.05],迁移受到抑制(26.68±4.48 vs 82.21±3.65,t=17.789,P<0.05),侵袭受到抑制(12.28±1.03 vs 34.43±2.10,t =8.103,P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中miR-126-3p 表达降低,上调miR-126-3p 表达可以显著抑制甲状腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制迁移和侵袭,miR- 126-3p 可能作为一种抑癌基因在甲状腺癌中发挥重要的生物学功能。